Download Report

PB-MAX™ Karyotyping Medium
12557
PB-IFU
PB-MAX™ Karyotyping Medium
English
2
™eskÔ jazyk
4
Dansk
6
Nederlands
8
eesti
10
Suomi
12
Français
14
Deutsch
16
Ελληυικα
18
magyar
20
Íslenka
22
Italiano
24
latviešu
26
lietuviškas
28
polski
30
português
32
SlovenskÔ jazyk
34
Español
36
Svenska
38
Label Symbol Glossary
40
English
PB-MAX™ Karyotyping Medium
with Fetal Bovine Serum
with gentamicin sulfate at 35 mcg/mL
with L-glutamine
with phytohemagglutinin
Cat. No.:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Intended Use
PB-MAX™ Karyotyping medium is intended for use in in
vitro diagnostic procedures which require the short-term
cultivation of peripheral blood lymphocytes for cytogenetic
study.This product has been rigorously quality control tested
by a leading U.S. clinical cytogenetic reference laboratory for
this application (see Performance Testing).
Background
The most common source of cells for clinical cytogenetic
study are peripheral blood lymphocytes.1 Routine
cytogenetic studies performed on peripheral blood
lymphocytes can include detection or confirmation of
chromosomal aberrations associated with numerical and
structural changes, autosomal and sex chromosomal
anomalies and constitutional or somatic effects.2,3 This
procedure represents the least invasive method for
obtaining primary cells for cytogenetic study, with 123,000
being performed in the U.S. annually.4 Lymphocytes are
mature cells, and thus, not actively dividing.The technique
developed by Moorehead et al. in 19605 for the short-term
culture of lymphocytes requires the use of a mitogen to
induce mitosis in nondividing cells.The most commonly used
mitogen is phytohemagglutinin (PHA) which is a red kidney
bean extract that transforms small lymphocytes
(T cells) into blastlike cells.This transformation is rapidly
followed by RNA synthesis with DNA synthesis beginning
24 hours later.1 Once DNA synthesis begins, the cells are
committed, and PHA is no longer needed in the culture.
Seventy-two hours after the addition of PHA to the culture,
about 45% of cells are in S phase.This represents the peak
mitotic activity, and is the optimum point at which to
harvest for chromosome studies.6
Most clinical cytogenetic laboratories culture peripheral
blood lymphocytes for a period of 48-72 hours in a
complete culture medium which consists of a basal medium
supplemented with approximately 10-40% fetal bovine
serum, PHA in the range of approximately 1-2% v/v
depending on source, L-glutamine and antibiotics. Some lots
of FBS can exhibit toxicity, and should be qualified prior to
use in cytogenetic studies. Also, PHA potency for mitotic
stimulation can vary with different lots.The optimum
concentration usually needs to be determined prior to use
or one can follow vendor dilution recommendations for the
lot in use.
2
Invitrogen recognizes the cytogenetic laboratory’s need for
culture media products supplied completely supplemented
and cytogenetically qualified in addition to demonstrating
consistent performance. In response to this need, PB-MAX™
Karyotyping medium was designed as a complete ready-touse product and is prequalified on primary cells in an
application-specific cytogenetic assay which is performed by
experienced cytogeneticists at a leading certified cytogenetic
laboratory following standardized protocols.
Product Description
PB-MAX™ Karyotyping medium is composed of a liquid
RPMI-1640 basal medium which is completely supplemented
with standard concentrations of L-glutamine, gentamicin
sulfate, fetal bovine serum and phytohemagglutinin.This
formulation is based on Peripheral Blood Media referenced
in the ACT Laboratory Manual (1991) for use in PHAstimulated Peripheral Blood Culture.6 PB-MAX™ is provided
as a 1X frozen liquid medium which is complete and ready
to use once thawed.This design allows for optimal shelf life
and requires no additional supplementation which minimizes
end-user handling which could potentially compromise
product integrity. In addition to offering the convenience of a
ready-to-use product, two sizes are available to meet the
changing need associated with each individual laboratory’s
volume.This product is manufactured under cGMP’s in an
ISO 9001 Certified facility. Each lot of product is
performance tested on primary peripheral blood
lymphocytes cultured for approximately 72 hours and
evaluated for miotic index and chromosome banding
resolution of the #10 chromosome. Each lot is run in
parallel against a culture medium which has been
performance qualified previously in this assay system.
Precautions
FOR USE IN IN VITRO DIAGNOSTIC PROCEDURES
REQUIRING THE CULTIVATION AND GROWTH OF
PERIPHERAL BLOOD LYMPHOCYTES.
1. DO NOT USE IF MEDIUM APPEARS CLOUDY,
PACKAGE HAS BEEN COMPROMISED OR IF
PRODUCT WAS RECEIVED THAWED.
2. ANTIBIOTIC POTENCY IS DETERMINED AT TIME
OF FORMULATION. PRODUCT SHELF LIFE IS
BASED ON PERFORMANCE IN FUNCTIONAL
ASSAYS, NOT ANTIBIOTIC POTENCY.
3. AVOID PROLONGED EXPOSURE TO LIGHT.
Storage Conditions
-5 to -20°C, in the dark.
Shelf-Life
12 months when stored unopened at the recommended
storage conditions.
Instructions For Use
Thaw PB-MAX™ Karyotyping medium at 4 to 8°C.Warm
the medium to room temperature and gently swirl to mix
prior to use. PB-MAX™ Karyotyping medium can be thawed
and aseptically transferred into smaller aliquots for
convenience.These aliquots can be frozen and thawed at
time of use, however multiple freeze-thaw cycles should be
avoided. Avoid prolonged exposure to light when using this
culture medium product.
Quality Control
Each lot of PB-MAX™ Karyotyping medium is performance
tested at the time of manufacture. In addition to standard
quality control tests such as pH, osmolarity, mycoplasma and
sterility, each manufactured lot of medium is tested to
ensure consistent biological performance by means of
quantitative growth assay using primary human peripheral
blood lymphocytes. Primary cells, obtained from normal
healthy donors, are cultured for approximately 72 hours at
which time are harvested, slides prepared and evaluated by
scoring mitotic index and chromosome banding resolution.
Each lot of product is tested in parallel and compared to an
approved reference standard which ensures consistent
diagnostic performance. Please refer to the certificate of
analysis for further information.
Limitations
Each manufactured lot of PB-MAX™ Karyotyping medium is
performance tested on primary peripheral blood
lymphocytes to ensure product performance for in vitro
diagnostic use for this application. Although this media will
likely perform for use in propagation of other cell types,
their intended use is not subject to present quality control
procedures and no assurances are presently given for their
application.
GIBCO™ cell culture liquid products are prepared by an
aseptic process for which each step has been validated to
ensure that all products meet the industry standard sterility
assurance level of 10-3;i.e.,product that demonstrates a
contamination level of no more than 1 of 1000 units during
the manufacturing process.The highest level of sterility
assurance (equal to or greater than 10-6) cannot be achieved
without terminal sterilization which is harmful to the
performance of cell culture products.
References
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
For further information or for technical support on
this or other GIBCOTM products, contact Technical Services
at [email protected], or refer to the GIBCOTM
products catalogue for local phone numbers
in your region.
You may also contact your Invitrogen Sales Representative
or our World Wide Web site at www.invitrogen.com.
For in vitro diagnostic use.
CAUTION: Not for human or animal therapeutic use.
Uses other than the labeled intended use may
be a violation of local law.
EACH CLINICIAN/SCIENTIST MUST MAKE AN
INDEPENDENT JUDGEMENT ON WHETHER THIS
MEDIUM IS SUITABLE FOR USE IN IN VITRO DIAGNOSTIC
APPLICATIONS CONDUCTED IN THEIR LABORATORY
INVITROGEN, DOES NOT GUARANTEE THE
SUCCESSFUL OUTCOME OF ANY DIAGNOSTIC
TESTING BASED SOLELY ON THE USE OF GIBCO™
MEDIUM. GIBCO’s CONTRIBUTION TO THESE
PROCEDURES IS SIMPLY AT THE STEP OF PROVIDING
A CULTURE OR HANDLING MEDIUM FOR THESE
PROCEDURES.
3
™eskÔ jazyk
Médium pro karyotypizaci PB-MAX™
s fetálním hov∑zím sérem
s gantamicin sulfátem, 35mcg/ml
s L-glutaminem
s fytohemaglutininem
Katalogové ´íslo:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Použití
Médium pro karyotypizaci PB-MAX™ je ur´ené pro
diagnostické použití in vitro, pro které je pot’ebná
krátkodobá kultivace lymfocyﬂ periferní krve pro
cytogenetické studie. Tento vÔrobek prošel pro toto použití
p’ísnÔmi testy na kvalitu v p’ední cytogenetické referen´ní
laborato’i v USA (viz Testování ú´innosti).
Kontext
Nej´ast∑jším zdrojem bun∑k pro klinické cytogenetické
studie jsou lymfocyty periferní krve.1 K rutinním
cytogenetickÔm studiím provád∑nÔm na lymfocytech
periferní krve patŕí detekce nebo potvrzení
chromozomálních aberací spojenÔch s numerickÔmi a
strukturálními zm∑nami, anomáliemi autosomálních a
pohlavních chromozomﬂ a vrozenÔch nebo somatickÔch
ú´inkﬂ.2,3 Tento postup představuje nejmén∑ invazivní metodu
k získání primárních bun∑k pro cytogenetické studie. Jen v
USA se provede ro´n∑ 123 000 takovÔch studií.4 Lymfocyty
jsou zralé buÕky, a proto se aktivn∑ ned∑lí. V technice
vyvinuté Mooreheadem et al. v roce 19605 ke krátkodobé
kultivaci lymfocytﬂ je potřebné použití mitogenu k indukci
mitózy u ned∑lících se bun∑k. Nej´ast∑ji používanÔm
mitogenem je fytohemaglutinin (PHA), což je extrakt zrn
´erven´Ôch fazolí, kterÔ transformuje malé lymfocyty
(T buÕky) na buÕky podobné blastocytﬂm. Po této
transformaci následuje rychle syntéza RNA a syntéza DNA
za´ne o 24 hodin pozd∑ji.1 Jakmile za´ne syntéza DNA,
buÕky se nasadí a v kultuře již PHA není zapotřebí. Za 72
hodin po přidání PHA do kultury je asi 45 % bun∑k v S-fázi.
To představuje vrcholovou mitotickou aktivitu a je
optimálním bodem, při kterém dochází k nejlepšímu vÔt∑žku
chromozomálních studií.6
Ve v∑tšin∑ klinickÔch cytogenetickÔch laboratoří se kultivují
lymfocyty periferní krve po dobu 48-72 hodin v úplném
kultiva´ním médiu, které se skládá ze základního média
dopln∑ného přibližn∑ 10-40 % fetálního hov∑zího séra, PHA
v rozmezí přibližn∑ 1-2 % v/v v závislosti na zdroji,
L-glutaminem a antibiotiky. N∑které šarže FBS mohou
vykazovat toxicitu a mají bÔt před použitím v
cytogenetickÔch studiích vyhodnoceny. Ú´inky PHA na
mitotickou stimulaci se mohou též u rﬂznÔch šarží lišit. Před
použitím je obvykle zapotřebí stanovit optimální koncentraci,
případn∑ lze použít doporu´ení k řed∑ní dané prodejcem
pro příslušnou šarži.
4
Firma Invitrogen rozumí potřeb∑ cytogenetickÔch laboratoří
mít kultiva´ní média, která jsou kompletn∑ dopln∑na a
cytogeneticky zpﬂsobilá krom∑ své trvalé ú´innosti. Jako
reakce na tuto potřebu bylo vyvinuto karyotypiza´ní
médium PB-MAX™, které je připraveno k použití a má
předem zjišt∑nou zpﬂsobilost na primárních buÕkách v
cytogenetické analÔze specifické pro dané použití, která je
provedená zkušenÔmi cytogenetiky v přední certifikované
cytogenetické laboratoři podle standardizovanÔch protokolﬂ.
Popis vÔrobku
Médium pro karyotypizaci PB-MAX™ je složeno z tekutého
základního média RPMI-1640, které je kompletn∑ dopln∑no
standardní koncentrací L-glutaminu, gentamicin sulfátu,
fetálního hov∑zího séra a fytohemaglutininu. Tato formulace
je vytvořena na základ∑ média pro periferní krev uvedeného
v ACT Laboratory Manual (1991) pro použití v kultuře pro
periferní krev stimulované pomocí PHA.6 PB-MAX™ se
dodává jako 1X zmrazené tekuté médium, které je
kompletní a po rozmrznutí ihned připravené k použití. Toto
provedení umožÕuje optimální dobu použitelnosti a není u
n∑ho zapotřebí žádná dodate´ná suplementace.Tím se
minimalizuje manipulace kone´n´Ôm spotřebitelem, což by
mohlo potenciáln∑ ohrozit integritu vÔrobku. Krom∑ toho,
že nabízíme pohodlné použití přípravku připraveného k
okamžitému použití, jsou k dispozici dv∑ velikosti vÔrobku, a
tak je možné vyhov∑t zm∑nám potžřeb jednotlivÔch
laboratoří. Tento vÔrobek se vyrábí podle požadavkﬂ
Správné vÔrobní praxe v závod∑ s certifikací ISO 9001.
Každá šarže vÔrobku prochází testováním ú´innosti na
kulturách primárních lymfocytﬂ periferní krve, které jsou
kultivovány po dobu přibližn∑ 72 hodin a hodnotí se
mitotickÔ index a vazebné rozlišení chromozomu ´. 10.
Každá šarže je testována proti kultiva´nímu médiu, u
kterého byla předtím stanovena zpﬂsobilost v tomto
analyza´ním systému.
UPOZORN∂NÍ
PRO POUŽITÍ P‘I DIAGNOSTICKÓCH POSTUPECH
IN VITRO, KTERÉ VYŽADUJÍ KULTIVACI A RﬁST
LYMFOCYTﬁ PERIFERNÍ KRVE.
1. VÓROBEK NEPOUŽÍVEJTE, POKUD MÉDIUM
VYPADÁ ZKALENÉ, OBAL JE PORUÏENÓ, ANEBO
POKUD JSTE OBDRŽELI VÓROBEK ZCELA
ROZMRZNUTÓ.
2. ANTIBIOTICKÁ SÍLA JE UR™ENÁ V DOB∂
FORMULACE. DOBA POUŽITELNOSTI VROBKU JE
DÁNA JEHO Ú™INNOSTÍ P‘I FUNK™NÍ ANALÓZE
A NIKOLIV ANTIBIOTICKOU SILOU.
3. NEVYSTAVUJTE DLOUHÉMU VLIVU SV∂TLA.
Podmínky uchovávání
-5 až -20°C, ve tm∑.
Doba použitelnosti
12 m∑sícﬂ, pokud je vÔrobek uchováván v neotevřeném
stavu a za doporu´en´Ôch skladovacích podmínek.
Návod k použití
Nechejte rozmrznout karyotypiza´ní médium PB-MAX™ při
teplot∑ 4- 8°C. Ohřejte médium na pokojovou teplotu a
před použitím ho jemnÔm vířením promíchejte.
Karyotypiza´ní médium se mﬂže rozmrazit a za aseptickÔch
podmínek přenášet při potřeb∑ menších množství. Tyto
menší ´ásti v´Ôrobku lze op∑t zmrazit a rozmrazit v dob∑,
kdy budou použity, je však zapotřebí se vystříhat
opakovanÔch cyklﬂ zmrazení a rozmrazení. Kultiva´ní
médium nevystavujte delšímu pﬂsobení sv∑tla.
ŽÁDNÉHO DIAGNOSTICKÉHO TESTU ZALOŽENÉHO
VÓHRADN∂ NA POUŽITÍ MÉDIA GIBCO™. P‘ÍNOS
FIRMY INVITROGEN K T∂MTO POSTUPﬁM JE DÁN
POUZE TÍM, ŽE POSKYTUJE KULTURU NEBO MÉDIUM
PRO TYTO POSTUPY.
Tekuté bun∑´né kultury GIBCO™ jsou připraveny za
aseptickÔch podmínek, při nichž je validován každÔ krok, aby
bylo zajišt∑no, že všechny vÔrobky splÕují standardní
zaru´enou prﬂmyslovou úroveÕ sterility 10-3; tj., že vÔrobek
má b∑hem vÔrobního procesu úroveÕ kontaminace ne v∑tší
než 1 na 1000 jednotek. Nejvyšší úroveÕ zajišt∑ní sterility
(rovná nebo vyšší než 10-6) nelze dosáhnout bez kone´né
sterilizace, která je však škodlivá z hlediska ú´innosti
vÔrobkﬂ bun∑´nÔch kultur.
Literatura
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
Kontrola kvality
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
Každá šarže karyotypiza´ního média PB-MAX™ je v dob∑
vÔroby testována na ú´innost. Krom∑ standardních testﬂ na
kvalitu, jako je pH, osmolarita, mykoplasmata a sterilita, je
každá šarže média testovaná s cílem zajistit konzistentní
biologickou ú´innost pomocí kvantitativní rﬂstové analÔzy s
použitím primárních lidskÔch lymfocytﬂ periferní krve.
Primární buÕky, které se získávají od normálních zdravÔch
dárcﬂ, jsou kultivovány po dobu přibližn∑ 72 hodin, poté jsou
sebrány, připraveny na krycích sklí´kách a vyhodnoceny
pomocí skórování mitotického indexu a chromozomálního
vazebného rozlišení. Každá šarže vÔrobku je testována a
porovnávána proti referen´nímu standardu, což zaru´uje
konzistentní diagnostickou ú´innost. Pro další informace si
prosím vyžádejte příslušnÔ certifikát o analÔze pro danou
šarži
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
Omezení
Každá vyrobená šarže karyotypiza´ního média PB-MAX™ je
testována na primární lymfocyty periferní krve s cílem zajistit
ú´innost v∑robku pro jeho diagnostické použití in vitro. I
když toto médium bude pravd∑podobn∑ ú´inné i při
rozmnožování jinÔch bun∑´nÔch typﬂ, jejich použití v t∑chto
případech není předm∑tem nyn∑jších postupﬂ kontroly
kvality a v sou´asné dob∑ nedáváme žádnou záruku na toto
použití.
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Pro další informace o technické podpoře tohoto vÔrobku
nebo jinÔch vÔrobkﬂ GIBCO™, se obra¤te na odd∑lení
technickÔch služeb – e-mail [email protected],
případn∑ si prostudujte katalog vÔrobkﬂ GIBCO™, kde
najdete telefonní ´ísla zastoupení ve vašem regionu.
Mﬂžete se rovn∑ž obrátit na Vašeho obchodního zástupce
firmy Invitrogen nebo navštivte naši internetovou stránku
www.invitrogen.com.
Ur´eno pro diagnostické (in vitro) použití.
UPOZORN∂NÍ: VÔrobek není ur´en pro terapeutické použití
u lidí nebo zvířat.
Jiné použití než je uvedeno ve schválené
příbalové informaci mﬂže představovat
porušení místních zákonnÔch předpisﬂ.
KAŽDÓ LÉKA‘ NEBO V∂DECKÓ PRACOVNÍK SI MUSÍ
VYTVO‘IT NEZÁVISLÓ ODHAD, ZDA JE TOTO MÉDIUM
VHODNÉ PRO DIAGNOSTICKÉ POUŽITÍ IN VITRO,
KTERÉ JE POUŽÍVÁNO V JEHO LABORATO‘I.
INVITROGEN CORP. NEZARU™UJE ÚSP∂ÏNÓ VÓSLEDEK
5
Dansk
PB-MAX™ Karyotyping Medium
Med føtalt okseserum
med gentamicinsulfat ved 35 mcg/ml
Med L-glutamin
Med phytohæmagglutinin
Kat. nr.:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Tilsigtet anvendelse
PB-MAX™ Karyotyping medium er beregnet til anvendelse i
in vitro diagnostikprocedurer, der kræver kortvarig dyrkning
af perifere blodlymfocytter til cytogenetiske studier.
Produktet er blevet grundigt kvalitetskontrolleret af et
førende klinisk cytogenetisk referencelaboratorium i USA til
denne anvendelse (se Test af ydeevne).
Baggrund
Den mest almindelige kilde til celler til klinisk cytogenetske
studier er perifere blodlymfocytter.1 Rutinemæssige
cytogenetiske studier udført på perifere blodlymfocytter kan
indbefatte detektion eller bekræftelse af kromosomfejl
associeret med talrige og strukturelle forandringer,
autosomale og kønskromosomfejl og konstitutionelle eller
somatiske virkninger.2,3 Denne procedure repræsenterer
dem mindst invasive metode til opnåelse af primære celler til
cytogenetiske studier, af hvilke der årligt udføres 123.000 i
USA.4 Lymfocytter er modne celler og deler sig derfor ikke
aktivt. Teknikken udviklet af Moorehead et al. i 1960 5 til
kortvarig dyrkning af lymfocytter kræver anvendelse af et
mitogen til induktion af mitose i ikke-delende celler. Det
mest almindeligt anvendte mitogen er phytohæmagglutinin
(PHA), som er et rødt nyrebønneekstrakt, der transformerer
små lymfocytter (T-celler) til blastlignende celler. Denne
transformation efterfølges hurtigt af RNA-syntese med
DNA-syntese begyndende 24 timer senere.1 Efter
påbegyndelsen af DNA-syntesen er cellernes skæbne
fastlagt, og PHA er ikke længere nødvendigt for kulturen.
Toghalvfjerds timer efter tilsætning af PHA til kulturen er
cirka 45% af cellerne i S-fasen. Dette repræsenterer en top
af mitotisk aktivitet og er det optimale tidspunkt for høst til
kromosomstudier.6
De fleste klinisk cytogenetiske laboratorier dyrker perifere
blodlymfocytter i en periode på 48-72 timer i et komplet
dyrkningsmedium, der består af et basalmedium suppleret
med cirka 10-40% føtalt okseserum, PHA i området af cirka
1-2% vol./vol. afhængigt af kilden, L-glutamin og antibiotika.
Visse lot af FBS kan udvise toksicitet og bør afprøves inden
brug til cytogenetiske studier. Ligeledes kan PHA’s virkning
til mitotisk stimulering variere med forskellige lot. Den
optimale koncentration skal sædvanligvis bestemmes inden
brug, eller man kan følge leverandørens fortyndingsvejledning
for loten inden brug.
Invitrogen erkender de cytogenetiske laboratoriers behov
for dyrkningsmedieprodukter leveret komplet supplerede og
cytogenetisk afprøvede ud over, at de udviser konsistent
ydeevne. Som et svar på dette behov designedes
PB-MAX™ Karyotyping medium som et komplet klar til
brug produkt, der i forvejen er afprøvet på primære celler i
et anvendelsesspecifikt cytogenetisk assay, der udføres af
erfarne cytogenetikere på et førende, godkendt cytogenetisk
laboratorium efter standardiserede protokoller.
Produktbeskrivelse
PB-MAX™ Karyotyping medium er sammensat af flydende
RPMI-1640 basalmedium, der er komplet suppleret med
standardkoncentrationer af L-glutamin, gentamicinsulfat,
føtalt okseserum og phytohæmagglutinin. Denne formulering
er baseret på medium til perifert blod refereret i ACTlaboratoriemanualen (1991) til anvendelse i PHA-stimuleret
dyrkning af perifert blod.6 PB-MAX™ leveres som et 1X
frossent flydende medium, der er komplet og klar til brug
efter optøning. Dette design giver optimal holdbarhed og
kræver ikke yderligere supplering, hvilket minimerer
slutbrugerens håndtering, der kunne kompromittere
produktets integritet. Ud over at frembyde et bekvemt og
klart-til-brug produkt er der to størrelser tilgængelige for at
tilfredsstille forskellige behov, der skyldes de enkelte
laboratoriers volumen. Dette produkt er fremstillet under
cGMP’er på en ISO 9001 godkendt facilitet. Hver enkelt
produktlot er testet for ydeevne på primære
blodlymfocytter i cirka 72 timer og evalueret for mitotisk
indeks og kromosombåndfarvningsopløsning af kromosom
10. Hvert enkelt lot er kørt i parallelt mod et
dyrkningsmedium, der forinden er blevet testet for ydeevne i
dette assaysystem.
FORHOLDSREGLER
TIL ANVENDELSE I IN VITRO DIAGNOSTISKE
PROCEDURER, DER KRÆVER DYRKNING OG VÆKST AF
PERIFERE BLODLYMFOCYTTER.
1. MÅ IKKE ANVENDES, HVIS MEDIET ER UKLART,
PAKKEN ER BESKADIGET, ELLER HVIS PRODUKTET
MODTAGES HELT OPTØET.
2. DEN ANTIBIOTISKE KAPACITET ER BESTEMT PÅ
TIDSPUNKTET FOR FORMULERINGEN.
PRODUKTETS HOLDBARHED ER BASERET PÅ
YDEEVNE I FUNKTIONELLE ASSAYS, IKKE DEN
ANTIBIOTISKE KAPACITET.
3. UNDGÅ LANGVARIG EKSPONERING MOD LYS.
Opbevaringsbetingelser:
-5 til -20°C i mørke.
Holdbarhed:
12 måneder ved opbevaring under de anbefalede betingelser.
6
Brugsanvisning
Optø PB-MAX™ Karyotyping medium ved 4 til 8°C.
Opvarm mediet til stuetemperatur og omhvirvl det forsigtigt
for at blande det inden brug. PB-MAX™ Karyotyping
medium kan optøs og overføres aseptisk til mindre aliquots
for at lette brugen. Disse aliquots kan nedfryses og optøs på
anvendelsestidspunktet. Dog skal gentagen frysning og
optøning undgås. Undgå lægerevarende eksponering mod lys
ved anvendelse af dette dyrkningsmedium.
Kvalitetskontrol
Hvert enkelt lot af PB-MAX™ Karyotyping medium er
testet for ydeevne på fremstillingstidspunktet. Ud over
standardkvalitetskontroltests, såsom pH, osmolaritet,
mycoplasma og sterilitet, er hvert enkelt fremstilede lot af
mediet testet for at sikre konsistent biologisk ydeevne ved
hjælp af et kvantitativt vækstassay anvendende primære
humane perifere blodlymfocytter. Primære celler opnået fra
normale, raske donorer blev dyrket i cirka 72 timer, på
hvilket tidspunkt de blev h, klargjort på objektglas og
evalueret ved scoring for mitotisk indeks og
kromosombåndingsopløsning. Hvert enkelt produktlot testes
parallelt og sammenlignes med en godkendt
referencestandard, hvilket sikrer konsistent diagnostisk
ydeevne. Se venligst Analysecertifikatet for yderligere
information.
Begrænsninger
Hvert fremstillede lot af PB-MAX™ Karyotyping medium er
testet for ydeevne på primære perifere blodlymfocytter for
at sikre produktets ydeevne til in vitro diagnostisk brug i
denne anvendelse. Skønt dette medie sandsynligvis vil virke
til propagering af andre celletyper, er dets tilsigtede
anvendelse ikke underkastet aktuelle
kvalitetskontrolprocedurer, og der gives ikke aktuelt nogen
garanti for dets anvendelse.
GIBCO’s celledyrkningsprodukter fremstilles ved en aseptisk
proces, i hvilken hvert trin er valideret for at sikre, at alle
produkter overholder
industristandardsterilitetssikringsniveauet på 10-3; dvs. et
produkt, der udviser et kontamineringsniveau på ikke mere
end 1 af 1000 enheder i løbet af fremstillingsprocessen. Det
højeste niveau af sterilitetssikring (lig med eller højere end
10-6) kan ikke opnås uden afsluttende sterilisering, som vil
være skadeligt for celledyrkningsprodukternes ydeevne.
Referencer:
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
For yderligere information eller teknisk service for dette
eller andre GIBCO™ produkter, kontakt Teknisk service på
[email protected] eller se i GIBCO’s produktkatalog
for lokalt telefonnummer i Deres område..
De kan også kontakte Deres Invitrogen salgsrepræsentant
eller vores World Wide Web site på www.invitrogen.com.
Til in vitro diagnostisk anvendelse.
ADVARSEL: Er ikke beregnet til behandling af mennesker
eller dyr.
Anvendelse til andet end erklæret på etiketten
kan være et brud på lokal lov.
DEN ENKELTE KLINIKER/FORSKER SKAL UDFØRE EN
UAFHÆNGIG VURDERING VEDRØRENDE DETTE
MEDIUMS EGNETHED TIL BRUG I IN VITRO
DIAGNOSTISKE ANVENDELSER UDFØRT PÅ DERES
LABORATORIUM INVITROGEN GARANTERER IKKE ET
VELLYKKET UDFALD AF NOGEN SOM HELST
DIAGNOSTISK TEST UDELUKKENDE BASERET PÅ
ANVENDELSEN AF GIBCO™ MEDIUM. GIBCOs BIDRAG
TIL DISSE PROCEDURER ER SIMPELT HEN DET TRIN, AT
LEVERE ET MEDIUM TIL DYRKNING OG HÅNDTERING I
DISSE PROCEDURER.
7
Nederlands
PB-MAX™ Karyotyping-medium
gewoonlijk vooraf aan het gebruik worden bepaald, maar er
kan ook gebruikgemaakt worden van de aanbevelingen van
de fabrikant voor de betreffende partij.
Bevat foetaal bovien serum
Bevat gentamicinesulfaat, 35 mcg/ml
Bevat L-glutamine
Bevat phytohemaglutinine
Cat. Nr.:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Beoogd gebruik
PB-MAX™ Karyotyping-medium is bedoeld voor gebruik in
in vitro diagnostische procedures voor cytogenetisch
onderzoek waarvoor snel kweken moeten worden gemaakt
van perifere bloedlymfocyten. Dit product is voor deze
toepassing nauwkeurig op kwaliteit gecontroleerd door een
vooraanstaand klinisch cytogenetisch referentielaboratorium
in de VS (zie Kwaliteitscontrole).
Achtergrond
De meest gebruikelijke bron van cellen voor klinisch
cytogenetisch onderzoek zijn de perifere bloedlymfocyten.1
Gebruikelijke cytogenetische onderzoeken op perifere
bloedlymfocyten omvatten onder meer de detectie of
bevestiging van chromosoomafwijkingen die verband houden
met getalsmatige en structurele afwijkingen,
chromosoomanomaliteiten op autosomaal en geslachtelijk
gebied en constitutionele of somatische effecten 2, 3. Deze
procedure is de minst invasieve methode voor het verkrijgen
van primaire cellen voor cytogenetisch onderzoek, met
123.000 uitgevoerde onderzoeken in de VS per jaar 4.
Lymfocyten zijn rijpe cellen die dus niet actief delen. De
door Moorehead et al. in 19605 ontwikkelde techniek voor
het snel kweken van lymfocyten vereist het gebruik van een
mitogeen voor de inductie van mitose in niet-delende cellen.
Het meest gebruikte mitogeen is phytohemaglutinine (PHA),
een rood extract uit de kievietsboon dat kleine lymfocyten
(T-cellen) omvormt tot blast-achtige cellen. Deze
transformatie wordt snel gevolgd door RNA-synthese,
terwijl de DNA-synthese 24 uur later begint.1 Na de start
van de DNA-synthese zijn de cellen gecommitteerd en is
PHA niet meer nodig in de kweek.Tweeënzeventig uur na de
toevoeging van PHA aan de kweek is ongeveer 45% van
cellen in de S-fase. Dit staat voor een piek in de mitotische
activiteiten en het is het optimale moment om lymfocyten
voor chromosoomonderzoek te oogsten.6
De meeste klinische cytogenetische onderzoekslaboratoria
kweken perifere bloedlymfocyten gedurende een periode
van 48 - 72 uur in een compleet kweekmedium dat bestaat
uit een basaal medium, aangevuld met ongeveer 10 - 40%
foetaal bovien serum, ongeveer 1 - 2% v/v PHA (afhankelijk
van de bron) en L-glutamine en antibiotica. Sommige partijen
FBS kunnen giftig zijn en moeten voorafgaand aan gebruik in
cytogenetische onderzoeken worden beoordeeld. Daarnaast
kan het vermogen van PHA de mitose te stimuleren per
partij verschillen. De optimale concentratie moet
8
Voor Invitrogen is het een gegeven dat cytogenetische
laboratoria kweekmediumproducten wensen die volledig
gesupplementeerd en cytogenetisch gekwalificeerd zijn en
die bovendien consistent presteren. Om te voldoen aan deze
vraag is PB-MAX™ Karyotyping-medium ontwikkeld als een
volledig gebruiksklaar product; het wordt vooraf getest op
primaire cellen in een toepassingsspecifieke cytogenetische
test die volgens gestandaardiseerde protocollen wordt
uitgevoerd door ervaren cytogenetici van een vooraanstaand
gecertificeerd cytogenetisch laboratorium.
Productbeschrijving
PB-MAX™ Karyotyping-medium is samengesteld uit een
vloeibaar RPMI-1640 basaal medium dat volledig is
gesupplementeerd met standaardconcentraties L-glutamine,
gentamicinesulfaat, foetaal bovien serum en
phytohemaglutinine. Deze samenstelling is gebaseerd op de
Peripheral Blood Media zoals genoemd in de ACT
Laboratory Manual (1991) voor gebruik in PHAgestimuleerde perifere bloedkweken.6 PB-MAX™ wordt
geleverd als een 1X bevroren vloeibaar medium dat na het
ontdooien gebruiksklaar is. Deze vorm garandeert een
optimale houdbaarheid en maakt het toevoegen van extra
stoffen overbodig; de eindgebruiker hoeft daardoor maar
weinig handelingen te verrichten die de integriteit van het
product mogelijk in gevaar brengen. Naast het gemak van de
beschikbaarheid van een gebruiksklaar product zijn er twee
groottes leverbaar, zodat voldaan kan worden aan de
wisselende behoeftes zoals die bij elk laboratorium kunnen
optreden. Dit product wordt geproduceerd onder cGMP's
(current Good Manufacturing Practice) in een ISO 9001gecertificeerde productiefaciliteit. De prestaties van elke
partij product zijn getest op primaire perifere
bloedlymfocyten die ongeveer 72 uur zijn gekweekt en
geëvalueerd op miotische index en
chromosoombandingresolutie van het #10 chromosoom.
Elk partij wordt parallel getest en vergeleken met een
kweekmedium dat eerder in dit testsysteem goed heeft
gepresteerd.
VOORZORGSMAATREGELEN
VOOR GEBRUIK IN IN VITRO DIAGNOSTISCHE
PROCEDURES WAARVOOR HET NODIG IS PERIFERE
BLOEDLYMFOCYTEN TE KWEKEN EN TE LATEN
GROEIEN.
1. GEBRUIK DIT MEDIUM NIET ALS HET ER TROEBEL
UITZIET, DE VERPAKKING IS BESCHADIGD OF HET
PRODUCT ONTDOOID IS ONTVANGEN.
2. DE ANTIBIOTISCHE STERKTE WORDT BEPAALD
OP HET MOMENT VAN DE SAMENSTELLING. DE
HOUDBAARHEID VAN HET PRODUCT, MAAR
NIET HET ANTIBIOTISCH VERMOGEN,WORDT
BEPAALD DOOR DE PRESTATIES IN
FUNCTIONELE TESTS.
3. VERMIJD LANGDURIGE BLOOTSTELLING AAN
LICHT.
Bewaarcondities:
Donker, -5 tot -20 °C.
Houdbaarheid:
12 maand bij ongeopend bewaren bij de aanbevolen
bewaarcondities.
Instructies voor gebruik
Ontdooi PB-MAX™ Karyotypingmedium bij 4 tot 8°C.
Verwarm het medium tot kamertemperatuur en schud
voorzichtig voorafgaand aan het gebruik. PB-MAX™
Karyotyping-medium kan worden ontdooid en aseptisch in
kleinere hoeveelheden worden bewaard. Deze hoeveelheden
kunnen worden ingevroren en voor het gebruik worden
ontdooid, maar herhaald invriezen en ontdooien moet
worden vermeden.Vermijd bij het gebruik langdurige
blootstelling van dit kweekmedium aan licht.
Kwaliteitscontrole
Op het moment van productie wordt elke partij PB-MAX™
Karyotyping-medium getest op prestaties. Naast de
standaardkwaliteitscontroletests zoals op pH, osmolariteit,
mycoplasma en steriliteit wordt elke geproduceerde partij
medium via een kwantitatieve groeitest getest op
consistente fysiologische prestaties; daarbij worden primaire
humane perifere bloedlymfocyten gebruikt. Primaire cellen
van normale gezonde donors worden ongeveer 72 uur in
kweek gehouden; daarna worden de cellen geoogst en
worden de objectglaasjes geprepareerd en geëvalueerd aan
de hand van de score van de mitotische index en de
resolutie bij chromosoombanding. Elke partij product wordt
parallel getest en vergeleken met een goedgekeurde
referentiestandaard zodat consistente diagnostische
prestaties verzekerd zijn. Zie het analysecertificaat voor
aanvullende informatie.
Beperkingen
De prestatie van elke geproduceerde partij PB-MAX™
Karyotypingmedium wordt getest op primaire perifere
bloedlymfocyten zodat is verzekerd dat het product voldoet
bij het in vitro diagnostisch gebruik van deze toepassing.
Hoewel dit medium waarschijnlijk goed zal presteren bij het
vermeerderen van andere soorten cellen valt een dergelijk
gebruik niet onder de huidige kwaliteitscontroleprocedure
en worden over een dergelijk gebruik op dit moment geen
toezeggingen gedaan.
ELKE ARTS/WETENSCHAPPER DIENT ZELFSTANDIG AF
TE WEGEN OF DIT MEDIUM GESCHIKT IS VOOR
GEBRUIK IN IN VITRO DIAGNOSTISCHE TOEPASSINGEN
DIE IN HET BETREFFENDE LABORATORIUM WORDEN
UITGEVOERD. INVITROGEN GARANDEERT GEEN
SUCCESVOL RESULTAAT VAN ENIGE DIAGNOSTISCHE
TEST DIE ALLEEN GEBASEERD IS OP HET GEBRUIK VAN
GIBCOTM-MEDIUM. DE BIJDRAGE VAN GIBCO AAN
DEZE PROCEDURES BESTAAT ALLEEN UIT HET
LEVEREN VAN EEN KWEEK OF HET BEHANDELEN VAN
MEDIUM VOOR DEZE PROCEDURES.
Vloeibare celkweekproducten van GIBCO™ worden
aseptisch geproduceerd in een proces waarvan elk stap is
gevalideerd; dit verzekert dat alle producten voldoen aan
een Sterility Assurance Level (SAL) van 10-3, dat wil zeggen,
bij het product komt gedurende het productieproces een
besmettingsniveau van niet meer dan 1 op 1000 eenheden
voor. Het hoogste niveau van gegarandeerde steriliteit
(hoger dan of gelijk aan 10-6 kan niet worden bereikt zonder
een totale sterilisatie; dit is echter schadelijk voor de
prestatie van celkweekproducten.
Referenties
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Voor aanvullende informatie of technische ondersteuning
voor dit of andere GIBCOTM producten kan contact
opgenomen worden met de Technische Dienst via
[email protected]; zie ook de GIBCOTM
productcatalogus voor lokale telefoonnummers binnen de
betreffende regio.
Er kan ook contact worden opgenomen met de Invitrogen
Handelsvertegenwoordiger of gekeken worden op onze
World Wide Web-site op www.invitrogen.com.
Voor diagnostisch gebruik in vitro.
LET OP:
Niet voor humaan of dierlijk
therapeutisch gebruik.
Ander gebruik dan aangegeven op
het label kan strijdig zijn met de
geldende wetgeving.
9
eesti
Kromosoomiuuringutel kasutatav sööde PB-MAX™
Veiselooteseerumiga
Gentamütsiinsulfaadiga 35 mcg/ml
L-glutamiiniga
Fütohemaglutiniiniga
Katalooginumber:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Ettenähtud kasutamisviis
Kromosoomiuuringutel kasutatav sööde PB-MAX™ on
mõeldud kasutamiseks selliste in vitro diagnostikatoimingute
puhul, mis nõuavad tsütogeneetiliste uuringute jaoks
perifeerse vere lümfotsüütide lühiajalist kultiveerimist.Toode
on läbinud range kvaliteedikontrolli ja selle kõlblikkust
eelnimetatud rakenduse jaoks on testinud üks Ameerika
Ühendriikide juhtivaid tsütogeneetika etalonlaboratooriume
(Vt alajaotust "Kvaliteedi kontrollimine").
Ajalugu
Kõige tavalisem rakkude allikas kliiniliste
tsütogeneetikauuringute jaoks on perifeerse vere
lümfotsüüdid.1 Harilike perifeerse vere lümfotsüütidega läbi
viidavate uuringute hulka võivad kuuluda kromosoomide
arvu või nende struktuuri muutumisega seotud
kõrvalekallete, autosoomsete ja sooanomaaliate ning
konstitutsiooniliste või somaatiliste mõjustuste
kindlakstegemine.2,3 Selline toiming kujutab endast kõige
vähem invasiivset meetodit primaarsete rakkude hankimiseks
tsütogeneetiliste uuringute jaoks ja USAs teostatakse
niisuguseid uuringuid aastas ligikaudu 123 000.4
Lümfotsüüdid on küpsed rakud ega jagune seega enam
aktiivselt. Mooreheadi jt 1960. aastal5 välja töötatud
lümfotsüütide lühiajalise kultiveerimise tehnika nõuab mõne
mitogeeni kasutamist mittejagunevate rakkude mitoosi
esilekutsumiseks. Kõige sagedamini kasutatav mitogeen on
fütohemaglutiniin (PHA) – punaste ubade ekstrakt, mis
muudab väikesed lümfotsüüdid (T-rakud) blastisarnasteks
rakkudeks. Sellisele transformatsioonile järgneb kiiresti RNA
süntees, 24 tundi hiljem aga algab DNA süntees.1 Pärast
DNA sünteesi käivitumist on rakkude saatus juba ära
määratud ja PHA-d kultuuris enam ei vajata. 72 tundi pärast
PHA lisamist kultuurile on ligikaudu 45% rakkudest S-faasis.
See kujutab endast mitootilise aktiivsuse tipphetke ja on
kõige sobivam aeg kromosoomiuuringute jaoks materjali
kogumiseks.6
Suurem osa kliinilise tsütogeneetikaga tegelevaid
laboratooriume kasvatav perifeerse vere lümfotsüüte 48–72
tunni pikkuse ajavahemiku jooksul mõnel täielikul
kultiveerimissöötmel, mis koosneb aluskeskkonnast, millele
on lisatud ligikaudu 10–40% veiselooteseerumit, PHA-d
ligikaudu 1–2% sõltuvalt selle allikast, L-glutamiini ja
antibiootikume. Mõned veiselooteseerumi partiid võivad
osutuda toksiliseks ja enne veiselooteseerumi kasutamist
tuleb määrata kindlaks selle sobivus tsütogeneetiliste
10
uuringute jaoks. Ühtlasi võib PHA mitoosi stimuleerimise
võime olla erinevate partiide puhul erinev. PHA optimaalne
kontsentratsioon tuleb tavaliselt välja selgitada vahetult enne
selle kasutamist või siis lähtutakse müüja soovitustest antud
konkreetse partii lahjendamise kohta.
Invitrogen mõistab tsütogeneetikalaboratooriumide vajadust
selliste kultiveerimissöötme järele, mida tarnitakse kõikide
lisanditega varustatuna ja tsütogeneetiliste uuringute jaoks
kohase kvaliteediga, rääkimata juba sellest, et need tooted
peavad olema ühtlase efektiivsusega. Sellele vajadusele vastu
tulles töötati välja kromosoomiuuringutel kasutatav sööde
PB-MAX™ kui lõpuni välja arendatud ja kasutamisvalmis
toode, mille töökõlblikkus on eelnevalt kindlaks määratud
primaarrakkudega tehtavate rakendusspetsiifiliste
tsütogeneetiliste katsetustega, mida viivad standardprotokolle
järgides läbi vilunud tsütogeneetikud mõnes juhtivas
sertifitseeritud tsütogeneetikalaboratooriumis.
Toote kirjeldus
Kromosoomiuuringutel kasutatav sööde PB-MAX™ koosneb
vedelast aluskeskkonnast RPMI-1640, mis on täiel määral
varustatud vajalike lisanditega standardkontsentratsioonis Lglutamiini, gentamütsiinsulfaadi, veiselooteseerumi ja
fütohemaglutiniini näol.Toote koostis põhineb selle
perifeerse vere söötme koostisel, mida soovitatakse ACT
laboratooriumikäsiraamatus (1991) kasutada PHAstimuleeritud perifeerse vere kultiveerimisel.6 PB-MAX™i
tarnitakse täieliku kontsentreerimata külmutatud
veresöötme kujul, mis on pärast sulatamist kasutamisvalmis.
See tagab tootele optimaalse säilivusaja ning kõrvaldab
vajaduse täiendavate lisandite järele, viies miinimumini toote
käsitsemise lõpptarbija juures, sest see võib toodet rikkuda.
Lisaks sellele, et toode on mugavalt kasutamisvalmis, on see
ka saadaval kahes erinevas koguses, et rahuldada erineva
töömahuga laboratooriumide pidevalt muutuvaid vajadusi.
Toode valmistatakse kooskõlas kvaliteedisüsteemi
eeskirjadega (cGMP-d) ISO 9001 nõuetele vastavas
sertifitseeritud käitises. Kõikide tootepartiide efektiivsust
testitakse perifeerse vere lümfotsüüdi primaarrakkudega,
mida kultiveeritakse ligikaudu 72 tunni jooksul, et määrata
seejärel kindlaks mitoosiindeks ja resolutsioon 10.
kromosoomi vöötimisel. Kõiki partiisid võrreldakse mõne
sellise kultiveerimissöötmega, mis on eelnevalt samasuguse
kontrollsüsteemi abil vastuvõetavaks tunnistatud.
ETTEVAATUSABINÕUD
KASUTAMISEKS IN VITRO SELLISTE
DIAGNOSTIKATOIMINGUTE JUURES, MIS
NÕUAVAD PERIFEERSE VERE LÜMFOTSÜÜTIDE
KULTIVEERIMIST JA KASVATAMIST.
1. ÄRGE KASUTAGE KESKKONDA, KUI SEE NÄIB
OLEVAT HÄGUNE. SELLISEL JUHUL ON PAKEND
KAHJUSTATUD VÕI TOODE ON JÕUDNUD
TARBIJANI TÄIESTI SULANUNA.
2. TOOTE ANTIBIOOTILINE JÕUDLUS MÄÄRATAKSE
KINDLAKS JUBA VALMISTAMISEL.TOOTE
SÄILIVUSAEG EI SÕLTU TEMA ANTIBIOOTILISE
TOIME TUGEVUSEST,VAID FUNKTSIONAALSETE
KATSETE KÄIGUS KINDLAKS TEHTUD
EFEKTIIVSUSEST.
3. VÄLTIGE TOOTE PIKAAJALIST SEISMIST VALGUSE
KÄES.
Säilitamistingimused
temperatuuril -5∞ C kuni -20∞ C ja pimedas.
Säilivusaeg
12 kuud, kui toodet hoitakse avamata kujul ettenähtud
säilitamistingimustel.
Kasutamisjuhend
Sulatage kromosoomiuuringutel kasutatav sööde PB-MAX™
üles temperatuuril 4 °C kuni 8 °C. Soojendage söödet
toatemperatuurini ja enne kasutamist segage seda anumat
õrnalt loksutades. Kromosoomiuuringutel kasutatavat söödet
PB-MAX™ tohib kasutamishõlpsuse huvides jaotada pärast
ülessulatamist aseptiliselt väiksemateks osakogusteks. Neid
väiksemaid koguseid tohib uuesti külmutada ja vahetult enne
kasutamist üles sulatada, kuid korduvaid külmutamissulatamistsükleid tuleks vältida. Ärge laske
kultiveerimissöötmel selle kasutamise käigus pikemat aega
valguse käes seista.
Kvaliteedi kontrollimine
Kõikide kromosoomiuuringutel kasutatava söötme
PB-MAX™ partiide efektiivsust testitakse nende
valmistamise ajal. Lisaks standardsele pH, osmolaalsuse,
mükoplasma, ja steriilsuse näitajate kontrollimisele testitakse
kõiki valminud söötmepartiisid ka inimese primaarsete
perifeerse vere lümfotsüütide kvantitatiivsete kasvuproovide
abil, et tagada toote ühtlane bioloogiline toime.
Normaalsetelt tervetelt doonoritelt saadud primaarrakke
kultiveeritakse ligikaudu 72 tunni jooksul, seejärel aga
määratakse kindlaks koelõikude mitoosiindeks ja
resolutsioon vöötimisel. Kõiki tootepartiisid testitakse
ühtaegu mõne juba vastuvõetavaks tunnistatud
standardsöötmega ja katsetulemusi võrreldakse omavahel, et
tagada ühtlane efektiivsus diagnoosimisel.Täiendava
informatsiooni saamiseks palun tutvuge konkreetse
tootepartii sertifikaadil esitatud analüüsitulemustega.
Piirangud
Kõikide kromosoomiuuringutel kasutatava söötme
PB-MAX™ tootepartiide efektiivsust testitakse primaarsete
perifeerse vere lümfotsüütidega, et tagada toote sobivus
kasutamiseks in vitro diagnostikas ettenähtud viisil.
KÕIK ARSTID JA TEADLASED PEAVAD ISE OTSUSTAMA,
KAS SEE SÖÖDE SOBIB KASUTAMISEKS SELLISTE IN
VITRO DIAGNOSTIKATOIMINGUTE PUHUL, MIDA
NENDE LABORATOORIUMIS LÄBI VIIAKSE. INVITROGEN
CORP. EI GARANTEERI DIAGNOSTILISTE TESTIDE
EDUKAT KULGEMIST AINUÜKSI SEETÕTTU, ET NEED
VIIAKSE LÄBI GIBCO™ SÖÖDET KASUTADES.
INVITROGENI PANUS NIISUGUSTE PROTSEDUURIDE
EDUKUSSE SEISNEB ÜKSNES SELLES, ET TA PAKUB VÄLJA
KULTUURIDE SAAMISEKS VÕI KÄSITSEMISEKS VAJALIKU
KESKKONNA.
GIBCO™ vedeltooteid rakkude kultiveerimiseks
valmistatakse aseptilise tootmisprotsessiga, mille kõikide
etappide puhul on kantud hoolt selle eest, et tooted
vastaksid tööstusharu standardi 10. steriilsustasemele-3 – st
toote reostumisaste ei tohi olla valmistamise käigus suurem
kui 1/1000.Veelgi kõrgemat steriilsustaset (10-6 või sellest
kõrgem) ei ole võimalik saavutada ilma lõppsteriliseerimiseta,
see aga võib kahjustada rakkude kultiveerimiseks
kasutatavate söötmete efektiivsust.
Viidatud allikmaterjalid
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Täiendava informatsiooni või tehnilise abi saamiseks seoses
selle või mõne teise GIBCO™ tootega astuge ühendusse
tehnilise teeninduse osakonnaga meiliaadressil
[email protected] või otsige GIBCO™
tootekataloogist üles oma piirkonna telefoninumbrid.
Võite võtta ka ühendust oma Invitrogeni müügiesindajaga või
külastada meie veebilehte aadressil www.invitrogen.com
Diagnostiliseks kasutamiseks in vitro.
ETTEVAATUST!
Toode ei ole mõeldud kasutamiseks
inimeste või loomade ravimisel.
Kasutamine mõnel muul otstarbel kui
tooteetiketil märgitud võib olla vastuolus
kohalike seadustega.
11
Suomi
PB-MAX™ karyotyyppimediumi
sisältää: naudan sikiön seerumia,
gentamisiinisulfaattia 35 µg/ml
L-glutamiinia
fytohemagglutiniinia
Luettelonro:
12557-013
12557-021
100 mL
500 mL
Käyttötarkoitus
PB-MAX™ karyotyyppimediumi on tarkoitettu käytettäväksi
in vitro diagnostiikkamenettelyissä, joissa tarvitaan
perifeerisen veren lymfosyyttien lyhytaikaista viljelyä
sytogeneettistä tutkimusta varten. Tämän tuotteen laadun
tätä sovellusta varten on testannut huolellisesti johtava
yhdysvaltalainen kliinisen sytogenetiikan referenssilaboratorio
(ks.Toimivuustestaus).
Taustaa
Kliinisen sytogeneettisen tutkimuksen yleisimpänä solujen
lähteenä ovat perifeerisen veren lymfosyytit.1 Perifeerisen
veren lymfosyyteillä tehtyihin sytogeneettisiin
rutiinitutkimuksiin kuuluvat lukumäärällisiin ja rakenteellisiin
muutoksiin liittyvien kromosomipoikkeamien, autosomaalisten
ja sukupuolikromosomien poikkeavuuksien sekä
yleisrakenteellisten tai somaattisten vaikutusten havaitseminen
ja toteaminen.2,3 Tämä menettely edustaa vähiten invasiivista
primaarisolujen hankintamenetelmää sytogeneettistä
tutkimuksia varten ja niitä suoritetaan Yhdysvalloissa vuosittain
123 000.4 Lymfosyytit ovat kypsiä soluja eivätkä ne täten
jakaudu aktiivisesti. Mooreheadin ja muiden 19605 kehittämä
tekniikka lymfosyyttien lyhytaikaiseen viljelyyn vaatii
mitogeenin käyttöä mitoosin käynnistämiseksi
jakautumattomissa soluissa. Yleisimmin käytetty mitogeeni on
pavuista saatava uute fytohemagglutiniini (PHA), joka muuttaa
pienet lymfosyytit (T-solut) blastimaisiksi soluiksi. Tätä
muutosta seuraa nopeasti RNA-synteesi DNA-synteesin
alkaessa vuorokauden kuluttua.1 Kun DNA-synteesi alkaa,
solut ovat sitoutuneet eikä PHA:ta enää tarvita viljelyssä.
Kolmen vuorokauden kuluttua PHA:n lisäämisestä viljelyyn,
noin 45% soluista on S-vaiheessa.Tämä edustaa mitoottisen
toiminnan huippua ja on optimipiste, missä soluja voi kerätä
kromosomitutkimuksia varten.6
Useimmat kliiniset sytogenetiikan laboratoriot viljelevät
perifeerisen veren lymfosyyttejä 2–3 vuorokautta
kokonaisviljelymediumissa, joka koostuu perusmediumista, jota
on täydennetty noin 10-40 prosentilla naudan sikiön seerumia,
1-2 prosentilla v/v PHA:ta lähteestä riippuen,
L-glutamiinilla ja antibiooteilla. Naudan sikiön seerumin erissä
voi esiintyä myrkyllisyyttä, ja ne pitää pätevöittää ennen
käyttöä sytogeneettisissä tutkimuksissa. Myös PHA:n
mitoottinen stimulointikyky voi vaihdella eri erien välillä.
Optimiväkevyys tarvitsee yleensä määrittää ennen käyttöä, tai
voidaan noudattaa myyjän käytettävälle erälle antamia
laimennussuosituksia.
12
Invitrogen tunnustaa sytogenetiikan laboratorion sellaisten
viljelymediumituotteiden tarpeen, jotka on toimitettu
kokonaan täydennettyinä ja sytogeneettisesti pätevöitettyinä,
sekä osoittavat lisäksi yhtenäistä toimivuutta. Vastauksena
tähän tarpeeseen PB-MAX™ karyotyyppimediumi on
suunniteltu täysin käyttövalmiiksi tuotteeksi ja on esipätevöity
primaarisoluilla sovelluskohtaisessa sytogeneettisessä
kokeessa, minkä suorittavat johtavan, sertifioidun
sytogenetiikan laboratorion kokeneet sytogeneetikot
vakioprotokollia noudattaen.
Tuotekuvaus
PB-MAX™ karyotyyppimediumi koostuu nestemäisestä
RPMI-1640 perusmediumista, mikä on täysin suplementoitu
L-glutamiinin, gentamisiinisulfaatin, naudan sikiön seerumin ja
fytohemagglutiniinin vakioväkevyyksillä. Tämä formulaatio
perustuu perifeerisen veren mediumeihin, jotka luetellaan
ACT Laboratory Manual (1991) -käsikirjassa PHAstimuloidun perifeerisen veriviljelyn kanssa käytettäviksi.6
PB-MAX™ toimitetaan 1X pakastettuna nestemediumina,
mikä on kokonainen ja valmis käytettäväksi sulettuaan. Tämä
suunnittelu sallii optimaalisen käyttöiän, eikä vaadi
lisätäydennyksiä, mikä minimoi loppukäyttäjän suorittaman
käsittelyn, mikä voi mahdollisesti vaikuttaa tuotteen
koskemattomuuteen. Käyttövalmiin tuotteen kätevyyden
lisäksi tarjotaan kaksi kokoa, jotka vastaavat kunkin
yksittäisen laboratorion volyymiin liittyviä muuttuvia tarpeita.
Tämä tuote valmistetaan cGMP:n vaatimusten mukaisesti
ISO 9001 sertifikaatin saaneessa laitoksessa. Kullekin tuoteerälle tehdään toimivuustesti primaareilla perifeerisen veren
lymfosyyteillä, joita on viljelty noin 3 vuorokautta ja joiden
mitoottinen indeksi ja nro. 10 kromosomin raitojen
resoluutio on arvioitu. Kutakin erää vertaillaan
viljelymediumiin, jonka toimivuus on pätevöity aiemmin tässä
koejärjestelmässä.
VAROTOIMET
KÄYTETTÄVÄKSI IN VITRO
DIAGNOSTIIKKAMENETTELYISSÄ, JOISSA TARViTAAN
PERIFEERISEN VEREN LYMFOSYYTTIEN VILJELYÄ JA
KASVATUSTA.
1. EI SAA KÄYTTÄÄ, JOS MEDIUMI NÄYTTÄÄ
SAMEALTA, PAKKAUS ON AVATTU TAI JOS TUOTE
ON OTETTU VASTAAN SULANEENA.
2. ANTIBIOOTTINEN TEHO MÄÄRITTYY
FORMULAATION AIKANA.TUOTTEEN KÄYTTÖIKÄ
PERUSTUU KÄYTTÖÖN TOIMINNALLISISSA
KOKEISSA, EI ANTIBIOOTTISEEN TEHOON.
3. PITKÄLLISTÄ ALTISTUMISTA VALOLLE ON
VÄLTETTÄVÄ .
Säilytysolosuhteet:
-5 – -20°C pimeässä.
Käyttöikä:
12 kuukautta avaamattomana suositelluissa
säilytysolosuhteissa.
Käyttöohjeet
Sulata PB-MAX™ karyotyyppimediumi 4 - 8°C:ssa. Lämmitä
mediumi huoneenlämpöiseksi ja huljuta sekoitusta ennen
käyttöä. PB-MAX™ karyotyyppimediumi voidaan sulattaa ja
siirtää aseptisesti kätevämpiin ja pienempiin tasaeriin. Nämä
tasaerät voidaan pakastaa ja sulattaa käyttöajankohtana,
mutta tulee välttää useita pakastus-sulatuskiertoja. Vältä
pitkällistä altistumista valolle tätä viljelymediumituotetta
käytettäessä.
Laadunvalvonta
Kunkin PB-MAX™ karyotyyppimediumin erän toimivuus on
testattu valmistuksen aikana. Laadunvalvonnan vakiotestien
kuten pH:n, osmolariteetin, mykoplasman ja steriiliyden
lisäksi kukin valmistettu mediumierä testataan yhtenäisen
biologisen toimivuuden varmistamiseksi kvantitatiivisten
kasvutestien avulla, joissa käytetään primaareja ihmisen
perifeerisen veren lymfosyyttejä. Primaarisolut, joita on
hankittu normaaleilta, terveiltä luovuttajilta, viljellään noin 3
vuorokautta, jonka jälkeen viljely kerätään, näytteet
valmistellaan ja arvioidaan pisteyttämällä mitoottinen indeksi
ja kromosomiraitojen resoluutio. Kukin tuote-erä testataan
samalla tavalla ja verrataan hyväksyttyyn viitestandardiin, mikä
varmistaa yhtenäisen diagnostisen toimivuuden. Lisätietoja
saa analyysitodistuksesta.
Rajoitukset
Kunkin PB-MAX™ karyotyyppimediumin valmistuserän
toimivuus on testattu primaarilla perifeerisen veren
lymfosyyteillä tuotteen toimivuuden varmistamiseksi tämän
sovelluksen in vitro diagnostisessa käytössä. Vaikka tämä
mediumi toimii todennäköisesti hyvin muiden solutyyppien
propagaatiossa, sellainen käyttötarkoitus ei ole
tämänhetkisten laadunvalvontamenettelyjen alainen eikä
niiden sovellukseen anneta nykyisellään mitään vakuutuksia.
GIBCO™ soluviljelynestetuotteet valmistetaan aseptisella
prosessilla, jonka jokainen vaihe on validoitu sen
varmistamiseksi, että kaikki tuotteet täyttävät alan
steriiliyden vakiovarmistustason 10-3; eli tuotteiden
kontaminaatiotason voidaan osoittaa olevan vähemmän kuin
1 per 1000 yksikköä valmistusprosessin aikana. Steriiliyden
varmistuksen korkeinta tasoa (sama tai suurempi kuin 10-6)
ei voi saavuttaa ilman loppusterilointia, mikä on haitallista
soluviljelytuotteiden toimivuudelle.
Kirjallisuusviitteet
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Lisätietojen tai teknisen tuen saamiseksi tälle tai muille
GIBCOTM tuotteille, ota yhteyttä teknisen palvelun osastoon
osoitteessa [email protected], tai katso GIBCOTMn
tuoteluettelosta alueesi paikalliset yhteyspuhelinnumerot.
Voit myös ottaa yhteyttä Invitrogen-myyntiedustajaan tai
käydä verkkosivustollamme osoitteessa www.invitrogen.com.
In vitro diagnostiseen käyttöön.
HUOMAUTUS: Ei ihmisten tai eläinten
terapeuttiseen käyttöön.
Muu kuin etiketin mukainen käyttö
voi loukata paikallisia lakeja.
JOKAISEN KLIINIKON TAI TUTKIJAN ON PÄÄTETTÄVÄ
ITSENÄISESTI, SOPIIKO TÄMÄ MEDIUMI HÄNEN
LABORATORIOSSAAN SUORITETTAVIEN
DIAGNOSTISTEN IN VITRO -SOVELLUKSIEN TEKEMISEEN.
INVITROGEN EI TAKAA MINKÄÄN DIAGNOSTISEN
TESTAUKSEN MENESTYSTÄ, MIKÄ PERUSTUU
PELKÄSTÄÄN GIBCO™-MEDIUMIN KÄYTTÖÖN.
INVITROGEN MYÖTÄVAIKUTTAA NÄIHIN
MENETTELYIHIN VAIN SITEN, ETTÄ SE TOIMITTAA
VILJELY- TAI KÄSITTELYMEDIUMIN NÄILLE
MENETTELYILLE.
13
Français
PB-MAX™ Milieu de caryotypage
avec du sérum fœtal bovin
du sulfate de gentamicine à 35 mcg/ml
de la L-glutamine
de la phytohémagglutinine
Cat. N°:
12557-013
12557-021
100 mL
500 mL
Utilisation
Le milieu de caryotypage PB-MAX™ est destiné aux
procédures diagnostiques in vitro qui nécessitent la mise en
culture à court terme des lymphocytes sanguins
périphériques en vue de leur étude cytogénétique. Dans le
cadre de cette application, ce produit a fait l’objet d’un
contrôle de qualité rigoureux aux Etats-Unis, par un
laboratoire de référence dans le domaine de la cytogénétique
clinique (voir Test des performances).
Historique
Les lymphocytes sanguins périphériques constituent la source
la plus courante de cellules pour les études cytogénétiques
cliniques1. Parmi les études cytogénétiques de routine
réalisées sur les lymphocytes sanguins périphériques, se
trouvent la détection ou la confirmation des aberrations
chromosomiques associées à des modifications numériques
ou structurelles, des anomalies chromosomiques sexuelles et
autosomiques et des effets somatiques ou constitutionnels.2,3
Cette procédure constitue la méthode la moins invasive
permettant d’obtenir des cellules primaires en vue d’une
étude cytogénétique, 123 000 études de ce type sont
réalisées chaque année aux Etats-Unis.4 Les lymphocytes sont
des cellules matures et, par conséquent, elles ne sont pas en
phase de division active. La technique de culture de
lymphocytes à court terme, développée par Moorehead et al.
en 19605, nécessite l’emploi d’un mitogène pour induire une
mitose chez des cellules qui ne sont pas en phase de division.
La phytohémagglutinine (PHA), extraite du haricot rouge, est
le mitogène le plus couramment utilisé ; elle transforme les
petits lymphocytes (cellules T) en cellules de type blastes.
Cette transformation est rapidement suivie par une synthèse
d’ARN, la synthèse de l’ADN commençant 24 heures après.1
Une fois que la synthèse de l’ADN a débuté, les cellules sont
sensibilisées et la présence de PHA dans la culture n’est plus
nécessaire. Soixante douze heures après l’addition de PHA à
la culture, environ 45 % des cellules sont en phase S. Ceci
constitue le pic de l’activité mitotique et constitue le
moment optimal pour prélever des cellules en vue d’étudier
leurs chromosomes.6
La plupart des laboratoires de cytogénétique clinique
cultivent les lymphocytes sanguins périphériques pendant 48
à 72 heures sur un milieu de culture complet constitué d’un
milieu de base enrichi d’environ 10 à 40 % de sérum fœtal
bovin, de PHA à hauteur d’environ 1 à 2 % v/v selon la
source, de L-glutamine et d’antibiotiques. Certains lots de
FBS peuvent présenter une toxicité et doivent être testés
avent d’être utilisés dans le cadre d’études cytogénétiques.
Le potentiel de stimulation mitotique de la PHA est
14
également susceptible de varier selon les lots. La
concentration optimale doit en général être déterminée
avent l’utilisation ; il est également possible de suivre les
recommandations de dilution préconisées par le vendeur
pour le lot en cours d’utilisation.
Invitrogen a détecté le besoin exprimé par les laboratoires,
de milieux de cultures totalement enrichis et
cytogénétiquement agréés et qui présentent des
performances constantes. Le milieu de caryotypage
PB-MAX™ a été conçu en réponse à ce besoin, sous la
forme d’un produit complet, prêt à l’emploi et pré-agréé
pour les cellules primaires, incorporé dans un dosage
cytogénétique spécifique, réalisé par des cytogénéticiens
expérimentés, dans un laboratoire de cytogénétique certifié,
selon des protocoles standardisés.
Description du produit
Le milieu de caryotypage PB-MAX™ est constitué d’un
milieu liquide de base, RPMI-1640, complètement enrichi avec
des concentrations standard de L-glutamine, de sulfate de
gentamicine, de sérum fœtal bovin et de
phytohémagglutinine. Cette formulation est basée sur le
milieu sanguin périphérique référencé dans le Manuel de
laboratoire ACT (1991) pour utilisation dans les cultures
sanguines périphériques stimulées par la PHA.6 Le
PB-MAX™ est fourni sous la forme d’un liquide congelé 1X,
complet et prêt à l’emploi après décongélation. Cette
conception permet d’obtenir une durée de validité optimale
et ne nécessite aucun enrichissement ce qui minimise, pour
les utilisateurs finaux, les manipulations susceptibles de
menacer l’intégrité du produit. Ce produit, outre qu’il se
présente sous une forme prête à l’emploi commode, est
disponible en deux tailles pour pouvoir répondre aux
variations des besoins de chaque laboratoire. Ce produit est
fabriqué selon les BPF dans un établissement certifié ISO
9001. Les performances de tous les lots sont testées sur des
lymphocytes sanguins périphériques cultivés pendant environ
72 heures et évalués pour ce qui concerne leur index
mitotique et la résolution de la mise en évidence des bandes
du chromosome n° 10. Tous les lots sont traités en parallèle
par rapport à un milieu de culture dont les performances ont
été préalablement agréées pour ce système de dosage.
PRÉCAUTIONS
UTILISATION AU COURS DE PROCÉDURES
DIAGNOSTIQUES IN VITRO NÉCESSITANT LA MISE EN
CULTURE ET LA CROISSANCE DE LYMPHOCYTES
SANGUINS PÉRIPHÉRIQUES.
1. NE PAS UTILISER SI LE MILiEU SEMBLE TROUBLE, SI
SON CONDITIONNEMENT A ÉTÉ ENDOMMAGÉ
OU SI LE PRODUIT A ÉTÉ REÇU DÉCONGELÉ.
2. LE POTENTIEL ANTIBIOTIQUE EST DÉTERMINÉ AU
MOMENT DE LA FORMULATION. LA DURÉE DE
VALIDITÉ EST BASÉE SUR LES PERFORMANCES DES
DOSAGES FONCTIONNELS, PAS SUR LE
POTENTIEL ANTIBIOTIQUE.
3. ÉVITER UNE EXPOSITION PROLONGÉE À LA
LUMIÈRE.
Conditions de conservation:
entre -5 et –20 °C, dans l’obscurité.
Durée de validité:
Douze mois, conservé non ouvert dans les conditions de
conservation recommandées.
Instructions d’utilisation
Décongeler le milieu de caryotypage PB-MAX™ à 4-8 °C.
Réchauffer le milieu à température ambiante et agiter
délicatement par retournement avant emploi. Le milieu de
caryotypage PB-MAX™ peut être décongelé et réparti de
façon aseptique en aliquotes plus petites si besoin est. Ces
aliquotes peuvent être congelées, puis décongelées au
moment de l’emploi ; il convient toutefois d’éviter les cycles
congélations/décongélations multiples. Éviter une exposition
prolongée à la lumière lors de l’utilisation de ce milieu de
culture.
Contrôle de qualité
Les performances de tous les lots de milieu de caryotypage
PB-MAX™ sont testées au moment de la fabrication. Outre
les tests de contrôle de qualité standard comme le pH,
l’osmolalité, le contrôle de la présence de mycoplasmes et la
stérilité, chaque lot de fabrication est testé en vue de garantir
des performances biologiques constantes par l’intermédiaire
de dosages quantitatifs de croissance employant des
lymphocytes sanguins périphériques humains primaires. Les
cellules primaires, provenant de donneurs normaux, sains,
sont mises en culture pendant environ 72 heures puis
recueillies, préparées sur des lames et évaluées par
détermination de l’index mitotique et résolution de la mise
en évidence des bandes chromosomiques. Tous les lots de
produits sont testés en parallèle et comparés à un standard
de référence agréé qui garantit des performances
diagnostiques constantes. Pour de plus amples informations,
se référer au Certificat d’analyse.
Limites
Les performances de tous les lots de fabrication du milieu de
caryotypage PB-MAX™ sont soigneusement testées sur des
lymphocytes sanguins périphériques primaires afin de garantir
les performances des produits lors d’une utilisation
diagnostique in vitro de cette application. Bien qu’il soit
probablement possible d’étendre l’emploi de ce milieu à
d’autres types de cellules, ces utilisations ne constituent pas
l’objet des présentes procédures de contrôle de qualité et
aucune garantie ne peut être donnée quant à ces
applications.
TOUS LES MÉDECINS/BIOLOGISTES DOIVENT SE FAIRE
UNE OPINION INDÉPENDANTE SUR LE FAIT QUE CE
MILIEU EST ADAPTÉ À UNE UTILISATION LORS DES
DEMANDES DE DIAGNOSTIC IN VITRO TRAITÉES PAR
LEUR LABORATOIRE. INVITROGEN CORP NE
GARANTIT PAS LE SUCCÈS DE TOUTE ANALYSE
DIAGNOSTIQUE SUR LA BASE DU SEUL EMPLOI D’UN
MILIEU DE MARQUE GIBCO™. LA CONTRIBUTION DE
GIBCO À CES PROCÉDURES SE LIMITE À LA
FOURNITURE D’UN MILIEU DE CULTURE OU DE
CONSERVATION POUR CES PROCÉDURES.
Les produits liquides GIBCO™ pour cultures cellulaires sont
préparés selon un procédé aseptique dont chaque étape a
été validée pour garantir que tous les produits sont
conformes au niveau 10-3 du standard industriel de stérilité,
c’est-à-dire que les produits ne présentent un niveau de
contamination que dans 1 cas sur 1000 au cours du
processus de fabrication. Le niveau le plus élevé en matière
de stérilité (supérieur ou égal à 10-6) ne peut pas être atteint
en l’absence de stérilisation terminale, cette dernière étant
nuisible pour les performances de ces produits pour culture
cellulaire.
Références
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Pour de plus amples informations ou pour une assistance
technique sur ce produit ou d’autres produits GIBCOTM,
veuillez prendre contact les Services techniques à l’adresse
[email protected], ou vous référer au catalogue des
produits où figurent les numéros de téléphone GIBCOTM de
votre région.
Il est également possible de prendre contact avec vos
représentants Invitrogen ou notre site web à l’adresse
www.invitrogen.com.
Pour utilisation diagnostique in vitro
ATTENTION : Ne pas utiliser dans un but thérapeutique
humain ou animal
Un emploi hors du cadre des indications
précisées sur l’étiquette est susceptible de
tomber sous le coup de la loi.
15
Deutsch
Mit
Mit
Mit
Mit
PB-MAX™ Karyotyping Medium
fötalem Rinderserum
35 µg/mL Gentamicinsulfat
L-Glutamin
Phytohämagglutinin
Kat. Nr.:
12557-013
12557-021
100 mL
500 mL
Verwendungszweck
PB-MAX™ Karyotyping Medium ist für die Verwendung bei
in-vitro-Diagnostikverfahren bestimmt, die die kurzfristige
Kultivierung von peripheren Blutlymphozyten zur
zytogenetischen Untersuchung erfordern. Dieses Produkt
ist bezüglich dieser Anwendung strengen Qualitätskontrollen
durch ein führendes U.S.-amerikanisches Referenzlabor für
klinische Zytogenetik unterzogen worden (siehe Abschnitt
Leistungsprüfung).
Hintergrund
Untersuchungen qualifiziert werden. Außerdem kann die
PHA-Potenz für die Mitosestimulation über verschiedene
Chargen variieren. Die optimale Konzentration muss
normalerweise vor der Verwendung bestimmt werden, oder
es können die Verdünnungsempfehlungen des Herstellers für
die verwendete Charge befolgt werden.
Invitrogen hat den Bedarf der zytogenetischen Labore nach
Kulturmediaprodukten erkannt, die zusätzlich zu einer
konsistenten Leistung vollständig supplementiert und
zytogenetisch qualifiziert geliefert werden. Unter
Berücksichtigung dieser Anforderungen wurde PB-MAX™
Karyotyping Medium als vollständig gebrauchsfertiges
Produkt entwickelt, und ist an primären Zellen in einem
anwendungsspezifischen zytogenetischen Assay vorqualifiziert
worden, der von erfahrenen Zytogenetikern in einem
führenden zugelassenen Zytogenetiklabor nach
standardisierten Protokollen durchgeführt wird.
Die häufigste Quelle für Zellen zur klinischen
zytogenetischen Untersuchung sind periphere
Blutlymphozyten.1 Zytogenetische Routineuntersuchungen
an peripheren Blutlymphozyten können den Nachweis oder
die Bestätigung von Chromosomenaberrationen umfassen,
die mit numerischen oder strukturellen Veränderungen,
autosomalen und Geschlechtschromosomenanomalien und
konstitutionellen oder somatischen Auswirkungen in
Verbindung gebracht werden.2,3 Dieses Verfahren stellt die
am wenigsten invasive Methode zum Erhalt primärer Zellen
für zytogenetische Untersuchungen dar, von denen in den
USA jährlich 123.000 durchgeführt werden.4 Lymphozyten
sind reife Zellen, und teilen sich daher nicht aktiv. Die von
Moorehead et al. 1960 entwickelte Technik für die
kurzfristige Kultivierung von Lymphozyten5 erfordert die
Verwendung eines Mitogens zur Einleitung der Mitose in sich
nicht teilenden Zellen. Das am häufigsten verwendete
Mitogen ist Phytohämagglutinin (PHA), ein Auszug aus der
roten Kidney-Bohne, der kleine Lymphozyten (T-Zellen) in
blastenähnliche Zellen verwandelt. Nach dieser
Transformation folgt schnell die RNA-Synthese, und 24
Stunden später beginnt die DNA-Synthese.1 Sobald die
DNA-Synthese angefangen hat, sind die Zellen festgelegt, und
PHA wird nicht länger in der Kultur benötigt.
Zweiundsiebzig Stunden nach dem Hinzufügen von PHA zu
der Kultur befinden sich ungefähr 45% der Zellen in der
Synthese-Phase. Diese stellt den Höhepunkt der
mitotischen Aktivität dar, und ist der optimale Zeitpunkt
zum Ernten für die Chromosomenuntersuchungen.6
Produktbeschreibung
Die meisten Labore für klinische Zytogenetik kultivieren
periphere Blutlymphozyten über einen Zeitraum von 48-72
Stunden in einem vollständigen Kulturmedium, das aus einem
Basalmedium besteht, das mit ungefähr 10-40% fötalem
Rinderserum, ungefähr 1-2% v/v PHA in Abhängigkeit von
der Bezugsquelle, L-Glutamin und Antibiotika supplementiert
ist. Einige Chargen FBS können Toxizität aufweisen und
müssen vor dem Gebrauch in zytogenetischen
ZUR VERWENDUNG BEI IN-VITRODIAGNOSTIKVERFAHREN, DIE DIE KULTIVIERUNG UND
DAS WACHSTUM VON PERIPHEREN
BLUTLYMPHOZYTEN ERFORDERN.
16
PB-MAX™ Karyotyping Medium besteht aus einem flüssigen
RPMI-1640-Basalmedium, das vollständig mit
Standardkonzentrationen von L-Glutamin, Gentamicinsulfat,
fötalem Rinderserum und Phytohämagglutinin
supplementiert ist. Diese Formulierung beruht auf den
peripheren Blutmedien, auf die im ACT-Laborhandbuch
(1991) zur Verwendung in einer PHA-stimulierten
peripheren Blutkultur verwiesen wird.6 PB-MAX™ wird als
gefrorenes vollständiges 1X-Flüssigmedium geliefert, das
nach dem Auftauen gebrauchsfertig ist. Dieses Design
ermöglicht eine optimale Lagerfähigkeit und erfordert keine
zusätzliche Supplementierung, so dass die Bearbeitung durch
den Endanwender, die möglicherweise die Produktintegrität
beeinträchtigen könnte, minimiert wird. Zusätzlich zu der
Bequemlichkeit eines gebrauchsfertigen Produkts sind zwei
Größen erhältlich, um dem unterschiedlichen Bedarf gerecht
zu werden, der mit dem individuellen Volumen jedes Labors
zusammenhängt. Dieses Produkt wird in cGMP-Qualität in
einer gemäß ISO-Norm 9001 zertifizierten Einrichtung
hergestellt. Jede Produktcharge wird an primären
peripheren Blutlymphozyten, die über ungefähr 72 Stunden
kultiviert werden, auf ihre Leistung überprüft und nach
Mitoseindex und Chromosomen-Banding-Auflösung für das
Chromosom Nr. 10 bewertet. Jede Charge wird parallel zu
einem Kulturmedium geprüft, dessen Leistung bereits zuvor
in diesem Assaysystem qualifiziert worden ist.
VORSICHTSMASSNAHMEN
1. NICHT VERWENDEN,WENN DAS MEDIUM TRÜB
ERSCHEINT, DIE VERPACKUNG BESCHÄDIGT IST
ODER DAS PRODUKT AUFGETAUT EMPFANGEN
WURDE.
2. DIE ANTIBIOTISCHE POTENZ WIRD ZUM
ZEITPUNKT DER HERSTELLUNG BESTIMMT. DIE
PRODUKTLAGERFÄHIGKEIT BERUHT AUF DER
LEISTUNG IN FUNKTIONALEN ASSAYS, NICHT
AUF DER ANTIBIOTISCHEN POTENZ.
3. LÄNGERE LICHTEINWIRKUNG VERMEIDEN.
Lagerbedingungen:
Im Dunkeln bei -5 bis –20°C.
Lagerfähigkeit:
12 Monate bei ungeöffneter Lagerung unter den
empfohlenen Lagerbedingungen.
Gebrauchsanweisung
PB-MAX™ Karyotyping Medium bei 4 bis 8°C auftauen. Das
Medium auf Raumtemperatur erwärmen lassen und vor dem
Gebrauch vorsichtig durchrühren. PB-MAX™ Karyotyping
Medium kann aufgetaut und zur einfacheren Verwendung
aseptisch in kleinere Aliquote aufgeteilt werden. Diese
Aliquote können eingefroren und zum Zeitpunkt der
Verwendung wieder aufgetaut werden.Wiederholte EinfrierAuftau-Zyklen sollten jedoch vermieden werden. Bei der
Verwendung dieses Kulturmediumprodukts längere
Lichteinwirkung vermeiden.
Qualitätskontrolle
Jede Charge des PB-MAX™ Karyotyping Mediums wird zum
Zeitpunkt der Herstellung auf ihre Leistung überprüft.
Zusätzlich zu den Standardqualitätskontrolltests wie pHWert, Osmolalität, Mykoplasma und Sterilität wird jede
hergestellte Mediumcharge mit Hilfe eines quantitativen
Wachstumsassays unter Verwendung von primären humanen
peripheren Blutlymphozyten geprüft, um eine konsistente
biologische Leistung zu gewährleisten. Primäre Zellen, die
von normalen gesunden Spendern stammen, werden über
ungefähr 72 Stunden kultiviert. Danach werden sie geerntet,
auf Objektträgern präpariert und durch Bestimmung von
Mitoseindex und Chromosomen-Banding-Auflösung
ausgewertet. Jede Produktcharge wird parallel überprüft und
mit einem zugelassenen Referenzstandard verglichen, der
eine konsistente Diagnostikleistung sicherstellt. Weitere
Informationen finden Sie auf dem Analysezertifikat.
Einschränkungen
An jeder hergestellten Charge des PB-MAX™ Karyotyping
Mediums wird mit Hilfe von primären peripheren
Blutlymphozyten ein Leistungstest durchgeführt, um die
Produktleistung beim in-vitro-Diagnostikeinsatz für diese
Anwendung zu gewährleisten. Obgleich dieses Medium
wahrscheinlich bei der Verwendung zur Vermehrung anderer
Zellarten ebenfalls eine gute Leistung bietet, unterliegt
dieser Verwendungszweck nicht den gegenwärtigen
Qualitätskontrollverfahren, und es werden keine
Zusicherungen bezüglich dieser Anwendung gegeben.
JEDER KLINIKER/WISSENSCHAFTLER MUSS EIN
UNABHÄNGIGES URTEIL DARÜBER FÄLLEN, OB DIESES
MEDIUM FÜR DEN EINSATZ BEI DEN IN-VITRODIAGNOSTIKANWENDUNGEN GEEIGNET IST, DIE IN
DEM JEWEILIGEN LABOR DURCHGEFÜHRT WERDEN.
INVITROGEN GEWÄHRT KEINERLEI GARANTIEN FÜR
DEN ERFOLGREICHEN AUSGANG VON
DIAGNOSEUNTERSUCHUNGEN, DIE ALLEIN AUF DER
VERWENDUNG DES GIBCO™-MEDIUMS BERUHEN.
DER BEITRAG VON GIBCO ZU DIESEN VERFAHREN
BESTEHT LEDIGLICH IN DEM VORGANG, EINE KULTUR
ODER EIN BEHANDLUNGSMEDIUM FÜR DIESE
VERFAHREN BEREITZUSTELLEN.
GIBCO™-Zellkultur-Flüssigprodukte werden in einem
aseptischen Prozess hergestellt, bei dem jeder Schritt
validiert worden ist, um sicherzustellen, dass alle Produkte
den Branchenstandard bei der Sterilitätsgarantie von 10-3
erfüllen, d.h. das Produkt zeigt einen Kontaminationsgrad von
nicht mehr als 1 von 1000 Einheiten während des
Herstellungsverfahrens. Der höchste Grad der
Sterilitätsgarantie (gleich oder größer 10-6) kann nicht ohne
abschließende Sterilisierung erreicht werden, die einen
schädlichen Einfluss auf die Leistung der Zellkulturprodukte
besitzt.
Literatur
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Weitere Informationen oder technische Unterstützung zu
diesem Produkt oder anderen GIBCO™ Produkten erhalten
Sie bei unserem Technischen Kundendienst
([email protected]). Die örtlichen Telefonnummern
für Ihre Region finden Sie im GIBCO™-Produktkatalog.
Sie können sich auch an Ihren Invitrogen-Verkaufsvertreter
wenden oder unsere Internetsite unter www.invitrogen.com
besuchen.
Für die in-vitro-Diagnostik bestimmt.
VORSICHT:
Nicht für die therapeutische Anwendung
bei Menschen oder Tieren bestimmt.
Andere Anwendungen als der ausgewiesene
Verwendungszweck können einen Verstoß
gegen lokales Recht darstellen.
17
Ελληυικα
18
PB-MAX™ Karyotyping Medium
19
PB-MAX™ Kromoszóma elemzœ táptalaj
magyar
PB-MAX™ Kromoszóma elemzœ táptalaj
követni kell a szállító adott sarzsra vonatkozó hígítási
utasítását.
szarvasmarha magzati vérsavóval
35 mg/ml gentamicin szulfáttal
L-glutaminnal
phytohemagglutininnal
Kat. No.:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Alkalmazási terület
A PB-MAX™ kromoszóma elemzœ táptalaj olyan in vitro
diagnosztikai eljárások céljaira alkalmazható, melyek cytogén
vizsgálatok céljából perifériás vér lymphociták rövid idej·
tenyésztését igénylik. A termék fenti vizsgálatra való
alkalmasságát szigorú minœségi vizsgálat keretében
ellenœrizték vezetœ amerikai klinikai cytogén referencia
laboratóriumok (ld. hatékonyság vizsgálat).
Háttér
A klinikai cytogén vizsgálatok leggyakoribb sejt forrásait a
perifériás vér lymphociták képezik1. A perifériás vér
lymphocitákon végzett rutin cytogén vizsgálatok magukba
foglalják a számbeli, vagy strukturális változásokhoz
kapcsolódó kromoszóma elváltozások, az autoszomatikus és
nemi kromoszóma eltérések, valamint szerkezeti és
szomatikus hatások kimutatását, vagy megerœsítését.2,3 Jelen
eljárás a legkisebb beavatkozással járó módszer primer
sejtek cytogén vizsgálatok számára történœ biztosítására,
melybœl 123.000-t végeznek az USA-ban évente4 A
lymphociták érett sejtek, ezért nem osztódnak aktívan.
A Moorehead és társai által 1960-ban5 kidolgozott rövid
távú lymphocita tenyésztési technika a nem osztódó sejtek
mitosisának indukálására mitogén használatát igényli.
A leggyakrabban használt mitogén a vörös vesebabból
kivonható phytohemagglutinin (PHA), mely a kis
lymphocitákat (T sejteket) osztódásra képes sejtekké
transzformálja. Ezt a transzformációt rövidesen RNS
szintézis követi, majd 24 órával késœbb megkezdœdik a DNS
szintézise. A DNS szintézis megkezdœdése után a sejtek
osztódásra képessé válnak, ezért a továbbiakban a kultúrában
nincs szükség PHA-ra. A PHA kultúrához történœ hozzáadása
után 72 órával kb. a sejtek 45 %-a található S-fázisban. Ez
jelenti a mitotikus aktivitás csúcsértékét, és így optimális
pont a sejtek kromoszóma vizsgálatok céljára történœ
kinyerésére.6
A legtöbb klinikai cytogén laboratórium 48-72 óráig tenyészt
perifériás vér lymphocitákat komplett táptalajban, mely olyan
alaptáptalajból áll, amelyhez kb. 10-40 % magzati
szarvasmarha vérsavót, a forrástól függœen 1-2 v/v%-nyi
PHA-t, L-glutamint és antibiotikumokat adagoltak. Egyes FBS
sarzsok toxicitást mutathatnak, ezért felhasználás elœtt
cytogen vizsgálatokkal kell minœsíteni azokat. A különbözœ
sarzsokból származó PHA-k mitotikus stimuláló képessége
szintén eltérœ lehet. Általában szükséges az optimális
koncentráció felhasználás elœtt történœ meghatározása, illetve
20
Az Invitrogen felismerte a cytogén laboratóriumok igényét
az olyan táptalajok iránt, melyeket komplett formára
adalékolva, cytogenetikusan minœsítve hoznak forgalomba, és
amelyek demonstrálhatóan egyenletes teljesítményt
nyújtanak. Ezen igényre válaszul került kifejlesztésre a
PB-MAX™ Kromoszóma elemzœ táptalaj, mint komplett,
felhasználásra kész termék, melyet primer sejtekkel,
alkalmazás-specifikus, cytogenetikai hatásérték
meghatározások során vezetœ, tanúsított cytogén
laboratóriumok tapasztalt cytogenetikusai standard
protokollok alkalmazásával elœzetesen minœsítettek.
A termék leírása
A PB-MAX™ Kromoszóma elemzœ táptalaj folyékony RPMI1640 alaptáptalajból áll, melyet standard koncentrációjú Lglutaminnal. gentamicin-szulfáttal, szarvasmarha magzati
vérsavóval és phytohemagglutininnal adalékoltak. Ez a
formuláció az ACT Laboratóriumi Kézikönyv (1991) által a
PHA-stimulált perifériás vér kultúrákhoz javasolt perifériás
vér kultúrán alapul.6 A PB-MAX™ 1x fagyasztott folyékony
táptalajként kerül forgalomba, mely felolvasztás után
használatra kész. Ez a kivitel optimális eltarthatóságot biztosít,
nem igényel további adalékolást, így minimalizálja a felhasználó
által végzett m·veleteket, melyek potenciálisan ronthatják a
termék épségét.A használatra kész termék alkalmazásának
kényelme mellett az egyes laboratóriumok eltérœ volumen
igényeihez igazodva két kiszerelést hozunk forgalomba.
A terméket cGMP alatt, ISO 9001 tanúsított létesítményben
gyártjuk.Valamennyi sarzs hatékonyságát elœzetesen primer
perifériás vér lymphocita kultúrákon kb. 72 órán át vizsgáljuk,
majd kiértékeljük a miotikus indexet és a #10 kromoszóma
sáv felbontást.Valamennyi sarzsot a fenti rendszeren
korábban már minœsített hatékonyságú táptalajokkal végzett
párhuzamos vizsgálatokban értékeljük ki.
FIGYELMEZTETÉS
A TERMÉK OLYAN IN VITRO DIAGNOSZTIKAI
ELJÁRÁSOK SORÁN VALÓ FELHASZNÁLÁSÁRA
KÉSZÜLT, MELYEK PERIFÉRIÁS VÉR LYMPHOCITÁK
TENYÉSZTÉSÉT ÉS NÖVESZTÉSÉT IGÉNYLIK.
1. NE HASZNÁLJUK FEL A TERMÉKET, HA A TÁPTALAJ
ZAVAROS, HA A CSOMAGOLÁS SÉRÜLT,VAGY HA
A TERMÉK MEGOLVADT.
2. AZ ANTIBIOTIKUM HATÁSÉRTÉKÉT A
FORMULÁLÁS SORÁN HATÁROZTUK MEG. A
TERMÉK ELTARTHATÓSÁGA A FUNKCIONÁLIS
HATÁSÉRTÉKI MEGHATÁROZÁSOK SORÁN
MUTATOTT HATÉKONYSÁGON ALAPUL, NEM AZ
ANTIBIOTIKUM HATÓÉRTÉKÉN.
3. NE TEGYÜK KI A TERMÉKET HOSSZABB IDŒN
KERESZTÜL FÉNY HATÁSÁNAK.
Tárolási feltételek
-5 - -20°C közötti hœmérsékleten, sötét helyen.
Eltarthatóság
felbontatlan csomagolásban, a javasolt tárolási feltételek
mellett 12 hónap.
Felhasználási utasítás
Olvasszuk fel 4-8°C-on a PB-MAX™ kromoszóma elemzœ
táptalajt. Melegítsük fel a táptalajt szobahœmérsékletre, majd
felhasználás elœtt óvatosan keverjük össze. A PB-MAX™
Kromoszóma elemzœ táptalajt a kényelmesebb felhasználás
céljából felolvasztás után aszeptikus körülmények között
kisebb aliquot részletekre oszthatjuk. Ezeket az aliquotokat
lefagyaszthatjuk, majd megolvaszthatjuk a felhasználás idején,
azonban kerüljük a többszöri lefagyasztást és felolvasztást.
Óvjuk a terméket a hosszabb idœn át tartó fényhatástól.
Minœségellenœrzés
A gyártáskor valamennyi PB-MAX™ kromoszóma elemzœ
táptalaj sarzs hatékonyságvizsgálatra kerül. Az olyan standard
minœségellenœrzési vizsgálatok mellett, mint a pH,
osmolaritás, mycoplazma- és sterilitás meghatározás,
valamennyi legyártott táptalaj sarzs további
tesztvizsgálatokon esik át az egyenletes biológiai hatékonyság
biztosítása céljából. Ennek során primer humán perifériás vér
lymphociták felhasználásával quantitatív növekedés
meghatározás elvégzésére kerül sor. A primer sejteket,
melyek közönséges, egészséges donoroktól származnak, kb.
72 órán át tenyésztik, majd a táptalajt levágják, metszeteket
készítenek és azokat kiértékelik a mitotikus index
kiszámolása, valamint kromoszóma sáv felbontás
meghatározása útján.Valamennyi sarzsot párhuzamos
vizsgálatban hasonlítanak össze konzisztens diagnosztikai
hatékonyságot mutató, jóváhagyott referencia standardokkal.
További információ az elemzési tanúsítványban található.
Korlátozások
Valamennyi PB-MAX™ kromoszóma elemzœ táptalaj
hatékonyságát primer perifériás vér lymphocitákon vizsgáljuk
a termék jelen alkalmazás során mutatott in vitro
diagnosztikai hatékonyságának biztosítása céljából. Mivel ezt a
táptalajt valószín·leg egyéb sejttípusok tenyésztésére fogják
felhasználni, és a felhasználás módja nem képezte a
minœségellenœrzési vizsgálatok tárgyát, ezért az adott
alkalmazásra vonatkozóan nem vállalhatunk garanciát.
TESZTVIZSGÁLATOK SIKERES VÉGREHAJTÁSÁT
KIZÁRÓLAG A GIBCO™ TÁPTALAJ HASZNÁLATA
ALAPJÁN. A GIBCO HOZZÁJÁRULÁSA EZEKHEZ AZ
ELJÁRÁSOKHOZ EGYSZER‡EN AZ EZEN
ALKALMAZÁSOKHOZ SZÜKSÉGES TÁPTALAJ
BIZTOSÍTÁSÁRA, ILLETVE A TÁPTALAJ KEZELÉSÉRE
KORLÁTOZÓDIK.
A GIBCO™ sejttenyészeti folyadék termékek olyan
aszeptikus eljárás során készülnek, melynek valamennyi
lépését validálták annak biztosítása céljából, hogy valamennyi
termék kielégítse a gyógyszeripari standard sterilitási szintet,
ami 10-3, vagyis olyan terméket szolgáltasson, melynek
szennyezettségi szintje a gyártás során nem lehet magasabb,
mint 1 az 1000 egységbœl. A legmagasabb sterilitási szint,
(nagyobb, vagy egyenlœ, mint 10-6) nem érhetœ el
végsterilizálás nélkül, mely a sejt tenyészeti termékek
hatékonyságára káros hatást gyakorol.
Hivatkozások
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Ezen, vagy egyéb GIBCO™ termékkel kapcsolatos
információ szerzése, vagy technikai támogatás kérése
céljából, kérjük, vegye fel a kapcsolatot a Technikai
Szolgálattal a [email protected], e-mail címen, vagy a
GIBCO™ katalógusban közölt helyi telefonszámon.
Kapcsolatba léphet az Ön Invitrogen kereskedelmi
képviselœjével, vagy felkeresheti Web helyünket az alábbi
címen: www.invitrogen.com.
In vitro diagnosztikai felhasználásra.
FIGYELEM: Nem alkalmazható humán-, vagy állatterápiás célokra.
A címkén feltüntetettœl eltérœ felhasználás sértheti
a helyi törvényeket.
VALAMENNYI KLINIKUSNAK/TUDÓSNAK EGYÉNILEG
KELL ELDÖNTENIE AZT, HOGY EZ A TÁPTALAJ
ALKALMAS-E A LABORATÓRIUMBAN VÉGZETT
IN VITRO DIAGNOSZTIKAI ALKALMAZÁS CÉLJAIRA. AZ
INVITROGEN NEM GARANTÁLJA A DIAGNOSZTIKAI
21
Íslenska
PB-MAX™ Karyotyping Medium
Inniheldur sermi úr nautgripafóstrum
Inniheldur gentamícín súlfat 35 míkróg/ml
Inniheldur L-glútamín
Inniheldur phytohemagglutinin
Vörunr.:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Tilætlu notkun
PB-MAX™ Karyotyping æti er ætla til notkunar vi „in
vitro“ sjúkdómsgreiningar Úegar Úörf er á skammtíma ræktun
eitilfrumna úr blói fyrir frumuerfafræi-rannsóknir. Òessi
vara hefur gengi gegnum ströng gæapróf hjá leiandi
bandarískri rannsóknar-stofu í klínískum
frumuerfafræirannsóknum til Úessara nota (sjá
Gæaeftirlit).
Bakgrunnur
Algengasti uppruni frumna í klínískum
frumuerfafræirannsóknum eru eitilfrumur úr blói1. Meal
venjubundinna frumuerfafræi-rannsókna á eitilfrumum úr
blói geta veri uppgötvun ea stafesting litningafrávika
tengdum breytingum á röun og uppbyggingu, frávikum í
frílitningum og kynlitningum og elislægum ea líkamlegum
áhrifum 2,3. Òessi afer er sú sem krefst minnstu inngripa til
a fá upprunalegar frumur í frumuerfafræirannsókn og eru
123.000 slíkar rannsóknir framkvæmdar árlega í
Bandaríkjunum4. Eitilfrumur eru fullÚroskaar frumur og Úví
ekki í virkri skiptingu.Tæknin, sem var Úróu af Moorehead
og samstarfs-mönnum ári 19605 til skammtíma ræktunar á
eitilfrumum, kallar á notkun eitilfrumuræsis til a framkalla
mítósuskiptingu í frumum sem ekki skipta sér. Mest notai
eitilfrumuræsirinn er phytohemagglutinin (PHA) sem er seyi
úr rauum nÔrnabaunum sem umbreytir litlum eitilfrumum
(T frumum) í frumur sem líkjast kímfrumum. Òessari
umbreytingu fylgir fljótt RNA nÔmyndun og DNA nÔmyndun
hefst sólarhring seinna1. Òegar DNA nÔmyndunin er hafin
eru frumurnar ornar umbreyttar og ekki er lengur Úörf
fyrir PHA í ræktuninni. 72 klst. eftir a PHA hefur veri bætt
í ræktunina eru u.Ú.b. 45% frumnanna í S fasa. Òetta svarar til
hámarks mítósuvirkni og er kjörtími til notkunar í
litningarannsóknir6.
Flestar klínískar frumuerfafræirannsóknarstofur rækta
eitilfrumur úr blói í 48-72 klst í fullbúnu ræktunaræti sem
er samsett úr grunnæti bættu me u.Ú.b. 10-40% sermi úr
nautgripafóstrum, PHA á styrkleikabilinu 1-2% v/v eftir
uppruna, L-glútamíni og sÔklalyfjum. Sumar framleislulotur
FBS geta reynst eitraar og ætti Úví a gæaprófa Úær fyrir
notkun vi frumuerfafræirannsóknir. Styrkur PHA me
tilliti til mítósuskiptinga örvunar getur einnig veri
mismunandi milli framleislulota. Kjörstyrk Úarf venjulega a
ákvea fyrir notkun ea hægt er a fylgja ábendingum
seljanda um Úynningu vikomandi framleislulotu.
22
Invitrogen gerir sér grein fyrir Úörf
frumuerfafræirannsóknarstofa fyrir ræktunaræti, sem
afhent er fullbúi og hæft til frumuerfafræirannsókna
ásamt Úví a hafa samkvæma virkni.Til a svara Úessari Úörf
var PB-MAX™ Karyotyping æti hanna sem fullbúin vara
tilbúin til notkunar og er gilda fyrirfram me upprunalegum
frumum me sérhæfri frumuerfafræimælingu, sem
framkvæmd er af reyndum frumuerfafræingum á leiandi
viurkenndri frumuerfafræirannsóknarstofu samkvæmt
stöluum vinnureglum.
VörulÔsing
PB-MAX™ Karyotyping æti er samsett úr fljótandi RPMI1640 grunnæti, sem er fullbúi me venjulegum styrk Lglútamíns, gentamícín súlfats, sermis úr nautgripafóstrum og
phytohemagglutinins. Òessi samsetning er bygg á „Peripheral
Blood Media“ sem vísa er til í ACT rannsóknarstofu
handbókinni (1991) til notkunar vi PHA-örvaa „Peripheral
Blood Culture“6. PB-MAX™ fæst sem 1X æti í vökvaformi
sem búi er a frysta og er fullbúi og tilbúi til notkunar
eftir uppÚíingu. Òessi hönnun gefur hámarks geymsluÚol og
ekki Úarf a bæta neinu í, en Úa lágmarkar alla mehöndlun
notanda, sem hefi geta dregi úr trúverugleika vörunnar.
Í vibót vi Úægindin af Úví a hafa vöruna tilbúna til
notkunar eru tvær pakkningarstærir á bostólum til a
mæta breytilegum Úörfum um magn fyrir sérhverja
rannsóknarstofu.Varan er framleidd samkvæmt cGMP í
framleislueiningu, sem er ISO 9001 vottu. Sérhver
framleislulota er virkniprófu á upprunalegum eitilfrumum
úr blói ræktuum í u.Ú.b. 72 klst. og mítósuskiptinga stuull
og litninga bandlitunar stuull fyrir litning nr. 10 eru
ákvarair. Sérhver framleislulota er borin samhlia vi
ræktunaræti sem hefur veri virkniprófa áur í Úessu
prófunarkerfi.
Varúarrástafanir.
TIL NOTKUNAR Í „IN VITRO“ SJÚKDÓMSGREININGUM
ÒEGAR ÒÖRF ER Á RÆKTUN OG VEXTI EITILFRUMNA
ÚR BLÓ∫I.
1. 1. NOTI∫ EKKI EF ÆTI∫ ER SKÓJA∫, ÒA∫ SÉR Á
PAKKNINGUM E∫A EF VARAN VAR MÓTTEKIN
ÒÍDD.
2. SÓKLADREPANDI VIRKNI ER ÁKVE∫IN ÒEGAR
FRAMLEI∫SLA Á SÉR STA∫. GEYMSLUÒOL
VÖRUNNAR ER ÁKVE∫I∫ ÚT FRÁ VIRKNI Í
VERKUNARMÆLINGUM, EKKI SÓKLADREPANDI
VIRKNI.
3. FOR∫IST A∫ LJÓS NÁI A∫ SKÍNA Á VÖRUNA Í
LENGRI TÍMA.
Geymsluskilyri
-5 til –20°C, vari ljósi.
GeymsluÚol:
12 mánuir vi geymslu í órofnum umbúum vi viurkennd
geymsluskilyri.
Notkunarleibeiningar
Òíi PB-MAX™ Karyotyping æti vi 4-8°C. Hiti æti a
herbergishita og sveifli varlega í hringi til blöndunar fyrir
notkun. PB-MAX™ Karyotyping æti má Úía og skipta me
smitgát í smærri einingar. Òessar einingar má frysta og sían
Úía Úegar nota á Úær. Òó skal forast a Úía og frysta æti
oft. Forist lengri tíma í birtu Úegar Úetta vaxtaræti er nota.
Gæaeftirlit
Sérhver framleislulota PB-MAX™ Karyotyping ætis er
virkniprófu mean á framleislu stendur.Til vibótar vi
stölu gæapróf eins og pH, osmósu-ÚrÔsting, mÔkóplasma
og dauhreinsun er sérhver framleislulota ætis prófu til
a tryggja samkvæma líffræilega virkni me magnmælingu á
vexti Úar sem notaar eru upprunalegar eitilfrumur úr blói
úr fólki. Upprunalegar frumur, sem fengnar eru frá elilegum
fullfrískum gjöfum, eru ræktaar í u.Ú.b. 72 klst. og eru Úá
teknar, sÔnagler útbúin og metin me Úví a finna
mítósuskiptingastuul og litninga band-litunarupplausn.
Sérhver framleislulota vörunnar er prófu samhlia og
borin saman vi viurkenndan vimiunarstaal, sem tryggir
samkvæma greiningar-virkni.Vinsamlegast leiti frekari
upplÔsinga í rannsóknarvottorinu, sem fylgir hverri
framleislulotu.
Takmarkanir
GIBCO™ vökvar til frumuræktunar eru framleiddir me
smitgát Úar sem sérhvert stig hefur hloti gildingu til a
tryggja a allar vörur uppfylli stala inaarins um
dauhreinsunarstigi 10-3; Ú.e. vara Úar sem sÔnt er fram á
ekki hærra mengunarstig en 1 fyrir hverjar 1000 einingar í
framleisluferlinu. Ekki er hægt a uppná hæsta stigi
dauhreinsunar (jafnt ea hærra en 10-6) án Úess a beitt sé
loka dauhreinsun sem er skaleg virkni varnings til
frumuræktunar.
Tilvísanir
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Ef frekari upplÔsinga ea tæknilegrar astoar er óska fyrir
Úessa ea arar GIBCO™ vörur er bent á tæknideild á
[email protected] ea á símanúmer fyrir vieigandi
svæi í GIBCO™ vörulistanum.
Einnig er hægt a hafa samband vi sölufulltrúa Invitrogen
ea heimasíu okkar www.invitrogen.com.
Til „in vitro“ sjúkdómsgreininga.
VARÚ∫: Ekki ætla mönnum ea dÔrum í lækningaskyni.
Notkun önnur en sú, sem er fyrirskrifu, getur broti í
bága vi gildandi lög.
Sérhver framleislulota PB-MAX™ Karyotyping ætis er
prófu me tilliti til virkni á upprunalegum eitilfrumum úr
blói til a tryggja virkni vörunnar í „in vitro“ sjúkdómsgreiningum. Òó svo a Úetta æti virki líklega vi fjölgun
annarra frumu-gera er Úannig notkun ekki innifalin í
núgildandi gæaeftirlitsaferum og engin ábyrg er sem
stendur tekin á Úeirri notkun.
SÉRHVER LÆKNIR/VÍSINDAMA∫UR VER∫UR A∫ META
SJÁLFSTÆTT HVORT ÒETTA ÆTI ER HÆFT TIL
NOTKUNAR VI∫ „IN VITRO“ SJÚKDÓMSGREININGAR
SEM FRAMKVÆMDAR ERU Á RANNSÓKNARSTOFU
ÒEIRRA. INVITROGEN ÁBYRGIST EKKI
ÁRANGURSRÍKAR NI∫URSTÖ∫UR NEINNA
SJÚKDÓMSGREININGARANNSÓKNA, SEM BYGGJA
EINGÖNGU Á GIBCO™ ÆTI. FRAMLAG GIBCO TIL
ÒESSARA A∫FER∫A ER EINGÖNGU Á ÒVÍ STIGI A∫ SJÁ
FYRIR FRUMURÆKTUN E∫A SJÁ UM ÆTI FYRIR ÒESSAR
A∫FER∫IR.
23
Italiano
Terreno per cariotipizzazione PB-MAX™
con siero fetale di bovino
con gentamicina solfato, 35 mcg/mL
con L-glutamina
con fitoemagglutinina
N. di catalogo:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Uso previsto
Il terreno per cariotipizzazione PB-MAX™ è destinato
all’uso nelle procedure diagnostiche in vitro che richiedono la
coltivazione a breve termine di linfociti del sangue periferico,
per gli studi di citogenetica. Questo prodotto è stato
sottoposto ad accurato controllo di qualità, da un
laboratorio statunitense di citogenetica clinica, leader di
riferimento per quest’applicazione (vedere sezione "Test di
performance").
Informazioni generali
La fonte più comune di cellule per lo studio di citogenetica
clinica è costituita dai linfociti del sangue periferico.1 Gli
studi di citogenetica di routine eseguiti sui linfociti del
sangue periferico, possono includere la messa in evidenza o
la conferma di aberrazioni cromosomiche associate ad
alterazioni numeriche e strutturali, di anomalie dei
cromosomi autosomici e sessuali e di effetti costituzionali o
somatici.2,3 Questa procedura rappresenta il metodo meno
invasivo per ottenere cellule primarie per lo studio
citogenetico; negli Stati Uniti ne vengono effettuate 123.000
all’anno.4 I linfociti sono cellule mature e quindi non si
dividono attivamente. Questa tecnica, sviluppata da
Moorehead et al. negli anni sessanta per la coltura a breve
termine di linfociti, richiede l’uso di un mitogeno per indurre
la mitosi nelle cellule che non si dividono. Il mitogeno più
comunemente utilizzato è la fitoemagglutinina (PHA), un
estratto di fagiolo comune, che ha la proprietà di
trasformare i piccoli linfociti (cellule T) in cellule blastoidi.
Questa trasformazione è subito seguita dalla sintesi di RNA;
la sintesi di DNA inizia 24 ore dopo.1 Una volta cominciata
la sintesi di DNA, le cellule vengono indirizzate e la presenza
di PHA non è più necessaria nella coltura. Settantadue ore
dopo l’aggiunta di PHA alla coltura, il 45% circa delle cellule
si trovano in fase S. Ciò rappresenta l’attività mitotica di
picco e costituisce il momento ideale per la raccolta per gli
studi sui cromosomi.6
La maggior parte dei laboratori di citogenetica clinica
tengono in coltura i linfociti di sangue periferico per un
periodo di 48-72 ore in un terreno di coltura completo, che
consiste in un terreno basale arricchito con circa il 10-40%
di siero fetale di bovino, con PHA per circa 1-2% v/v a
seconda della fonte, con L-glutamina e con antibiotici. Alcuni
lotti di siero fetale di bovino (FBS) possono mostrare
tossicità e devono quindi essere qualificati prima dell’uso
negli studi di citogenetica. Inoltre, il potenziale di
24
stimolazione mitotica della PHA può variare a seconda del
lotto. La concentrazione ottimale deve, di solito, essere
determinata prima dell’uso, oppure si possono seguire le
raccomandazioni di diluizione per il lotto usato, fornite dal
venditore.
Invitrogen conosce le esigenze dei laboratori di citogenetica,
che richiedono terreni di coltura completamente arricchiti e
citogeneticamente qualificati, con una performance costante.
In risposta a queste esigenze, il terreno per cariotipizzazione
PB-MAX™ è stato allestito come prodotto completo
pronto per l’uso ed è prequalificato sulle cellule primarie in
un saggio citogenetico specifico per l’applicazione, effettuato
da citogenetisti esperti in un laboratorio di citogenetica
certificato e seguendo protocolli standardizzati.
Descrizione del prodotto
Il terreno per cariotipizzazione PB-MAX™ è composto da
un terreno basale liquido RPMI-1640, completamente
arricchito con concentrazioni standard di L-glutamina,
gentamicina solfato, siero fetale di bovino e fitoemagglutinina.
Questa formulazione si basa sui terreni di sangue periferico,
menzionati nell’ACT Laboratory Manual (1991) per l’uso in
colture di sangue periferico stimolate da PHA.6 PB-MAX™
viene fornito come terreno liquido congelato di
concentrazione 1X, completo e pronto per l’uso dopo
scongelamento. Questa preparazione consente un periodo di
validità ottimale e non richiede ulteriori arricchimenti,
minimizzando l’intervento dell’utente finale, che potrebbe
compromettere l’integrità del prodotto. Oltre ad offrire la
convenienza di un prodotto pronto per l’uso, sono
disponibili due grandezze, per soddisfare le esigenze di
variazione associate ad ogni singolo volume individuale di
laboratorio. Questo prodotto viene realizzato secondo il
sistema di qualità aziendale (Quality System Regulation cGMP's) in una struttura certificata secondo la norma EN
ISO 9001. La performance di ogni lotto del prodotto viene
testata sui linfociti primari del sangue periferico, tenuti in
coltura per 72 ore e valutati per quanto riguarda l’indice
mitotico e la risoluzione del bandeggio del cromosoma
numero 10. Ogni lotto viene esaminato in parallelo contro
un terreno di coltura precedentemente qualificato riguardo
alla performance in questo sistema di saggio.
PRECAUZIONI
PER L’USO NELLE PROCEDURE DIAGNOSTICHE IN
VITRO CHE RICHIEDONO LA COLTIVAZIONE E LA
CRESCITA DEI LINFOCITI DI SANGUE PERIFERICO.
1. IL TERRENO NON VA UTILIZZATO SE APPARE
TORBIDO, SE LA CONFEZIONE ESTERNA È STATA
DANNEGGIATA O SE IL PRODOTTO È STATO
FORNITO COMPLETAMENTE SCONGELATO.
2. IL POTERE ANTIBIOTICO VIENE DETERMINATO AL
MOMENTO DELLA FORMULAZIONE. IL PERIODO
DI VALIDITÀ DEL PRODOTTO SI BASA SULLA
PERFORMANCE NEI SAGGI FUNZIONALI E NON
SUL POTERE ANTIBIOTICO.
3. EVITARE L’ESPOSIZIONE PROLUNGATA ALLA LUCE.
Condizioni di conservazione:
Da -5 a 20 °C, al buio.
Periodo di validità:
12 mesi, nelle condizioni di conservazione raccomandate e
se la confezione non viene aperta.
OGNI MEDICO/RICERCATORE DEVE FORNIRE UN
GIUDIZIO INDIPENDENTE SULL’IDONEITÀ DEL TERRENO
PER L’USO NELLE APPLICAZIONI DIAGNOSTICHE IN
VITRO CONDOTTE NEL PROPRIO LABORATORIO.
INVITROGEN NON GARANTISCE L’ESITO POSITIVO DI
ALCUN TEST DIAGNOSTICO BASATO ESCLUSIVAMENTE
SULL’USO DI TERRENI GIBCO™. IL CONTRIBUTO DI
INVITROGEN A QUESTE PROCEDURE SI LIMITA NEL
FORNIRE UN TERRENO DI COLTURA O DI
TRATTAMENTO PER LE PROCEDURE STESSE.
Istruzioni per l’uso
Scongelare il terreno per cariotipizzazione PB-MAX™ a 4-8
°C. Riscaldare il terreno fino alla temperatura ambiente ed
agitarlo delicatamente per miscelarlo prima dell’uso. Il
terreno per cariotipizzazione PB-MAX™ può essere
scongelato e suddiviso in asepsi in aliquote minori, a seconda
delle esigenze. Queste aliquote possono venir congelate per
essere poi scongelate al momento di utilizzarle; evitare,
comunque, di congelare-scongelare ripetutamente il terreno.
Evitare l’esposizione prolungata alla luce quando si usa
questo terreno di coltura.
Controllo qualità
Ogni lotto di terreno per cariotipizzazione PB-MAX™ viene
testato per quanto riguarda la performance al momento
della produzione. Oltre ai test standard di controllo di
qualità quali pH, osmolalità, micoplasmi e sterilità, ogni lotto
di terreno prodotto viene testato per assicurare una
performance biologica adeguata, mediante un saggio
quantitativo di crescita che utilizza linfociti primari di sangue
periferico. Le cellule primarie, ottenute da donatori sani
normali, sono messe in coltura per circa 72 ore, trascorse le
quali vengono poi raccolte, preparate su vetrino ed
esaminate calcolando l’indice mitotico e la risoluzione del
bandeggio cromosomico. Ogni lotto del prodotto viene
testato in parallelo e comparato con uno standard
approvato di riferimento, che assicura una performance
diagnostica costante. Per ulteriori informazioni, fare
riferimento al certificato di analisi.
Limitazioni
Ogni lotto prodotto di terreno per cariotipizzazione
PB-MAX™, viene testato per quanto riguarda la performance
su linfociti primari di sangue periferico, per assicurare la
performance del prodotto per l’uso diagnostico in vitro per
quest’applicazione.Anche se questi terreni possono essere
usati per la propagazione di altri tipi cellulari, il loro uso
previsto non è soggetto alle attuali procedure di controllo
qualità ed attualmente non si forniscono garanzie per la loro
applicazione.
I prodotti liquidi di colture cellulari GIBCO™, vengono
preparati mediante un processo asettico, ogni fase del quale è
stata validata per assicurare che tutti i prodotti soddisfino il
livello di sicurezza di sterilità industriale standard di 10-3; cioè
prodotti che dimostrino un livello di contaminazione non
superiore a 1 su 1000 unità, durante il processo produttivo. Il
livello massimo di sicurezza di sterilità (uguale o maggiore di
10-6), non può essere raggiunto senza sterilizzazione conclusiva,
che non compromette la performance dei prodotti a base di
colture cellulari.
Riferimenti bibliografici
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Per ulteriori informazioni o per l’assistenza tecnica su
questo o su altri prodotti GIBCOTM, rivolgersi al
Servizio tecnico [email protected], oppure
ricercare il numero telefonico della propria zona nel
catalogo dei prodotti GIBCOTM.
Inoltre, è possibile rivolgersi al proprio rappresentante
vendite Invitrogen, oppure consultare il nostro sito internet
www.invitrogen.com.
Per uso diagnostico in vitro.
ATTENZIONE: non destinato all’uso in terapia
umana o veterinaria.
L’utilizzazione diversa dall’uso previsto
indicato, può costituire violazione delle
Norme locali.
25
latviešu
PB-MAX™ kariotipiz≥Ìanas vide
Ar liellopa embrija serumu
Ar gentamicøna sulf‚tu 35 mcg/mL
Ar L-glutamønu
Ar fitohemaglutinønu
Kataloga Nr.:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Paredz≥tß‚ lietoÌana
PB-MAX™ kariotipiz≥Ìanas vide ir paredz≥ta lietoÌanai
diagnostikai in vitro, kurßs citoªen≥tisku p≥tøjumu nol›kß‚
izmanto øslaicøgas perif≥risko asi…u limfocøtu kult›ras. ÿø vide
ir bijusi pak√auta stingrai kvalitßtes kontrolei, ko min≥tß‚
lietojuma nol›kß‚ veikusi vadoÌa ASV citoªen≥tiskßs izp≥tes
kløniskß‚ etalonlaboratorija (skatøt: Darbøbas test≥Ìana).
Pamatojums
Perif≥risko asi…u limfocøtus visbieÈßk izmanto, lai ieg›tu
Ì›nas kløniskiem citoªen≥tiskiem p≥tøjumiem.1 Parastie
citoªen≥tiskie p≥tøjumi, ko veic ar perif≥risko asi…u
limfocøtiem, var ietvert hromosomu aberßcijas konstat≥Ìanu
vai apstiprinßÌanu, kas saistøta ar skaitliskßm un strukturßlßm
izmai…ßm, autosomßm un dzimumhromosomas anomßlijßm
un uzb›ves vai somatiskßm sekßm.2,3 Ïø proced›ra no visßm
metod≥m ir vismazßk invazøva, kß rezultßtß ieg›st primßras
Ì›nas citoªen≥tiskai izp≥tei ASV katru gadu veic 123000
proced›ru.4 Limfocøti ir nobrieduÌas Ì›nas un aktøvi nedalßs.
æslaicøgas limfocøtu kult›ras ieg›Ìanas metode, ko 1960. gadß
izstrßdßja M›rheds un vi…a kol≥ªi, paredz mitog≥na
izmantoÌanu, lai rosinßtu mitozi Ì›nßs, kas nedalßs. VisbieÈßk
izmantotais mitog≥ns ir fitohemaglutinøns (PHA), kas ir
sarkano dßrza pupi…u ekstrakts, kurÌ pßrveido mazos
limfocøtus (T Ì›nas) blastiem lødzøgas Ì›nßs, kas strauji dalßs.
Ïai pßrveidei ßtri seko RNS sint≥ze un DNS sint≥ze, kas
sßkas 24 stundas v≥lßk.1 Kad ir sßkusies DNS sint≥ze, Ì›nas
ir iesaistøtas un PHA klßtbøtne kultørß vairs nav nepiecieÌama.
Septi…desmit divas stundas p≥c PHA pievienoÌanas kult›rai
aptuveni 45 % Ì›nu ir S fßz≥. Tß ir mitotiskßs aktivitßtes
kulminßcija un optimßlais laiks veikt nepiecieÌamos
hromosomu p≥tøjumus.6
Vairums citoªen≥zes klønisko laboratoriju uztur perfi≥risko
asi…u limfocøtu kult›ru 48-72 stundas gatavß kult›ras vid≥,
kas sastßv no bßziskas vides, kura papildinßta ar liellopa
embrija serumu aptuveni 10-40% apm≥rß, PHA aptuveni
1-2% v/v apm≥rß atkarøbß no avota, L-glutamønu un
antibiotikßm. Da›ßm FBS partijßm var b›t raksturøga
toksicitßte, un pirms izmantoÌanas citoªen≥tiskajos
p≥tøjumos jßveic to pßrbaude. Da›ßdßs partijßs var b›t
atÌ‰irøgs mitotiskßs stimul≥Ìanas potencißls. Pirms lietoÌanas
parasti ir jßnosaka optimßlß koncentrßcija vai arø var izpildøt
pßrdev≥ja sniegtos ieteikumus attiecøbß uz attiecøgßs partijas
atÌ‰aidøÌanu pirms lietoÌanas.
Invitrogen apzinßs, ka citoªen≥zes laboratorijßm ir
nepiecieÌami kult›ru vides preparßti, ko piegßdß pilnøbß
26
papildinßtus un citoªen≥tiski kvalific≥tus un kuru darbøba
turklßt ir viendabøga. Reaª≥jot uz Ìo vajadzøbu, ir izstrßdßta
PB-MAX™ kariotipiz≥Ìanas vide kß lietoÌanai gatavs
preparßts, kam veikta iepriekÌ≥ja pßrbaude, izmantojot
primßrßs Ì›nas konkr≥tam lietojumam atbilstoÌß
citoªen≥tiskß noteikÌanß, ko veic pieredz≥juÌi citoªen≥ti‰i
vadoÌß sertific≥t‚ citoªen≥zes laboratorijß, iev≥rojot
standartprotokolu.
Preparßta apraksts
PB-MAX™ kariotipiz≥Ìanas vide sastßv no Ì‰idras formas
RPMI-1640 bßzes vides, kas ir pilnøbß papildinßta ar Lglutamøna, gentamicøna sulfßta, liellopa embrija seruma un
fitohemaglutinøna standarta koncentrßciju. Ïß preparßta
pamatß ir perif≥risko asi…u lødzeklis, kas min≥ts ACT
laboratorijas rokasgrßmatß (1991. gads) izmantoÌanai PHAstimul≥tß perif≥risko asi…u kult›rß.6 PB-MAX™ piegßdß 1X
sald≥tas Ì‰idras vides veidß, kas ir gatava lietoÌanai p≥c
atkaus≥Ìanas. Tas nodroÌina optimßlu uzglabßÌanas termi…u
un neprasa papildu papildinßjumu, kas samazina galøgß
lietotßja iejaukÌanos, kura potencißli var≥tu kait≥t preparßta
integritßtei. Papildus iesp≥jai izmantot gatavu preparßtu, Ìis
preparßts ir pieejams divu izm≥ru iepakojumß, lai
apmierinßtu katras atseviÌ‰ßs laboratorijas da›ßdßs
vajadzøbas. Ïo preparßtu ra›o saska…ß ar Kvalitßtes nolikumu
(cGMP's) telpßs, kam ir ISO 9001 sertifikßts. Katru preparßta
partiju test≥, izmantojot primßros perif≥risko asi…u
limfocøtus, kurus uztur apm≥ram 72 stundas un ko nov≥rt≥,
…emot v≥rß mitotisko rßdøtßju un 10. hromosomas
hromosomu apvienoÌanas izÌ‰irÌanu. Paral≥li to salødzina ar
kult›ras vidi, kuras darbøba jau ir iepriekÌ attiecøgi kvalific≥ta
tajß paÌß noteikÌanas sist≥mß.
PEISARDZæBA LIETOÏAN°
LIETO IN VITRO DIAGNOSTIKAS PROCED‹R¶S, KUR
J¶VEIC PERIF≤RISKO ASI»U LIMFOCæTU KULTIV≤ÏANA
UN AUDZ≤ÏANA.
1. NEIZMANTO, JA PREPAR¶TS IZSKAT¶S
DU¬¿AINS, IESAI»OJUMS IR BOJ¶TS VAI
PREPAR¶TU SA»EM PILNæB¶ IZKUSUÏU.
2. ANTIBIOTISKO POTENCI¶LU NOSAKA
PREPAR¶TA IZGATAVOÏANAS LAIK¶.
PREPAR¶TA DERæGUMA TERMI»A PAMAT¶ IR
FUNKCION¶LAJOS TESTOS IEG‹TIE REZULT¶TI
NEVIS ANTIBIOTISKAIS POTENCI¶LS.
3. J¶IZVAIR¶S NO PREPAR¶TA ILGSTOÏAS
PAK¬AUÏANAS GAISMAS IEDARBæBAI.
Uzglab‚Ìana:
-5 lødz -20°C temperat›rß tumÌß vietß.
UzglabßÌanas ilgums:
12 mÁneÌi, ja glabß neatv≥rtß veidß, iev≥rojot uzglabßÌanas
nosacøjumus. P≥c derøguma termiÚa beigßm nav izmantojams.
LietoÌanas norßdøjumi
PB-MAX™ kariotipiz≥Ìanas vidi atkaus≥ 4 lødz 8°C
temperat›rß. Lødzekli sasilda lødz istabas temperat›rai un
pirms lietoÌanas viegli sakrata. PB-MAX™ kariotipiz≥Ìanas
vidi var atkaus≥t un aseptiskß veidß sadaløt vienßdßs,
atbilstoÌßs da√ßs ≥rtßkai lietoÌanai. ÿøs vienßdßs, atbilstoÌßs
da√as var sasald≥t un atkaus≥t lietoÌanas laikß, tom≥r ir
jßizvairßs no vairßkkßrt≥jas sasald≥Ìanas un atkaus≥Ìanas.
Izmantojot Ìo kult›ras vides preparßtu, to nedrøkst ilgstoÌi
pak√aut gaismas iedarbøbai.
Kvalitßtes kontrole
Ra›oÌanas laikß pßrbauda katras PB-MAX™ kariotipiz≥Ìanas
vides partijas darbøbu. Papildus standarta kvalitßtes kontroles
testiem, piem≥ram, pH, osmolaritßte, mikoplazma un
sterilitßte, pßrbauda katru sara›oto lødzek√a partiju, lai
nodroÌinßtu viendabøgu bioloªisku darbøbu, un to veic,
izmantojot kvantitatøvu augÌanas analøzi, kurß izmanto
primßrus cilv≥ka perif≥ro asi…u limfocøtus. No normßliem
veseliem donoriem ieg›tas primßrßs Ì›nas kultiv≥ apm≥ram
72 stundas, kuru laikß notiek ievßkÌana, priekÌmetstikli…u
sagatavoÌana un nov≥rt≥Ìana, izmantojot mitotisko rßdøtßju
un hromosomu apvienoÌanas izÌ‰irÌanu. Katru izstrßdßjuma
partiju test≥ paral≥li un salødzina ar apstiprinßtu etalonu, kas
nodroÌina viendabøgus rezultßtus diagnostikß. Papildu
informßciju var ieg›t, iepazøstoties ar analøzes sertifikßtu.
Ierobe_ojumi
Katras sara›otßs PB-MAX™ kariotipiz≥Ìanas vides preparßta
partijas darbøbu pßrbauda, izmantojot primßrus perif≥risko
asi…u limfocøtus, lai nodroÌinßtu preparßta darbøbu
paredz≥tajß diagnostikß in vitro. Kaut arø iesp≥jams, ka Ìo
lødzekli var izmantot citu Ì›nu tipu pavairoÌanß, Ìßds
lietojums nav pak√auts esoÌajßm kvalitßtes kontroles
proced›rßm un tam netiek sniegtas nekßdas garantijas.
1000 vienøbßm. Visaugstßko sterilitßtes nodroÌinßjuma lømeni
(vienßdu vai lielßku par 10-6) nevar panßkt, neveicot
terminßla (galøgo) sterilizßciju, kas kait≥ Ì›nu kult›ras
produktu darbøbai.
Atsauces
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Papildu informßciju vai tehnisku palødzøbu saistøbß ar šo vai
citu GIBCO™ ražojumu var sa…emt, sazinoties ar Tehnisko
dienestu pa e-pastu [email protected] vai
izmantojot GIBCO™ ražojumu katalogß atrodamu viet≥jßs
pßrstßvniecøbas telefona numuru.
Varat arø sazinßties ar Invitrogen tirdzniecøbas pßrstßvi vai
apmekl≥t m›su mßjas lapu www.invitrogen.com.
Paredz≥ts izmantošanai diagnostikß in vitro.
UZMANæBU:
nav paredz≥ts cilv≥ku vai dzøvnieku
ßrst≥šanai.
Preparßta izmantošana nol›kß, kas nav
norßdøts marķ≥jumß, var b›t viet≥jßs
likumdošanas pßrkßpums.
KATRAM KLæNICISTAM/ZIN¶TNIEKAM IR J¶PIE»EM
NEATKARæGS L≤MUMS PAR TO, VAI ÏIS PREPAR¶TS IR
PIEM≤ROTS IZMANTOÏANAI IN VITRO DIAGNOSTIK¶,
KO VEIC ATTIEC¬GAJ¶ LABORATORIJ¶. INVITROGEN
CORP. NEGARANT≤ NEVIENA DIAGNOSTIKAS TESTA
SEKMæGU IZN¶KUMU, PAMATOJOTIES VIENæGI UZ
GIBCO PREPAR¶TA IZMANTOÏANU. GIBCO
IEGULDæJUMS ÏAJ¶ PROCED‹R¶ VIENK¶RÏI IETVER
KULT‹RAS VAI LæDZEK¬A NODROÏIN¶ÏANU ÏæM
PROCED‹R¶M.
GIBCO™ Ì›nu Ì‰idruma produktus izgatavo aseptiskß
procesß, kurß pßrbauda katru etapu, lai nodroÌinßtu visu
produktu atbilstøbu nozares standarta sterilitßtes
nodroÌinßjuma lømenim 10-3; t.i., produkts, kurß
piesßr…ojuma lømenis ra›oÌanas laikß nav lielßks par 1 no
27
lietuviškas
PB-MAX™ kariotipinµ terpµ
su embrioniniu galvij„ serumu
su gentamicino sulfatu 35 mcg/mL
su L-gliutaminu
su fitohemagliutininu
Kat. Nr.:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Paskirtis
PB-MAX™ kariotipinµ terpµ yra skirta naudoti in vitro
diagnostinµms proced›roms, kurios reikalauja trumpalaikµs
periferini„ kraujo limfocit„ kultivavimo citogenetiniam
tyrimui.Tokiam pritaikymui vadovaujanti JAV klinikinµ
citogenetinµ laboratorija atliko griežtus kokybµs kontrolµs
testus (ži›rµkite Veiksmingumo testavimas).
Pagrindiniai faktai
Dažniausias l©steli„ šaltinis klinikiniam citogenetiniam tyrimui
yra periferiniai kraujo limfocitai.1 º Ωprastus citogenetinius
tyrimus, atliktus su periferiniais kraujo limfocitais, galima
Ωtraukti chromosomini„ mµgini„ nustatym© arba patvirtinim©,
susijusΩ su skaitmeniniais ir strukt›riniais pasikeitimais,
autosominµmis ir lyties chromosominµmis anomalijomis,
konstituciniais arba somatiniais efektais.2,3 Ïi proced›ra yra
mažiausiai invazinis metodas, naudojamas pirminµms
l©stelµms gauti citogenetiniam tyrimui, toki„ tyrim„ JAV
kasmet atliekama 123 0004. Limfocitai yra subrendusios
l©stelµs, todµl aktyviai nesidalija. Ïi technika, kuri© suk›rµ
Moorehead ir kiti 1960-aisiais5 , trumpalaikiam limfocit„
kultivavimui reikalauja mitogeno naudojimo norint sukelti
mitozπ nesidalijan´iose l©stelµse. Dažniausiai naudojamas
mitogenas yra fitohemagliutininas (PHA), kuris yra raudon„j„
pup„ ekstraktas, transformuojantis mažus limfocitus
(T l©steles) Ω l©steles, kurios yra panašios Ω blastines l©steles.
Po šios transformacijos tuoj vyksta RNR sintezµ ir DNR
sintezµ, kuri prasideda 24 valandomis vµliau.1 DNR sintezei
prasidµjus, l©stelµs yra determinuotos, ir PHA kult›roje
daugiau nebereikalingos. Praµjus septyniasdešimt dviem
valandoms po PHA pridµjimo Ω kult›r©, apie 45% l©steli„ yra
S fazµje.Tai yra aukš´iausias mitotinis aktyvumas ir optimalus
momentas surinkti chromosomas tyrimams.6
Dauguma klinikini„ citogenetini„ laboratorij„ augina
periferinius kraujo limfocitus 48-72 valandas pilnoje kult›ros
terpµje, kuri susideda i š bazinµs terpµs, papildytos apytiksliai
10-40% embrioniniu galvij„ serumu, PHA yra vidutiniškai 12% v/v diapazone, priklausomai nuo šaltinio, L-gliutamino ir
antibiotik„. Kai kurios EGS serijos gali gali b›ti toksiškos ir
turi b›ti Ωvertintos prieš naudojim © citogenetiniams
tyrimams. PHA stiprumas mitotinei stimuliacijai gali varijuoti
skirtingoms serijoms. Optimali koncentracija paprastai turi
b›ti nustatyta prieš naudojim© arba reikia laikytis pardavµjo
nurodyt„ praskiedimo rekomendacij„ naudojamai serijai.
28
„Invitrogen“ mano, kad citogenetinµms laboratorijoms reikia
kult›rini„ terpµs preparat„, kurie pateikiami visiškai papildyti
ir citogenetiškai Ωvertinti, papildomai parodomas nuoseklus
veiksmingumas.Todµl PB-MAX™ kariotipinµ terpµ buvo
sukurta kaip visiškai paruoštas naudoti preparatas ir yra iš
anksto Ωvertintas su pirminµmis l©stelµmis specifiniame
citogenetiniame tyrime, kurΩ vadovaujan´iose atestuotose
citogenetinµse laboratorijose pagal standartizuotus
protokolus atlieka patirtΩ turintys citogenetikos specialistai.
Preparato aprašymas
PB-MAX™ kariotipinµ terpµ yra sudaryta iš skystos RPMI1640 bazinµs terpµs, kuri yra visiškai papildyta standartine Lgliutamino, gentamicino sulfato, embrioninio galvij„ serumo ir
fitohemagliutinino koncentracija. Ïi formuluotµ yra
grindžiama periferine kraujo terpe, nurodyta ACT
laboratorijos vadove (1991), ir naudojama PHAstimuliuojamose periferinµse kraujo kult›rose.6 PB-MAX™
yra pateikiama kaip 1X užšaldyta skys´io terpµ, kuri yra
visiškai paruošta naudoti po atšildymo.Tokia forma užtikrina
optimal„ galiojimo laik©, nereikia papildom„ pried„, tai
sumažina galutinio vartotojo atliekamus darbus, galin´ius
potencialiai sumažinti preparato integralum©. Si›lant paruošt©
naudoti preparat©, papildomai yra si›lomi du preparat„
dydžiai, norint patenkinti besikei´iantΩ poreikΩ, susijusΩ su
kiekvienos individualios laboratorijos darbo apimtimi. Ïis
preparatas yra gaminamas pagal GMP reikalavimus ISO 9001
atestuotoje patalpoje. Kiekvienos preparato serijos
veiksmingumas yra išbandomas su pirminiais periferiniais
kraujo limfocitais, auginamais apytiksliai 72 valandas ir
Ωvertintais dµl mitotinio rodiklio bei chromosomos Nr. 10
jungimo skaidymo. Kiekviena serija yra išbandyta lygiagre´iai
su kult›ros terpe, kurios veiksmingumas išbandytas anks´iau
šioje bandym„ sistemoje.
ATSARGUMO PRIEMON¥S
NAUDOJAMAS IN VITRO DIAGNOSTIN¥MS
PROCED‹ROMS, REIKALAUJAN‹IOMS PERIFERINI‚
KRAUJO LIMFOCIT‚ KULTIVAVIMO IR AUGIMO.
1. NENAUDOKITE, JEI TERP¥ YRA DRUMSTA,
PAKUOT¥ BUVO PAŽEISTA ARBA JEI PREPARATAS
GAUTAS ATÏILDYTAS.
2. ANTIBIOTINIS STIPRUMAS YRA NUSTATOMAS
FORMULAVIMO METU. PREPARATO GALIOJIMO
LAIKAS GRINDŽIAMAS FUNKCINI‚ TYRIM‚
VEIKSMINGUMU, NE ANTIBIOTINIU STIPRUMU.
3. VENKITE ILGALAIKIO ÏVIESOS POVEIKIO.
Laikymo s©lygos
nuo -5 iki -20°C temperat›roje, tamsoje.
Galiojimo laikas
12 mµnesi„, jei laikomas neatidarytas esant
rekomenduojamoms laikymo s©lygoms.
Naudojimo instrukcijos
Atšildykite PB-MAX™ kariotipinπ terpπ esant temperat›rai
nuo 4 iki 8°C. Sušildykite terpπ iki kambario temperat›ros ir
švelniai suplakite prieš naudojim©. PB-MAX™ kariotipinµ
terpµ, kad b›t„ patogiau, gali b›ti atšildyta ir steriliai perkelta
Ω mažesnius mµginius. Ïie mµginiai gali b›ti atšildyti
naudojimo metu, ta´iau reikia vengti daugkartini„ sušaldymoatšildymo cikl„. Naudodami kult›ros terpµs preparat©,
venkite ilgalaikio šviesos poveikio preparatui.
Kokybµs kontrolµ
Kiekvienos PB-MAX™ kariotipinµs terpµs serijos
veiksmingumas yra išbandytas gamybos metu. Be standartini„
kokybµs kontrolµs test„, pvz., pH, osmosingumo,
mikoplazmos ir sterilumo, kiekviena pagaminta terpµs serija
yra testuojama norint užtikrinti nuosekl„ biologinΩ
veiksmingum© naudojant kiekybinio augimo tyrimus, kuri„
metu naudojami pirminiai žmogaus periferinio kraujo
limfocitai. Pirminµs l©stelµs, gautos iš normali„ sveik„
donor„, yra auginamos apytiksliai 72 valandas, po to yra
surenkamos, audini„ sekcijos paruošiamos ir Ωvertinamos
fiksuojant mitotinΩ rodiklΩ ir chromosom„ jungimo
išsiskaidym©. Kiekviena preparato serija yra testuojama
lygiagre´iai ir palyginama su nustatytu standartu, kuris
užtikrina nuosekl„ diagnostinΩ veiksmingum©. Norµdami gauti
daugiau informacijos, ži›rµkite Ω analizµs sertifikat©.
Apribojimai
Kiekvienos PB-MAX™ kariotipinµs terpµs serijos
veiksmingumas yra išbandytas su pirminiais periferiniais
kraujo limfocitais norint užtikrinti in vitro diagnostinΩ
naudojim©. Nors ši terpµ bus tikriausiai veiksminga kit„
l©steli„ tipams dauginti, j„ naudojimo paskirtis
nereglamentuojama dabartin„mis kokybµs kontrolµs
proced›romis ir j„ pritaikymui dabar nesuteikiama joki„
garantij„.
„GIBCO™“ l©steli„ kult›ros skys´io preparatai yra ruošiami
steriliai, kiekvienas ruošimo etapas buvo patvirtintas norint
užtikrinti, kad visi preparatai atitikt„ pramonµs standarto
sterilumo užtikrinimo lygΩ 10-3; tai yra preparatas, kuris turi
ne didesnΩ kaip 1 iš 1000 vienet„ užterštumo lygΩ gamybos
proceso metu. Aukš´iausias sterilumo užtikrinimo lygis (lygus
arba didesnis negu 10-6) negali b›ti pasiekiamas be galutinµs
sterilizacijos, kuri gali pakenkti l©steli„ kult›r„ preparat„
veiksmingumui.
Literat›ros s©rašas:
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
ž
›
„
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Dµl tolesnµs informacijos arba techninµs paramos šiam arba
kitiems „GIBCO™ “ preparatams, kreipkitµs Ω techninio
aptarnavimo personal© elektroniniu paštu
[email protected] arba ži›rµkite Ω „GIBCO™“
preparat„ katalog©, kad surastumµte vietos telefono
numerius savo regione.
Taip pat galite kreiptis Ω „Invitrogen“ prekybos atstov© arba
aplankyti m›s„ interneto tinklalapΩ www.invitrogen.com
In vitro diagnostiniam naudojimui.
D¥MESIO!
µ
Nenaudojamas žmonµms arba gyvuliams gydyti.
Naudojant ne pagal etiketµje nurodyt© paskirtΩ, gali
b›ti pažeidžiamas vietos Ωstatymas.
KIEKVIENAS KLINIKINIS DARBUOTOJAS/MOKSLININKAS
PRIVALO NUSPR¥STI INDIVIDUALIAI, AR ÏI TERP¥ YRA
TINKAMA NAUDOTI IN VITRO DIAGNOSTINIAMS
TYRIMAMS, ATLIEKAMIEMS J‚ LABORATORIJOJE.
„INVITROGEN“ NEGARANTUOJA JOKI‚ S¥KMING‚
DIAGNOSTINI‚ TESTAVIM‚ REZULTAT‚, PAGR√ST‚ VIEN
„ GIBCOTM“ TERP¥S NAUDOJIMU. „GIBCO™“ IND¥LIS
YRA KULT‹ROS PATEIKIMAS ARBA TERP¥S TVARKYMAS
ÏIOMS PROCED‹ROMS.
29
©
š
polski
Pożywka PB-MAX‘ Karyotyping Medium
Zawiera pÎodow© surowicπ bydlπc©
różni≠ w poszczególnych partiach Zwykle przed użyciem
należy określi≠ stπżenie optymalne lub postπpowa≠ wedÎug
zaleceń producenta dotycz©cych rozcieńczenia dla danej partii.
Zawiera siarczan gentamycyny 35 mkg/ml
Zawiera l-glutaminπ
Zawiera fitohemaglutyninπ
Nr kat:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Przeznaczenie
Pożywka PB-MAX™ Karyotyping przeznaczona jest do
zastosowań w procedurach diagnostycznych in vitro,
wymagaj©cych krótkoterminowej hodowli limfocytów z krwi
obwodowej w badaniach cytogenetycznych.Ten produkt
poddano rygorystycznym testom kontroli jakoęści w
przoduj©cym laboratorium wzorcowym w Stanach
Zjednoczonych pod wzglπdem przydatności do tego celu
(patrz Badania wydajności).
Informacje ogólne
Najczπstszym z´ ródÎem komórek do badań cytogenetycznych
s© limfocyty z krwi obwodowej.1 Rutynowe badana
cytogenetyczne przeprowadzone na limfocytach z krwi
obwodowej to m. in. wykrywanie lub potwierdzanie
chromosomowych odchyleń od normy zwi©zanych ze
zmianami ilościowymi i strukturalnymi, anomaliami
chromosomów autosomalnych i pÎciowych oraz skutkach
strukturalnych i somatycznych.2,3 Ta metoda to najmniej
inwazyjny sposób uzyskiwania komórek pierwotnych do
badań cytogenetycznych – rocznie w Stanach Zjednoczonych
wykonywanych jest 123,000 takich zabiegów. 4 Limfocyty to
dojrzaÎe komórki, dlatego nie ulegajπ podziaÎom czynnym.
Technika opracowana przez zespóÎ Moorehed et al. w 19605,
dotycz©ca krótkoterminowej hodowli limfocytów, wymaga
zastosowania mitogenu do wymuszenia mitozy
nierozdzielaj©cych siπ komórek. Najczπściej stosowanym
mitogenem jest fitohemaglutynina (PHA), ekstrakt z fasoli
zwykÎej, który przeksztaÎca niewielkie limfocyty (T cell) w
komórki podobne do blastycznych. Po tej zmianie zachodzi
szybko synteza RNA, a 24 godzin póśniej synteza DNA.1 Po
rozpoczπciu syntezy DNA komórki s© już okreżlone i PHA
nie jest już potrzebne w hodowli. Siedemdziesi©t dwie
godziny po dodaniu PHA do hodowli okoÎo 45% komórek
jest w fazie S. Oznacza to szczyt aktywności mitotycznej i
jest to optymalny moment na "zebranie plonu" w badaniach
chromosomów.6
Wiπkszoś≠ laboratoriów cytogenetycznych hoduje limfocyty
pobrane z krwi obwodowej przez okres 48-72 godzin w
peÎnej pożywce hodowlanej skÎadaj©cej siπ z podstawowej
pożywki uzupeÎnionej ok. 10-40 procentow© pÎodow©
surowic© bydlπc©, PHA w zakresie ok. 1-2 % v/v w zależności
od śródÎa, l-glutamin© i antybiotykami Niektóre partie
surowicy bydlπcej wykazuj© toksycznoś≠ i powinny by≠
sprawdzone przed użyciem w badaniach cytogenetycznych.
Ponadto zdolnoś≠ PHA do stymulacji mitotycznej może siπ
30
Firma Invitrogen zauważyÎa zapotrzebowanie laboratoriów
cytogenetycznych na pożywki do hodowli dostarczane w
peÎni uzupeÎnienione i przebadane cytogenetycznie, a także
wykazuj©ce staÎ© wydajnoś≠. Odpowiadaj©c na to
zapotrzebowanie opracowano pożywkπ PB-MAX™
Karyotyping, jako kompletny, gotowy do użytku produkt,
wstπpnie przebadany za pomoc© testu cytogenetycznego,
zwi©zanego z określonym zastosowaniem,
przeprowadzanego przez doświadczonych cytogenetyków w
przoduj©cym certyfikowanym laboratorium cytogenetycznym
zgodnie ze standardowymi procedurami.
Opis produktu
PB-MAX™ Karyotyping skÎada siπ z pÎynnej pożywki
podstawowej RPMI-1640 uzupeÎnionej standardowymi
stπżeniami l-glutaminy, siarczanu glutaminy, pÎodow© surowic©
bydlπc© oraz fitohemaglutynin©. Formulacja to zostaÎa
opracowana na podstawie pożywki krwi obwodowej
(Peripheral Bood Media) opisanej w ACT Laboratory Manual
(1991) do użytku w hodowlach krwi obwodowej
stymulowanych PHA.6 PB-MAX™ dostarczany jest jako
kompletna pożywka pÎynna 1X, gotowa do użycia po
rozmro©eniu.Takie rozwi©zanie zapewnia optymalny czas
skÎadowania i nie wymaga dodatkowego uzupeÎniania, co
minimalizuje liczbπ czynności wykonywanych przez
użytkownika, które mogÎyby zanieczyści≠ produkt. Oprócz
udogodnienia, jakim jest produkt gotowy do użycia,
wprowadzono także dwa rozmiary opakowań, aby zaspokoi≠
zmieniaj©ce siπ potrzeby zwi©zane z indywidualnymi
zapotrzebowaniami laboratoriów.Ten produkt wytworzono
zgodnie z przepisami cGMP's w zakÎadzie speÎniaj©cym
normy ISO 9001.Wydajnoś≠ każdej partii tego produktu jest
badana na pierwotnych limfocytach krwi obwodowej przez
okoÎo 72 godziny i oceniany jest wskażnik mitotyczny oraz
rozdzielczoś≠ barwienia chromosomów dla chromosomu nr
10. Każda partia jest badana w odniesieniu do hodowli
pożywki zatwierdzonej poprzednio w tym systemie prób.
ÿRODKI OSTROŻNOÿCI
DO ZASTOSOWAŃ W PROCEDURACH DIAGNOSTYKI
IN VITRO WYMAGAJ®CYCH HODOWLI I NAMNAŻANIA
LIMFOCYTÓW KRWI OBWODOWEJ.
1. NIE UŻYWA¨ POŻYWKI JEŻELI JEST M∏TNA,
OPAKOWANIE JEST USZKODZONE LUB
OTRZYMANY PRODUKT BYÍ ROZMROŻONY.
2. SIÍA ANTYBIOTYKU OKREÿLANA JEST W CZASIE
FORMULACJI. OKRES PRZYDATNOÿCI PRODUKTU
OKREÿLANY JEST W OPARCIU O WYDAJNOÿ¨ W
PRÓBACH FUNKCJONALNYCH, A NIE NA
PODSTAWIE SIÍY ANTYBIOTYKU.
3. UNIKA¨ PRZEDÍUŻONEGO NAÿWIETLANIA.
Warunki przechowywania:
temp. –5 do –20 °C, w ciemnym pomieszczeniu.
Okres przydatności do użycia
12 miesiπcy przechowywania w zalecanych warunkach w
stanie zamkniπtym.
Wskazówki dotycz©ce użytkowania
Rozmraża≠ pożywkπ PB-MAX™ Karyotyping w temp. 4 do
8 °C. Ogrza≠ do temperatury pokojowej i delikatnie
wirowa≠, aby wymiesza≠ przed użyciem. Pożywka PB-MAX™
Karyotyping może by≠ rozmrożona i aseptycznie
przeniesiona do mniejszych jednakowych porcji dla wygody.
Porcje można zamraża≠ i rozmraża≠ przed użyciem, jednak
wielokrotne cykle rozmrażania i zamrażania nie s© zalecane.
Unika≠ dÎugiej ekspozycji na światÎo podczas stosowania
pożywki hodowlanej.
Kontrola jakości
KAÆDY KLINICYSTA/PRACOWNIK NAUKOWY MUSI
SAMODZIELNIE ZDECYDOWA¨, CZY TA PO¨ÆYWKA
NADAJE SI∏ DO ZASTOSOWAŃ DIAGNOSTYCZNYCH
IN VITRO PROWADZONYCH W DANYM
LABORATORIUM. FIRMA INVITORGEN NIE
GWARANTUJE POZYTYWNYCH WYNIKÓW TESTÓW
DIAGNOSTYCZNYCH PRZEPROWADZONYCH TYLKO
W OPARCIU O POÆYWK∏ GIBCO™ MEDIUM.
JEDYNYM WKÍADEM FIRMY GIBCO™ JEST
DOSTARCZENIE POÆYWKI DO HODOWLI LUB
TRANSPORTU W TYCH PROCEDURACH.
Produkty pÎynne do hodowli komórek firmy GIBCO™
przygotowywane s© w aseptycznym procesie, którego każdy
etap jest sprawdzany w celu zapewnienia zgodności z
przemysÎowym standardem zapewnienia sterylności o
poziomie 10-3; tzn. produktu wykazuj©cego poziom
zanieczyszczenia nie wiπkszy niż 1 na 1000 jednostek
podczas procesu produkcji. Najwyższy poziom sterylności
(równy lub wyższy od 10-6) nie może by≠ osi©gniπty bez
końcowej sterylizacji, która szkodliwe wypÎynπÎaby na
wydajnoś≠ produktów do hodowli komórek.
Bibliografia:
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
Każda partia pożywki PB-MAX™ Karyotyping jest testowana
pod wzglπdem wydajności w czasie produkcji. Oprócz
standardowych testów kontroli jakości takich jak pH,
osmolowości, mykoplazmy i sterylności, każda partia pożywki
jest badana pod wzglπdem staÎej wydajności biologicznej przy
pomocy ilościowych prób namnażania z użyciem ludzkich
limfocytów z krwi obwodowej. Komórki pierwotne, uzyskane
od normalnych zdrowych dawców, hodowane s© przez okoÎo
72 godziny, po czym zbierane, przygotowywane w formie
preparatów i oceniane za pomoc© wskażnika mitotycznego
oraz próby barwienia chromosomów. Każdy partia produktu
jest badana równolegle i porównywana z zatwierdzonym
wzorcem porównawczym, co zapewnia staÎ≠ jakoś≠
diagnostyczn©. SzczegóÎowe informacje można znależ≠ na
certyfikacie badań.
Ograniczenia
Każda partia pożywki PB-MAX™ Karyotyping badana jest
pod wzglπdem wydajności za pomoc© pierwotnych
limfocytów krwi obwodowej w celu zapewnienia
odpowiedniej wydajności do użytku diagnostycznego in vitro.
Chociaż te pożywki mog© si≠ sprawdza≠ w namnażaniu
komórek innych typów, takie zastosowanie nie jest
przedmiotem obecnych procedur kontroli jakości i nie
udziela siπ żadnych gwarancji na takie zastosowania.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Aby uzyska≠ wiπcej informacji lub wsparcie techniczne
dotycz©ce tego lub innych produktów firmy GIBCO™,
należy siπ skontaktowa≠ z Serwisem Technicznym pod
adresem [email protected] lub znależ≠ numer
telefoniczny lokalnego przedstawiciela w Państwa regionie w
katalogu produktów firmy GIBCO™.
Można także skontaktowa≠ siπ z przedstawicielem
handlowym firmy Invitrogen lub szuka≠ informacji w naszej
witrynie internetowej pod adresem: www.invitrogen.com.
Do zastosowań diagnostyki in vitro.
OSTRZEŻENIE: Nie stosowa≠ w terapii ludzi lub zwierz©t.
Zastosowania inne niż podane w etykietce
produktu mog© stanowi≠ naruszenie
lokalnych przepisów.
31
português
(Meio PB-MAX™ de Caracterização de Cariótipos)
Com Soro Fetal Bovino
com sulfato de gentamicina a 35 mcg/ml
com L-glutamina
com fitohemaglutinina
N.º de Catálogo:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Utilização Prevista
O meio PB-MAX™ Karyotyping foi concebido para ser
utilizado em procedimentos de diagnóstico in vitro que
requeiram o cultivo a curto prazo de linfócitos de sangue
periférico para - estudo citogenético. Este produto foi
submetido a testes rigorosos de controlo da qualidade, por
um dos principais laboratórios clínicos citogenéticos de
referência dos EUA, para este tipo de aplicação (Ver Testes
de Funcionamento).
Contexto
As fontes mais comuns de células para estudo citogenético
clínico são os linfócitos do sangue periférico.1 Os estudos
citogenéticos habitualmente executados em linfócitos de
sangue periférico podem incluir a detecção ou confirmação
de aberrações cromossómicas associadas a alterações
numéricas e estruturais, anomalias autossómicas e dos
cromossomas sexuais e efeitos constitucionais ou
somáticos.2,3 Este procedimento representa o método
menos invasivo que existe para a obtenção de células
primárias para estudo citogenético, e nos EUA efectuam-se
anualmente 123 mil procedimentos4 Os linfócitos são células
maduras que, portanto, não se dividem activamente. A
técnica desenvolvida por Moorehead et al. em 19605 para a
cultura de linfócitos a curto prazo requer a utilização de um
mitogénio para induzir a mitose em células que não se
dividem. O mitogénio usado com mais frequência é a
fitohemaglutinina (PHA), que é um extracto de feijão
vermelho que transforma os linfócitos pequenos (células T)
em células semelhantes a blastócitos. A síntese do ARN
segue-se rapidamente a esta transformação, e a síntese do
ADN inicia-se 24 horas depois. 1 Uma vez que a síntese do
ADN tenha começado a dar-se, as células ficam
comprometidas no processo, e a PHA deixa de ser
necessária na cultura. Setenta e duas horas depois da adição
de PHA à cultura, cerca de 45% das células encontra-se em
fase S. Isto representa a actividade máxima mitótica, sendo
o ponto ideal no qual se deve efectuar a colheita para
estudos cromossómicos.6
A maioria dos laboratórios citogenéticos clínicos cultiva
linfócitos de sangue periférico durante um período de 48 a
72 horas, num meio de cultura completo constituído por um
meio basal suplementado por cerca de 10 a 40% de soro
bovino fetal, PHA à taxa de cerca de 1 a 2% v/v, dependendo
da fonte, L-glutamina e antibióticos. Alguns lotes de FBS
podem exibir toxicidade, devendo ser qualificados antes de
32
serem utilizados em estudos citogenéticos. Além disso, a
potência de PHA para a estimulação mitótica pode variar
com diferentes lotes. Normalmente, a concentração ideal
tem de ser determinada antes da sua utilização;
alternativamente, o utilizador pode seguir as recomendações
do fornecedor relativamente à diluição do lote utilizado.
A Invitrogen reconhece a necessidade que os laboratórios
citogenéticos têm de obter produtos de meios de cultura
que sejam fornecidos completamente suplementados e
citogeneticamente qualificados, além de demonstrarem
fornecer um funcionamento consistente. Em reacção a esta
necessidade, o meio PB-MAX™ Karyotyping foi concebido,
como produto completo e pronto a utilizar, o qual é préqualificado em células primárias, num ensaio citogenético
específico da aplicação efectuado por citogeneticistas
experientes, num dos principais laboratórios citogenéticos
certificados, segundo protocolos padronizados.
Descrição do Produto
O meio PB-MAX™ Karyotyping é composto por um meio
basal RPMI-1640 líquido, o qual é completamente
suplementado com concentrações normais de L-glutamina,
sulfato de gentamicina, soro bovino fetal e fitohemaglutinina.
Esta formulação baseia-se nos Meios de Sangue Periférico
referenciados no manual ACT Laboratory Manual (1991)
para utilização em Culturas de Sangue Periférico estimuladas
por PHA.6 O PB-MAX™ é fornecido na forma de um meio
líquido 1X congelado, que está completo e pronto a utilizar
uma vez - descongelado. Esta concepção permite que o
produto tenha um período de validade ideal e não requer
nenhuma suplementação adicional, o que minimiza a sua
manipulação por parte do utilizador final, o que poderia
comprometer a integridade do produto. Para além de
oferecer a conveniência de um produto pronto a utilizar, o
produto encontra-se disponível em dois tamanhos, para
satisfazer as diferentes necessidades associadas aos volumes
de diferentes laboratórios individuais. Este produto é
fabricado ao abrigo dos cGMP, em instalações certificadas de
acordo com as normas ISO 9001. Cada lote do produto é
testado, em termos de funcionamento, em linfócitos de
sangue periférico primário, cultivados durante
aproximadamente 72 horas, e avaliado em termos do seu
índice mitótico e da resolução da coloração em bandas do
cromossoma n.º 10. Cada lote é activado em paralelo e em
relação a um meio de cultura cujo funcionamento tenha sido
anteriormente qualificado neste sistema de ensaios.
Precauções
PARA UTILIZAR EM PROCEDIMENTOS DE
DIAGNÓSTICO IN VITRO QUE REQUEIRAM A
CULTIVAÇÃO E O CRESCIMENTO DE LINFÓCITOS DE
SANGUE PERIFÉRICO.
1. NÃO USAR CASO O MEIO TENHA UM ASPECTO
TURVO, A EMBALAGEM TENHA SIDO DANIFICADA
OU O PRODUTO TENHA SIDO RECEBIDO
DESCONGELADO.
outros tipos de células, a aplicação para a qual foram
concebidos não foi sujeita a procedimentos de controlo da
qualidade, não sendo possível fornecer garantias
relativamente à sua aplicação.
2. A POTÊNCIA DO ANTIBIÓTICO É DETERMINADA
POR ALTURA DA FORMULAÇÃO. O PRAZO DE
VALIDADE DO PRODUTO BASEIA-SE NO SEU
FUNCIONAMENTO EM ENSAIOS FUNCIONAIS, E
NÃO NA POTÊNCIA ANTIBIÓTICA..
CADA CLÍNICO/CIENTISTA DEVE FAZER UMA
AVALIAÇÃO INDEPENDENTE EM TERMOS DE DECIDIR
SE ESTE MEIO É APROPRIADO PARA SER UTILIZADO EM
APLICAÇÕES DIAGNÓSTICAS IN VITRO, EFECTUADAS
NO SEU LABORATÓRIO. A INVITROGEN NÃO
GARANTE O SUCESSO DO RESULTADO DE NENHUNS
TESTES DE DIAGNÓSTICO BASEADOS APENAS NA
UTILIZAÇÃO DO MEIO GIBCO™. A CONTRIBUIÇÃO
DOS TESTES GIBCO™ PARA ESTES PROCEDIMENTOS
LIMITA-SE APENAS AO ASPECTO DO FORNECIMENTO
DE UMA CULTURA OU MEIO DE MANIPULAÇÃO PARA
ESTES PROCEDIMENTOS.
3. EVITAR UMA EXPOSIÇÃO PROLONGADA À LUZ.
Condições de Armazenamento:
-5 A -20ºC, em local escuro.
Duração quando Armazenado
12 meses quando armazenado em pacote fechado, nas
condições de armazenamento recomendadas.
Instruções de Utilização
Descongelar o meio PB-MAX™ Karyotyping entre 4 e 8ºC.
Aquecer o meio até alcançar a temperatura ambiente,
rodando-o gentilmente para o misturar antes de o utilizar.
O meio PB-MAX™ Karyotyping pode ser descongelado e
transferido assepticamente para alíquotas mais pequenas,
por uma questão de conveniência. Estas alíquotas podem
ser congeladas e descongeladas quando forem necessárias;
porém, convém evitar executar vários ciclos de congelação e
descongelação. Evitar exposições prolongadas à luz, durante
a utilização deste produto de meio de cultura.
Controlo da Qualidade
Cada lote de meio de PB-MAX™ Karyotyping foi testado em
termos do seu funcionamento por altura do seu fabrico. Para
além dos testes normais de controlo da qualidade, tais como
pH, pressão osmótica, micoplasma e esterilidade, cada lote de
meio fabricado é ainda testado, para assegurar um
funcionamento biológico consistente, por meio de ensaios de
crescimento quantitativo empregando linfócitos de sangue
periférico humano primário. Cultivam-se células primárias,
obtidas de doadores saudáveis normais, durante cerca de 72
horas, depois do que se colhem as células e se preparam e
avaliam lâminas pelo índice mitótico de riscadura e - resolução
da coloração dos cromossomas em bandas. Cada lote do
produto é testado em paralelo e comparado com um padrão
de referência aprovado, o que assegura um funcionamento
diagnóstico consistente. Consultar o certificado de análise do
lote específico para obter mais informações.
Limites
Cada lote de meio PB-MAX™ Karyotyping fabricado é
testado em termos do seu funcionamento em linfócitos de
sangue periférico primário, para assegurar o funcionamento
correcto do produto para utilização em diagnósticos in vitro
para esta aplicação. Embora seja provável que estes meios
proporcionem bons níveis de desempenho na propagação de
Os produtos líquidos de culturas celulares GIBCO™ são
preparados por um processo asséptico, tendo cada uma das
etapas do mesmo sido validada a fim de assegurar que todos
os produtos satisfazem o nível padrão de segurança de
esterilidade da indústria, que é de 10-3; ou seja, o produto
demonstra um nível de contaminação de não mais de 1 em
cada 1000 unidades, durante o processo de fabrico. O nível
mais elevado de certeza de esterilidade (igual ou superior a
10-6) não pode ser alcançado sem se efectuar a esterilização
terminal, a qual é nociva para o funcionamento de produtos
de culturas celulares.
References
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Para obter mais informações ou assistência técnica sobre
estes ou outros produtos GIBCO™, contactar o Centro
de Assistência Técnica, em [email protected], ou
consultar o catálogo de produtos GIBCO™, onde se
encontram listados os números de telefone locais de
cada região.
O cliente pode também contactar o seu Representante de
Vendas da Invitrogen ou visitar o nosso site no World Wide
Web, em www.invitrogen.com.
Para utilização em diagnósticos in vitro.
ADVERTÊNCIA: Não é próprio para utilização terapêutica no
homem ou nos animais.
Quaisquer utilizações para além da utilização
prevista inscrita no produto poderá constituir
uma violação da legislação local.
33
Médium pre karyotypizáciu PB-MAX™ Product Information
SlovenskÔ jazyk
Médium pre karyotypizáciu PB-MAX™
s fetálnym hovädzím sérom
s gantamicín sulfátom, 35mcg/ml
s L-glutamínom
s fytohemaglutinínom
Katalógové ´íslo:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
PouÈitie
Médium pre karyotypizáciu PB-MAX™ je ur´ené na
diagnostické pouÈitie in vitro, pre ktoré je potrebná
krátkodobá kultivácia lymfocytov periférnej krvi pre
cytogenetické Ìtúdie. Tento vÔrobok preÌiel na toto pouÈitie
prísnymi testmi na kvalitu v poprednom cytogenetickom
referen´nom laboratóriu v USA (vi± Testovanie ú´innosti).
Kontext
Naj´astejÌím zdrojom buniek pre klinické cytogenetické
Ìtúdie sú lymfocyty periférnej krvi.1 K rutinnÔm
cytogenetickÔm Ìtúdiám vykonávanÔm na lymfocytoch
periférnej krvi patrí detekcia alebo potvrdenie
chromozomálnych aberácií spojenÔch s numerickÔmi a
Ìtrukturálnymi zmenami, anomáliami autozomálnych a
pohlavnÔch chromozómov a vrodenÔch alebo somatickÔch
ú´inkov.2,3 Tento postup predstavuje najmenej inváznu
metódu na získanie primárnych buniek pre cytogenetické
Ìtúdie. Len v USA sa vykoná ro´ne 123 000 takÔch Ìtúdií.4
Lymfocyty sú zrelé bunky, a preto sa aktívne nedelia. V
technike vyvinutej Mooreheadom et al. v roku 19605 je na
krátkodobú kultiváciu lymfocytov potrebné pouÈitie
mitogénu na indukciu mitózy u nedeliacich sa buniek.
Naj´astejÌie pouÈívanÔm mitogénom je fytohemaglutinín
(PHA), ´o je extrakt ´ervenÔch fazú≈, ktorÔ transformuje
malé lymfocyty (T bunky) na bunky podobné blastocytom.
Po tejto transformácii nasleduje rÔchlo syntéza RNA a
syntéza DNA za´ne o 24 hodín neskôr.1 Akonáhle za´ne
syntéza DNA, bunky sa nasadia a v kultúre uÈ PHA nie je
potrebnÔ. Za 72 hodín po pridaní PHA do kultúry je asi 45
% buniek v S-fáze. To predstavuje vrcholovú mitotickú
aktivitu a je optimálnym bodom, pri ktorom dochádza k
najlepÌiemu vÔ¤aÈku chromozomálnych Ìtúdií.6
Vo vä´Ìine klinickÔch cytogenetickÔch laboratórií sa kultivujú
lymfocyty periférnej krvi po dobu 48-72 hodín v úplnom
kultiva´nom médiu, ktoré sa skladá zo základného média
doplneného pribliÈne 10-40 % fetálneho hovädzieho séra,
PHA v rozmedzí pribliÈne 1-2 % v/v v závislosti na zdroji,
L-glutamínom a antibiotikami. Niektoré ÌarÈe FBS môÈu
vykazova¤ toxicitu a majú sa pred pouÈitím v
cytogenetickÔch Ìtúdiách vyhodnoti¤. Ú´inok PHA na
mitotickú simuláciu sa môÈe tieÔÈ líÌi¤ v závislosti na ÌarÈi.
Pred pouÈitím je obvykle potrebné stanovi¤ optimálnu
koncentráciu, prípadne sa môÈu pouÈi¤ odporú´ania na
riedenie dané predajcom pre prísluÌnú ÌarÈu.
34
Firma Invitrogen rozumie potrebe cytogenetickÔch
laboratórií ma¤ kultiva´né médiá, ktoré sú kompletne
doplnené a cytogeneticky spôsobilé okrem svojej trvalej
ú´innosti. Ako reakcia na túto potrebu bolo vyvinuté
karyotypiza´né médium PB-MAX™, ktoré je pripravené na
pouÈitie a má vopred zistenú spôsobilos¤ na primárnych
bunkách v cytogenetickej analÔze Ìpecifickej pre dané
pouÈitie, ktorá je vykonaná skúsenÔmi cytogenetikmi v
poprednom certifikovanom cytogenetickom laboratóriu
pod≈a ÌtandardizovanÔch protokolov.
Popis vÔrobku
Médium pre karyotypizáciu PB-MAX™ je zložené z tekutého
základného média RPMI-1640, ktoré je kompletne doplnené
štandardnou koncentráciou L-glutamínu, gentamicín sulfátu,
fetálneho hovädzieho séra a fytohemaglutinínu. Táto
formulácia je vytvorená na základe média pre periférnu krv
uvedeného v ACT Laboratory Manual (1991) pre použitie v
kultúre pre periférnu krv stimulovanej pomocou PHA.6
PB-MAX™ sa dodáva ako 1X zmrazené tekuté médium,
ktoré je kompletné a po rozmrznutí ihne± pripravené na
použitie. Toto prevedenie umožÕuje optimálny ´as
použite≈nosti a nie je u neho potrebná žiadna dodato´ná
suplementácia.TÔm sa minimalizuje manipulácia kone´nÔm
spotrebite≈om, ´o by mohlo potenciálne ohrozi¤ integritu
vÔrobku. Okrem toho, že ponúkame pohodlné použitie
prípravku pripraveného na okamžité použitie, sú k dispozícii
dve ve≈kosti vÔrobku, a tak je možné vyhovie¤ zmenám
potrieb jednotlivÔch laboratórií. Tento vÔrobok sa vyrába
pod≈a požiadaviek Správnej vÔrobnej praxe v závode s
certifikáciou ISO 9001. Každá šarža vÔrobku prechádza
testovaním ú´innosti na kultúrach primárnych lymfocytov
periférnej krvi, ktoré sú kultivované po dobu približne 72
hodín a hodnotí sa mitotickÔ index a väzbové rozlíšenie
chromozómu ´. 10. Každá šarža je testovaná proti
kultiva´nému médiu, u ktorého bola predt´Ôm stanovená
spôsobilos¤ v tomto analyza´nom systéme.
UPOZORNENIA
PRE POUŽITIE PRI DIAGNOSTICKÓCH POSTUPOCH
IN VITRO, KTORÉ VYŽADUJÚ KULTIVÁCIU A RAST
LYMFOCYTOV PERIFÉRNEJ KRVI.
1. VÓROBOK NEPOUŽÍVAJTE, AK MÉDIUM VYZERÁ
SKALENÉ, OBAL JE PORUÏENÓ, ALEBO AK STE
OBDRŽALI VÓROBOK CELKOM ROZMRZNUTÓ.
2. ANTIBIOTICKÁ SILA JE UR™ENÁ V ™ASE
FORMULÁCIE. ™AS POUŽITEƒNOSTI VÓROBKU JE
DANÓ JEHO Ú™INNOS⁄OU PRI FUNK™NEJ
ANALÓZE A NIE ANTIBIOTICKOU SILOU.
3. NEVYSTAVUJTE DLHÉMU VPLYVU SVETLA.
Podmienky uchovávania
-5 až -20°C, v tme.
™as použite≈nosti
12 mesiacov, ak sa vÔrobok uchováva v neotvorenom stave a
za odporú´anÔch skladovacích podmienok.
Návod na použitie
Nechajte rozmrznú¤ karyotypiza´né médium PB-MAX™ pri
teplote 4- 8°C. Ohrejte médium na izbovú teplotu a pred
použitím ho jemnÔm vírením premiešajte. Karyotypiza´né
médium sa môže rozmrazi¤ a za aseptickÔch podmienok
prenáša¤ pri potrebe menších množstiev. Tieto menšie ´asti
vÔrobku sa môžu opä¤ zmrazi¤ a rozmrazi¤ v ´ase, ke± budú
použité, je vřak treba sa vystríha¤ opakovanÔch cyklov
zmrazenia a rozmrazenia. Kultiva´né médium nevystavujte
dlhšiemu pôsobeniu svetla.
Kontrola kvality
Každá šarža karyotypiza´ného média PB-MAX™ je v ´ase
vÔroby testovaná na ú´innos¤. Okrem štandardnÔch testov
na kvalitu, ako je pH, osmolarita, mykoplazmy a sterilita, je
každá šarža média testovaná s cie≈om zaisti¤ konzistentnú
biologickú ú´innos¤ pomocou kvantitatívnej rastovej analÔzy
s použitím primárnych ≈udskÔch lymfocytov periférnej krvi.
Primárne bunky, ktoré sa získavajú od normálnych zdravÔch
darcov, sú kultivované po dobu približne 72 hodín, potom sa
zozbierajú, pripravia sa na krycích sklí´kach a vyhodnotia sa
pomocou skórovania mitotického indexu a
chromozomálneho väzbového rozlíšenia. Každá šarža
vÔrobku je testovaná a porovnávaná proti referen´nému
štandardu, ´o zaru´uje konzistentnú diagnostickú ú´innos¤.
Pre ±alšie informácie si prosím vyžiadajte príslušnÔ certifikát
o analÔze pre danú šaržu.
Obmedzenia
Každá vyrobená šarža karyotypiza´ného média PB-MAX™ je
testovaná na primárne lymfocyty periférnej krvi s cie≈om
zaisti¤ ú´innos¤ vÔrobku pre jeho diagnostické použitie
in vitro. Aj ke± toto médium bude pravdepodobne ú´inné i
pri rozmnožovaní inÔch bune´nÔch typov, ich použitie v
tÔchto prípadoch nie je predmetom terajších postupov
kontroly kvality a v sú´asnej dobe nedávame žiadnu záruku
na toto použitie.
LEN TÓM, ŽE POSKYTUJE KULTÚRU ALEBO MÉDIUM PRE
TIETO POSTUPY.
Tekuté bune´né kultúry GIBCO™ sú pripravené za
aseptickÔch podmienok, pri ktorÔch je validovanÔ každÔ
krok, aby bolo zaistené, že všetky vÔrobky splÕujú
štandardnú zaru´enú priemyslovou úroveÕ sterility 10-3; tj., že
vÔrobok má po´as vÔrobného procesu úroveÕ kontaminácie
nie vä´šiu než 1 na 1000 jednotiek. Najvyššia úroveÕ
zaistenia sterility (rovná alebo vyššia než 10-6) sa nedá
dosiahnu¤ bez kone´nej sterilizácie, ktorá je však škodlivá z
h≈adiska ú´innosti vÔrobkov bune´nÔch kultúr.
Literatúra
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Pre ±alšie informácie o technickej podpore tohto vÔrobku
alebo inÔch vÔrobkov GIBCO™, sa obrá¤te na oddelenie
technickÔch služieb – e-mail [email protected],
prípadne si preštudujte katalóg vÔrobkov GIBCO™, kde
nájdete telefónne ´ísla zastúpenia vo vašom regióne.
Môžete sa tiež obráti¤ na Vášho obchodného zástupcu firmy
Invitrogen alebo navštívte našu internetovú stránku
www.invitrogen.com.
Ur´ené na diagnostické použitie in vitro.
UPOZORNENIE:
VÔrobok nie je ur´enÔ na terapeutické
použitie u ≈udí alebo zvierat.
Iné použitie než je uvedené v schválenej
príbalovej informácii môže predstavova¤
porušenie miestnych zákonnÔch predpisov.
KaždÔ lekár alebo vedeckÔ pracovník si musí vytvori¤
nezávislÔ odhad, ´i je toto médium vhodné na diagnostické
použitie in vitro, ktoré sa používa v jeho laboratóriu.
INVITROGEN CORP. NEZARU™UJE ÚSPEÏNÓ VÓSLEDOK
ŽIADNEHO DIAGNOSTICKÉHO TESTU ZALOŽENÉHO
VÓHRADNE NA POUŽITÍ MÉDIA GIBCO™. PRÍNOS
FIRMY INVITROGEN K TÓMTO POSTUPOM JE DANÓ
35
Español
PB-MAX™ Karyotyping Medium
Con suero bovino fetal
Con sulfato de gentamicina a 35 µg/ml
Con L-glutamina
Con fitohemaglutinina
N.º de catálogo:
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Uso indicado
El medio de cariotipado PB-MAX™ Karyotyping Medium
está indicado para utilizarlo en procedimientos de
diagnóstico in vitro que requieren el cultivo a corto plazo de
linfocitos de sangre periférica para realizar un estudio
citogenético. Este producto se ha sometido a rigurosos
controles de calidad en un laboratorio de referencia en
citogenética clínica de EE.UU. para esta aplicación (véase
“Análisis del rendimiento”).
Antecedentes
La fuente más común de células para realizar un estudio
citogenético son los linfocitos de sangre periférica.1 Los
estudios citogenéticos rutinarios realizados con linfocitos de
sangre periférica pueden incluir la detección o confirmación
de aberraciones cromosómicas asociadas con cambios
numéricos y estructurales, anomalías cromosómicas
autosómicas o sexuales y efectos constitucionales o
somáticos.2,3 Este procedimiento representa el método
menos invasivo para obtener células primarias para estudios
citogenéticos, y se realizan 123.000 estudios de este tipo
anualmente en EE.UU.4 Los linfocitos son células maduras y,
por lo tanto, no se dividen constantemente de forma activa.
La técnica desarrollada por Moorehead et al. en 19605 para
el cultivo a corto plazo de linfocitos requiere el uso de un
mitógeno para inducir la mitosis de células que no se están
dividiendo. El mitógeno que se utiliza con más frecuencia es
la fitohemaglutinina (PHA) que es un extracto de la judía
seca roja que transforma los linfocitos pequeños (células T)
en células tipo blastos. A esta transformación le sigue
rápidamente la síntesis de ARN y la síntesis de ADN
empieza 24 horas después.1 Una vez que empieza la síntesis
de ADN, las células están comprometidas, y ya no se
necesita la PHA en el cultivo. Al cabo de 72 horas de añadir
la PHA al cultivo, aproximadamente el 45% de las células
están en la fase S. Esto representa la actividad mitótica
máxima y es el punto óptimo para extraer las células para
los estudios cromosómicos.6
La mayoría de los laboratorios de citogenética clínica
cultivan los linfocitos de sangre periférica por un período de
48-72 horas en un medio de cultivo completo compuesto
por un medio basal suplementado con aproximadamente 1040% de suero fetal bovino, PHA en el rango del 1-2% v/v
aproximadamente dependiendo de la fuente, L-glutamina y
antibióticos. Algunos lotes de FBS pueden mostrar toxicidad
y deben ser calificados antes de su uso en los estudios
36
citogenéticos.Asimismo, la potencia de PHA para la
estimulación mitótica puede variar con diferentes lotes.
Normalmente, se necesita determinar la concentración óptima
antes de su uso o se pueden seguir las recomendaciones del
proveedor sobre dilución del lote en uso.
Invitrogen reconoce la necesidad del laboratorio de
citogenética de que se suministren medios de cultivo
completamente suplementados y citogenéticamente
calificados que además muestren un rendimiento uniforme.
En respuesta a esta necesidad, se diseñó el PB-MAX™
Karyotyping Medium como un producto completo listo para
usar y está precalificado con células primarias en un ensayo
citogenético específico de la aplicación realizado por
citogenetistas experimentados en un laboratorio certificado
destacado de citogenética siguiendo los protocolos estándar.
Descripción del producto
El PB-MAX™ Karyotyping Medium está compuesto de un
medio basal RPMI-1640 líquido que está suplementado
completamente con concentraciones estándar de Lglutamina, sulfato de gentamicina, suero fetal bovino y
fitohemaglutinina. Esta formulación está basada en el medio
para sangre periférica citado en el manual de laboratorio
ACT (1991) para su uso en cultivo de sangre periférica
estimulada con PHA.6 PB-MAX™ se suministra como medio
líquido congelado 1X completo y listo para usar una vez
descongelado. Este diseño permite una vida útil óptima y no
requiere ninguna suplementación adicional, lo que minimiza
la manipulación del usuario final que podría comprometer la
integridad del producto. Además de ofrecer las prácticas
características de un producto listo para usar, se
comercializan dos tamaños para cumplir las necesidades
cambiantes del volumen de cada laboratorio. Este producto
se fabrica siguiendo las Buenas Prácticas de Fabricación
actuales (BPF) en una instalación con certificación ISO 9001.
Se ha analizado el rendimiento de cada lote de producto en
linfocitos primarios de sangre periférica cultivados durante
aproximadamente 72 horas y se han evaluado su índice
mitótico y la resolución de bandeo cromosómico del
cromosoma 10. Cada lote se ejecuta en paralelo frente a un
medio de cultivo cuyo rendimiento se ha calificado
previamente en este sistema de ensayo.
Precauciones
PARA USO EN PROCEDIMIENTOS DE DIAGNÓSTICO
IN VITRO QUE REQUIEREN EL CULTIVO Y CRECIMIENTO
DE LINFOCITOS DE SANGRE PERIFÉRICA.
1. NO UTILICE EL PRODUCTO SI EL MEDIO APARECE
TURBIO, SI EL PAQUETE ESTÁ DAÑADO O SI EL
PRODUCTO SE RECIBIÓ COMPLEMENTAMENTE
DESCONGELADO.
2. LA POTENCIA DEL ANTIBIÓTICO SE DETERMINA
EN EL MOMENTO DE LA FORMULACIÓN. LA VIDA
ÚTIL DEL PRODUCTO ESTÁ BASADA EN EL
RENDIMIENTO EN ENSAYOS FUNCIONALES, NO
EN LA POTENCIA DEL ANTIBIÓTICO.
3. EVITE LA EXPOSICIÓN PROLONGADA A LA LUZ.
Condiciones de almacenamiento
de -5 a -20°C, en la oscuridad.
Vida útil
12 meses cuando se almacena sin abrir en las condiciones
recomendadas de almacenamiento.
Instrucciones de uso
Descongele el PB-MAX™ Karyotyping Medium a 4-8ºC.
Caliente el medio hasta que alcance la temperatura
ambiente y remuévalo ligeramente para mezclarlo antes de
usar. El PB-MAX™ Karyotyping Medium puede
descongelarse y transferirse asépticamente en partes
alícuotas más pequeñas por comodidad. Estas alícuotas
pueden congelarse y descongelarse en el momento de uso;
sin embargo, deben evitarse múltiples ciclos de congelacióndescongelación. Evite la exposición prolongada a la luz
cuando se utilice este producto para medio de cultivo.
CADA CLÍNICO/CIENTÍFICO DEBE HACER UN JUICIO
INDEPENDIENTE SOBRE SI ESTE MEDIO ES INDICADO
O NO PARA SU USO EN APLICACIONES DE
DIAGNÓSTICO IN VITRO REALIZADAS EN SU
LABORATORIO. INVITROGEN, NO GARANTIZA
RESULTADOS SATISFACTORIOS CON NINGÚN
ANÁLISIS DIAGNÓSTICO BASADO EXCLUSIVAMENTE
EN EL USO DE MEDIO GIBCO™. LA CONTRIBUCIÓN
DE GIBCO A ESTOS PROCEDIMIENTOS ES
ÚNICAMENTE PROPORCIONAR UN CULTIVO O
MEDIO DE MANIPULACIÓN PARA ESTOS
PROCEDIMENTOS.
Los productos líquidos de cultivo celular GIBCO™ se
preparan mediante un proceso aséptico donde cada etapa se
valida para garantizar que los productos cumplen el nivel de
garantía de calidad estándar de la industria de 10-3; es decir,
producto que muestra un nivel de contaminación no
superior a 1 de cada 1.000 unidades durante el proceso de
fabricación. El nivel más alto de garantía de calidad (igual o
superior a 10-6) no puede obtenerse sin la esterilización
terminal que perjudica el rendimiento de los productos del
cultivo celular.
References
Control de calidad
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
Se ha analizado el rendimiento del PB-MAX™ Karyotyping
Medium de cada lote en el momento de su fabricación.
Además de las pruebas estándar de control de calidad, como
pH, osmolaridad, micoplasma y esterilidad, cada lote de
medio fabricado se analiza para garantizar un rendimiento
biológico uniforme mediante un ensayo cuantitativo de
crecimiento con linfocitos primarios de sangre periférica
humana. Las células primarias, obtenidas de donantes sanos
normales, se cultivan durante aproximadamente 72 horas y,
transcurrido dicho tiempo, se extraen, se preparan en
portaobjetos y se evalúan puntuando el índice mitótico y la
resolución de bandeo cromosómico. Cada lote de producto
se analiza en paralelo y se compara con un estándar
aprobado de referencia que garantiza un rendimiento
diagnóstico uniforme. Consulte el certificado de análisis
específico para obtener más información.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
Limitaciones
Se analiza el rendimiento de cada lote fabricado de
PB-MAX™ Karyotyping Medium en linfocitos primarios de
sangre periférica para garantizar el rendimiento del producto
para su uso en diagnóstico in vitro para esta aplicación.
Aunque este medio servirá para utilizarlo en la propagación
de otros tipos celulares, su uso indicado no está sujeto a los
procedimientos actuales de control de calidad y no se emite
ningún tipo de garantía de su aplicación.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
Para obtener información o asistencia técnica sobre éste u
otros productos GIBCO™, póngase en contacto con el
servicio técnico enviando un correo a
[email protected], o consulte el catálogo de
productos GIBCO™ para conseguir los números de
teléfono locales en su región.
También puede ponerse en contacto con su representante
de ventas de Invitrogen o con nuestro sitio web en
www.invitrogen.com.
Para uso diagnóstico in vitro.
PRECAUCIÓN: No indicado para uso terapéutico en humanos
o animales.
Un uso diferente al indicado en la etiqueta
puede suponer una violación de las leyes locales.
37
Svenska
PB-MAX™ Karyotyping Medium
med fetalt bovinserum
med gentamicinsulfat vid 35 mcg/ml
med L-glutamin
med fytohemagglutinin
Katalog nummer :
12557-013
100 mL
12557-021
500 mL
Avsedd användning
PB-MAX™ Karyotyping medium är avsett att användas vid
förfaranden med in vitro diagnostik vilka kräver
korttidsodling av periferiska blodlymfocyter vid
cytogenetiska studier. För denna applikation har produkten
blivit rigoröst kvalitetstestad av ledande kliniska
cytogenetiska referenslaboratorier i USA
(Se Prestandakontrolll).
Bakgrund
Den vanligaste källan av celler vid kliniska cytogenetiska
studier är periferiska blodlymfocyter.1 Cytogenetiska
rutinstudier gjorda på periferiskt blod kan innefatta upptäckt
av eller bekräftelse på kromosomavvikelser associerade med
numeriska och strukturella förändringar, autosomala och
könskromosomala animalier och konstitutionell eller
somatiska effekter 2,3. Detta förfarande representerar den
minst invasiva metoden vid införskaffandet av primärceller
för cytogenetiska studier, varav det utförs 123 000 i U.S.A.
varje år.4 Lymfocyter är fullt utvecklade celler och delar sig
därför icke aktivt. Tekniken utvecklades av Moorehead et al
19605 eftersom korttidskultivering av lymfocyter kräver
användning av mitogen för att framkalla mitosis i icke
delande celler. Det mitogen som vanligen användes är
fytohemagglutin (PHA) vilket är ett extrakt från red kidney
bean som omvandlar små lymfocyter (T-celler) till blastlika
celler. Denna omvandling följs snabbt av en RNA syntes
med DNA syntes som börjar 24 timmar senare.1 När DNA
syntesen påbörjas är cellerna uppbundna och PHA behövs
inte längre i odlingen. Sjuttiotvå timmar efter att PHA
tillsats odlingen är cirka 45 % av cellerna i S-fasen. Detta
representerar maximum av mitotisk aktivitet och är den
optimala tidpunkten för skörd för kromosomerstudier6.
De flesta kliniska cytogenetiska laboratorierna odlar perifera
blodlymfocyter under en tidsperiod av 48 – 72 timmar i ett
komplett odlingsmedium bestående av ett basalt medium
supplementerat av cirka 10 – 40 % fetalt bovinserum, PHA i
området cirka 1 – 2 % v/v beroende på källa, L-glutamin och
antibiotika. Några satser FBS kan påvisa toxitet och skall
kvalificeras innan användning i cytogenetiska studier.
Dessutom kan PHA potentialen för mitotisk stimulering
variera med olika satser. Den optimala koncentrationen
behöver vanligen bestämmas innan användningen alternativt
kan försäljarens utspädningsrekommendationer för den
använda satsen.
38
Invitrogen erkänner det cytogenetiska laboratoriets behov av
att de produkter för odlingsmedia som levereras är
fullständigt supplementerade och cytogenetiskt kvalificerade
i tillägg till att det uppvisar oföränderlig prestanda. Som ett
svar på detta behov skapades PB-MAX™ Karyotyping som
en produkt fullständigt färdig för användning och är
förkvalificerad på primärceller i en applikationsspecifik
cytogenetisk test utförd av erfarna cytogenetiker vid
certifierade, ledande cytogenetiska laboratorier i enlighet
med standardiserade förfaranden.
Produktbeskrivning
PB-MAX™ Karyotyping medium är sammansatt av en
flytande RPMI-1640 basalt medium vilket är fullständigt
supplementerat med standardkoncentrationer av L-glutamin,
gentamicin sulfat, fetalt bovinserum och fytohemagglutinin.
Denna sammansättning är baserad på perifert blodmedia
nämnt i ACT Laboratory Manual (1991) för användning i
PHA stimulerad perifiell blododling6. PB-MAX™ levereras
som ett 1X fruset medium som är komplett och färdigt för
användning när det har tinat. Denna konstruktion optimerar
lagringstiden och kräver ingen ytterligare supplementering,
vilket minimerar slutanvändarens hantering som potentiellt
kan kompromettera produktens integritet. I tillägg till att
erbjuda bekvämligheten med en användarfärdig produkt finns
det två storlekar tillgängliga för att möta det föränderliga
behovet som associeras med varje individuellt laboratoriums
volym. Denna produkt tillverkas under cGMP i en ISO9001
certifierad enhet. Varje produktsats prestandatestas på
primära perifera blodlymfocyter som odlats i cirka 72
timmar och utvärderas med avseende på miotiskt index och
fasthet i kromosombandningen på den 10 kromosomen.
Varje sats körs parallellt mot ett odlingsmedium som har
prestandakvalificerats tidigare i detta testsystem.
Försiktighet
FÖR ANVÄNDNING I DIAGNOSTISKA FÖRFARANDEN
IN VITRO SOM KRÄVER ODLING OCH TILLVÄXT AV
PERIFERA BLODLYMFOCYTER.
1. FÅR EJ ANVÄNDAS OM MEDIUMET ÄR GRUMLIGT,
FÖRPACKNINGEN ÄR BRUTEN ELLER OM
PRODUKTEN MOTTOGS UPPTINAD.
2. ANTIBIOTOSK POTENS FASTSTÄLLS VID
TIDPUNKTEN FÖR TILLVERKNINGEN.
PRODUKTENS LAGRINGSTID BASERAS PÅ
PRESTANDAN I FUNKTIONSTESTER, INTE
ANTIBIOTISK POTENS.
3. UNDVIK LÄNGRE EXPONERING I LJUS.
Förvaring
-5 till -20°C i mörker.
Lagringstid
12 månader vid lagring oöppnad, och vid de
rekommenderade förvaringsvillkoren.
Bruksanvisning
Tina PB-MAX™ Karyotyping medium vid 4 – 8ºC.Värm
mediumet till rumstemperatur och vrid det försiktigt så att
det blandas innan användning. PB-MAX™ Karyotyping
medium kan tinas och aseptiskt överföras till mindre, lika
stora delar, som lämpligt. Dessa delar kan frysas och tinas
vid användningstidpunkten, dock skall multipla frys –
upptinings cykler undvikas. Undvik längre tids exponering
mot ljus vid användning av denna produkt med
odlingsmedium.
Kvalitetskontroll
Varje sats med PB-MAX™ Kanyotyping medium
prestandatestas vid tidpunkten för tillverkningen. I tillägg till
standardkvalitetstester såsom pH, osmolaritet, mykoplasma
och sterilitet testas varje tillverkad sats med medium för att
garantera jämn biologisk prestanda med hjälp av kvantitativ
tillväxttest med hjälp av primärt mänskligt perifera
blodlymfocyter. Primärceller, införskaffade från normala,
friska donatorer, odlas i cirka 72 timmar vid tidpunkten för
införskaffandet, objektglas förbereds och utvärderas genom
räkning av det mitotiska indexet och fasthet i
kromosombindningen.Varje produktsats testas parallellt och
jämförs med en godkänd referensstandard vilken garanterar
jämn diagnosprestanda. Var god se det satsspecifika
analyscertifikatet för ytterligare information.
Begränsningar
Varje tillverkad sats med PB-MAX™ Karyotyping medium är
prestandatestad på primära perifera blodlymfocyter för att
garantera produktprestandan för denna produkt vid
användningen vid in vitro diagnostik. Trots att detta media
troligtvis fungerar till användning vid bildandet av andra
celltyper är dess avsedda användning inte föremål för
kvalitetskontroll för ögonblicket och inga garantier gess för
närvarande för dess applikation.
GIBCO™ vätskeprodukter med cellkultur framställs genom
en aseptisk process för vilket varje steg har validerats för att
garantera att alla produkter uppfyller den industristandard
för sterilitetsgaranti på en nivå om 10-3; dvs en produkt som
visar en kontaminationsnivå om mindre än 1 av 1000
enheter under tillverkningsprocessen. Den högsta nivån av
sterilitetsgaranti (lika med eller större än 10-6) kan inte
uppnås utan terminal sterilisering, vilket skadar
cellkulturprodukternas prestanda.
References
1. Clinical Genetics and Genetic Counseling.Thaddeus E. Kelly. 2nd Edition, pp 23, 1986.
2. Thompson & Thompson - Chapter 6, pp 142-165.
3. Therman, E. Human Chromosomes pp 21-22, 61-70, 104-110, 136-147, 150-163
(1980).
4. 1994 International Cytogenetic Laboratory Directory,T. Kutsen (ed).
The Association of Cytogenetic Technologists, Burbank, CA 1994.
5. Moorhead, P.S., Nowell, P.C., Nellman,W.J. Battips, D.M. and Hungerford, D.A.
Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood.
Exp. Cell Res. 20, 613-616 (1960).
6. Hack MS, Lawce HJ, eds.The Association of Cytogenetic Technologists Laboratory
Manual. San Francisco:ACT, 1980; section 2;70-77. Barch ,MJ, ed. Second edition,
Houston,TX:ACT, 1991, chapter 2;24-30.
För ytterligare information eller teknisk support på denna
eller andra GIBCO™ produkter, kontakta Teknisk Service
vid [email protected] eller se GIBCO™:s
produktkatalog för lokala telefonnummer i regionen.
Det är även möjligt att kontakta Invitrogen
försäljningsrepresentanter eller använda vår Webb plats på
www.invitrogen.com.
För diagnostisk användning in vitro.
FÖRSIKTIGHET: Ej för terapeutisk användning på människa
eller djur.
Annan användning än den som anges på
etiketten kan bryta mot lokala lagar.
VARJE KLINIKER/VETENSKAPSMAN MÅSTE GÖRA EN
OBEROENDE BEDÖMNING OM DETTA MEDIUM ÄR
LÄMPLIGT FÖR ANVÄNDNING VID DIAGNOSTISKA
APPLIKATIONER IN VITRO I SINA LABORATORIER.
INVITROGEN GARANTERAR INTE ETT
FRAMGÅNGSRIKT RESULTAT BASERAT ENDAST PÅ
ANVÄNDNINGEN AV GIBCO™ MEDIUM. GIBCO™:s
BIDRAG TILL DESSA FÖRFARANDEN ÄR ENDAST ATT
TILLHANDAHÅLLA EN KULTUR ELLER
HANTERINGSMEDIUM FÖR DESSA FÖRFARANDEN.
39
40
PB-IFU
To order
AUSTRIA
GERMANY
SWEDEN
Invitrogen GmbH
Gebührenfreie Bestellungen:
Tel: 0800 20 10 87
Fax: 0800 21 63 17
Invitrogen GmbH
Gebührenfreie Bestellungen:
Tel: 0800 083 09 02
Fax: 0800 083 34 35
Invitrogen AB
Ordertelefon: 020 26 34 52
Tel: 08 630 73 20
Fax: 08 732 44 93
BELGIUM
ITALY
SWITZERLAND
N.V. Invitrogen S.A.
Free Phone Orders: 0800 14894
Tel: 09 272 55 99
Fax: 09 272 55 98
Invitrogen S.R.L
Free Fax Orders: 800 302 505
Tel: 02 98 22 201
Fax: 02 98 24 15 17
DENMARK
THE NETHERLANDS
Invitrogen AG
Free Phone Orders:
0800 84 88 00
Free Fax Orders:
0800 87 68 00
Invitrogen A/S
Frikaldsnr. ordre: 80 30 17 40
Tel: 43 99 43 44
Fax: 43 99 43 45
Invitrogen
Gratis Telefoon (Orders):
0800 099 3310
Gratis Fax (Orders):
0800 023 4212
FRANCE
Invitrogen SARL
Téléphone vert commandes:
0800 23 20 79
Fax vert commandes:
0800 13 58 13
Tél: 01 34 32 31 00
Fax: 01 30 37 50 07
www.invitrogen.com
NORWAY
Invitrogen AS
Free Phone:
00800 5345 5345
Tel:
22 83 16 00
Free Fax:
00800 7890 7890
SPAIN/PORTUGAL
Invitrogen S.A
Pedidos Tel. (Gratuito):
900 181 461
Pedidos Fax. (Gratuito):
900 181 460
Tel: 93 479 69 50
Fax: 93 374 15 70
© 2003 Invitrogen Corporation
UNITED KINGDOM
Invitrogen Ltd
Free Phone Orders:
0800 269 210
Free Fax Orders:
0800 243 485
Tel: 0141 814 6100
Fax: 0141 814 6260
Email: [email protected]