1. No category

Diagnosi
di laboratorio
di infezioni fungine
Materiale in cui si ricercano i miceti:
squame cutanee, capelli, tamponi vari,
escreato, urine, sangue, liquor, biopsie ….
Indagini di laboratorio:
1. Esame microscopico
2. Esame colturale
3. Indagini sierologiche
Esame microscopico
Preparato “a fresco”
Preparato fissato e colorato
Esame istologico
Esame microscopico “a fresco”
Preparazioni con inchiostro di China
Colorazione negativa per evidenziare la capsula
Indicazioni:
Cryptococcus neoformans
e altri lieviti capsulati
Esame microscopico “a fresco”
Preparazioni con KOH
Materiale cheratinizzato,
pus, escreato.…
Scopo:
chiarificazione del
materiale patologico
Tempo: 5-10 min
1
Esame istologico
Esame microscopico di preparati fissati e colorati
Colorazione al PAS
Acido periodico formazione di gruppi aldeidici dai
mannani e glucani parietali reazione con reattivo
di Schiff colorazione rosso magenta della parete
fungina
Colorazioni:
Giemsa
Blu di metilene
Gram …..
C.
Esame istologico
Esame istologico
Colorazione di Gomori
(Gomori Methenamine Silver)
Mucicarminio
Acido cromico
formazione di gruppi
aldeidici dai polisaccaridi
parietali
riduzione del nitrato
d’argento ad argento metallico colorazione nera
della parete fungina
Oltre la parete
colora
anche i
polisaccaridi
capsulari
(C.neoformans)
Ematossilina-Eosina: non colora o colora poco i funghi
evidenzia la reazione infiammatoria
Esame microscopico
considerazioni
Esame colturale
Terreni usuali
Sabouraud destrosio agar (pH 5,57)
Malto estratto agar
Vantaggi
Terreni particolari
Possibilità di fare diagnosi immediata
Riduce il sospetto di contaminazioni ambientali
Sabouraud destrosio agar + olio di oliva (Malassezia spp)
Czapek agar (identificazione Aspergillus)
Agar sangue (per ottenere la forma lievito nei dimorfi) ……
Temperatura di incubazione: 25°C e/o 37°C
Svantaggi
Tempo di incubazione: variabile (1-30 gg)
Non identifica la specie
quando si sospetta la presenza di funghi a lenta crescita
prolungare l’incubazione per 4-6 settimane
2
Lieviti
Funghi dimorfi: Histoplasma capsulatum
Muffa su Sabouraud agar, 25°C
Muffe
325
Lievito su agar sangue, 37°C
Lieviti: identificazione classica di specie
Tests biochimici:
Identificazione di specie
utilizzazione di carboidrati,
utilizzazione di fonti di azoto ecc
Studio della morfologica :
di poca utilità
Eccezioni:
Cryptococcus neoformans (presenza di capsula)
Candida albicans : tubi germinativi
Funghi filamentosi:
Lieviti capsulati:
identificazione classica di specie
Cryptococcus neoformans
Si basa sullo studio di:
Tubi germinativi
di Candida albicans
Morfologia macroscopica
Morfologia microscopica
3
Funghi filamentosi: identificazione classica di specie
Morfologia macroscopica:
•dimensioni della colonia
•colore sul diritto e sul rovescio
• aspetto (polveroso, lanoso …..)
• pigmenti diffusi nell’agar …….
Funghi filamentosi:
identificazione classica di specie
Morfologia microscopica
Ife: colore,
dimensioni,
presenza di setti
Morfologia apparato
conidiogenico:
conidioforo
cellule conidiogeniche
conidi …………
Ricerca di anticorpi
Indagini sierologiche
Ricerca di anticorpi
Ricerca di antigeni
Indagine utilizzata in:
Aspergillosi
Blastomicosi
Coccidioidomicosi
Istoplasmosi
Paracoccidioidomicosi…….
Metodiche:
Immunoprecipitazione,
Saggi immunoenzimatici
Immunofluorescenza indiretta…
Ricerca di anticorpi
Reazione
di precipitazione
Problematiche
Scarsa o mancanza di anticorpi nell’immunocompromesso
Reazioni crociate fra varie specie fungine
4
Diagnosi sierologica:
Ricerca di antigeni circolanti
Ricerca di antigeni circolanti
Indagine utilizzata in:
Agglutinazione al latex:
ricerca di antigeni capsulari di C.neoformans
Criptococcosi
Aspergillosi
Candidosi
Istoplasmosi
ecc
Metodiche:
Agglutinazione al latex
Saggi immunoenzimatici
ecc.
Ricerca dei galattomannani:
test ELISA
1
2
3
Ricerca di antigeni circolanti
4
Substrato scisso:
variazione di colore
Problematiche:
Incostanza dell’antigene nei vari fluidi biologici
5