מחקרים חדשים של Negda
Dr. Elizabeth E. Half דר' אליזבט הלף Head, Gastrointestinal Malignancy Unit מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול Department of Gastroenterology ותסמונות משפחתיות של סרטן Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה הדוח הסופי על ההשפעה של ® Negdaעל שורת תאים מטרת המחקר :להעריך את ההשפעה של ריכוזים שונים של ® Negdaעל תאים של סרטן המעי הגס. חומרים ושיטות: ההשפעה של ® Negdaנבדקה על ) HT-29שורת תאים של סרטן המעי הגס( באמצעות גדילה .הגדילה של התאים נקבעה באמצעות חמש שיטות שונות: .1ספירת תאים באמצעות ) FACSמיון תאים על ידי פלורסנציה( ומיקרוסקופ אור לפני ואחרי טיפול ב.Negda®- .2ערכת לקביעה קולורימטרית של קספאז ) 3מק"ט ,R&D systems ,BF3100 מיניאפוליס ,ארה"ב(; פעילות של קספאז 3מציינת שלב אפופטוטי של התאים. ) ECIS® .3חישת עכבה חשמלית של מצע התא( .לקריאת פרטים על השיטה: http://www.biophysics.com/ecis-theory.php :AlamarBlue .4מודד מטבוליזם של התאים כאינדיקציה לכושר החיים שלהם. .5צביעת אנקסין :5קביעת אפופטוזיס באמצעות .FACS ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] : Dr. Elizabeth E. Half דר' אליזבט הלף Head, Gastrointestinal Malignancy Unit מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול Department of Gastroenterology ותסמונות משפחתיות של סרטן Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה משטר מינון משקל האבקה בכמוסה הוא 0.663גרם .האבקה הומסה בדימתיל סולפוקסיד )(DMSO בכל הניסויים. טבלה :1המרכיבים של הכמוסה ויטמין D3 רימון שורש ג'ינג'ר כורכומין תה ירוק סה"כ % לטבליה0.671 gr. / 1800 200 25 250 113 588 % mg 50mg 29.80625931 3.725782414 37.25782414 16.84053651 87.63 14.90313 1.862891 18.62891 8.420268 43.82 מסקנה :ב 50-מ"ג של האבקה יש 18.62מ"ג כורכומין. טבלה :2ריכוז כורכומין במלאי העבודה מלאי 50 Negda® :מ"ג 2 /מ"ל DMSO 2000µl )18.62 mgכורכומין( DMSO 0.025272816 25272.81611 Mכורכומין µMכורכומין 368.38 g/mol ) Mwכורכומין( ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] : Dr. Elizabeth E. Half דר' אליזבט הלף Head, Gastrointestinal Malignancy Unit מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול Department of Gastroenterology ותסמונות משפחתיות של סרטן Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה טבלה :3ריכוזים שנעשה בהם שימוש נפח 0.25µl 0.5µl 1 µl 1.5 µl 3 µl 6 µl ריכוז כורכומין 6.31 µM 12.63 µM 25.27 µM 37.90 µM 75.81 µM 149.30 µM הערה :בגלל הצבע הטבעי של כורכומין ,שממסך את הקריאות של הצפיפות האופטית באמצעות ספקטרופוטומטר ושיש לו פלורוסנציה עצמית במדידת ,FACSהריכוז של ® Negdaהוגבל בטווח .6.31 µM -149.3 µMכדי להגיע לריכוז הזה 50 ,מ"ג של האבקה הומסו ב 2-מ"ל DMSOובזה השתמשו לניסויים נוספים. ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] : Dr. Elizabeth E. Half דר' אליזבט הלף Head, Gastrointestinal Malignancy Unit מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול Department of Gastroenterology ותסמונות משפחתיות של סרטן Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה ניסוי :#1ספירת תאים באמצעות FACSלפני ואחרי הטיפול התאים טופלו בשלושה מינונים שונים של ® 6ul ,3ul ,1ul :Negdaבמשך 24שעות .התאים נספרו באמצעות .FACSהיו שתי בקרות שליליות :תאים בלי טיפול )מצעים בלבד( ותאים עם DMSOבלבד. איור :1ספירת תאים בתגובה תלוית מינון לNegda®- ספירת תאי - HT‐29תגובה למינון 8.00E+05 7.00E+05 6.00E+05 4.00E+05 3.00E+05 cells/ml 5.00E+05 2.00E+05 1.00E+05 0.00E+00 DMSO Negda 135.62µl Negda 406.94µl Negda 801.44µl Media מסקנה :ספירת התאים הסרטניים קטנה כשהריכוז של ® Negdaגדל באופן תלוי מינון )ראו איור .(1 ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] : Dr. Elizabeth E. Half דר' אליזבט הלף Head, Gastrointestinal Malignancy Unit מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול Department of Gastroenterology ותסמונות משפחתיות של סרטן Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה ניסוי :#2פעילות קספאז 3 כדי לקבוע האם זה )איור (1היה תוצאה של אפופטוזיס ,נעשה שימוש בערכה קולורימטרית של פעילות קספאז 3כדי לקבוע אפופטוזיס בתאי HT-29אחרי טיפול במינונים שונים של ® 1.5µl ,1µl ,0.5µl ,0.25µl) Negdaשהיו שווי ערך ל,25.27µM ,12.6µM ,6.31µM- 37.9µMשל כורכומין( .כפעולה משלימה ,התאים גם נספרו אחרי הטיפול באמצעות מיקרוסקופ אור. ערכת לקביעה קולורימטרית -בוצע בשלושה עותקים. טבלה :4ספירת תאים באמצעות מיקרוסקופ אור אחרי הטיפול טיפול מצע Negda 0.25 µl Negda 0.5 µl Negda 1 µl Negda 1.5 µl DMSO ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 ספירת תאים P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] : Dr. Elizabeth E. Half דר' אליזבט הלף Head, Gastrointestinal Malignancy Unit מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול Department of Gastroenterology ותסמונות משפחתיות של סרטן Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה איור :2פעילות קספאז 3לתא פעילות קספאז 3 1.00E‐07 8.00E‐08 6.00E‐08 2.00E‐08 activity/cell 4.00E‐08 0.00E+00 dmso negda negda negda negda 33.87µM 67.79µM 135.64µM 203.44µM media ‐2.00E‐08 ‐4.00E‐08 מסקנה :ספירת התאים הסרטניים קטנה כשהריכוז של ® Negdaגדל באופן תלוי מינון )טבלה .(4אפשר להסביר זאת על ידי גידול באפופטוזיס כפי שמראה מחקר פעילות הקספאז ) 3איור .(2 ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] : דר' אליזבט הלף מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול ותסמונות משפחתיות של סרטן Dr. Elizabeth E. Half Head, Gastrointestinal Malignancy Unit Department of Gastroenterology Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה ניסוי :#3ההשפעה של ® Negdaעל תאי HT-29מבוצע באמצעות ®) ECISחישת עכבה חשמלית של מצע התא(. תאי סרטן המעי הגס HT-29נזרעו בריכוז של 18שעות טופלו בשני עותקים. והודגרו במשך הלילה ,ואחרי איור :3תוצאות - ECISהצבעים מייצגים את הטיפולים השונים ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] : Dr. Elizabeth E. Half דר' אליזבט הלף Head, Gastrointestinal Malignancy Unit מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול Department of Gastroenterology ותסמונות משפחתיות של סרטן Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה תיאור ותוצאות: שחור -בקרה שלילית )בלי טיפול( ,התאים ממשיכים לשגשג. ורוד ,DMSO -אחרי שהוסף DMSOהתאים נסוגו אבל אחרי 25שעות התאים חידשו את יכולתם לשגשג. אדום ותכלת .33.3µg/ml Negda® -שוב התאים התאוששו זמן קצר אחרי הטיפול. ירוק וצהוב .66.6µg/ml Negda® -צפיפות התאים קטנה. כחול ואפור .100µg/ml Negda® -צפיפות התאים קטנה בלי התאוששות. מסקנה :מדידות של התנגדות התא למוליכות ) (ECISמצביעות על צפיפות התאים. כשצפיפות התאים גדלה ,יש יותר תאים עם כושר חיים .התוצאות מצביעות על כך שהגדלת המינון של ® Negdaגרמה לקיטון בצפיפות התאים באופן תלוי מינון. ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] : Dr. Elizabeth E. Half דר' אליזבט הלף Head, Gastrointestinal Malignancy Unit מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול Department of Gastroenterology ותסמונות משפחתיות של סרטן Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה ניסוי - #4כושר חיים של תאים באמצעות AlamarBlue הניסוי הזה נערך באותו הפורמט שתואר בניסוי הקודם. איור :4אחוז כושר החיים של התאים באמצעות AlamarBlue %כושר החיים של התאים באמצעות AlamarBlue 120.00 100.00 80.00 60.00 40.00 20.00 0.00 media negda 33 mM negda 66 mM negda 100 mM dmso מסקנה :כשהמינון של ® Negdaגדל כושר החיים של התאים הסרטניים קטן. ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] : Dr. Elizabeth E. Half דר' אליזבט הלף Head, Gastrointestinal Malignancy Unit מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול Department of Gastroenterology ותסמונות משפחתיות של סרטן Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה ניסוי :#5מידת האפופטוזיס באמצעות אנקסין Vבאמצעות FACS הניסוי הזה נערך באותו הפורמט שתואר בניסוי הקודם. איור :5אנקסין Vבאמצעות FACS ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] : דר' אליזבט הלף מנהלת היחידה למניעת ממאירויות מערכת העיכול ותסמונות משפחתיות של סרטן Dr. Elizabeth E. Half Head, Gastrointestinal Malignancy Unit Department of Gastroenterology Rambam- Health Care Campus רמב"ם-הקריה הרפואית לבריאות האדם Haifa Israel חיפה תוצאות :כל נקודה בתרשים ה FACS-מייצגת תא בודד .תאים ירוקים הם תאים נורמליים לא אפופטוטיים .תאים צהובים נצבעו על ידי אנקסין ,Vכלומר אלה תאים אפופטוטיים. כפי שאפשר לראות באיור ,5ככל שהריכוז של ® Negdaעולה ,יותר תאים עוברים מהאזור הירוק לאזור הצהוב. מסקנה :האפופטוזיס גדל בטיפול באמצעות ® Negdaבאופן תלוי מינון. מסקנה סופית לגבי ההשפעה של ® Negdaעל שורת תאים של סרטן המעי הגס HT- :29מהמחקרים האלה במבחנה נראה שכשהריכוז של ® Negdaגדל ,כושר החיים והשגשוג של התאים קטן ואילו האפופטוזיס גדל בבירור באופן תלוי מינון. בברכה, ד"ר אליזבט הלף ת.ד 9602 .חיפה ,31096טל ,04-7773855 .פקס 04-8543058 P.O.B. 9602, Haifa 31096 Israel, Tel.972-4-7773855, Fax-972-48543058 דוא"ל e-mail: [email protected] :
© Copyright 2024