Klaus Riis Damgaard - Hjørring Vandselskab A/S
Component Resolved Diagnostics DSPAP 2011 Hotel Koldingfjord Kirsten Skamstrup Hansen ovl.PhD. Pædiatrisk Klinik Gentofte Allergicentret Gentofte Hospital Terminologi • Component Resolved Diagnostics (CRD) • Component based microarray • Allergen based microarray • Molecular Diagnosis Historie • 1921 Prautznitz og Küstner • Overførbar serumfaktor • 1967-69 IgE-antistof • Ishizaka, Denver, USA/Johansson, Stockholm, Sverige • 1996-97 • 3-D struktur Bet v 1 fra Birk, ALK, Hørsholm, DK • Men komponenter ’gammel’ viden • ex. betydning af mælkeproteiner Høst, Odense • 2010 de fleste ’major allergener’ karakteriserede • Sekvensbestemmelse, kloning • Rene, rekombinante proteiner • Mikroarrays Æble og birk • Prospektiv undersøgelse af reaktiviteten overfor æble før og under en pollensæson • 27 birkepollenallergikere • Fødevareprovokationer før og under pollensæson: DBPCFC + åben prov • SPT, IgE, HR, Immunoblot Fødevareprovokation æble P<0.05 • oprenset Mal d 1 fra Golden Delicious æble • Resultater Symptomscore • Symptom- og medicinregistrering Pos prov • Øget klinisk reaktivitet i pollensæson • Test med oprenset Mal d 1 svagere respons – årsag major allergen koncentration lav!!! Neg prov Før Under sæson Skamstrup Hansen K, J Crom 2001 Sensibilisering og allergi • IgE eller prik positiv = sensibilisering • Symptomer = allergi • Ingen IgE-test bedre end udgangsmaterialet • Ingen IgE-test bedre end anamnese og provokation Et allergen… • Allergen • Antigen, som kan binde IgE… • Allergenkilde • Kompleks matrix med mange antigener, både • IgE-bindende og ikke-IgE-bindende • Epitop • Aminosyresekvens på allergen, som kan binde IgE på mastcelleoverflade • Allergenekstrakt • Oprenset fra allergenkilde • ofte indeholdende flere forskellige allergenmolekyler og • forskellige isotyper af de enkelte molekyle • og andet… • Recombinante allergener/komponenter • Oprensede naturlige allergener/komponenter ISAC - microarray • 103 allergener fra 47 allergen kilder • Rene proteiner • Flest rekombinante, få naturligt oprensede • Markører i hjørner af biochip’pen • 3-dobbelt bestemmelse • 20 µl serum • Semikvantitative resultater • ISU = ISAC Standardized Unit • < 0.3 ISU til > 15 ISU ImmunoCAP ISAC ® Immuno Solid phase Allergen Chip Case cashewnød • 2 år gammel pige • Anafylaksi efter indtag af cashewnød • Birk + kryds • • • • • • • Hasselnød Hassel El Æble Fersken Ara h 8 Gly m 4 Case cashewnød • Klinik • Fødevareprovokation positiv cashew, peanut • Astma • Rhinoconjunctivitis • Blev jeg klogere af ISAC test? • Ana o 2 fra cashew negativ, men anafylaksi og pos provokation lav dosis • Svær Bet v 1 sensibilisering? • Ara h 2 svagt pos, og milde symptomer • Sand multisensibilisering • • flere allergenfamilier, flere arter, dyr, planter, mider øget risiko for blivende allergisk sygdom, fortsat astma… Fordele ved CRD • Risikomarkører • Ara h 2 peanut • Cor a 8 (LTP) hasselnød + andre LTP • Fel d 1 større risiko for astma og Fel d 1, Bet v 1, Ara h 1, 2, 3 risiko for svær astma? Von Haage M, foredrag, Stockholm, 2010 • Sensibiliseringsmønstre • Den enkelte patient • mono- eller multisensibilisering • krydsreaktivitet • specifikke determinanter korreleret til sværhedsgrad og prognose • Geografiske forskelle • pollentyper, klima • spisevaner • Antal tests måske reduceres • Ex. Bet v 1 forklarer OAS frugt, nødder Allergener • Relativt få proteinfamilier • Struktur • Funktion • Vekslende grad af krydreaktivitet • Ex. patogenesis related proteins • Ex. PR-10 ~ Bet v 1 • Relativt labile • Ex. lagerproteiner • Ex. Ara h 2 • Stabile • Ex. lipid transfer proteins • Ex. LTP fra nødder, fersken etc. • Stabile Hasselnøddeallergi i Europa • Multicenter studie • Züric, Madrid, København • Population • Hasselnøddeallergi med og uden pollenallergi (birk eller oliven) • 20 hasselnød, 20 pollen minus hasselnød og 20 raske kontroller fra hvert center • Ca 180 i alt • Metoder • DBPCFC hasselnød, åbne provokationer kontroller • IgE Phadia • Cor a 1, 2, 8, 9, 11, CCD, vicilin, bromelain + fuld ekstrakt • pollenallergen panel Hasselnøddeallergi i Europa • Resultater • Svære symptomer hyppigst i Spanien (5) mod 1 og 0 i Schweiz og DK • LTP hyppigst i Spanien, men ikke pos hos alle med svære symptomer • LTP Schweiz og DK ikke korreleret til sværhedsgrad af symptomer PR-10 LTP DK CH E Danmark Schweiz Spanien Skamstrup Hansen K et al. JACI 2009 Fordele ved CRD 2 • Adskille kliniske sygdomsenheder, samme allergen(kilde) • Ex. Hvede • fødevareallergi hvede børn -5 gliadin (Tri a 19) • food-dependent, exercise-induced anaphylaxis hvede voksne Tri aA_TI + (Tri a 19) • Specifik test før specifik behandling • Ex. Pollen • birk = Bet v 1 • græs = Phl p 1 og/eller 5 • obs Alternaria og Profilin • Ex. Insektstik Pasuoluo K, JACI 2001, 2003 Battais F, Clin Exp all 2003 Matsuo H, J Immunol 2005 Heil C, Clin Exp All 2009 Andersson K, Int Arch All Imm 2009 • bi = Api m 1 • hveps = Ves v 5 (ikke i ISAC nu) • obs CCD, hualuronidase De Graaf DC, J Proteomics 2009 Muller UR allergy 2009 Bilo BM, allergy 2009 Peanut • Ara h 1, 2, 3, 6 primær sensibilisering • • • • Ara h 8 PR-10 Ara h 9 LTP Ara h 2 vigtigste allergen, børn med peanutallergi USA > Sverige > Spanien Ara h 1-3; Ara h 9 hyppig og tidligst debut i Spanien; Ara h 8 i Sverige • Alle provokationspositive patienter positive Ara h 2 • Sensibilisering flere allergener risiko for svær reaktion • Krydsreaktivitet • Mellem major-allergenerne • Bælgfrugter, soya, lupin, mandel, paranød, (hasselnød) Nicolau N, JACI 2010 Vereda A, JACI 2010 Bindslev-Jensen C, Eller E, Allergicenteret, OUH, u-publicerede data Lewis SA, Clin Exp All 2005 Andre mulige applikationer • Kat og hund • • • • • Fel d 1, 2, 3 primær sensibilisering Can f 1, 2, 5 primær sensibilisering Fel d 2 og Can f 3 (serum albumin) kryds med andre pattedyr Fel d 2 eller Can f 3 alene og ingen symptomer ved kontakt måske kan dyrene skånes! • Latex Grönlund H, Int Arch All Immun 2009 Saarelainen S, Clin Exp Allergy 2004 • Hev b 1, 3, 5, 6 primær sensibilisering • Obs profilin (Hev b 8) og CCD Raulf-Heimsoth M, Clin Exp Allergy 2007 Pamies R, Ped Allergy Immunol 2006 …og mulige faldgruber • De forkerte patienter • Milde symptomer • Monosymptomatologi uden behov for behandling • Allergi mælk/æg før provokation af småbørn • ovomocoid dog markør for mere blivende symptomer • Forkerte allergener/komponenter • • • • Bet v 1 ikke relevant udenfor birkezonen LTP kun interessant ved vurdering af sværere symptomer Positiv IgE bi/hveps, men ingen symptomer? Vi eksponeres ikke for rene komponenter… • Fejlfortolkning af resultater • Profilin, CCD sjældent relevant i nord • Positiv bi/hveps, ingen symptomer? Lægeansvar? Overvejelser før CRD • Hvornår? • Når der er brug for mere viden om sensibiliseringsmønster • Hvorfor? • • • • Vurdere risiko for svære symptomer, også ved provokation Prognose Uforklarede reaktioner Planlægning af specifik behandling • Med hvad? • Relevante komponenter eller irrelevante… • Enkeltallergener eller ISAC • Hvem bestiller og tolker? • Kræver viden om allergener og allergensystemer • Planlagt videre udredning/behandling, - ellers henvis Konklusion • CRD giver mulighed for vurdering af • Sensibiliseringsmønstre og sammenhæng mellem allergene komponenter • Sammenhæng mellem sensibilisering og symptomer • Måske udsige noget om risiko og prognose • CRD en forudsætning for individualiseret behandling • Fare for vis fejl- og overdiagnostisering • Brug af enkeltkomponenter i forhold til arrays skal afklares Fremtid • ISAC • Flere komponenter • Flere chips, mere målrettet forskellige sygdomsenheder? • Flere kliniske studier før rutinebrug • Praktisk brugbare oplysninger eller ’aha’? • Hvilke allergenfamilier? • Hvilke symptomer? • Mere forskning: Immunologi, genetik, epigenetik • Sammenhæng mellem sensibilisering og allergi • Sammenhæng mellem eksposition, sensibilisering og allergi • Epitope mapping Tak til Laboratoriet for Medicinsk Allergologi & Allergiklinikken, RH/Gentofte Kollegerne i Zürich, Madrid, Uppsala og Langen Phadia for scanninger og tekniske oplysninger og tak for jeres opmærksomhed!
© Copyright 2024