järjestäminen tilalla Alkiohuuhtelun järjestäminen tilalla Mikä

20.3.2015
Alkiohuuhtelun järjestäminen tilalla
järjestäminen tilalla
Mikä alkio on?
• Viikon ikäinen, munasolu + siittiö
• Koko noin 1/10 mm
• Pyöreä pallo, jossa
• kuori eli zona
• sisällä soluja
• Solut vielä kaikki samanlaisia
• voidaan irrottaa muutama solu ilman että alkio kärsii
• Irrallaan kohdunsarven kärjessä
Eläinlääkäri Kirsi Vartia, Faba
Vasikoita alkioista
Miten alkiota saadaan?
• Naudalta irtoaa yleensä vain yksi munasolu
• Superovulaatio: – annetaan FSH‐hormonia: ‐> useita munasoluja irtoaa yhtä aikaa
– prostaglandiini‐hormonilla eläin tulee kiimaan
– siemennetään – huuhdellaan alkiot viikon kuluttua
SUPEROVULAATIO
VASTAANOTTAJAT
LUOVUTTAJA
ALKIOT
ALKIONSIIRTO
ALKIOHUUHTELU
SIEMENNYS
KÄSITTELYT, PAKASTUS
KIIMOJEN SYNKRONOINTI
VASIKAT
Huuhdeltava eläin
Follikkeliaallot määrittävät huuhteluaikataulua
• Halutaan paljon jälkeläisiä
• Hieho: – siemennyskokoinen
– munasarjatoiminta käynnistynyt
– säännöllinen kiimakierto
• Lehmä: – palautunut poikimisesta
– munasarjatoiminta käynnistynyt – säännöllinen kiimakierto
– hyvä yleiskunto
1
20.3.2015
Vastaanottaja
•
•
•
•
•
Ei haluta omaa jälkeläistä
Terve
Hedelmällisyys ok
Kiimakierto käynnissä
Kohtu palautunut poikimisesta
Huuhtelun suunnittelu
•
•
•
•
•
Hyvä aloittaa pian eläimen poikimisen jälkeen
Hieholla vähän ennen vuoden ikää
Yhteys huuhteluryhmän eläinlääkäriin
Tarkka kiimanseuranta ja muistiinpanot
Mahdollisimman tasainen ruokinta ja olosuhteet
– Tee muutto karsinaan/parteen ajoissa
– Totuta eläin käsittelyyn
Aikataulutus
• Ohjelma aloitetaan 9‐12 vrk aloituskiimasta
• Tärkeää tietää seisovan kiiman ajankohta
• Kiiman päätyttyä ilmoitetaan huuhtelueläinlääkärille
– > suunnittelee huuhteluohjelman sekä vastaanottajien synkronoinnit
– > lähettää ohjeet tilalle ja tilan eläinlääkärille
Tila:
xxx, xxxx
HUUHTELUOHJELMA
Huuhteleva ell: Kirsi Vartia p. 040 3115 329
HUUHDELTAVA ELÄIN: Lola VASTAANOTTAJAT:
PVM
LÄÄKITYS
23.2
kierukka
1.3
pg
PVM
1.3
LÄÄKITYS
pg: 680
Yhteistyötä !
• Perusteelliset kirjalliset ohjeet
• Aina voi kysyä !!
• Jalostusasiantuntija valitsee eläimet ja siemennyssonnin
• Oma eläinlääkäri tarkastaa eläimet tilalla
• Seminologi siementää
• Alkionsiirtoseminologi avustaa huuhtelupäivänä
HUUHDELTAVA ELÄIN:Lola
VASTAANOTTAJAT:
PVM
su
15.3
ma
16.3
ti
17.3
LÄÄKITYS
LÄÄKITYS JA ANNOS 12 ml
KLO
A: FOLLTROPIN 2,0 ml
AAMU
I: FOLLTROPIN 2,0 ml
ILTA
A: FOLLTROPIN 1,5 ml
AAMU
I: FOLLTROPIN 1,5 ml
ILTA
A: FOLLTROPIN 1,5 ml
AAMU
PROSTAGLANDIINI +
ILTA
I: FOLLTROPIN 1,5 ml
ke
A: FOLLTROPIN 1,0 ml +
AAMU
18.3
PROSTAGLANDIINI
ILTA
I: FOLLTROPIN 1,0 ml
HUUHDELTAVAN ELÄIMEN KIIMANTARKKAILU:
SEISOVAN KIIMAN AJANKOHTA:
SIEMENNYS ALOITETAAN 12 H SEISOVASTA KIIMASTA
PVM
TOIMENPIDE
KLO
PROSTAGLANDIINI
KIERUKAT POIS
VASTAANOTTAJIEN
KIIMANTARKKAILU
MERKITÄÄN
ERILLISELLE
LOMAKKEELLE
KOMMENTTEJA
1.SIEMENNYS
ALOITUSKIIMAN PVM : 4-5.3
2. SIEMENNYS
3. SIEMENNYS
HUUHTELU: 27.3.2015
HUUHTELUN JÄLKEINEN PROSTAGLANDIINI : 30.3.2015
2
20.3.2015
HUUHDELTAVA ELÄIN:Lola
VASTAANOTTAJAT:
HUUHDELTAVA ELÄIN:Lola
VASTAANOTTAJAT:
PVM
su
15.3
ma
16.3
ti
17.3
LÄÄKITYS
PVM
su
15.3
ma
16.3
ti
17.3
LÄÄKITYS
LÄÄKITYS JA ANNOS 12 ml
KLO
A: FOLLTROPIN 2,0 ml
AAMU
I: FOLLTROPIN 2,0 ml
ILTA
A: FOLLTROPIN 1,5 ml
AAMU
I: FOLLTROPIN 1,5 ml
ILTA
A: FOLLTROPIN 1,5 ml
AAMU
PROSTAGLANDIINI +
ILTA
I: FOLLTROPIN 1,5 ml
ke
A: FOLLTROPIN 1,0 ml +
AAMU
18.3
PROSTAGLANDIINI
ILTA
I: FOLLTROPIN 1,0 ml
HUUHDELTAVAN ELÄIMEN KIIMANTARKKAILU:
SEISOVAN KIIMAN AJANKOHTA:
SIEMENNYS ALOITETAAN 12 H SEISOVASTA KIIMASTA
PVM
TOIMENPIDE
KLO
PROSTAGLANDIINI
KIERUKAT POIS
VASTAANOTTAJIEN
KIIMANTARKKAILU
MERKITÄÄN
ERILLISELLE
LOMAKKEELLE
KOMMENTTEJA
LÄÄKITYS JA ANNOS 12 ml
KLO
A: FOLLTROPIN 2,0 ml
AAMU
I: FOLLTROPIN 2,0 ml
ILTA
A: FOLLTROPIN 1,5 ml
AAMU
I: FOLLTROPIN 1,5 ml
ILTA
A: FOLLTROPIN 1,5 ml
AAMU
PROSTAGLANDIINI +
ILTA
I: FOLLTROPIN 1,5 ml
ke
A: FOLLTROPIN 1,0 ml +
AAMU
18.3
PROSTAGLANDIINI
ILTA
I: FOLLTROPIN 1,0 ml
HUUHDELTAVAN ELÄIMEN KIIMANTARKKAILU:
VASTAANOTTAJIEN
KIIMANTARKKAILU
MERKITÄÄN
ERILLISELLE
LOMAKKEELLE
SIEMENNYS ALOITETAAN 12 H SEISOVASTA KIIMASTA
PVM
TOIMENPIDE
1.SIEMENNYS
1.SIEMENNYS
2. SIEMENNYS
2. SIEMENNYS
KLO
KOMMENTTEJA
3. SIEMENNYS
HUUHTELU: 27.3.2015
HUUHTELUN JÄLKEINEN PROSTAGLANDIINI : 30.3.2015
HUUHTELU: 27.3.2015
HUUHTELUN JÄLKEINEN PROSTAGLANDIINI : 30.3.2015
HUUHDELTAVA ELÄIN:Lola
VASTAANOTTAJAT:
PVM
su
15.3
ma
16.3
ti
17.3
LÄÄKITYS
LÄÄKITYS JA ANNOS 12 ml
KLO
A: FOLLTROPIN 2,0 ml
AAMU
I: FOLLTROPIN 2,0 ml
ILTA
A: FOLLTROPIN 1,5 ml
AAMU
I: FOLLTROPIN 1,5 ml
ILTA
A: FOLLTROPIN 1,5 ml
AAMU
PROSTAGLANDIINI +
ILTA
I: FOLLTROPIN 1,5 ml
ke
A: FOLLTROPIN 1,0 ml +
AAMU
18.3
PROSTAGLANDIINI
ILTA
I: FOLLTROPIN 1,0 ml
HUUHDELTAVAN ELÄIMEN KIIMANTARKKAILU:
SEISOVAN KIIMAN AJANKOHTA:
SIEMENNYS ALOITETAAN 12 H SEISOVASTA KIIMASTA
TOIMENPIDE
KIERUKAT POIS
SEISOVAN KIIMAN AJANKOHTA:
3. SIEMENNYS
PVM
PROSTAGLANDIINI
KLO
PROSTAGLANDIINI
KIERUKAT POIS
VASTAANOTTAJIEN
KIIMANTARKKAILU
MERKITÄÄN
ERILLISELLE
LOMAKKEELLE
KOMMENTTEJA
1.SIEMENNYS
2. SIEMENNYS
Muutama vinkki
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Siemennyssonnin valinta
Riittävä annosmäärä
Varoita päivystystä huuhtelusiemennyksistä
Vastaanottajia tarvitaan edes muutama
Muista sekoittaa hormonin neste ja kuiva‐aine
Säilytä hormoni jääkaapissa ja yritä olla pudottamatta pulloa
Muista prostaglandiinit!
Kerro, jos sinulla on jossakin varapakasteita
Tehdään suunnitelma varapakasteista
Soita jos vähänkin epäilyttää meneekö oikein
Siirrä tai myy alkiot!
3. SIEMENNYS
HUUHTELU: 27.3.2015
HUUHTELUN JÄLKEINEN PROSTAGLANDIINI : 30.3.2015
Mitä huuhtelumaljalta löytyy?
• Alkiohuuhtelussa Suomessa saadaan keskimäärin noin 7 siirtokelpoista alkiota (vaihteluväli 0‐ 50)
• Usein myös hedelmöittymättömiä munasoluja ja alkioita joiden kehitys on pysähtynyt • Noin 10‐15 % huuhteluista ei tuota lainkaan siirtokelpoisia alkioita
Alkiohuuhtelut 2008‐2014
350
300
250
[CELLRANGE]
[CELLRANGE]
[CELLRANGE]
[CELLRANGE]
200
[CELLRANGE]
[CELLRANGE]
[CELLRANGE]
150
100
50
0
2008
2009
2010
2011
Conventional
2012
2013
2014
Sexed
3
20.3.2015
Seksattu siemen huuhteluissa
n
Siirtok. Alkiot/huuhtelu
Deg/huuhtelu
Ufo/huuhtelu
Yht/huuhtelu
Sex: hiehot
Normaali: hiehot
Sex: lehmät
Normaali:
lehmät
335
6,5
1753
7,2
122
5,0
509
9,2
1,7
2,9
11,2
1,6
2,3
11,1
1,9
5,1
11,9
1,4
2,3
12,9
Alkioiden genomimääritys
Tavoitteena 10 solua alkiomassasta
Genomimääritys alkiosta
• Ensin katsotaan sukupuoli
– Lehmä  määritys päättyy yleensä tähän
• Alkiot siirtoon/pakkaseen – Sonni  katsotaan genomit
• Alkiot pakkaseen odottamaan tulosta
• Hollanti, Saksa, Ranska
• Ranska: tiineyttävyys 48 % genomimääritetyillä pakasteilla
• Tiineyttävyys vaihtelee 33‐65% välillä
Ovum‐Pick‐Up eli OPU
• Munasolujen keräys eläimen munasarjoista ultraääniavusteisesti
 munasolujen kypsytys laboratoriossa
 hedelmöitys
 viljely
4
20.3.2015
OPU
OPU & alkioiden in vitro‐tuotanto
OPU
• 1978: ensimmäinen “koeputkilapsi” Louise Brown
LUOVUTTAJA
ALKIONSIIRTO
MUNASOLUT
ALKIOTUOTANTO LABORATORIOSSA
• 1981: enimmäinen koeputkivasikka Virgil
OPU‐ALKIOT
VASTAANOTTAJAT
• 1987: OPU‐tekniikka toimivaksi naudalla (Tanska, Hollanti)
VASIKAT
SIEMEN
• Suomessa OPU käyttöön 1998, ensimmäinen
koeputkivasikka Nopu 1999 SONNI
OPUn käyttökohteet
OPU Euroopan mittakaavassa
• Jalostusohjelmat – perinteisen alkiohuuhtelun
rinnalla
• Työkaluna pidemmälle vietyjen
lisääntymistekniikoiden ja biotekniikan
kehittämisessä (transgeeniset eläimet, kloonaus)
Lähde: AETE
5
20.3.2015
Alkioita / OPU / eläin
Tehotonta? Miksi tehdä OPUa?
• Jokainen munasoluerä voidaan haluttaessa hedelmöittää eri sonnilla  useita eri paritusmahdollisuuksia, myös seksattu
siemen
• Voidaan kerätä 1‐2 kertaa / viikko
• Voidaan kerätä myös alkutiineyden aikana (3 ensimmäistä tiineyskuukautta)
• Eläin, josta ei saada huuhtelemalla alkioita voi toimia OPU:ssa hyvin
Lähde: AETE
Alkiohuuhtelu
OPU
6 siirtokelpoista
alkiota/ huuhtelu
2 OPU‐sessiota / luovuttaja / viikko
10 huuhtelua / vuosi
1,5‐2 alkiota / sessio
60 alkiota / vuosi
150 alkiota / vuosi
35 vasikkaa / vuosi
70 vasikkaa / vuosi
Luovuttaja
Samantapaiset kriteerit kuin alkionluovuttajalla:
• Genetiikka
• Terve
• Kuntoluokka
• SEN SIJAAN voi olla tiine
Tarvittava välineistö
• Ultraäänilaite jossa sektorianturi kiinnitettävissä
neulanohjaimeen
• Alipainepumppu
• Neulat, letkut, keräysputket...
6
20.3.2015
OPU ‐ Toimenpide
• Epiduraalipuudutus
• (Tarvittaessa kevyt rauhoitus)
• Suolen tyhjennys, normaalit
puhdistukset
• Anturi + neulanohjain + neula
emättimeen, käsin rektaalisesti
ohjataan munasarja anturin
päätä vasten  neula
follikkeliin, munasolu ja
follikkelineste letkua pitkin
putkeen
OPERATOR HAND
US PROBE WITH NEEDLE
VAGINAL WALL
CERVIX
OVARY
Haasteita
Tulevaisuuden visiot
• Pitkään jatkuvassa keräämisessä eläimen hyvinvointi?
• OPU‐alkioiden pakastaminen
• Biopsian otto (genomimääritys) ja biopsioidun
alkion pakastaminen
• OPU VikingGeneticsin jalostusohjelmaan 2014 syksyllä, alkuun tutkimusta ja kehitystyötä yhdessä MTT:n kanssa
• Täydentämään huuhteluja, ei korvaamaan huuhtelutoimintaa
Anti‐Müllerian ‐hormoni
Kiitos!
• Follikkelien granulosasolujen erittämä hormoni
• Ennustaa 3‐7 mm mittaisten follikkelien määrää munasarjoissa
• kertoo superovulaatiovasteesta eli alkiomäärästä
• Näytteenoton ajankohta ei ole riippuvainen kiimakierron vaiheesta
7