1. No category

Diazyme Laboratories
12889 Gregg Court
Poway, CA 92064, USA (США)
Тел.: 858-455-4768 / Факс: 858-455-3701
Эл. почта: [email protected]
Веб-сайт: www.diazyme.com
Принцип анализа
Жидкие реагенты для
определения креатинина
Комплектация
Жидкие реагенты для определения креатинина компании
Diazyme поставляются в нерасфасованном виде и в наборах,
имеющих следующую комплектацию:
№ по
Устройство
Состав набора
каталогу
R1: 1 x 60 мл
Универсальный
DZ072B-K
R2: 1 x 20 мл
Калибр.: 1 мл
R1: 2 x 60 мл
Универсальный
DZ072B-K01
R2: 2 x 20 мл
Калибр.: 2 мл
R1: 3 x 250 мл
Универсальный
DZ072B-K02
R2: 1 x 250 мл
Калибр.: 10 мл
R1: 2 x 60 мл
Olympus AU400
DZ072B-KY1
R2: 2 x 20 мл
Hitachi 917
Калибр.: DZ072B-CAL*
R1: 2 x 60 мл
Beckman CX/LX
DZ072B-KB1
R2: 2 x 20 мл
Калибр.: DZ072B-CAL*
* калибраторы приобретаются отдельно
Методика применения жидких реагентов для определения
креатинина компании Diazyme является простой и быстрой
процедурой с использованием ферментов, которая может
применяться в повседневной лабораторной практике.
Энзиматический метод является методом выбора для точного
измерения концентрации креатинина в клинических условиях,
особенно у новорожденных, детей и пациентов гематологических отделений.3 Энзиматический метод количественного определения креатинина состоит из серии
сопряженных ферментативных реакций, включая превращение
креатинина в креатин под действием фермента креатининазы,
превращение креатина в саркозин под действием креатининамидиногидролазы (креатиназы) и последующее окисление
саркозина под действием саркозиноксидазы (СОД) с
образованием перекиси водорода. В присутствии пероксидазы
(ПОД) перекись водорода образует окрашенное соединение,
что делает возможным ее количественное определение при
длине волны 550 нм.4
Креатининаза
Креатинин + H2O
Креатиназа
Креатин + H2O
Саркозин + H2O + O2
Саркозиноксидаза
ПОД
2H2O2 + 4-AA + TOOS
Назначение
Жидкие реагенты для определения креатинина компании
Diazyme, а также калибратор креатинина Diazyme
предназначены для количественного определения креатинина в
сыворотке крови и моче. Определение содержания креатинина
используется в диагностике и лечении заболеваний почек, с
целью мониторинга при гемодиализе, а также в качестве
основы для расчета содержания в моче других определяемых
веществ. Используется только для диагностики in vitro.
Клиническое значение
Креатинин представляет собой химическое соединение,
являющееся результатом метаболизма в мышечной ткани.
Креатинин образуется из креатина – соединения, играющего
важную роль в энергетическом обмене мышечной ткани.
Ежедневно в креатинин превращается приблизительно 2 %
содержащегося в организме креатина. Посредством кровотока
креатинин переносится в почки, где происходит фильтрация
основного количества креатинина и его выведение с мочой.
Почки обеспечивают поддержание нормальной концентрации
креатинина в крови. Было установлено, что креатинин является
достаточно надежным показателем функции почек. При
нарушении функции почек концентрация креатинина в крови
повышается. Таким образом, патологически высокий уровень
креатинина служит признаком возможного нарушения или
недостаточности функции почек, в некоторых случаях еще до
появления у пациента каких-либо жалоб. По этой причине
определение концентрации креатинина в крови является
компонентом стандартных анализов крови и мочи.1-2
Креатин
Саркозин + мочевина
Формальдегид +
глицин + H2O2
4H2O + хиноновый
краситель
( макс = 556 нм)
Содержащийся в пробе эндогенный креатин удаляется под
действием креатиназы и саркозиноксидазы в процессе
предварительной инкубации.
Необходимые материалы, не входящие в набор
Инструкции по методике применения жидких реагентов для
определения
креатинина
Diazyme
в
автоматических
биохимических анализаторах доступны по запросу. Звоните по
телефону 858-455-4768 или направляйте запросы по адресу
электронной почты: [email protected]. Контрольные
образцы для валидирования рабочих характеристик реагентов
для определения креатинина, а также физиологический раствор
для разведения проб мочи не предоставляются.
Состав реагентов
Активные
Концентрация
Реагент 1
Креатиназа
TOOS
СОД
Реагент R2:
Креатининаза
4-AA
ПОД
Калибратор
компоненты
12—60 МЕ/мл
0,07—0,21 мг/мл
4—17 МЕ/мл
135—670 МЕ/мл
0,3—0,9 мг/мл
5 мг/дл (442 мкмоль/л) креатинина в 0,9% физрастворе
Diazyme Laboratories
70783 Ред. M RU
Стр. 1 из 4
Действительно с: 8/27/13
Подготовка реагентов
Калибровка
Жидкие реагенты для определения креатинина Diazyme (R1, R2
и калибратор) представляют собой готовые к использованию
жидкие реагенты.
В набор реагентов входит содержащий креатинин калибратор,
который необходимо использовать для калибровки процедуры
анализа согласно указаниям, вместе с 0,9% физиологическим
раствором в качестве нулевого стандарта. Калибратор может
быть проконтролирован при помощи стандартного опорного
материала (SRM) 914a Национального института стандартов и
технологий (NIST) и должен храниться при температуре
2—8 °C.
Стабильность и хранение реагентов
Реагенты в закрытых флаконах остаются стабильными до
истечения срока годности, указанного на внешней упаковке,
при температуре хранения 2—8 °C. После вскрытия реагент
сохраняет стабильность в течение как минимум 30 дней.
Сбор образцов и обращение с ними
Необходимо использовать свежие пробы сыворотки крови
пациента. Пробы мочи необходимо разбавить в 10 раз при
помощи физиологического раствора.
Предостережения
Используется только для диагностики in vitro.
Образцы, содержащие материалы человеческого
происхождения, должны обрабатываться как потенциально инфицированные, с применением процедур по
обеспечению безопасности в лабораториях, таких как
изложены в документе «Биологическая безопасность в
микробиологических и биомедицинских лабораториях»
(HHS, номер публикации [CDC] 93-8395).
Как и для любой диагностической процедуры, при
интерпретации полученных результатов необходимо
учитывать результаты всех других анализов, а также
клиническое состояние пациента.
Необходимо избегать проглатывания, а также контакта
реагентов с кожей или слизистыми оболочками. См.
бюллетень по безопасному обращению с материалом.
Реагенты R1 и R2 в качестве консерванта содержат
< 0,1 % азида натрия (NaN3), который может вступать в
реакцию с медными и свинцовыми деталями
канализации, приводя к образованию чрезвычайно
взрывоопасных азидов этих металлов. При утилизации
реагентов требуется промывка большим количеством
жидкости, чтобы предупредить образование азидов.
Реагенты обладают чувствительностью к свету. Не
оставляйте флаконы с реагентами открытыми. Храните
их в плотно закрытом состоянии.
Не используйте реагенты после даты окончания срока
годности, указанной на внешней упаковке.
Дополнительная информация по безопасному хранению
и обращению с продуктом приведена в бюллетене по
безопасному обращению с материалом для данного
продукта. Для получения бюллетеня по безопасному
обращению с материалом обращайтесь в отдел по
обслуживанию покупателей по телефону 858-455-4768.
Процедура анализа
Условия
Для получения информации о параметрах для конкретного
устройства обратитесь в отдел обслуживания клиентов
компании Diazyme Laboratories.
Схема выполнения анализа для биохимических
анализаторов
R1: 270 мкл
Проба: 8 мкл
5
Компания рекомендует использование контрольных образцов
креатинина в каждой лаборатории с целью валидации рабочих
характеристик реагентов для определения креатинина.
Компания Diazyme Laboratories предлагает набор контрольных
образцов креатинина (DZ072B-Con). Если результаты анализа
контрольного образца выходят за пределы установленного
допустимого диапазона, данный анализ не должен
выполняться. Компания рекомендует выполнять процедуру
контроля качества в соответствии с федеральными,
государственными и местными нормативами.
Результаты5
Концентрация креатинина выражается в мг/дл или мкмоль/л
мг/дл x 88,4 = мкмоль/л
мкмоль/л x 0,0113 = мг/дл
Если в соответствии с инструкцией значения концентрации
калибратора вводятся в мкмоль/л, полученные результаты будут
автоматически распечатаны устройством Hitachi 917 в мкмоль/л.
Инструкции по распечатке результатов для других устройств см.
в соответствующих руководствах по эксплуатации.
У взрослых пациентов молодого или среднего возраста с
усиленным развитием мышечной ткани концентрация
креатинина в крови может быть выше нормы для населения в
целом. С другой стороны, концентрация креатинина в крови
пожилых пациентов может быть ниже нормы. У детей
нормальная концентрация составляет примерно 0,2 мг/дл
(17,7 мкмоль/л) или выше в зависимости от развития
мышечной ткани. У пациентов с одной почкой концентрация
креатинина в норме может составлять примерно 1,8—1,9 мг/дл
(159,1—168,0 мкмоль/л). Концентрация креатинина в крови
2,0 мг/дл (176,8 мкмоль/л) или выше у детей и 10,0 мг/дл
(884,0 мкмоль/л) у взрослых пациентов может указывать на
необходимость выполнения гемодиализа с целью удаления из
крови продуктов метаболизма.
В некоторых случаях определенные лекарственные препараты
могут приводить к патологическому повышению концентрации
креатинина.
Настоятельно
рекомендуется
в
каждой
лаборатории определить диапазон ожидаемых значений для
местного населения.
Мужчины
59—104 мкмоль/л
Сыворотка
0,67—1,17 мг/дл
3540—24 600 мкмоль/л
Моча*
40—278 мг/дл
*Первая утренняя порция мочи
37 °C
A1 при
550 нм
Контроль качества
Диапазон нормальных значений6
R2: 90 мкл
0
Калибровку необходимо выполнять как минимум каждые
14 дней, а также при использовании каждой новой серии
реагентов. Калибровка выполняется путем ввода значения,
указанного в сертификате анализа для конкретной серии.
10 мин
A2 при
550 нм
Женщины
45—84 мкмоль/л
0,51—0,95 мг/дл
2550—20 000 мкмоль/л
29—226 мг/дл
Diazyme Laboratories
70783 Ред. M RU
Стр. 2 из 4
Действительно с: 8/27/13
Ограничения
Проба с содержанием креатинина, превышающим границу
линейного диапазона, необходимо развести 0,9% физиологическим раствором и повторить анализ с использованием
коэффициента разведения при расчете результата.
Рабочие характеристики
Все рабочие характеристики были определены в компании
Diazyme Laboratories с использованием устройства Hitachi 917.
Предел обнаружения
Предел обнаружения составляет 12 мкмоль/л (0,14 мг/дл).
Точность
Рабочие
характеристики
данного
метода
анализа
сравнивались с характеристиками доступного в продаже
набора для определения креатинина при помощи проб
сыворотки с концентрацией креатинина 0,2—13,51 мг/дл
(17,7—1194,3 мкмоль/л) и проб мочи с концентрацией
креатинина 0,14—141 мг/дл (12,4—12 434,4 мкмоль/л).
Исследование корреляции результатов анализа сыворотки
крови проводилось с использованием 50 неизмененных и
5 измененных проб сыворотки. Исследование корреляции
результатов анализа мочи проводилось с использованием
42 неизмененных и 9 измененных проб мочи. Ниже
представлены результаты анализа корреляции для наборов
проб как сыворотки крови, так и мочи.
Точность – пробы сыворотки крови:
Коэффициент корреляции: 0,9981
Наклон/точка пересечения: y = 0,9467x + 0,0643
Прецизионность
Прецизионность
результатов
методики
определения
креатинина с помощью жидких реагентов Diazyme оценивалась
в соответствии с руководством EP5-A Института клинических
лабораторных стандартов (Clinical Laboratory Standards
Institute, ранее NCCLS). В этом исследовании анализ четырех
образцов сыворотки выполнялся при помощи устройства
Hitachi 917, по 2 повтора дважды в день в течение 20 дней.
Кол-во измерений
Среднее, мг/дл
(мкмоль/л)
СО, мг/дл
(мкмоль/л)
CV%
Анализ
сывороток
Кол-во измерений
Среднее, мг/дл
(мкмоль/л)
СО, мг/дл
(мкмоль/л)
CV%
Внутрисерийная прецизионность
0,75
1,41
4,11
10,28
мг/дл
мг/дл
мг/дл
мг/дл
(66,3
(125
(346
(908,7
мкмоль/л)
мкмоль/л)
мкмоль/л) мкмоль/л)
80
80
80
80
0,74
1,38
4,04
10,28
(65,4)
(122,3)
(357,5)
(908,7)
0,015 (1,3) 0,015 (1,37) 0,029 (2,54) 0,015 (1,3)
2,1
1,1
0,7
0,1
Общая прецизионность
0,75
1,41
4,11
10,28
мг/дл
мг/дл
мг/дл
мг/дл
(66,3
(125
(346
(908,7
мкмоль/л)
мкмоль/л)
мкмоль/л) мкмоль/л)
80
80
80
80
0,74
1,38
4,04
10,28
(65,4)
(122,3)
(357,5)
(908,7)
0,022 (1,9) 0,026 (2,29) 0,058 (5,11) 0,14 (12,4)
3,0
1,9
1,4
Анализ мочи
Кол-во измерений
Среднее, мг/дл
(мкмоль/л)
СО, мг/дл
(мкмоль/л)
CV%
Анализ мочи
Кол-во измерений
Среднее, мг/дл
(мкмоль/л)
СО, мг/дл
(мкмоль/л)
CV%
Внутрисерийная прецизионность
Уровень 1
Уровень 2
Уровень 3
21
21
21
29,09
87,1
196,7
(2572)
(7711)
(17 407)
0,1
0,27
0,90
(8,84)
(23,60)
(79,71)
0,36
0,31
0,46
Общая прецизионность
Уровень 1
Уровень 2
Уровень 3
20
20
20
29,86 (2640)
0,79 (69,8)
2,64
87,7 (7765)
195 (17 265)
0,67 (59,2)
1,19 (105,2)
0,76
0,60
Линейность
Точность – пробы мочи:
Коэффициент корреляции: 0,9968
Наклон/точка пересечения: y = 1,0002x - 0,0518
Анализ
сывороток
Прецизионность
результатов
методики
определения
креатинина при помощи жидких реагентов Diazyme изучалась
также для проб мочи с использованием модифицированного
протокола EP10. Для определения внутрисерийной прецизионности был выполнен 21 повторный анализ коммерческих
контрольных образцов мочи. Для определения общей
прецизионности выполнялось 2 серии анализов каждого из
коммерческих контрольных образцов мочи на протяжении
5 дней подряд. Выполнялось десятикратное разведение проб
0,9%
физиологическим
раствором
с
последующим
определением концентрации креатинина. Затем результаты
умножались на коэффициент разведения (т. е. на 10) для
получения окончательных значений, представленных ниже.
Линейность данного метода анализа сохраняется в диапазоне
0,14—13,56 мг/дл (12—1200 мкмоль/л) для сыворотки крови и
0,14—141,25 мг/дл (12—12 500 мкмоль/л) для мочи.
Результаты ниже 0,14 мг/дл (12 мкмоль/л) являются
недействительными. Если результат превышает 141,25 мг/дл
(12 500 мкмоль/л), образец необходимо развести в 10 раз
физиологическим раствором и повторить анализ.
Интерференция
Влияние на результаты методики определения креатинина при
помощи жидких реагентов Diazyme оценивалось при помощи
анализатора Hitachi 917. Следующие соединения, в норме
присутствующие в сыворотке крови, в указанных ниже
концентрациях вызывали отклонение результатов анализа менее
чем на 10%: триглицериды 1000 мг/дл, аскорбиновая кислота
10 ммоль/л, билирубин 40 мг/дл, конъюгированный билирубин
30 мг/дл, гемоглобин 500 мг/дл. Следующие соединения, в норме
присутствующие в моче, в указанных ниже концентрациях
вызывали отклонение результатов анализа менее чем на 10%:
триглицериды 1000 мг/дл, аскорбиновая кислота 10 ммоль/л,
билирубин 40 мг/дл, конъюгированный билирубин 40 мг/дл,
гемоглобин 1000 мг/дл.
Литература
1. Tietz, N. W. (Ed): Fundamentals of Clinical Chemistry, W. B.
Saunders Co., Philadelphia, 865 (1982)
2. National Kidney Foundation K/DOQI. Clinical Practice
Guidelines for chronic kidney disease: evaluation, classification,
and stratification. Am J Kidney Dis 2002; 39:S1-S200
3. Badiou S, Dupuy AM, Descomps B, Cristolead, JP. Comparison
between the enzymatic vitros assay for creatinine determination
and three other methods adapted on the Olympus analyzer,
Journal of Clinical Laboratory Analysis 2003:17, 235 - 240
1,4
Diazyme Laboratories
70783 Ред. M RU
Стр. 3 из 4
Действительно с: 8/27/13
4. Hayes AW. Principles and Methods of Toxicology, Taylor &
Francis, 1028 (2001)
5. Cristenson RH, Johnson LJ, Gregory, LC. Appleton and Lange’s
Outline Review Clinical Chemistry, McGraw-Hill Professional,
118 (2001)
6. Mazzachi BC, Peake MJ, Ehrhardt V. Reference Range and
Method Comparison Studies for Enzymatic and Jaffé Creatinine
Assays in Plasma and Serum and Early Morning Urine. Clin Lab
2000; 46;53-55
MDSS
Schiffgraben 41
30175 Hannover, Germany
(Германия)
12889 Gregg Court
Poway, CA 92064, USA (США)
Тел.: (858) 455-4754
Факс: (858) 455-4750
Diazyme Laboratories
70783 Ред. M RU
Стр. 4 из 4
Действительно с: 8/27/13