1. No category

MINICAP CDT
Ref. 2208
Ref. 2228*
2014/06
MINICAP CDT - 2014/06
TILSIKTET BRUK
MINICAP CDT kit er utviklet for separasjon av humane serum transferrin isoformer i alkalisk buffer (pH 8,8) med MINICAP-systemet. Normalt serum
transferrin isoformer separerer på MINICAP i 5 primære fraksjoner i henhold til deres sialyseringsnivå : Asialotransferrin (ikke sialysert),
disialotransferrin, trisialotransferrin, tetrasialotransferrin og pentasialotransferrin. De lav-sialyserte isoformene (disialotransferrin assosiert med
asialotransferrin i noen tilfeller) utgjør CDT (karbohydratdeficit transferrin) som er en markør for kronisk alkoholmisbruk.
MINICAP utfører alle sekvensene automatisk for å skaffe en transferrinprofil for kvantitativ analyse av CDT. Transferrin isoformer, separert i
silikakapillærer, detekteres direkte ved absorbans på 200 nm. Direkte påvisning forsyner nøyaktig relativ kvantifisering av individuelle CDT fraksjoner.
For In Vitro diagnostisk bruk.
MERK : På dette instruksjonsarket blir navnet "MINICAP" brukt for automatisert MINICAP og MINICAP FLEX-PIERCING instrumenter.
TESTENS PRINSIPP (1-19)
CDT kvantifisering av transferrin isoformer ved hjelp av elektroforese er en teknikk som brukes i kliniske laboratorier for screening av prøver fra
pasienter for kronisk alkoholmisbruk (2, 3, 4, 5, 11, 13, 16, 18). MINICAP er blitt utviklet for å gi komplett automatisering av denne testingen med hurtig separasjon
og god oppløsning. På mange måter kan metodologien anses som en mellomliggende type teknikk mellom klassisk sone-elektroforese og flytende
kromatografi. MINICAP-systemet bruker prinsippet med kapillær elektroforese i fri løsning. Med denne teknikken skilles ladede molekyler ved sin
elektroforetiske mobilitet i alkalisk buffer med en spesifikk pH. Separasjon forekommer også i samsvar med elektrolytt-pH og elektroosmotisk
strømning (9, 12).
MINICAP-systemet har kapillærer som fungerer parallelt og gir 2 simultane analyser muligheten for CDT kvantifisering. En prøvefortynning med en
spesifikk prøvediluent er preparert og injisert ved aspirasjon ved den anodiske enden av kapillære. En høyspennings proteinseparasjon utføres
deretter og proteinene detekteres direkte ved 200 nm i den katodiske enden av kapillæren. Kapillærene vaskes straks med en vaskeløsning og
klargjøres for den neste analysen med buffer. Med grunnleggende pH buffer er transferrin isoformer påvist i den følgende rekkefølgen :
Asialotransferrin, disialotransferrin, trisialotransferrin, tetrasialotransferrin og pentasialotransferrin.
REAGENSER OG MATERIALER SOM LEVERES I MINICAP CDT KITENE
ADVARSEL : Se sikkerhetsdatabladet.
ARTIKLER
Buffer (klar til bruk)
Prøvediluent (klar til bruk)
Vaskeløsning (stock-løsning)
CDT vaskeløsning (klar til bruk)
Reagensglass
Filtre
Avfallsbeholdere for brukte glass
Strekkodeetiketter for prøvediluent
Strekkodeetiketter for CDT vaskeløsning
PN 2208
2 flasker, 250 mL hver
1 flaske, 80 mL
1 flaske, 25 mL
1 flaske, 80 mL
1 pakke med 125
3 filtre
4 avfallsbeholdere
5 ark med 5 etiketter
5 ark med 5 etiketter
* MINICAP CDT MAXI-KIT
PN 2228*
6 flasker, 250 mL hver
3 flasker, 80 mL hver
3 flasker, 25 mL hver
3 flasker, 80 mL hver
3 pakker med 125
3 filtre
12 avfallsbeholdere
15 ark med 4 etiketter
15 ark med 4 etiketter
FOR OPTIMALE RESULTATER :
Alle reagenser fra samme pakke må alltid brukes sammen og i henhold til instruksjonene i pakningsvedlegget.
VENNLIGST LES PAKNINGSVEDLEGGET NØYE.
ADVARSEL : Bruk ikke kjøpt avionisert vann slik som vann for jerning for eksempel (risiko for alvorlige kapillærskader). Bruk bare vann
med ultraren kvalitet som for eksempel vann av injeksjonsklasse.
1. BUFFER
Preparering
Buffer er klar til bruk. Den inneholder : bufferløsning pH 8.8 ± 0.5 ; tilsetningsstoffer, ikke farlige ved konsentrasjonene som brukes, nødvendige for
optimalt resultat.
Bruk
Buffer for analyse av transferrin isoformer i MINICAP.
Lagring, stabilitet og tegn på forringelse
Lagre bufferen ved romtemperatur (15 til 30 °C) eller nedkjølt (2 til 8 °C). Den er stabil til utløpsdatoen som står på etikettene kitforpakningen eller
flasken med buffer. Unngå lagring i nærheten av et vindu eller en varmekilde.
MERK : Når bufferen er lagret mellom 2 og 8 °C, anbefaler vi at den når romtemperatur før bruk.
MÅ IKKE FRYSES.
Når bufferflasken er åpnet og plassert på MINICAP-instrumentet, er det stabilt i maksimalt 2 måneder (akkumulert). Hvis det er planlagt å bruke
bufferflasken i mer enn 2 måneder, må den fjernes fra instrumentet etter hver gangs bruk og oppbevares ved romtemperatur (15 til 30 °C) eller settes
i kjøleskap (mellom 2 og 8 °C). Bufferen er da stabil inntil utløpsdatoen som er angitt på etiketten på bufferflasken.
Kast buffer hvis den forandrer utseende, f.eks. blir grumsete på grunn av mikrobiell forurensning.
- 172 -
SEBIA BRUKSANVISNING - Norsk
MINICAP CDT - 2014/06
2. PRØVEDILUENT
Preparering
Prøvediluenten er klar til bruk. Den inneholder tilsetningsstoffer, ikke farlige ved brukte konsentrasjoner, nødvendige for optimal ytelse og effektiv
separasjon av transferrin isoformer.
Bruk
For automatisk fortynning av serumprøver.
Lagring, stabilitet og tegn på forringelse
Lagre prøvediluenten ved romtemperatur (15 til 30 °C). Den er stabil til utløpsdatoen som står på etikettene kitforpakningen eller flasken med
prøvediluent.
MERK : Prøvediluent kan bli tåkete eller presipitere ved romtemperatur. Varm opp til 37 °C for å oppløse om igjen. Rør den forsiktig før bruk.
MÅ IKKE FRYSES.
Kast prøvediluenten hvis den forandrer utseende, f.eks. blir grumsete på grunn av mikrobiell forurensning.
3. VASKELØSNING
Preparering
Flasken med stock-vaskeløsning må fortynnes opp til 250 mL med destillert eller deionisert vann.
Etter fortynning, inneholder vaskeløsningen en sur løsning med pH ≈ 12.
Bruk
For vasking av kapillærer etter transferrin isoformer elektroforese.
VIKTIG : Før du fyller vaskeløsningsbeholderen, anbefales det at du vasker åpningen på beholderen, koplingen og røret med rikelige mengder av
destillert eller avionisert vann for å unngå saltavleiringer.
Lagring, stabilitet og tegn på forringelse
Lagre stock- og arbeidsvaskeløsningene i lukkede beholdere ved romtemperatur eller nedkjølt. Stock-vaskeløsningen er stabil til utløpsdatoen som
står på etiketten på kitforpakningen eller vaskeløsningsflasken.
Arbeidsvaskeløsningen er stabil i 3 måneder.
Kast arbeidsvaskeløsningen hvis den forandrer utseende, f.eks. blir grumsete på grunn av mikrobiell forurensning.
4. CAPILLARYS / MINICAP CDT VASKELØSNING
4.1. For daglig rengjøring av prøvesonden med utgivelser < 7.42
Preparering
CAPILLARYS / MINICAP CDT vaskeløsningsflasken er klar til bruk. Den inneholder tilsetningsstoffer, ikke farlige ved brukte konsentrasjoner,
nødvendige for optimal ytelse.
Bruk
For DAGLIG rengjøring av prøvesonder i automatisert system MINICAP SEBIA, for kapillær elektroforese; for bruk ved slutten av hver arbeidsøkt eller
før bruk av en annen MINICAP analyseteknikk.
Se instruksjonshåndboken for SEBIA MINICAP.
• Tilsett i et mikrorør 500 µL av CAPILLARYS / MINICAP CDT-vaskeløsning.
• Skjær av dekselet på mikrorøret.
• Plasser mikrorøret, plassert på et nytt hemolyserør brukt som støtte (identifisert med en strekkodeetikett spesifikk for CDT vaskeløsningen), helt til
slutt i en serie av prøver på den roterende prøvetakeren til MINICAP.
• Plasser et nytt reagensglass på det automatiske lastesystemet for glass til MINICAP (en melding vises hvis reagensglasset mangler).
• Skyv den roterende prøvetakeren inn i MINICAP-systemet.
• Lukk dørene til MINICAP-systemet. Rengjøringssekvensen starter automatisk.
VIKTIG : For optimal bruk av CDT vaskeløsningen med MINICAP-systemet, er det nødvendig å bruke en strekkodeetikett tiltenkt for å identifisere
hemolyserøret som holder mikrorøret som inneholder den fortynnede løsningen (skjær av dekselet på mikrorøret før du bruker det).
Lagring, stabilitet og tegn på forringelse
Lagre vaskeløsningen ved romtemperatur (15 til 30 °C) i lukkede beholdere for å forhindre fordamping.
Den er stabil til utløpsdatoen som står på etikettene på kitforpakningen eller flasken med buffer. MÅ IKKE FRYSES.
MERK : Vaskeløsningen kan bli tåkete eller presipitere ved romtemperatur. Varm opp til 37 °C for å oppløse om igjen. Rør den forsiktig før bruk.
Kast arbeidsvaskeløsningen dersom den forandrer utseende, f.eks. blir grumsete på grunn av mikrobiell forurensning.
4.2. For daglig rengjøring av prøvesonden og kapillærer med utgivelser ≥ 7.42
Preparering
CAPILLARYS / MINICAP CDT vaskeløsningsflasken er klar til bruk. Den inneholder tilsetningsstoffer, ikke farlige ved brukte konsentrasjoner,
nødvendige for optimal ytelse.
Bruk
For DAGLIG rengjøring av prøvesonder og kapillærer i automatisert system MINICAP SEBIA, for kapillær elektroforese ; for bruk ved slutten av hver
arbeidsøkt og nødvendigvis før bruk av en annen MINICAP analyseteknikk.
Se instruksjonshåndboken for SEBIA MINICAP.
• Tilsett i et mikrorør 1 mL av CAPILLARYS / MINICAP CDT-vaskeløsning.
• Skjær av dekselet på mikrorøret.
• Plasser mikrorøret, plassert på et nytt hemolyserør brukt som støtte (identifisert med en strekkodeetikett spesifikk for CDT vaskeløsningen), helt til
slutt i en serie av prøver på den roterende prøvetakeren til MINICAP.
• Plasser et nytt reagensglass på det automatiske lastesystemet for glass til MINICAP (en melding vises hvis reagensglasset mangler).
• Skyv den roterende prøvetakeren inn i MINICAP-systemet.
• Lukk dørene til MINICAP-systemet. Rengjøringssekvensen starter automatisk.
VIKTIG : For optimal bruk av CDT vaskeløsningen med MINICAP-systemet, er det nødvendig å bruke en strekkodeetikett tiltenkt for å identifisere
hemolyserøret som holder mikrorøret som inneholder den fortynnede løsningen (skjær av dekselet på mikrorøret før du bruker det).
- 173 -
MINICAP CDT - 2014/06
Lagring, stabilitet og tegn på forringelse
Lagre vaskeløsningen ved romtemperatur (15 til 30 °C) i lukkede beholdere for å forhindre fordamping.
Den er stabil til utløpsdatoen som står på etikettene på kitforpakningen eller flasken med buffer. MÅ IKKE FRYSES.
MERK : Vaskeløsningen kan bli tåkete eller presipitere ved romtemperatur. Varm opp til 37 °C for å oppløse om igjen. Rør den forsiktig før bruk.
Kast arbeidsvaskeløsningen dersom den forandrer utseende, f.eks. blir grumsete på grunn av mikrobiell forurensning.
5. REAGENSGLASS
Bruk
Engangsglass for serumprøvefortynning og migrering på det automatiske instrumentet. Skal plasseres på det automatiske lastesystemet for glass for
MINICAP. Et glass er tiltenkt for analysen av 2 serumprøver.
ADVARSEL : Reagensglass med biologiske prøver må håndteres med varsomhet.
6. FILTER
Bruk
Engangsfilter for filtrering av analysebuffer, arbeidsvaskløsning og destillert vann (brukt for skylling av kapillærer).
VIKTIG : Med hver nye kit, skift alltid ut de tre filtrene.
Skru et filter ved koplingen plassert ved den ytterste enden av hvert slange som ligger i flasken av bufferen, vaskeløsning og destillert eller avionisert
vann. Når du setter filter på MINICAP-systemet, skyll koplingene og slangene med destillert eller avionisert vann.
Filteret tiltenkt for analysebuffer må brukes for filtrering av begge bufferflaskene; de to andre filtrene er ment for filtrering av arbeidsvaskløsningen og
for destillert eller avionisert vann (for skylling av kapillærer).
Lagring
Før bruk, lagre filtrene i deres forseglede pakke på et tørt sted ved romtemperatur eller nedkjølt.
7. AVFALLSBEHOLDERE FOR BRUKTE GLASS
Bruk
Avfallsbeholdere tiltenkt for automatisk oppsamling av brukte reagensglass i MINICAP. Skal plasseres i MINICAP ved plasseringen tiltenkt dette
formålet.
ADVARSEL : Avfallsbeholdere som inneholder brukte reagensglass med biologiske prøver må håndteres med varsomhet.
8. STREKKODEETIKETTER FOR PRØVEDILUENT
Bruk
Etiketter for å identifisere røret som inneholder prøvediluenten (CDT-prøvediluent).
9. STREKKODEETIKETTER FOR CDT-VASKELØSNING
Bruk
Etiketter for å identifisere røret som inneholder CDT-vaskeløsningen (CDT-VASKELØSNING).
NØDVENDIGE REAGENSER SOM IKKE MEDFØLGER
ADVARSEL : Se sikkerhetsdatabladet.
1. NORMAL CDT-KONTROLL
VIKTIG : CDT-kontrollfortynningsløsningen, SEBIA (1 flaske, 5 mL), er nødvendig for rekonstitueringen av den normale CDT-kontrollen.
Sammensetning
Det normale CDT kontroll, (SEBIA, PN 4795) skaffes fra en poll med normale humane sera. Den normale CDT-kontrollen er i stabilisert lyofilisert form.
CDT-kontrollfortynningsløsningen som er nødvendig for rekonstitueringen av den normale CDT-kontrollen er klar til bruk. Den inneholder :
tilsetningsstoffer, ikke farlige ved brukte konsentrasjoner, nødvendige for optimal ytelse.
Tilsiktet bruk
Normal CDT kontroll er designet for normalisering av kapillærer for første bruk av MINICAP instrumentet, eller etter lengre tids stopp (over 1 uke), for
kvantifisering av humane transferrin isoformer med MINICAP CDT elektroforeseprosedyre, eller etter å ha endret og aktivert kapillærer.
• Rekonstituer hver Normal CDT-kontrollflaske med eksakt volum med CDT-kontrolldiluent, som indikert på pakningsvedlegget av den normale CDTkontroll. La stå i 30 minutter og bland forsiktig (unngå utvikling av skum).
Den rekonstituerte normale CDT-kontrollen skal brukes som et normalt humant serum.
• Påfør den rekonstituerte normale CDT-kontrollen i et mikrorør.
• Skjær av dekselet på mikrorøret.
• Plasser mikrorøret, plassert på et nytt hemolyserør brukt som støtterør (og identifisert med strekkodeetiketten normal CDT kontroll), i posisjon nr.
28 på en MINICAP roterende prøvetaker ("Kontroll"-posisjon).
• Hell 1 mL CAPILLARYS / MINICAP CDT prøvediluent i et hemolyserør (identifisert med strekkodeetiketten prøvediluenten) uten å føre inn luftbobler
og plasser det i posisjon nr. 27 på den roterende prøvetakeren ("diluent / løsning"-posisjon) (en melding vises hvis røret eller prøvediluenten
mangler).
VIKTIG : Forsikre fraværet av skum i røret før du plasserer det på prøveracken.
• Skyv den roterende prøvetakeren inn i MINICAP-systemet.
• Lukk dørene til MINICAP-systemet. Analysen starter automatisk.
• I vinduet som vises på skjermen velger du antall analyser av normal CDT-kontroll som skal utføres og kontrolleres.
MERK : Bare én analyse av normal CDT-kontroll tillater normaliseringen av de 2 kapillærene til MINICAP-systemet.
Resultatene blir da vurdert automatisk av programvaren for dataanalysen.
Verdiene som er oppnådd må ligge innenfor området som er gitt med hvert parti CDT-kontroll.
- 174 -
MINICAP CDT - 2014/06
VIKTIG : For optimal bruk av Normal CDT-kontrollen plassert, er det nødvendig å bruke en strekkodeetikett tiltenkt for å identifisere hemolyserøret
som holder mikrorøret som inneholder CDT-kontrollen (skjær av dekselet på mikrorøret før du bruker det).
Kvalitetskontroll :
Den normale CDT-kontrollen skal brukes som et normalt humant serum. Etter rekonstitusjon, bruk Normal CDT-kontroll direkte som en serumprøve
for å analysere (i posisjon nr. 28 på den roterende prøvetakeren, se foregående avsnitt). Det vil automatisk bli fortynnet med prøvediluenten. Det er
anbefalt å inkludere en analyse av Normal CDT-kontroll. Verdiene som er oppnådd må ligge innenfor området som er gitt med hvert parti CDT-kontroll.
VIKTIG : For optimal bruk av Normal CDT-kontrollen plassert på den roterende prøvetakeren i posisjonene 1 til 26, er det nødvendig å bruke en
strekkodeetikett tiltenkt for å identifisere hemolyserøret som holder mikrorøret som inneholder CDT-kontrollen (skjær av dekselet på mikrorøret før du
bruker det).
Lagring, stabilitet og tegn på forringelse
Se Normal CDT-kontroll på pakningsvedlegget.
Ingen testmetode kan gi absolutt forsikring om fravær av HIV, hepatitt B og C eller andre smittefarlige stoffer. Behandle derfor den normale CDTkontrollen som et farlig biologisk materiale.
Dette kontrollserumet ble funnet negativ på analyser godkjent av FDA eller EUs tilsvarende kontrollorganer :
- mot hepatitt B overflateantigen,
- for antistoff mot HCV,
- for antistoff mot HIV1 og HIV2.
2. DESTILLERT ELLER AVIONISERT VANN
Bruk
For å skylle kapillærer i det automatiserte systemet MINICAP, SEBIA, for kapillær elektroforese.
Det anbefales å bruke filtrert destillert eller avionisert vann (på et filter med en porøsitet på ≤ 0,45 μm) og med en resistivitet på mer enn
10 Megohms x cm.
Bytt vann hver dag for å forhindre mikrobiell kontaminasjon.
For optimal funksjon, tilsett 35 µL/dL av CLEAN PROTECT (SEBIA, PN 2059, 1 ampulle på 5 mL).
VIKTIG : Før skyllebeholderen fylles, anbefaler vi at den vaskes med rikelig med destillert eller avionisert vann.
3. CAPICLEAN
Sammensetning
Flasken med CAPICLEAN konsentrert løsning (SEBIA, PN 2058, 25 mL) inneholder : proteolytiske enzymer, overflateaktive stoffer og tilsetninger som
ikke er farlige ved konsentrasjonene som brukes, nødvendige for optimal ytelse.
ADVARSEL : Se sikkerhetsdatabladet.
Bruk
For rengjøring av prøve-prober i de automatiske systemene MINICAP, SEBIA, for kapillær elektroforese, under CAPICLEAN rengjøringssekvensen.
VIKTIG : Start en CAPICLEAN rengjøringssekvens minst en gang i uken og maksimalt en gang pr. dag, eller etter hver 500. analyser dersom de er
utført innen en uke.
Se instruksjonene for CAPICLEAN, SEBIA.
VIKTIG : For optimal bruk av CAPICLEAN-løsningen med MINICAP-systemet, er det nødvendig å bruke en strekkodeetikett tiltenkt for å identifisere
hemolyserøret som holder mikrorøret som inneholder den fortynnede CAPICLEAN-løsningen (skjær av dekselet på mikrorøret før du bruker det).
Kontroller at nye reagensglass plasseres på det automatiske lastesystemet for glass til MINICAP (en melding vises hvis reagensglasset mangler).
Lagring, stabilitet og tegn på forringelse
Oppbevar CAPICLEAN nedkjølt (2 – 8 °C). Den er stabil til utløpsdatoen som står på etiketten på flasken. MÅ IKKE FRYSES.
Det kan observeres bunnfall eller kombinerte partikler i suspensjonen (flak) i CAPICLEAN ampullen. Dette gir ingen bivirkninger på bruken.
Ikke løs opp dette bunnfallet eller partiklene. Det anbefales å beholde bare overskytende væske.
For senere bruk, oppbevar røret som inneholder fortynningsløsningen ved 2 – 8 °C. Den må brukes i løpet av dagen.
4. NATRIUMHYPOKLORITTLØSNING (for rengjøring av prøvesonde)
Preparering
Preparer en natriumhypoklorittløsning (2 % til 3 % klorid) ved å fortynne 250 mL klorinert konsentrert løsning (9,6 % klorid) med 1 liter kaldt destillert
eller avionisert vann.
Bruk
For rengjøring av prøvesonde i MINICAP-systemet (ukentlig vedlikehold for å eliminere adsorberte proteiner fra sonden).
Se instruksjonshåndboken for SEBIA MINICAP.
• Tilsett i et mikrorør 500 µL av fortynnet klorinert løsning allerede preparert.
• Skjær av dekselet på mikrorøret.
• Plasser mikrorøret, plassert på et nytt hemolyserør brukt som støtte (identifisert med en strekkodeetikett spesifikk for natrium hypoklorittløsningen)
på den roterende prøvetakeren til MINICAP.
• Kontroller at nye reagensglass plasseres på det automatiske lastesystemet for glass til MINICAP (en melding vises hvis reagensglasset mangler).
• Skyv den roterende prøvetakeren inn i MINICAP-systemet.
• Lukk dørene til MINICAP-systemet. Rengjøringssekvensen starter automatisk.
VIKTIG : For optimal bruk av natrium hypoklorittløsningen med MINICAP-systemet, er det nødvendig å bruke en strekkodeetikett tiltenkt for å
identifisere hemolyserøret som holder mikrorøret som inneholder den fortynnede løsningen (skjær av dekselet på mikrorøret før du bruker det).
Lagring, stabilitet og tegn på forringelse
Hvis den klorinerte arbeidsløsningen oppbevares ved romtemperatur i en lukket beholder, er den stabil i 3 måneder. Unngå oppbevaring i sollys, i
nærheten av varme- og tenningskilde og syrer og ammoniakk.
- 175 -
MINICAP CDT - 2014/06
5. CAPILLARYS / MINICAP VASKELØSNING
Preparering
Hver flaske med stock CAPILLARYS / MINICAP-vaskeløsning (SEBIA, PN 2052, 2 flasker, 75 mL) må fortynnes opp til 750 mL med destillert eller
avionisert vann.
Det er praktisk å fortynne bare 25 mL av stock-løsningen til 250 mL med destillert eller avionisert vann for MINICAP.
Etter fortynning, inneholder vaskeløsningen en sur løsning med pH ≈ 12.
Bruk
For vasking av MINICAP-kapillærene.
VIKTIG : Før du fyller vaskeløsningsbeholderen, anbefales det at du vasker åpningen på beholderen, koplingen og røret med rikelige mengder av
destillert eller avionisert vann for å unngå saltavleiringer.
Lagring, stabilitet og tegn på forringelse
Lagre stock- og arbeidsvaskeløsningene i lukkede beholdere ved romtemperatur eller nedkjølt. Stock-vaskeløsningen er stabil til utløpsdatoen som
står på etiketten på kitforpakningen eller vaskeløsningsflasken.
Arbeidsvaskeløsningen er stabil i 3 måneder.
Kast arbeidsvaskeløsningen hvis den forandrer utseende, f.eks. blir grumsete på grunn av mikrobiell forurensning.
6. CAPILLARYS / MINICAP CDT-BEHANDLINGSLØSNING FOR PRØVER
Preparering
Flasken med CAPILLARYS / MINICAP CDT-behandlingsløsning for prøver (SEBIA, PN 2054, 50 mL) er klar for bruk. Den inneholder tilsetningsstoffer,
ikke farlige ved brukte konsentrasjoner, nødvendige for optimal ytelse.
Bruk
For behandling, om nødvendig, av serumprøver med interferens som tilsvarer de presenterte profilene, se "Elektroforesemønster" som viser noen
eksempler på prøver med interferens.
Prøvenes behandlingsløsning har en bunnfallsvirkning på visse immunglobuliner som kan forstyrre det elektroforetiske mønsteret.
MERK : Behandlingsløsningen for prøvene er spesielt effektiv når den følgende interferensen er visualisert :
- Utseende av en eller mange tynne ytterligere fraksjoner på mønsteret eller av en vid fraksjon før disialotransferrin.
- Endring av elektroforesemønsteret som ugyldiggjør CDT-kvantifiseringen.
Se paragraf "Preparasjon av prøver" for bruk av behandlingsløsningen.
Lagring, stabilitet og tegn på forringelse
Lagre behandlingsløsningen for prøvene den nedkjølt (2 til 8 °C). Den er stabil til utløpsdatoen som står på etikettene på esken eller flasken. MÅ IKKE
FRYSES.
Kast behandlingsløsningen for prøvene hvis den forandrer utseende, f.eks. blir grumsete på grunn av mikrobiell forurensning.
MERKNADER :
Testene som er utført for validering av reagensene har vist at for de ulike løsningene og ved bruk av utstyr tilpasset regenerert volum, har en variasjon
på ± 5 % av endelig volum ingen negativ effekt på analysen.
Det destillerte eller deioniserte vannet som brukes for å regenerere løsninger, må være fritt for bakterier og mugg (bruk filter ≤ 0.45 µm) og ha en
resistivitet (motstand) over 10 Megohms x cm.
NØDVENDIG UTSTYR OG TILBEHØR
1.
2.
3.
4.
5.
6.
MINICAP-system SEBIA, PN 1230, MINICAP FLEX-PIERCING-system SEBIA, PN 1232.
Roterende prøvetaker levert med MINICAP.
Beholder-kit levert med MINICAP : Skyllemiddel (for å fylle med destillert eller avionisert vann) og avfallsbeholder.
MINICAP reagensglass, SEBIA (250 enheter), PN 2280.
Lokk til avfallsbeholder for brukte reagensrør, SEBIA (12 stykker), PN 2286 : lokk til å ha på beholdere som inneholder brukte begre.
Hemolyserør (med 8 til 16 mm diameter og 50 til 100 mm lengde).
For prøvebehandling, om nødvendig :
• 1,5 mL mikrorør.
• Hemolyseringsrør (75 mm høye og 13 mm i diameter).
• Sentrifuge (600 / 1700 g).
PRØVER FOR ANALYSE
Prøvetaking og lagring
Ferske serumprøver anbefales til analyse. Sera må tas ved å følge etablerte prosedyrer brukt i klinisk laboratorietesting.
Prøver skal ikke lagres ved romtemperatur. De kan lagres opp til 10 dager mellom 2 og 8 °C.
MERK : Under transport kan prøvene oppbevares ved romtemperatur i opptil 48 timer. Det anbefales å transportere dem ved 2 – 8 °C.
For lengre lagring skal prøver fryses innen 8 timer av prøvetakning. Frossen sera er stabil i en måned.
Proteindegradering, og spesielt C3 komplementær degradering, er meget prøveavhengig for sera lagret mellom 2 og 8 °C.
På grunn av C3-degradering, kan en yterligere fraksjon, C3d, være observert på transferrin isoform elektroforetiske mønster. Denne fraksjonen vises
etter (den er mer katodisk) pentasialotransferrin og den har ingen interferens med noen elektroforetisk separerte transferrin isoformer.
C3d-fraksjonen kan øke i løpet av lagring.
Prøvepreparasjon
Bruk ufortynnede serumprøver.
Ved lagring ved 2 til 8 °C eller etter tining, kan litt sera (spesielt de som inneholder kryoglobulin eller kryogel) bli tyktflytende eller utvikle turbiditet. Ved
romtemperatur kan disse prøvene analyseres direkte.
Det er anbefalt å observere serumutseende før analyse (for eksempel tegn på hemolyse, kryoglobuliner eller turbiditet).
- 176 -
MINICAP CDT - 2014/06
Preparasjon av serumprøver med interferens (Se "Elektroforesemønster" viser noen eksempler på prøver med interferens) :
•
•
•
•
•
•
•
Plasser 200 µL med serum for behandling i et mikrorør.
Tilsett 50 µL med CAPILLARYS / MINICAP CDT-behandlingsløsning for prøver.
Bland i 5 sekunder.
Sentrifuger mikrorøret i 10 minutter ved 600 g.
Samle supernatanten og plasser den i et nytt mikrorør for å utføre analysen.
Skjære dekselet av mikrorøret.
Plasser mikrorøret som inneholder supernatanten av den behandlede prøven på et nytt hemolyserør (brukt som en holder) og deretter på MINICAP
prøvestativ.
• Utfør analysen som med en ikke-behandlet prøve.
Prøver som skal unngås
• Ikke bruk hemolyserte serumprøver. Hemolyse forårsaker en forringelse i transferrin isoform elektroforesemønster og ugyldiggjør CDTkvantifisering.
• Unngå aldrete, feil lagrete serumprøver.
• Unngå plasmaprøver. Fibrinogen migrerer før asialotransferrin isoform og forårsaker forringelse av elektroforesemønster. Når fibrinogenfraksjonen
er for stor, kan den forstyrre transferrin isoform analysen og forhindrer CDT-kvantifisering.
• Ikke analyser prøver som inneholder DTA eller citrat. Disse forringer elektroforesemønsteret og ugyldiggjør CDT-kvantifisering.
MERK : Innsamlingsrørene og parametrene for sentrifugering for biologiske prøver er beskrevet i tilgjengelig dokumentasjon av den pre-analytiske
fasen for biomedisinsk analyse (data gitt av produsenten av rør, veiledninger og anbefalinger om innsamling av biologiske prøver...). Uten angivelse i
bruksanvisningen for om hvilken type rør som skal brukes eller om sentrifugeringen, henvises det til dokumentasjonen og når det gjelder
rørdimensjonen som skal brukes, henvises det til SEBIA-dokumentet "Karakteristikk av rørene som skal brukes i henhold til instrumentet". Den preanalytiske fasen må utføres i henhold til faglig standard, de ulike anbefalingene, inkludert de som er gitt av produsenten av rørene og relevante
forskrifter.
PROSEDYRE
MINICAP-systemet er et flerparameterinstrument for serumproteinanalyse på parallelle kapillærer. Transferrin isoformer-analysen bruker 2 kapillærer
for å analysere prøvene.
Sekvensen av de automatiserte trinnene er som følger :
• Strekkodeavlesing av prøverørene (for opp til 26 rør), prøvediluentrør og roterende prøvetaker,
• Prøvefortynning fra primærrør i reagensglass,
• Vasking av kapillærer,
• Injeksjon av fortynnede prøver,
• Proteinseparasjon og direkte påvisning av separerte proteiner på kapillærer.
De manuelle trinnene inkluderer :
• Oppsett av de åpne prøverørene i roterende prøvetaker i posisjonene 1 til 26,
• Oppsett av prøvediluentrøret i roterende prøvetaker i posisjonen 27,
• Oppsett av den roterende prøvetakeren i MINICAP-instrumentet,
• Fjern prøverørene etter analyse,
• Fjern og lukk avfallsbeholderne for brukte glass.
VENNLIGST LES MINICAP INSTRUKSJONSHÅNDBOK.
I. PREPARERING AV MINICAP-ANALYSE
1. Slå på MINICAP instrument og datamaskin.
2. Plasser minst et nytt reagensglass på det automatiske lastesystemet for glass til MINICAP (en melding vises hvis reagensglasset mangler) for
å starte instrumentet.
3. Start programvaren, og instrumentet starter automatisk.
4. MINICAP CDT kit-en er tiltenkt å kjøre med CDT-analyseprogrammet fra MINICAP instrumentet. Les instruksjonshåndboken til MINICAP nøye
og følg instruksene som vises på skjermen for å velge CDT-analyseprogrammet og plassere MINICAP CDT-bufferflasken i posisjon "B2" i
instrumentet.
VIKTIG : Man må alltid assosiere og identifisere hurtigkoblingslokket, røret og filteret i henhold til bufferen. Hvis denne prosedyren ikke blir
fulgt, kan en forurensing av migrasjonsbufret med det tidligere bufret føre til migrasjonsartefakt, som kan forstyrre den aktuelle analysen.
5. Plasser nye reagensglass på det automatiske lastesystemet for glass til MINICAP (en melding vises hvis reagensglassene mangler).
6. Plasser en ny avfallsbeholder for brukte glass i MINICAP på tiltenkt plass for dette formålet.
7. Kontroller fyllenivået til reagensflaskene, tilsett reagens hvis nødvendig og tøm avfallsbeholderen. I vinduet "Kontroller reagensnivåer"
oppdaterer du programvaren ved å flytte markørtastene.
8. Den roterende prøvetakeren inneholder 28 posisjoner for prøverør :
• Plasser opp til 26 åpne prøverør på den roterende prøvetakeren (posisjonsnumre 1 til 26), strekkoden til hvert rør må være synlig i
åpningene til den roterende prøvetakeren.
VIKTIG : Hvis antall prøverør som skal analyseres er oddetall, legg til et rør som inneholder destillert eller avionisert vann.
• Hell prøvefortynning i et hemolyserør, merket med strekkode-etikett for prøvefortynning, uten at det dannes luftbobler: 0,5 mL for analyse
av 1 eller 2 prøver, 1 mL for analyse av 8 prøver. Sett dette røret i posisjon 27 på den roterende prøveholderen ("Fortynner/løsning"
posisjon).
VIKTIG : Forsikre fraværet av skum i røret til prøvediluenten før du plasserer det på den roterende prøvetakeren.
VIKTIG : Hvis et rør mangler i posisjonene nr. 1 til 26 (prøverør), i posisjon nr. 27 (prøvediluentrør), kan ikke analysen starte og en melding
vises.
MERK : Når du bruker et kontrollserum, er det nødvendig å bruke den spesifikke strekkodeetiketten.
- 177 -
9.
10.
11.
12.
MINICAP CDT - 2014/06
Skyv den roterende prøvetakeren inn i MINICAP-systemet.
Lukk dørene til MINICAP-systemet. Analysen starter automatisk.
Etter analysen fjerner du den roterende prøvetakeren med analyserte prøverør.
Om nødvendig tar du avfallsbeholderen som inneholder brukte reagensrør av, lukker den godt med tilhørende lokk og deponerer den.
ADVARSEL : Avfallsbeholdere som inneholder brukte reagensglass med biologiske prøver må håndteres med varsomhet.
FORTYNNING - MIGRERING - BESKRIVELSE AV DE AUTOMATISERTE TRINNENE
1. Strekkoder er lest på både prøverørene og på den roterende prøvetakeren.
2. Prøver fortynnes i prøvediluent og prøvesonden skylles etter hver prøve.
3. Kapillærer vaskes.
4. Fortynnede prøver injiseres inn i kapillærer.
5. Migrering gjennomføres under konstant spenning i omtrent 8 minutter, og temperaturen er styrt av peltier-effekt.
6. Transferrin isoformer detekteres direkte ved å skanne ved 200 nm og en elektroforetisk profil på skjermen på systemet.
MERK : Disse automatiske trinnene beskrives for de to første analyserte prøverørene. Elektroforesemønster vises etter 18 minutter fra starten av
analysen. For de følgende prøverørene, foretas de to første trinnene (strekkodelesing og fortynning av prøver) under analysen av de 2 forrige prøvene.
II. RESULTATANALYSE
På slutten av analysen, er relativ kvantifisering av individuell transferrin isoformer utført automatisk og profiler kan analyseres; systemet kalkulerer
konsentrasjonen (%) av hver fraksjon som vises i den følgende rekkefølgen : Pentasialotransferrin assosiert med tetrasialotransferrin,
trisialotransferrin, disialotransferrin og asialotransferrin.
Pentasialotransferrin og tetrasialotransferrin er individuelt integrert; pentasialotranferrin er identifisert av en spesifikk farge.
På elektroforesemønsteret, er kurvene av transferrin isoform, unntatt for asialotransferrin kalkulert og gjentrukket ved justering (eller utstyrt) og er
overført med den rene profilen.
Det er mulig å endre den automatiske integrasjonen av fraksjoner ved hjelp av en manuell integrasjon : Slett integrasjonen av hver fraksjon og / eller
integrer manuelt én eller flere fraksjoner.
MERK : Ved analyse av Normal CDT Control, identifisert med strekkoden, vil et lilla vaarsellys vises dersom optisk densitet (OD) er utilstrekkelig
(kontakt SEBIA teknisk avdeling).
VENNLIGST LES MINICAP INSTRUKSJONSHÅNDBOK.
III. SLUTT PÅ ANALYSESEKVENSEN
På slutten av hver analysesekvens, må operatøren initiere "standby"- eller "shutdown"-prosedyren for MINICAP-systemet for å lagre kapillærer under
optimale forhold.
VIKTIG : Kontroller at nye reagensglass plasseres på det automatiske lastesystemet for glass til MINICAP (en melding vises hvis reagensglasset
mangler).
IV. PÅFYLLING AV REAGENSBEHOLDERE
MINICAP-systemet har automatisk reagenskontroll.
VIKTIG : Se instruksjonene for utskifting av reagensbeholderne i forhold til fargekode for flasker og koblinger.
En melding vises når en av følgende oppgaver må utføres :
• Sett inn en ny bufferflaske og/eller,
• Fyll beholderen med arbeidsvaskeløsning og/eller,
• Fyll beholderen med filtrert destillert eller avionisert vann for å skylle kapillærer og/eller,
• Tøm avfallsbeholderen.
ADVARSEL : Bruk ikke kjøpt avionisert vann slik som vann for jerning for eksempel (risiko for alvorlige kapillærskader). Bruk bare vann
med ultraren kvalitet som for eksempel vann av injeksjonsklasse.
VIKTIG : Før skyllebeholderen fylles, anbefaler vi at den vaskes med rikelig med destillert eller avionisert vann.
VENNLIGST LES MINICAP INSTRUKSJONSHÅNDBOK.
KVALITETSKONTROLL
Det er anbefalt å inkludere et normalt serum (slik som Normal CDT-kontroll, SEBIA, PN 4795) med hver sekvens for analyse.
RESULTATER
Verdier
Direkte påvisning ved 200 nm i kapillærer gir relative konsentrasjoner (prosentandeler) av individuelle transferrin isoformer.
I en studie ble CDT øvre referansegrense funnet å være 1.3 % ved analyse av 225 kontrollsubjekter (F Schellenberg, JPM Wielders, 2010).
"Cut-off" verdi basert på øvre referansegrense pluss usikkerhet i målingene er 1.6 %. Denne "cut-off" verdien er bekreftet med en annen intern studie
med 104 prøver.
Resultatene for analyse av CDT er klassifisert som følger :
- CDT ≤ 1.3 % : normalt resultat,
- CDT > 1.3 % og ≤ 1.6 % : usikkert resultat,
- CDT > 1.6 % : patologisk resultat.
Det anbefales at hvert laboratorium etablerer sine egne terskelverdier.
MERK : Terskelverdier har blitt etablert ved bruk av programvarens standard parametrer (utjevnende 2 og automatisk transferrin isoform kvantifisering
ved bruk av CDT analyseprogram).
- 178 -
MINICAP CDT - 2014/06
Tolking
CDT verdier > 1.6 % regnes som positive og med kronisk alkoholmisbruk som årsak.
ADVARSEL : Graderingen av den horisontale aksen tillater ikke, i noen tilfeller, identifikasjonen av en fraksjon som ikke har blitt automatisk
identifisert av programvaren.
Interferens og begrensninger
Faktorene i listen under kan interferere med CDT prøven og kan forstyrre eller forhndre CDT kvantifisering. Det er anbefalt å undersøke hvert mønster
visuelt for forringelse, ytterligere fraksjon og prinsippavgang fra utseende av normale (ikke-alkoholiske) eller CDT eleverte (alkoholmisbruk) mønster
(fig. 1 og 2). Når forstyrrende mønster-abnormaliteter er tilstede, skal ikke ikke CDT-verdien som vises benyttes.
• CDG syndrom (Congenital Disorders of Glycosylation).
• Genetiske varianter av transferrin.
• Noen monoklonale komponenter eller høy-polyklonal bakgrunn.
• Fibrinogen og hemolyserte prøver.
• Antikoagulanter (citrat, EDTA).
• For gamle og feillagrede prøver.
• Leverskader (alvorlig, sykdom på endelige stadie).
Se PRØVER FOR ANALYSE.
CDT kan være kvantifisert i serumprøver med genetiske varianter av transferrin isoformer. I dette tilfelle er CDT-kvantifiseringen oppnådd ved
kalkulasjon, deretter vises "CDT (*)" merkingen på skjermen og kommentaren "CDT kalkulert" er tilføyd i nærheten av "CDT (*)" markeringen når du
skriver ut resultatene. For en CDT prosent nært terskelverdien, anbefales det å analysere pasientens kliniske data.
Hepatiske sykdommer kan forstyrre CDT-kvantifisering.
En blokk som inneholder disialotransferrin og trisialotransferrin kan være observert når du analyserer serumprøven fra en pasient med leverskader,
cirrhose på grunn av kronisk alkoholmisbruk for eksempel (se "Elektroforesemønster"). I dette tilfellet er en reduksjon av transferrin generelt observert
lenket til en økning av trisialotransferrin.
VIKTIG : Det er også nødvendig å analysere pasientens kliniske data, som supplerende resultater.
På grunn av variasjonen av interferensfaktorer det er mulig at behandlingsløsningen for prøvene ikke er effektiv med denne CDTkvantifiseringsmetoden.
Dersom disialotransferrin er over 3 % og asialotransferrin ikke er tilstede, vises et gult varselsignal på skjermen. Dette signalet kan indikere en
potensiell interferens på disialotransferrin. Det anbefales da å nøye undersøke elektroforesemønsteret og om nødvendig å behandle prøven med
CAPILLARYS / MINICAP CDT prøvebehandlingsoppløsning eller å bruke den komplementære CAPILLARYS CDT / IS prosedyren med Tetravalent
CDT / IS antiserum. Analysen av prøven med serum protein elektroforese kan brukes for å verifisere at ingen monoklonale proteiner migrerer i
betasonen.
Når en CDT-variant finnes, er det viktig å kontrollere følgende punkter :
- Er prøven oppbevart i romtemperatur (hvis ja, hvor lenge)?
- Er C3-konsentrasjonen høy?
- Hva er transferrin-konsentrasjonen?
Med en økt C3-konsentrasjon og en prøve som er oppbevart i flere dager i romtemperatur, økes den degraderte C3 (C3d) og kan nå en optisk densitet
(OD) liknende fraksjons-OD-en til tetrasialotransferrin (4-sialo).
Med en lav transferrin-konsentrasjon (på grunn av et hepatittproblem) kan tetrasialotransferrin -toppen (4-sialo) være betydelig redusert.
Disse parametrene kan føre til en variantliknende profil når de kombineres. Når denne situasjonen oppstår, anbefales det å fornye analysen på en
frisk serumprøve eller en serumprøve oppbevart ved 2 - 8 °C eller frossen.
Feilsøking
Ta kontakt med SEBIA teknisk support når testen ikke virker selv om instruksjonene for preparering og lagring av materialene samt prosedyren ble
nøye fulgt.
HMS-datablad for kitreagens og informasjon om eliminering av avfallsprodukter er tilgjengelige fra leverandørens avdeling for teknisk support.
UTFØRELSEDATA
Disse etablerte resultatene ved bruk av MINICAP CDT-prosedyren angir en veldig god reproduserbarhet for den kvantitative analysen av CDT med
gjennomsnittlig CV % på cirka 4.3 %.
Resultatene som presenteres nedenfor for CDT har blitt etablert ved bruk av standard parameterne for PHORESIS programvare (utjevnende 2 og
automatisk transferrin isoform kvantifisering ved bruk av CDT-analyseprogram).
Reproduserbarhet innen sekvens og mellom analyser
Fem (5) forskjellig serumprøver (normale prøver A og E, og patologiske prøver B, C og F med økt CDT) ble kjørt ved bruk av MINICAP CDT-prosedyren
på 3 MINICAP-systemer og med 2 partier av MINICAP CDT-kit. Hver prøve ble analysert 5 ganger på de 2 kapillærene av hvert MINICAP-system.
Gjennomsnitt, standardavvik og variasjonskoeffisient (n = 10) ble beregnet for CDT for hver prøve og hvert MINICAP-system.
Tabellen viser verdiene av de 5 testede prøvene for CDT, beregnet med 3 MINICAP-systemer.
I tillegg viste ingen av repetisjonene falske positive eller falske negative verdier.
- 179 -
% CDT
Serumprøve A : System nr. 1 og partinr. 1 - System nr. 2 og partinr. 2 - System nr. 3 og partinr. 1
GJENNOMSNITT (%)
0.7 - 0.6 - 0.7
STANDARDAVVIK
0.00 - 0.05 - 0.03
CV (%)
0.0 - 7.3 - 4.3
Serumprøve B : System nr. 1 og partinr. 1 - System nr. 2 og partinr. 2 - System nr. 3 og partinr. 1
GJENNOMSNITT (%)
1.8 - 1.7 - 1.9
STANDARDAVVIK
0.05 - 0.05 - 0.05
CV (%)
2.7 - 3.1 - 2.8
Serumprøve C : System nr. 1 og partinr. 1 - System nr. 2 og partinr. 2 - System nr. 3 og partinr. 1
GJENNOMSNITT (%)
5.3 - 5.2 - 5.4
STANDARDAVVIK
0.05 - 0.09 - 0.08
CV (%)
0.9 - 1.8 - 1.5
Serumprøve E : System nr. 1 og partinr. 1 - System nr. 2 og partinr. 2 - System nr. 3 og partinr. 1
GJENNOMSNITT (%)
0.6 - 0.5 - 0.6
STANDARDAVVIK
0.05 - 0.05 - 0.05
CV (%)
8.0 - 9.1 - 9.1
Serumprøve F : System nr. 1 og partinr. 1 - System nr. 2 og partinr. 2 - System nr. 3 og partinr. 1
GJENNOMSNITT (%)
8.0 - 8.0 - 7.9
STANDARDAVVIK
0.18 - 0.29 - 0.20
CV (%)
2.2 - 3.6 - 2.5
MINICAP CDT - 2014/06
Reproduserbarhet mellom serier
Seks (6) forskjellige serumprøver ble analysert 10 ganger ved hjelp av MINICAP CDT- prosedyren på 3 MINICAP-systemer og med 2 partier av
MINICAP CDT-kit. De analyserte prøvene inkluderte 3 prøver med normalt CDT-nivå og 3 prøver med høy CDT. Gjennomsnitt, standardavvik og
variasjonskoeffisient (n = 10) av CDT ble beregnet for hver prøve og hvert MINICAP-system.
Tabellen viser spredningen av CDT-verdier for de 6 testede serumprøvene på de 3 systemene og en gjennomsnittlig variasjonskoeffisient beregnet
fra den samlede variasjonskoeffisienten (n = 15).
CDT
GJENNOMSNITT (%)
0.5 - 7.7
STANDARDAVVIK
0.00 - 0.28
Reproduserbarhet mellom systemer og mellom partier
CV (%)
0.0 - 10.1
GJENNOMSNITTLIG
VARIASJONSKOEFFISIENT (%)
4.0 %
Seks (6) forskjellige serumprøver (identiske med de som ble analysert for "Reproduserbarhet mellom serier"-studien) ble analysert 10 ganger ved hjelp
av MINICAP CDT-prosedyren på 3 MINICAP-systemer og med 2 partier av MINICAP CDT-kit. Gjennomsnitt, standardavvik og variasjonskoeffisient
(n = 30) av CDT ble beregnet for hver prøve og på de 3 MINICAP-systemene.
Tabellen viser spredningen av CDT-verdier for de 6 testede serumprøvene på de 3 systemene og en gjennomsnittlig variasjonskoeffisient beregnet
fra den samlede variasjonskoeffisienten for alle prøvene (n = 6).
I tillegg viste ingen av repetisjonene (reproduserbarhet mellom analyser, systemer og partier) falske positive eller falske negative verdier.
CDT
Nøyaktighet
GJENNOMSNITT (%)
0.5 - 7.6
STANDARDAVVIK
0.04 - 0.22
CV (%)
2.9 - 9.8
GJENNOMSNITTLIG
VARIASJONSKOEFFISIENT (%)
5.9 %
CDT-nivåene ble målt i sekstiåtte (68) serumprøver med normale og økte nivåer av CDT både ved elektroforetiske separasjoner etablert med MINICAP
CDT-prosedyren og et kommersielt tilgjengelig kapillær elektroforesesystem for CDT-kvantifisering.
De målte verdiene av CDT fra begge prosedyrene var analysert ved lineær regresjon statistisk prosedyre. Resultatene av lineær regresjonsanalyse
er tabulert nedenfor (y = MINICAP CDT).
CDT
Linearitet
Korrelasjons-koeffisient
0.997
y-intersept
-0.052
Hellings-vinkel
1.002
Måleområde for CDT %verdier MINICAP CDT
0.4 - 13.5
Fire ulike serumprøver ble blandet 2 ganger 2 med ulike blandingsforhold (blanding nr. 1 av prøver med 0,3 % og 14,8 % CDT og blanding nr. 2 av
prøver med 0,5 % og 16,3 % CDT) og fortynningene ble elektroforert med MINICAP CDT prosedyre. Testene ga en god linearitet for CDT innenfor
hele måleområdet som ble studert mellom 0,3 og 16,3 % av CDT.
- 180 -
MINICAP CDT - 2014/06
BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
Anton RF. Carbohydrate-deficient transferrin for detection and monitoring of sustained heavy drinking. What have we learned ? Where do we go
from here ? Alcohol, 25, 185 - 188 (2001).
Anton RF, Moah DH. Carbohydrate-deficient transferrin and gamma-glutamyltransferase as markers of heavy alcohol consumption : gender
differences. Alcohol Clin. Exp. Res., 18 (3), 747 - 754 (1994).
Arndt T. Carbohydrate-deficient transferrin as a marker of chronic alcohol abuse : A critical review of preanalysis, analysis and interpretation.
Clin. Chem., 47 (1) 13 - 27 (2001).
Behrens U, Womer T, Braly L, Schaffner F, Lieber C. Carbohydrate-deficient transferrin (CDT), a marker for chronic alcohol consumption in
different ethnic population. Alcohol. Clin. Exp. Res., 12, 427 - 432 (1988).
Conigrave K et al. CDT, GGT and AST as markers of alcohol use : The WHO / ISBRA Collaborative Project. Alcol. Clin. Exp Res., 26 (3), 332 339 (2002).
Gjerde H, Johnsen J, Bjørneboe A, Bjørneboe GE, Mørland J. A comparison of serum carbohydrate-deficient transferrin with other biological
markers of excessive drinking. Scand. J. Clin. Lab. Invest., 48, 1 - 6 (1988).
Hackler R et al. Investigation by isoelectric focusing of the initial carbohydrate-deficient transferrin (CDT) and non-CDT transferrin isoform
fractionation step involved in determination of CDT by the ChronAlcol. D. Assay. Clin. Chem., 46 (4), 483 - 492 (2000).
Huseby NE, Nilssen O, Erfurth A, Wetterling T, Kanitz RD. Carbohydrate-deficient transferrin and alcohol intake dependency : Variations in
response to alcohol intake among different groups of patients. Alcohol Clin. Exp. Res., 21 (2), 201 - 205 (1997).
Landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, 495 - 509 (1995).
Lesch OM et al. Alcohol dependance : is carbohydrate-deficient transferrin a marker for alcohol intake ? Alcohol Alcohol, 31, 257 - 264 (1996).
Lesch OM et al. Carbohydrate-deficient transferrin as a screening marker for drinking in a general hospital population. Alcohol Alcohol, 31, 249 256 (1996).
Oda RP et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, 1715 1723 (1997).
Oslin DW, Pettinati HM, Luck G, Semwanga A, Cnaan A, O'Brien C. Clinical correlation with carbohydrate-deficient transferrin levels in women
with alcoholism. Alcohol Clin. Exp. Res., 22 (9), 1981 - 1985 (1998).
Schellenberg F., Bénard J., Le Goff A., Bourdin C., Weill J. Evaluation of carbohydate-deficient transferrin compared with Tf index and other
markers of alcohol abuse. Alcohol Clin. Exp. Res., 13, 605 - 610 (1989).
Sillanaukee P, Olsson U. Improved diagnostic classification of alcohol abusers by combining carbohydrate-deficient transferrrin and
γ–glutamyltransferase. Clin. Chem., 47 (4), 681 - 685 (2001).
Stibler H, Borg S., Joustra M, Hultcrantz. Carbohydrate-deficient transferrin (CDT) in serum as a marker of high alcohol consumption. Advances
in the Biosciences (Eds Nordmann, Ribiere, Rouach), Pergamon Press 71, 353 - 357 (1988).
Stibler H. Carbohydrate-deficient transferrin in serum : a new marker of pottentially harmful alcohol consumption reviewed. Clin. Chem., 37 (12),
2029 - 2037 (1991).
Wuyts B, Delanghe JR. Carbohydrate-deficient transferrin as a marker for chronic alcohol consumption. LabMedica International, July-August :
10 - 12 (2001).
Yersin B, Nicolet JF, Decrey H, Burnier M, van Melle G, Pecoud A. Screening of excessive alcohol drinking. Comparative value of carbohydratedeficient transferrin, gamma-glutamyltransferase, and mean corpuscular volume. Arch. Intern Med., 155 (17), 1907 - 1911 (1995).
Arndt T, Erkens M, Holtkamp K, Keller T and Gressner AM. High prevalence of increased trisialotransferrin concentrations in patients with
anorexia nervosa : Implications for determination of carbohydrate-deficient transferrin. Clinica Chimica Acta, 379, 150-153 (2007).
Delanghe JR, De Buyzere ML. Carbohydrate Deficient Transferrin in forensic medicine. Clin. Chim. Acta, 2009, 406, 1 - 7.
Schellenberg F, Wielders JP. Evaluation of capillary electrophoresis assay for CDT on SEBIA’s CAPILLARYS System: Intra and inter laboratory
precision, reference interval and cut-off. Clin. Chim. Acta., 2010.
Helander A, Husa A, Jeppsson JO. Improved HPLC method for Carbohydrate Deficient Transferrin in serum. Clin. Chem., 2003, 49, 1881 – 1890.
Kenan N, et al. Importance of HPLC confirmation of problematic carbohydrate-deficient transferrin (CDT) results from a multicapillary
electrophoresis routine method. Clin. Chim. Acta (2010), doi:10.1016/j.cca.2010.08.006.
Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d’un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité.
Impact-Internat, Sept : 93 - 97 (1986).
J. Baraud, F. Schellenberg, J.C. Pagès (2009) Intérêt de l’immunosoustraction des immunoglobulines et de la transferrine dans le dosage de la
transferrine désialylée en électrophorèse capillaire. Ann. Biol. Clin., 67 (4) : 451 – 455.
J. Caslavska, W. Thormann (2012) Monitoring of alcohol markers by capillary electrophoresis. J. Sep. Sci. 00, 1 – 21, DOI 10.1002/
jssc.201200706.
J. Joneli, U. Wanzenried, J. Schiess, C. Lanz, J. Caslavska, W. Thormann (2013) Determination of carbohydrate-deficient transferrin in human
serum by capillary zone electrophoresis: Evaluation of assay performance and quality assurance over a 10-year period in the routine arena.
Electrophoresis, 34, 1563 – 1571.
D.A. Leon et al (2013) Hazardous alcohol consumption is associated with increased levels of B-type natriuretic peptide: evidence from two
population-based studies. Eur. J. Epidemiol. DOI 10.1007/s10654-013-9808-9.
T.M. Maenhout, G. Baten, M.L. De Buyzere and J. R. Delanghe (2012) Carbohydrate Deficient Transferrin in a driver’s license regranting
program. Alcohol and Alcoholism, doi: 10.1093/alcalc/ags013.
A. Szymanowicz (2013) À propos du dosage de la transferrine désialylée (CDT) et de ses indications. Ligand Assay 18 (1), 79 – 86.
C. Weykamp, J.P.M. Wielders, A. Helander, R.F. Anton, V. Bianchi, J.O. Jeppsson, C. Siebelder, J.B. Whitfield, F. Schellenberg (2012) Toward
standardization of carbohydrate-deficient transferrin (CDT) measurements: III. Performance of native serum and serum spiked with
disialotransferrin proves that harmonization of CDT assays is possible. Clin. Chem. Lab. Med. DOI 10.1515/cclm-2012-0767.
- 238 -
MINICAP CDT - 2014/06
SCHÉMAS / FIGURES
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Figure 1
Profil normal
Normal pattern
Disialotransferrin
Pentasialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
Figure 2
Profil à CDT augmentée
Pattern with increased CDT
Asialotransferrin
Disialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
- 239 -
Pentasialotransferrin
MINICAP CDT - 2014/06
SCHÉMAS / FIGURES
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Figure 3
Profil avec complément C3 dégradé
Pattern with degradated C3 complement
C3d
Disialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
- 240 -
Pentasialotransferrin
MINICAP CDT - 2014/06
SCHÉMAS / FIGURES
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Figure 4
Variants de la CDT - CDT variants
- 241 -
MINICAP CDT - 2014/06
SCHÉMAS / FIGURES
Figure 5
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Solution de traitement des échantillons (exemples)
Samples treatment solution (examples)
Sérum normal - avant traitement
Normal serum - before treatment
Pentasialotransferrin
Disialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
Sérum normal - après traitement
Normal serum - after treatment
Disialotransferrin
Pentasialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
- 242 -
MINICAP CDT - 2014/06
SCHÉMAS / FIGURES
Figure 6
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Solution de traitement des échantillons (exemples)
Samples treatment solution (examples)
Sérum N° 1 avec interférent - avant traitement
Normal No. 1 with interferent - before treatment
Pentasialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
Sérum N° 1 avec interférent - après traitement
Serum No. 1 with interferent - after treatment
Pentasialotransferrin
Disialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
- 243 -
MINICAP CDT - 2014/06
SCHÉMAS / FIGURES
Figure 7
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Solution de traitement des échantillons (exemples)
Samples treatment solution (examples)
Sérum N° 2 avec interférent - avant traitement
Serum No. 2 with interferent - before treatment
Pentasialotransferrin
Disialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
Sérum N° 2 avec interférent - après traitement
Serum No. 2 with interferent - after treatment
Disialotransferrin
Pentasialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
- 244 -
MINICAP CDT - 2014/06
SCHÉMAS / FIGURES
Figure 8
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Solution de traitement des échantillons (exemples)
Samples treatment solution (examples)
Sérum N° 3 avec interférent - avant traitement
Serum No. 3 with interferent - before treatment
Pentasialotransferrin
Disialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
Sérum N° 3 avec interférent - après traitement
Serum No. 3 with interferent - after treatment
Disialotransferrin
Pentasialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
- 245 -
MINICAP CDT - 2014/06
SCHÉMAS / FIGURES
Figure 9
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Solution de traitement des échantillons (exemples)
Samples treatment solution (examples)
Sérum N° 4 avec interférent - avant traitement
Serum No. 4 with interferent - before treatment
Sérum N° 4 avec interférent - après traitement
Serum No. 4 with interferent - after treatment
Disialotransferrin
Pentasialotransferrin
Tetrasialotransferrin
Trisialotransferrin
- 246 -
MINICAP CDT - 2014/06
SCHÉMAS / FIGURES
Figure 10
PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS
Profil avec bloc Disialo -Trisialotransferrine
Pattern with Disialo - Trisialotransferrin block
Disialotransferrin
Trisialotransferrin
- 247 -
Pentasialotransferrin
Tetrasialotransferrin