1. No category

Användarmöte
Stockholm
November 2012
Gertrud Naess
Quality Assurance Manager
Produktansvarig ID-Systemets produkter
Spädningslösningar
till ID-systemet
• ID-Diluent-1
Enzymlösning, Bromelin
• ID-Diluent-2
Liss-lösning
• ID-CellStab, ID-CellStab W.A
Liss-lösning, förvaringslösning för erytrocyter
Enzym
ID-Diluent-1
Enzymlösning, Bromelin
Hållbarhet öppnad flaska: 6 månader
Enzym
• Sensitiv teknik med lägre specificitet än IAT
• Förhöjer sensitiviteten för vissa ag-ak reaktioner.
Rh-systemet
• Förstör vissa antigen
Fya, Fyb
M, N, S, s
Användning av Enzym i Skandinavien
Antikroppsundersökningar
• Papain är att föredra som enzym
• Bromelin används endast vid speciallaboratorium
Användning av Enzym i Skandinavien
Antigenundersökningar
• För att åstadkomma agglutination i de fall vi inte
har tillgång till IgM-antikroppar
• Förstärka reaktioner när vi söker svaga antigen
• Fya, Fyb, M, N, S och s kan inte typas
• Viktigt med Ctl-brunn.
Falskt positiva reaktioner i Enzymteknik
•
•
•
•
DAT +
Neoantigen (Anti-T)
Köldantikroppar (Anti-HI)
Kemisk påverkan på celler (Silicon)
DAT+ falskt positiva i Enzym
• Ctl innehåller samma
sak som övriga brunnar
utom antikroppar
Ctl vid ABO/RhD-gruppering
• Polyklonala antikroppar och ID-Diluent-1
• Använd alltid kort med ctl-brunn
• Falskt positiv reaktion kan leda till felgruppering
Ex Patient A RhD Neg
med svaga isoagglutininer (Anti-B)
Ej Tolkningsbar ctl pos
AB RhD pos
Ctl fenotypningar
• Patienter
Kort med ctl bör användas för att säkerställa rätt resultat
Ex Rh-feno+K+Ctl
• Blodgivare
Typas för att hitta negativa
Sällan DAT+
Ctl kan uteslutas
Fallbeskrivning Jka-typning
•
•
•
•
•
•
•
•
EQUALIS-prov testat manuellt
Jka + (2+)
Svar från EQUALIS Jka: neg
Prov omsatt i ID-GelStation Neg
Prov omsatt manuellt med susp i glasrör 2+
Prov omsatt manuellt med susp i plaströr neg
Silikonet i glasröret
Har setts med olika fabrikat av rör
Ctl och bruk av monoklonala antikroppar
och ID-Diluent-2
• Ej Falskt positiva vid DAT+
• Ej Anti-T i antiserat.
• Enda teoretiskt tänkbara
orsaken till falskt positiva
reaktioner Ospec.
köldantikroppar
VARNING
• Kontaminering från en brunn till en annan kan ge
falskt positiva reaktioner
• Detta fångas inte i ctl om det inte är just den
brunnen som drabbats
LISS
ID-Diluent-2
ID-CellStab
ID-CellStab W.A
Hållbarhet öppnad flaska: Utgångsdatum
Niss-miljö
Innehåll
•
•
•
•
NaCl med låg jonstyrka
Albumin
EDTA
Antibiotika
Trimethoprim
Sulfamethoxazol
Falskt positiva reaktioner
• Antikroppar mot co-trimoxazole
• Antikroppar mot EDTA
• Neoantigen
Fallbeskrivning
Antikroppar mot co-trimoxazole
• Pat Anti-E+K
• Morgon: MG-test neg med E-, K- Erytrocyter
Fallbeskrivning
Antikroppar mot co-trimoxazole
• Nytt prov EM Pos mot samtliga testade erytrocyter
(MG-test, Screeningceller, panelceller och egna)
• Test i rör med ”AABB-LISS”
Negativ mot E-K- erytrocyter
• Möjlig förklaring – Pat insatt på antibiotika mellan
provtagningarna
Antikroppar mot Co-trimoxasole
• Reagerar i IAT med testerytrocyterspädda i
ID-CellStab, ID-CellStab WA eller ID-Diluent-2
• Ger falskt positiv DAT om cellerna späds i
ID-CellStab, ID-CellStab WA eller ID-Diluent-2
• Ingen klinisk betydelse hos patienter
Transfusion Volume 52, April 2012 844-848
Neoantigen
• Kan blottas vid påverkan på cellerna
Bakteriepåverkan
Diskmedel
Klister från etiketter
Fallbeskrivning Neoantigen
•
•
•
•
•
ID-GelStation
Screen pos 2+ en eller flera celler
~ 20% av alla testade prov
Reproducerbart med celler från samma flaska
Negativa reaktioner med celler från förvaringsrör
Fallbeskrivning Neoantigen
• Något i flaskorna påverkar cellerna så de
reagerar med en antikropp som ca 20% av befolkningen har
• Flaskorna diskas
• Blötläggs för att lösa etikett
• Klisterrester förorenar insidan av flaskan
• Klistret påverkar cellytan så att något neoantigen
blottas.
Vilket spädningsmedium
ska man använda?
LÄS METODANVISNINGEN!!!
Fallbeskrivning P1 typning
•
•
•
•
•
•
EQUALIS-prov
Vid typning P1 neg
Svar från EQUALIS P1 positiv
Omsättning P1 neg
Kontakt med support på Labex
Felsökning – Fel spädningslösning
Vilken metod bör man välja vid
antigentypning
• Mitt förslag
• Så långt som möjligt kort med monoklonala
antikroppar och ID-Diluent-2
Mindre risk för ”strulreaktioner”
Ctl-brunnen kan i de flesta fall uteslutas
Ingen inkubering krävs
Fallbeskrivning Fyx
•
•
•
•
•
•
•
3 prov typat tidigare till Fyb pos.
Vid validering av IH-1000
Fyb neg
Dessa var Fyx
”svagt Fyb-antigen” ”variant Fyb”
Kan skiljas ut i genotypning (DNA)
Frekvens ca 7% i en Skandinavisk befolkning
Fallbeskrivning Fyx
klinisk relevans
• Typning av blodgivare till transfusion:
Fyx har inte beskrivits ge transfusions-komplikationer
till individer med Anti-Fyb
• Typning av testcellsgivare för screening:
FyaFyx kan typas felaktigt till Homozygot Fya
Svagt anti-Fya hos patienter kan missas
Fallbeskrivning DAT
• DAT Gelstation Liss/Coombs kort 2+
• DC-Screening II (IgG-C3d-ctl) neg
• DAT+ celler sfäriska tyngre än de icke sfäriska
cellerna
Fallbeskrivning DAT
• Vid centrifugering av prov hamnar de tunga cellerna i botten av
röret och de lättar överst.
• Instrument tar alltid cellerna från botten av röret.
• Vid manuell sättning tas celler från toppen av erytrocytskiktet.
• Motsvarande har setts vid ABO/RhD-typning av transfunderad
patient med microcytär anemi.
Pat blodgrupp B
Givare blodgrupp O
Anti-A kloner i gelkort
• LA-2:
ABD-confirmation for patients
ABD-confirmation for donors
ABO/D for Newborn
BAS-test AHG(Svenskt kort)
BAS-test IgG(Svenskt kort)
• A5:
Alla övriga kort innehållande Anti-A
Fallbeskrivning 1 AB
• ABO/D+Rew
A54+
G½ 4+
• ABD-conf, BAS-test
LA-2
LB-2
2+
4+
Fallbeskrivning 1 AB
• Händer ofta i vissa Batcher
• Rapporterades från flera olika blodcentraler
• Analys av logglistor från ID-GelStation gjordes
Fallbeskrivning 1 AB
• ABO/D+Rev 50741
1002 st AB resultat kontrollerade
av dessa var 27 st (2,69%) <2+ eller dp
• ABO-confirmation for donors
1197 st AB resultat kontrollerade
av dessa var 130 st (10,86%) <2+ eller dp
Fallbeskrivning 1 AB
• Prov som ”strulat” skickades till Bio-Rad
• Vissa förändringar gjordes i brunnarna med
dessa prov som ”standard”
• Andelen icke godkända grupperingar med LA2klonen är nu låg.
Fallbeskrivning 2 AB
• ABO/D+Rew
Anti-A
Anti-B
• ABD-conf
Anti-A
Anti-B
• Rör-teknik
Seraclone
DiaClon
A5
G½
1+
4+
LA-2
LB-2
4+
Anti-A
Anti-A
A003
A5
3/m.f och
1/m.f
Fallbeskrivning 2 AB
• Har setts vid flera tillfälle
• DNA-typning: A2B
• För svagt Anti-A?
• Ett prov skickades till BioRad
• Utreddes i Bern
Fallbeskrivning 2AB
•
•
•
•
Serologiska fynd bekräftas
H-typning neg vilket talar mot A2B
Bern svarar: fel i A-transferas
Mycket ovanligt
• Nytt prov kommer skickas till Bio-Rad men även
utredas i Lund
Fallbeskrivning Missat Anti-A1
• Nationell serologisk kontroll i Norge
• Prov svagt A med Anti-A1
• ID-systemet missat Anti-A1, grupp utsvarad NI
• Alla tekniker olika bra på olika typer av antikroppar
• Gel-tekniken (collon-teknikerna) är inte optimal för
IgM-antikroppar
• Troligtvis beroende på sämre blandning av
ag-ak.
Reaktioner med Anti-A och Anti-B
• A1, A2, A1B och A2B
Ske ge ≥3+ reaktion för godkänt resultat
Reaktioner ≤2+ eller dp ska verifieras
Test av A3
(Universitetskliniken i Innsbruck)
• 14 A3B
• 9 A3
• A5: 22 av 23 detekterade
• LA-2: 22 av 23 detekterade
Test av Ax
(French National Centre for Scientific Research)
• 16 Ax
• A5: 9 av 16 detekterade
• LA-2: 10 av 16 detekterade
Anti-A,B i rutintester?
• Vid bruk av humana antisera
Anti-A reagerar sämre med svaga A jämfört med
monoklonaler
Anti-AB producerad av en 0-individ
Denna antikropp reagerar bättre med svaga A-antigen
än Anti-A
Anti-AB
•
•
•
•
•
Monoklonala reagens
Mix av:
Anti-A
Birma-1
Anti-B
ES-4
Anti-AB ES-131
Anti-A,B i rutintester?
• Vid bruk av monoklonala antisera
Anti-A reagerar bättre med svaga A än humana antisera.
Anti-A,B är en mix av Anti-A, Anti-B och Anti-A,B
Reaktionerna med svaga A anses inte markant starkare
än med Anti-A
AweakB positiv reaktion med Anti-B
Vad händer om felgruppering sker
• Grupperas Aweak till 0 eller AweakB till B
Blodmottagare
Förenligt blod transfunderas
Blodgivare
Oförenligt blod kan transfunderas
Blodgivare Aweak eller AweakB som inte
reagerar med Anti-A
• De flesta A3 och Ax fångas med de Anti-A som
finns i Gelkorten
• Fångas normal i diskrepans i plasmakontrollen
• Om provet är Aweak och innehåller Anti-A1 eller
annan irreguljär IgM-antikropp kan det
• felgrupperas till grupp 0
Blodgivare Aweak eller AweakB som inte
reagerar med Anti-A
• Anti-A1 och övriga irreguljära IgM-antikroppar
reagerar dåligt i geltekniken. Antikroppen ska
vara mycket stark för att ge reaktion, detta hör
till ovanligheterna.
• Svagare A än A3 och Ax ger oftast negativa
reaktioner med Anti-A i samtliga tekniker men
även här fångas detta i plasmakontrollen.
• För att så säkert som möjligt gruppera Aweak
och AweakB bör plasmakontroll utföras mot
A1-A2-B-0 celler.
Varför plasma-kontroll med
endast A1 och B celler?
• I Skandinavien har det i geltekniken under ca 10
års tid grupperats väldigt många prover och
många av dessa har varit blodgivargrupperingar
• Inget fall av felgruppering eller
transfusionskomplikation rapporterat beroende
på missat svagt A-antigen hos blodgivare
Kliniska aspekter för missade
IgM-antikroppar
•
Blodmottagare:
• Anti -A1 -H -P1 -Le –M m.m.
• ”Kalla” antikroppar saknar i de flesta fall klinisk
betydelse
• Anses vara en fördel att inte hitta
• Inget fall beskrivet av missade kliniskt viktiga
IgM-antikroppar ex. Anti-Tja, Vel
• MG-test: Data förenlighetstest
• Om MG-test utförs för att hitta ABO-oförenlighet bör
man överväga teknik med bättre sensitivitet.
Kort med AntiHumanGlobulin
• Liss-Coombs
Anti-IgG (polyklonal, kanin)
(Kan reagera med lätta kedjan i IgM och IgA)
Anti-C3d
(Reagerar även med C3b och osplittat C3)
• Coombs IgG
Anti-IgG (polyklonal, kanin)
(Kan reagera med lätta kedjan i IgM och IgA)
• Monospecifik IgG
Anti-IgG (polyklonal, kanin)
(Reagerar endast med IgG)
Antikroppar
Liss-Coombs – Coombs IgG
• IAT
Fånga Ag-Ak-reaktion in vitro
• Om man använder serum och Liss utan EDTA kan
man få en komplementaktivering invitro med C3d
mantling och fånga den reaktionen i ett Liss-Coombskort
• Vi använder EDTA-rör och Liss med EDTA
• Komplementaktiveringen inhiberad
• Osplittat C3 kan ospecifikt mantla på erytrocyter (PEG
+ ?) och ge ”falskt” positiva reaktioner
Liss-Coombs – Coombs IgG
• DAT
• Ska spegla det som skett In Vivo
• Prov ska tas så inget händer in Vitro - EDTA-rör
• Viktigt att fånga in Vivo komplementaktivering
• Rekommenderas Liss-Coombs kort
Anti-D i QC-Basic
•
•
•
•
•
10ng/ml (0,05 IU/ml)
Council of Europe: Minigräns för en godkänd IAT
Ger i de flesta fall 2+ med R1R1 och R2R2
Monoklonal antikropp
Ej förväntad förstärkning i enzymteknik (papain)
Certificate of Quality Assurance
Certificate of Quality Assurance
• Finns nu på LABEX hemsida att ladda ner
• Fr.o.m. 1 december skickas inga papperskopior
• Fil med CQA kommer sparas hos Labex i 10 år
Certificate of Quality Assurance
Informationsbrev skickas vecka 48 till ”reagensansvariga”