KVÆG Effekten af on-farm råmælkspasteurisering på coliforme bakterier og kalvens antistofoptagelse i en malkekvægsbesætning TEKST ASTRID THADE NØRREMARK / DYRLÆGE, RIBE-EGNENS DYRLÆGER, DYRLÆGER&KO Artiklen er udarbejdet som en del af programmet for den igangværende uddannelse til kvægfagdyrlæge. Med artiklerne kaster kursisterne nyt lys på kvægfaglige problemstillinger. Resumé Pasteurisering af råmælk i malkekvægbesætninger anvendes i stigende omfang til at reducere råmælkens indhold af bakterier. Formålet med nærværende studie var at undersøge effekten af on-farm råmælkspasteurisering på råmælkens indhold af coliforme bakterier og kalvens optagelse af antistoffer målt i Brix% i serum. I undersøgelsen indgik 50 kalve fra samme besætning, hvoraf 25 kalve fik tildelt pasteuriseret råmælk og 25 kalve fik tildelt ubehandlet råmælk. Alle undersøgelserne på blod og råmælk er baseret på tilgængelige analyser i veterinær kvægpraksis. Pasteurisering af råmælken resulterede i en signifikant reduktion i antallet af coliforme bakterier (P< 0,001), mens der i undersøgelsen ikke blev fundet nogen signifikant forskel i kalvenes optagelse af antistoffer. Indledning Der er i malkekvægsbesætninger fokus på kalvesundhed og dennes betydning for tilvækst og mælkeproduktion. Pasteurisering af råmælk anvendes i nogle malkekvægsbesætninger til at reducere råmælkens indhold af kim. Formålet med denne undersøgelse er på besætningsniveau at belyse effekten af råmælkspasteurisering på råmælkens indhold af coliforme bakterier (CB) og kalvens optagelse af antistoffer. Baggrund Opbygningen af koens placenta og separation af den føtale og maternelle blodforsyning in utero, betyder, at kalven fødes uden beskyttende immunoglobuliner 34 DVT 10 2015 (IgG) (1). Ved bekæmpelse af infektiøse sygdomme i den første levetid er den nyfødte kalv således afhængig af maternelle antistoffer via en korrekt og tilstrækkelig råmælksforsyning (2). Anbefalinger omkring råmælkstildeling til kalve ligger på 10-12 % af kropsvægten og et tilstrækkeligt antistofniveau er defineret som en IgG koncentration i serum > 10 mg/ml 24 til 48 timer efter kælvning (2). IgG i serum er i tidligere undersøgelser vist at korrelere med Brix% i serum, hvor Brix% på > 8,4 % angiver et IgG niveau > 10 mg/ml (3,4). Adskillige faktorer har betydning for kalvens optagelse af antistoffer til blodbanen, herunder råmælkens indhold af IgG, råmælksvolumen og tidspunkt for råmælkstildeling (2,5). Det er velbeskrevet, at råmælksmanagement har stor betydning for kalvesundheden, og tidligere studier indikerer, at 31 % af kalvedødeligheden inden for de første 3 leveuger kan tilskrives utilstrækkelig råmælksforsyning (5). Ud over en positiv effekt på kalvedødelighed er en tilstrækkelig råmælksforsyning også associeret med forbedret tilvækst i opdrætsperioden, en lavere alder ved første inseminering samt en højere mælkeproduktion i 1. laktation (2,6). Selvom råmælksforsyningen er essentiel for kalvens immunforsvar, kan råmælk også udgøre en infektionsrisiko. Bakteriel kontaminering af råmælk fra yveret og mangelfuld hygiejne under malkning og opbevaring kan forårsage, at den nyfødte kalv udsættes for patogener allerede inden for det første levedøgn (2). Det anbefales, at råmælk maksimalt indeholder et totalkim på 100.000 cfu/ml og et indhold af CB på 10.000 cfu/ml (7). Et højt kimtal i råmælk er i tidligere studier vist at interferere med kalvens optagelse af IgG (8,9). Mulige forklaringer er, at IgG bindes til bakterier i tarmlumen, eller at bakterier binder sig til de samme receptorer, som forestår transporten af IgG til blodbanen (8). Fælles for begge teorier er, at jo højere bakterieniveauet i råmælken er, desto færre IgG passerer over tarmens epithel til blodbanen (8,9). Dette studie har til formål at undersøge følgende: 1) Effekten af råmælkspasteurisering ved 60 °C i 60 minutter på råmælkens indhold af coliforme bakterier (CB) 2) Betydningen af pasteurisering af råmælk på kalvens optagelse af antistoffer målt ved Brix% i serum. Materiale og metode Kalvemanagement og optegnelser Studiet blev gennemført i en Holstein besætning på 500 køer og er baseret på i alt 50 kalve fordelt med 25 kalve i hver gruppe. Kalve i behandlingsgruppen (P) blev sondefodret med 4 liter pasteuriseret råmælk, mens kalve i kontrolgruppen (K) blev sondefodret med 4 liter ubehandlet råmælk. Køerne kælvede i velstrøede kælvningsbokse, og kalvene blev flyttet umiddelbart efter kælvning til en renvasket og desinficeret enkeltboks. Kalvedødeligheden 1-180 dage lå på 5,5 %, og der var i forsøgsperioden januar til marts 2015 ingen tilfælde af behandlingskrævende diarre blandt småkalvene under 14 dage. Medicinforbruget til ungdyr lå i gennemsnit på 0,40 ADD/100 dyr/dag de seneste 12 mdr. og under gult kort grænseværdien. Kun kalve, som ikke havde pattet hos koen, blev medtaget i forsøget. Besætningsejeren eller fodermesteren registrerede dato for kælvning, CKR nr. på ko og kalv, tidspunkt for kælvning, samt tidspunkt for råmælkstildeling. Derudover blev Brix% værdien på råmælken noteret, samt gruppen, som kalven blev placeret i - behandlingsgruppe (P) eller kontrolgruppe (K). Kalvens vægt på basis af målebånd (Dairy calf tape fra Coburn company Inc) blev registreret af dyrlægen, når kalvene var mellem 24 og 48 timer gamle. Kolostrum management og analyse Til forsøget blev der anvendt en coloQuick Pasteur, samt to nye kalvesonder, der blev stillet til rådighed i besætningen af Calvex A/S. Kolostrum fra første udmalkning blev testet med elektronisk refraktometer (Milwaukee). Der blev ikke taget hensyn til paritet, men kun råmælk med Brix% ≥ 20 % blev medtaget i undersøgelsen for at sikre råmælkskvaliteten. Råmælk af høj kvalitet er defineret ved en IgG-koncentra- FOTO COLOURBOX tion > 50 g/l (2). Råmælkens indhold af IgG er korreleret med Brix%, hvor tærskelværdien for et IgG-indhold på 50 g/l er angivet ved Brix på 22 % (3,4). Hver 2. råmælksportion blev efter tapning ved fyldestation pasteuriseret ved 60 °C i 60 minutter og herefter lagt på frost ved -16 °C. Råmælk i kontrolgruppe blev lagt direkte på frost ved -16 °C efter påfyldning. Kalvene blev skiftevis sondefodret med hhv. 4 liter pasteuriseret (P1-P25) og 4 liter ubehandlet råmælk (K26-K50). Efter fodring blev sonderne lagt i lunkent sæbevand og efterfølgende skyllet med rent vand. I enkelte tilfælde blev sonderne lagt direkte på frost ved -16 °C uden yderlig rengøring. Optøning af råmælk blev foretaget via coloQuick Pasteur i 25-30 minutter. Besætningsejeren og fodermesteren forestod udtagning af råmælksprøver i sterile engangsbeholdere fra AnalyTech Miljølaboratorium A/S følgende 3 steder: A) Fyldestation, B) Fra pose efter optøning og C) Fra sonde umiddelbart før fodring af kalven. Forud for forsøget blev besætningsejer og fodermester instrueret af besætningsdyrlægen i korrekt udtagelse af råmælksprøver. Alle råmælksprøver til analyse blev stillet på frost i separat fryser ved -20 °C inden for maksimal 10 minutter efter udtagelsen. Råmælksprøver blev af besætningsdyrlægen transporteret i frossen tilstand til eget laboratorium hos Ribe-egnens Dyrlæger. Prøverne blev optøet i 38 °C varmt vand og udsået på MacConkey’s agar nr. 3 (MAC) fra Oxoid A/S. Alle mælkeprøver blev sået ud med 100 µl på 90 mm MAC plader i 1-2 fortyndinger. Engangsbeholdere med fortyndingsvæske (Promedia MT diluent) fra Food Diagnostics blev anvendt til udarbejdelse af 10-folds fortyndinger. Opmåling af væske blev fortaget med engangspipettespidser og fordelt på MAC plader ved hjælp af sterile drigalski-spatler fra Food Diagnostics. Prøverne blev inkuberet ved 37 °C i 48 timer, hvorefter antallet af lyserøde (laktose positive) coliforme bakteriekolonier blev talt op og angivet i cfu/ml. Alle råmælksprøver blev udsået og aflæst af besætningsdyrlægen. Blodprøveanalyse 10 ml ikke-stabiliseret blod blev udtaget fra kalvenes halsvene 24 til 48 timer efter råmælkstildeling og analyseret inden for 1 time efter udtagelse af besætningsdyrlægen. Blodprøverne blev centrifugeret ved 3.200 omdrejninger i 5 minutter, hvorefter Brix% blev estimeret i blodserum ved hjælp af elektronisk refraktometer (Milwaukee). Statistik Data blev behandlet ved hjælp af t-test og lineær regression i R (version 3.1.3, R Foun dation for Statistical Computing, Vienna, Austria). Grænsen for signifikans blev sat ved P < 0,05. I tabel 1 er angivet middelværdier med spredning i parentes samt den tilhørende P-værdi. Der blev ved lineær regression ikke fundet nogen sammenhæng mellem antallet af CB fra sonde og Brix% i serum, hverken inden for eller på tværs af de to grupper. Der blev ved lineær regression heller ikke > DVT 10 2015 35 KVÆG fundet nogen interaktion mellem tidsinterval fra kælvning til råmælkstildeling og antallet af CB i råmælk fra sonde på Brix% værdien i serum. Resultater og diskussion Råmælkens indhold af CB er korreleret med totalkim (r=0,85) og associeret med både IgG-optagelse og risiko for sygdom (8). Pasteurisering af råmælk ved 60 °C i 60 minutter viste i denne undersøgelse en statistisk signifikant reduktion (P<0,001) i antallet af CB jf. tabel 1. Dette er i overensstemmelse med tidligere undersøgelser, hvor pasteurisering af råmælk har reduceret indholdet af både CB og totalkim i råmælken (8,9,10,11,12). Figur 1 illustrerer for behandlings- og kontrolgruppen, det gennemsnitlige antal CB (cfu/ml) for de tre udtagningssteder. Frisk råmælk anbefales maksimalt at indeholde et totalkim på 100.000 cfu/ml og et indhold af CB på 10.000 cfu/ml (7). I denne undersøgelse oversteg det gennemsnitlige antal af CB ved fyldestationen 10.000 cfu/ml for både kontrolgruppen og behandlingsgruppen jf. figur 1. De pasteuriserede råmælksprøver, udtaget direkte fra pose efter optøning (B), var i undersøgelsen negativ for vækst af CB. Dette understreger en god effekt af råmælkspasteurisering på råmælkens indhold af CB, samt en god hygiejne i forbindelse med besætningsejerens og fodermesterens udtagning af råmælksprøver. I råmælksprøverne udtaget fra sonde lå det gennemsnitlige antal CB på hhv. 3.339 cfu/ml for behandlingsgruppen og 22.274 cfu/ml for kontrolgruppen. Det gennemsnitlige antal CB i råmælken fodret til kalve i behandlingsgruppen var i denne undersøgelse syv gange lavere end det gennemsnitlige antal CB i råmælk fodret til kalve i kontrolgruppen. Stigningen i antallet af CB i råmælksprøver udtaget fra sonde (C) i behandlingsgruppen må antages at kunne relateres til hygiejne vedrørende sonderne, idet alle råmælksprøver udtaget fra pose efter optøning (B) var negativ for vækst af CB. Der blev ved undersøgelsens opstart taget nye sonder i brug, men der sås ingen stigning i CB over tid, som tegn på akkumulering af coliforme kim i sonden. Et højere indhold af CB i råmælk fra sonde (C) sammenholdt med råmælk fra pose (B) i behandlingsgruppen vurderes i denne undersøgelse at være betinget af variation i den daglige rengøring af sonderne. Udover at evaluere pasteuriseringens effekt på råmælkens indhold af CB var formålet også, at undersøge sammenhængen mellem pasteurisering af råmælk og kalvens optagelse af antistoffer. Kvaliteten, volumen og tidspunktet for råmælkstildeling er af betydning for kalvens optagelse af antistoffer til blodbanen (2,5). Denne undersøgelse er udført på besætningsniveau, hvor det ikke var muligt at samle råmælk i større enheder og sikre en fuldstændig ens sammensætning af råmælk i de to grupper. I stedet blev kvaliteten af råmælksportionerne undersøgt med elektronisk refraktometer og angivet i Brix%. Tabel 1. Resultater af t-test for de to grupper af kalve fodret med hhv. pasteuriseret kolostrum (n=25) og ubehandlet kolostrum (n=25). I tabellen er angivet middelværdier med spredning i parentes og den tilhørende P-værdi. Parameter Brix råmælk (%) Fødselsvægt (kg) Pasteuriseret Kontrol p-værdi 23,6 (2,0) 24,0 (2,7) P=0,54 48,1 (4,1) 47,4 (6,0) P=0,66 132,8 (115,8) 140,8 (108,4) P=0,8 4,0 (0,3) 4,1 (0,4) P=0,58 0* 4,0 (0,5) P<0,001 Fra sonde (C) CB log10(cfu/ml) 2,1* (1,7) 4,1 (0,5) P<0,001 Fra sonde (C) CB (cfu/ml) 3.339 22.472 9,0 (0,7) 8,7 (0,8) Alder ved råmælk (min) Fyldestation (A) CB log10 (cfu/ml) Efter optøning (B) CB log 10 (cfu/ml) Brix serum (%) CB= Coliforme Bakterier 36 DVT 10 2015 P=0,23 Den gennemsnitlige Brix% ligger i kontrolgruppen på 24 %, med en spredning på 2,7 %, og i behandlingsgruppen på 23,6 %, med en spredning på 2 %. Der var ikke nogen signifikant forskel på Brix% i råmælken mellem de to grupper jf. tabel 1. Kalvene i undersøgelsen fik alle tildelt 4 liter råmælk, og der blev ikke testet nogen signifikant forskel i den gennemsnitlige fødselsvægt samt det gennemsnitlige tidspunkt fra fødsel til råmælksfodring jf. tabel 1. Brix% blev i denne undersøgelse anvendt til at evaluere antistofoptagelsen i de to grupper. I kontrolgruppen fandtes en gennemsnitlig Brix% i serum på 8,7 % med en spredning på 0,8 %, mens den gennemsnitlige Brix% i behandlingsgruppen lå på 9,0 % med en spredning på 0,7 %. Der blev ikke fundet nogen signifikant forskel på Brix% i serum mellem de to grupper af kalve jf. tabel 1. Dette er i uoverensstemmelse med tidligere undersøgelser (8,9,10,11), hvor man har kunnet registrere et signifikant højere IgG-niveau i serum hos kalve tildelt pasteuriseret råmælk sammenlignet med kalve tildelt ubehandlet råmælk. Fælles for disse studier er, at råmælken først blev blandet i større enheder, således at råmælkskvaliteten var ens i undersøgelsesgrupperne, hvilket ikke var muligt i nærværende undersøgelse. Den manglende effekt på antistofoptagelsen kan skyldes et begrænset antal kalve, idet en undersøgelse (8) baseret på 1.064 kalve fra seks forskellige malkekvægsbesætninger viser en signifikant positiv sammenhæng mellem kalvens optagelse af IgG i serum og et lavt indhold af CB i råmælken. Omvendt har en mindre undersøgelse baseret på 30 kalve ligelig fordelt i 3 grupper (pasteuriseret, ubehandlet med et højt CB-indhold log cfu/ml 3,16 samt ubehandlet med et lavt CBniveau log cfu/ml 2,02) kunnet registrere et signifikant højere serum IgG hos kalve tildelt pasteuriseret råmælk versus ubehandlet råmælk, men ingen forskel på IgG i serum hos kalve tildelt ubehandlet råmælk med hhv. et højt og et lavt CB-niveau (10). I undersøgelsen antydes, at bakterietypen i råmælken kan være af betydning, samt at selve pasteuriseringen påvirker proteiner i råmælken, som normalt konkurrerer med IgG om de samme receptorer i tarmens epithel. Flere studier er nødvendige for at colifrome bakterier cfu/ml minutter var i denne undersøgelse effektiv til at reducere råmælkens indhold af CB. Udvikling i coliforme bakterier (CB) Figur 1. Antallet af coliforme bakterier Det gennemsnitlige niveau af CB i råmæl25000 fulgt i råmælk fra ken udtaget fra sonde var syv gange højere udmalkning til udfod20000 i kontrolgruppen sammenlignet med ring for kalve tildelt behandlingsgruppen. Pasteurisering af pasteuriseret råmælk 15000 Pasteuriseret (n=25) og kalve tildelt råmælk er således velegnet til at reducere råmælk ubehandlet råmælk 10000 risikoen for, at kalve udsættes for bakteri(n=25). Den røde linje Upasteuriseret elle patogener via råmælken. Der kunne i 5000 angiver det maksimalt råmælk undersøgelsen registreres nogen genintroacceptable niveau af 10 000 cfu/ml 0 coliforme bakterier i duktion af CB i råmælk udtaget ved sonde, råmælk (7). hvorfor en god hygiejne omkring sonden er afgørende for et fortsat lavt indhold af CB ved fodring af kalven. Der var i denne undersøgelse ingen forskel på kalvenes optagelse af antistoffer målt ved Brix% i klarlægge den præcise mekanisme og sam- af produktionsøkonomisk betydning, og serum ved sammenligning mellem kalve menhæng mellem råmælkspasteurisering undersøgelser har vist, at selv milde tilfodret med pasteuriseret råmælk og ubeFigur 1. Antallet af coliforme bakterier fulgt i råmælk fra udmalkning til udfodring for kalve tildelt pasteuriseret råmælk (n=25) og og kalvens optagelse af antistoffer. fælde af diarre er forbundet med en lavere handlet råmælk. kalve tildelt ubehandlet råmælk (n=25). Den røde linje angiver det maksimalt acceptable niveau af coliforme bakterier i råmælk (7). Der er i tidligere undersøgelser ikke regi- totalydelse i 1. laktation på 344 kg energistreret nogen forskel i kalvenes tilvækst i korrigeret mælk (EKM) (15). Pasteurisering Anerkendelse de første 8 leveuger mellem kalve fodret af råmælk bør ikke erstatte god råmælksTak til Calvex A/S for at stille en colomed hhv. pasteuriseretLitteraturliste og ubehandlet management, herunder god hygiejne Quick Pasteur til rådighed for undersøgel(1) D. E. er Nokes, T. J. Parkinson under og G. C. W . England (2001): Arthur´s og Veterinary reproduction obstetrics. Philadelphia: B. råmælk (11,13). Til gengæld der registremalkning, opbevaring tildeling af senand samt til dyrlæge, ph.d.WChristine Maria 8th edition. ret en reduceret risiko Saunders. for sygdom hos s .61-‐68 råmælken. Pasteurisering af råmælk kan Røntved (CMR On-site RD) for hjælp i kalve tildelt pasteuriseret råmælk som imidlertid være et supplerende redskab til forbindelse med udarbejdelse af forsøgs(2) Godden, S. (2008): Colostrum management for dairy calves. Vet Clin Food Anim 24:19-‐39 følge af et lavere indhold af CB og en yderligere at reducere råmælkens indhold protokollen. Endelig en stor tak til besæthøjere optagelse af IgG(3) tilBielman, blodbanen (8). N.R. Perkins, af patogener, somSellers ville til An ningsejer V., J. Gillan, A. L. Skidmore, . Godden og Kvideregives . E. Leslie (2010): evaluation oRalf f Brix Sanderink, refractometry samt fodermeinstruments or m of colostrum quality Pasteurisering af råmælk ved 60 f°C i easurement 60 den nyfødte kalv.in dairy cattle. J. Dairy Science. 93: 3713-‐3721. ster Kira Andersen, for deres engagement minutter har også vist at være effektiv over og arbejdsindsats i forbindelse med (4) Quigley, J. D., A. Lago, C. Chapman, P. Erickson og J. Polo (2013): Evaluation of the Brix refractometer to estimate for en række patogener, som fx E. coli, S. Konklusion udtagning af mælkeprøver. immunoglobulin G concentration in bovine colostrum. J. Dairy Science. 96: 1148-‐1155. enteridis og M. bovis (14). Kalvesundhed er Pasteurisering af råmælk ved 60 °C i 60 (5) Wells S. J., D. A. Dargatz, S. L. Ott. (1996): Factors associated with mortality to 21 days of life in dairy heifers in the United States. Prev Vet Med: 29:9-‐19 Litteraturliste (6) Faber, S. N., N. E. Faber, T. C. McCauley og R. L. Ax (2005): Case study: Effects of colostrum ingestion on lactational Feeding heat-treated colostrum to neonatal hei(1) D. E. Nokes, T. J. Parkinson og G. C. W. England sional Animal Scientist 21: 420-425. performance. The Professional Animal Scientist 21: 420-‐425. (7) McGuirk, S M., and M. Collins (2004): Manafers: Effect on growth characteristics and blood (2001): Arthur´s Veterinary reproduction and ging the production, storage and delivery of coloparameters. J. Dairy Science 92: 3265-3273 obstetrics. Philadelphia: WB. Saunders. 8th edi(7) McGuirk, S M., and M. Collins (2004): Managing the production, storage and delivery of colostrum. Vet. Clin. North Am. strum. Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract. (12) Donahue, M., S. M. Godden, R. Bey, S. Wells, tion. s .61-68 Food Anim. Pract. 20:593-‐603. 20:593-603. J. M. Oakes, S. Sreevatsan, J. Stabel og J. Fetrow (2) Godden, S. (2008): Colostrum management (8) Godden, S. M., D. J. Smolenski, M. Donahue, (2012): Heat treatment of colostrum on commerfor dairy calves. Vet Clin Food Anim 24:19-39 J. M. Oakes, R. Bey, S. Wels, S. Sreevatsan, J. Stacial dairy farms decrease colostrum counts while (3) Bielman, V., J. Gillan, N.R. Perkins, A. L. Skidbel og J. Fetrow (2012): Heat-treated colostrum maintaining colostrum immunoglobulin G concenmore, S. Godden og K. E. Leslie (2010): An evaluaand reduced morbidity in preweaned dairy calves: trations: J. Dairy Science. 95: 2697-2702 tion of Brix refractometry instruments for measuResults of a randomized trial and examination of (13) Laursen, M. V og Sloth, K. H. (2009): Pasteurement of colostrum quality in dairy cattle. J. Dairy mechanisms of effectiveness J. Dairy Science. risering af råmælk/colostrum i drikkeklare portioScience. 93: 3713-3721. ner. Agrotech rapport www.agrotech.dk. (4) Quigley, J. D., A. Lago, C. Chapman, P. Erickson 95:4029-4040. (9) Johnson, J.L, S. M. Godden, T. Molitor, T. (14) Godden, S., S. McMartin, J. Feirtag, J. Stabel, og J. Polo (2013): Evaluation of the Brix refractoAmes og D. Hagman (2007): Effects of Feeding R. Bey, S. Goyal, L. Metzger, J. Fetrow, S. Wells og meter to estimate immunoglobulin G concentraHeat-Treated Colostrum on Passive Transfer of H. Chester-Jones (2006): Heat-treatment of tion in bovine colostrum. J. Dairy Science. 96: Immune and Nutritional Parameters in Neonatal bovine colostrum. II: Effects of heating duration 1148-1155. Dairy Calves. J. Dairy Science. 90:5189-5198 on pathogen viability and immunoglobulin G. J. (5) Wells S. J., D. A. Dargatz, S. L. Ott. (1996): (10) Elizondo-Salazar, J. A., A. J. Heinrichs (2009): Dairy Science. 89: 3476-3483. Factors associated with mortality to 21 days of life Feeding heat-treated colostrum or unheated colo(15) Svensson, C. og J. Hultgren (2008): Associain dairy heifers in the United States. Prev Vet Med: strum with two different bacterial concentrations tions between housing, management, and morbi29:9-19 to neonatal dairy calves. J. Dairy Science 92: dity during rearing and subsequent first-lactation (6) Faber, S. N., N. E. Faber, T. C. McCauley og R. 4565-4571. milk production of dairy cows in southwest L. Ax (2005): Case study: Effects of colostrum (11) Elizondo-Salazar, J. A., A. J. Heinrichs (2009): Sweeden. J. Dairy Science. 91: 1510-1518 ingestion on lactational performance. The Profes- DVT 10 2015 37
© Copyright 2024