UPC2
UltraPerformance Convergence Chromatography
Enemmän selektiivisyyttä
kromatografia-analytiikkaan
Liisa Kanner
©2012 Waters Corporation
1
Erilaiset erotustekniikat
Gas Chromatography
©2012 Waters Corporation
Liquid Chromatography
Convergence Chromatography
GC
HPLC
SFC
Capillary GC
UPLC
UPC2
2
UltraPerformance Convergence Chromatography
Convergence Chromatography on kromatografinen erotustekniikka, joka
on vaihtoehtoinen neste- tai kaasukromatografialle.
UltraPerformance Convergence Chromatography [UPC2]
Alusta asti uudelleen suunniteltu kromatografialaitteisto, jossa eluenttina
käytetään hiilidioksidia ,CO2 . Erotuksen selektiivisyys vastaa
normaalifaasierotusta, mutta sopii erinomaisesti myös
käänteisfaasitekniikaksi.
ACQUITY UPC2
Laite perustuu UPLC tekniikkaan ja mahdollistaa haastavimmatkin erotukset
luotettavasti ja nopeasti.
©2012 Waters Corporation
3
Why The Name?
Giddings, J.C. (1965) A critical evaluation of the theory of gas
chromatography. In Gas Chromatography. 1964, edited by A. Goldup, p.
3-24. Elsevier, Amsterdam
In this article Dr. Giddings stated “One of the most interesting features
of ultra high pressure gas chromatography would be convergence with
classical liquid chromatography.”
Prof. Calvin Giddings (1930-1996)
©2012 Waters Corporation
4
Näytteenkäsittely
 Useimmiten näytteenkäsittely koetaan hankalaksi ja
kalliiksi ja siitä haluttaisiin päästä niin vähällä kuin
mahdollista.
 Useimmissa näytteenkäsittely prosesseissa päädytään
orgaaniseen liuottimeen.
– neste/neste, Soxhlet, tislaus, haihdutus ja uudelleen
liuotus
 Useat matriisit vaativat orgaanisen liuottimen
(geelit, rasvat, öljyt, synteeseissä käytetyt liuottimet)
solvents, etc.)
image from dyapharma.com
©2012 Waters Corporation
image from sefetec.net
image from tasnee.com
5
Näytteeenkäsittely
SFE
Grinding
Drying
SPE
Soxhlet
Extraction
Evaporation
Distillation
©2012 Waters Corporation
Macro
Micro
Liquid / Liquid
6
UPC2
Gas Chromatography
Convergence
Chromatography
Reversed--phase LC
Reversed
pyrethroids
carbamates
STEP 1
SPE Extraction
(Florisil)
SPE Extraction
(Oasis HLB)
STEP 2
Elution in
hexane/ethyl acetate
Direct Analysis
on UPC2
STEP 3
Evaporate to dryness
Convergence
Chromatography
STEP 4
Reconstitute in
cyclohexane
STEP 5
Derivatize sample
STEP 6
©2012 Waters Corporation
Eliminate lengthy
evaporation and
reconstitution steps
Elution in methanol
Evaporate to dryness
Reconstitute in
water
Ready for analysis
No need for
derivatization
Ready for analysis
7
Kromatografiset erotustekniikat
Erotus saadaan aikaa lämpötilagradientilla
GC
•Hyvä tehokkuus [N]
• Käytännössä ei ole rajoituksia kolonnin pituuden suhteen
•Rajoittunut selektiivisyys[α]
• Vähän vaihtoehtoja stationäärifaasiksi
Gas Chromatography
Erotus saadaan aikaan liuotingradientilla
LC
•Hyvä tehokkuus[N]
• Paine rajoittavana tekijänä
• Suhteellisen hyvä selektiivisyys [α]
• Paljon erilaisia muotoja ja stationäärifaaseja: RP, NP, SEC, IEX,
affiniteetti, ionipari, HILIC, GPC…etc.
Liquid Chromatography
Erotus saadaan aikaan liuotingradientilla
CC
Convergence Chromatography
©2012 Waters Corporation
•Hyvä tehokkuus[N]
• Eluentin CO2 alhainen viskositeetti mahdollistaa pidemmät kolonnit ja
pienemmät partikkelit
•Hyvä selektiivisyys[α]
• Paljon erilaisia stationäärifaaseja ja liuotinvaihtoehtoja eluentiksi
8
Kaasukromatografian
kehitys
GC
Capillary GC
Sen jälkeen kun kapillaarikolonnit
otettiin käyttöön –luvulla, on vain
vähä tapahtunut GC maailmassa
.
Gas Chromatography
*2
*3
*1
Vain vähän kehitystä GC-tekniikassa viimeisen 30
vuoden aikana
©2012 Waters Corporation
*1: image from Restek.com
*2: image from teaching.shu.ac.uk
*3: image from soils.org
9
Nestekromatografian
kehitys
LC
UltraPerformance LC
[UPLC]
Siirtyminen UPLC-tekniikkaan 2004 on
muuttanut nestekromatografian
suorituskykyä huomattavasti,
parantaen resoluutiota, herkkyyttä ja
nopeutta
Liquid Chromatography
500,000
130,000 psi
450,000
70% more efficiency
than 1.7 µm
400,000
30,000 psi
350,000
Plates/meter
ACQUITY UPLC
I-Class
laitteisto
18,000 psi
300,000
250,000
200,000
100% more efficiency
than 3.5 µm
150,000
100,000
LC erotuksen tehokkuutta (N) on
parannettu pienentämällä
laitteistojen tilavuutta ja kolonnien
partikkelikokoa
©2012 Waters Corporation
50,000
0
5 µm
3.5 µm
1.7 µm
1.4 µm
1.0 µm
Particle Size
10
SFC:n
kehitys
SFC
UltraPerformance
Convergence Chromatography
UltraPerformance Convergence Chromatography on SFC
laitteiston ja kolonnien kehityksen tulos.
Convergence Chromatography
©2012 Waters Corporation
Data courtesy of Davy Guillarme, Jean-Luc Veuthey LCAP, University of Geneva, Switzerland
11
UPC2:n sovellettavuus
Nopeat kiraaliset erotukset
Nopeat kiraaliset erotukset
UPC²
0.48
0.3 min
 Koko analyysi prosessi on nopeampi
0.36
AU
 Eluenttien valmistukseen ja
näytteenkäsittelyyn kuluva aika on lyhyempi
0.24
 Kolonnien käyttöikä on pidempi
 Eluenttien kulutus on vähäisempää ja
käytettävät eluentit ovat edullisempia
0.12
0.00
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
Minutes
0.60
0.70
0.80
0.90
1.00
NPLC
11 min
0.30
AU
Kannattaa siirtyä UPC2
tekniikkaaan
– Tulokset vähintään yhtä hyviä kuin perinteisellä NP
kromatografialla
– Analyysiaiaka 1/30
0.00
0.00
2.00
©2012 Waters Corporation
4.00
6.00
8.00
Minutes
10.00
12.00
14.00
– Eluenttien kulutus 1/75
• 135 µL MeOH vs 10 mL heksaani/etanoli
12
UPC2:n sovellettavuus
Korvaa normaalifaasi tekniikan
Kun normaalifaasiteknologia
korvataan UPC2:llä
ACQUITY UPC²
15 min
 Eluenttien valmistukseen ja näytteenkäsittelyyn
kuluu vähemmän aikaa
Cost per run ~ $0.05
 Kolonnien käyttöikä pitenee
 Eluentikustannukset ovat huomattavasti
alhaisemmat
Kannattaa siirtyä
tekniikkaaan
0.0018
 Tulokset vähintään yhtä hyvät
0.0016
30.856
0.0020
UPC2
Normal Phase HPLC
50 min
0.0014
 Analyysiaika vähnenee ainakin 3:s osaan
0.0012
 Kustannukset per analyysi 5.89 $:sta, 5 senttiin.
Cost per run ~ $5.89
AU
0.0010
0.0008
35.819
0.0006
20.850
10.855
6.237
0.0002
26.632
0.0004
0.0000
-0.0002
-0.0004
0.00
©2012 Waters Corporation
5.00
10.00
15.00
20.00
25.00
Minutes
30.00
35.00
40.00
45.00
50.00
13
UPC2:n monipuoliset
käyttömahdollisuudet
Lääkeaineanalytiikka,
epäpuhatusmääritykset
Kemianteollisuus
Paracetamol and impurities
Non-ionic surfactants
A
B
C
D
E
F
G
H
I
Ympäristöanalytiikka
Chiral pesticides
4-hydroxyacetophenone
p-nitrophenol
2-hydroxyacetophenone
4-chloroacetanilide
acetanilide
phenacetin
3-aminophenol
paracetamol
2-aminophenol
Elitarvikeanalytiikka
Vitamin E isomers
Permethrin
©2012 Waters Corporation
14
 Perustuu UPLC tekniikkaaan
 Huomattava lisäys selektiivisyyteen
kromatografiassa
©2012 Waters Corporation
15
UPC2
 UPC2 teknologiassa voidaan hyödyntää kaikkia normaalifaasin
selektiivisyys ominaisuuksia
–
–
Ortogonaalinen käänteisfaasikromatografialle
Pääasiallinen eluentti CO2, ei juurikaan tarvita normaalifaasianalytiikassa käytettäviä
haitallisia eluentteja.
 UPC2 soveltuu monille yhdistetyypeille
–
80-85% käänteisfaasilla erotettavista yhdisteistä voidaan erottaa myös
UPC2 :lla
–
–
–
–
–
–
Jos yhdiste liukenee orgaanisenn liuottimeen, se sopii analysoitavaksi UPC2 :lla
Useimmat orgaaniset suolat
Vahvat orgaaniset hapot ja emäkset
Pienet rasvaliukoiset peptidit
Poolittomat (esim., vahat ja öljyt )
Sopii erinomaisesti isomeerien stereoisomeerien diastereomeerien ja kiraalisten
yhdisteiden erotukseen.
 Detektoreiksi sopivat:
–
UV, PDA, ELSD, CD, MS, FID
©2012 Waters Corporation
16
Mitä on superkriittinen neste
neste?
?
Lisätään
lämpötilaa ja
painetta
Neste/kaasu
Lisätään
lämpötilaa ja
painetta
Kriittinen
piste
Korkea diffuusio ja alhainen
viskositeetti josta seurauksena
nopea ja tehokas
kromatografia
©2012 Waters Corporation
Superkriitinen
neste
17
UPC2 tekniikan periaatteet
 HPLC:n kaltainen erotustekniikka
– Normaalisti nestekromatogrfaiassa käytettävä heikko eluentti (vesi) on
korvattu hiilidioksidilla CO2
 Eluenttina on superkriittinen neste + yksi tai useampia
eluenttipareja
– CO2 on yleisin superkriittinen eluentti
– Metanoli on yleisin eluenttipari
 Erotus on normaalifaasikromatografia kaltainen
Substance
Critical Temp oC
Critical
Pressure
(bar)
Comments
Carbon Dioxide
31
74
Physical state easily changed
Water
374
221
Extreme conditions needed
Methanol
240
80
Ammonia
132
111
Freon
96
49
Environmentally unfriendly
Nitrous Oxide
37
73
Oxidizing agent
©2012 Waters Corporation
Extreme temperature needed
Highly corrosive
18
Liuottimien valinta
Solvent Strength
Eluotropic
Value [Eo]
Polarity
[P’]
0
0.1
Xylene
0.22
2.5
Toluene
0.22
2.4
Diethyl ether
0.29
2.8
Dichloromethane
0.30
3.1
Chloroform
0.31
4.1
Acetone
0.43
5.1
Dioxane
0.43
4.8
THF
0.48
4.0
MTBE
0.48
2.5
Ethyl acetate
0.48
4.4
DMSO
0.50
7.2
Acetonitrile
0.52
5.8
Isopropanol
0.60
3.9
Ethanol
0.68
4.3
Methanol
0.73
5.1
Solvent
Vahva
Normaali faasi
Heikko
Supercritical
CO2
Pentane, Hexane,
Heptane
Water
©2012 Waters Corporation
Superkriittinen CO2, jota
käytetään UPC:ssä liukenee
kaikkiin eluotrooppisen sarjan
liuottimiin, minkä takia on
mahdollista käyttää laajaa
joukkoa erilaisen
selektiivisyyden omaavia
eluentteja
Normaalifaasi
UPC2
Käänteisfaasi
10.2
19
Stationäärfaasi
Selektiivisyys vaihtoehdot
Stationary Phase
Choices
Silica / BEH
2-ethylpyridine
UUPC2 kromatografia
hyödyntää sekä normaali,
että käänteisfaasi
kromatografian
kolonnikemioita, jolloin on
käytettävissä laaja
selektiivisyysalue
Cyano
Aminopropyl
Diol
Normaalifaasi
UPC2
Amide
PFP
Phenyl
Käänteisfaasi
C18 < C8
©2012 Waters Corporation
20
Selektiivisyytenn vaikuttavat työkalut
RP ja NP kromatografiassa
Eluentti
Kiinteäfaaasi
Pentane, Hexane, Heptane
Silica / BEH
Xylene
Toluene
Diethyl ether
Dichloromethane
Chloroform
Acetone
Dioxane
THF
Normaalifaasi
Huomioitava eri
liuottimiem
mahdollinen
liukenemattomuus
toisiinsa
MTBE
2-ethylpyridine
Cyano
Aminopropyl
Diol
Amide
Ethyl acetate
DMSO
PFP
Acetonitrile
Isopropanol
Käänteisfaasi
Phenyl
Ethanol
Methanol
©2012 Waters Corporation
C18 < C8
21
Selektiivisyyten vaikuttavat työkalut
UPC2 kromatografiassa
Eluentit
Kiinteäfaasi
Pentane, Hexane, Heptane
Silica / BEH
Xylene
Toluene
2-ethylpyridine
Diethyl ether
Dichloromethane
Chloroform
Acetone
Dioxane
THF
MTBE
Ethyl acetate
DMSO
Cyano
UPC2
Melkein kaikki
nestekromatorafiassa
käytetttävät
liuottimet ja
kolonnifaasit
Aminopropyl
Diol
Amide
PFP
Acetonitrile
Isopropanol
Phenyl
Ethanol
Methanol
©2012 Waters Corporation
C18 < C8
22
Selektiivisyyten vaikuttavat työkalut
UPC2 kromatografiassa
Eluentti
Pentane, Hexane,
Heptane
Kiinteäfaasi
Superkriittinen
CO2
Silica / BEH
Xylene
Diethyl ether
Dichloromethane
2-ethylpyridine
Heikko
Toluene
Cyano
Chloroform
UPC2
Acetone
Dioxane
THF
Ethyl acetate
DMSO
Acetonitrile
Vahva
MTBE
Melkein kaikki
nestekromatorafiassa
käytetttävät
liuottimet ja
kolonnifaasit
Aminopropyl
Diol
Amide
PFP
Phenyl
Isopropanol
Ethanol
Methanol
©2012 Waters Corporation
Orgaaninen
liuotin
C18 < C8
23
ACQUITY UPC2 laitteisto
laitteisto::
Enemmän selektiivisyyttä
ACQUITY UPC2 CSH Fluoro-Phenyl 1.7 µm
: CSH PFP
B
C
API
0.048
0.036
AU
0.024
D(1,2)
A
E F
G
H
0.012
0.000
: HSS C18 SB
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB 1.7 µm
0.036
B
C
D
A
AU
0.024
G
F
0.012
API
0.048
E
H
0.000
: BEH HILIC
B
0.036
AU
0.024
API
ACQUITY UPC2 Hybrid 1.7 µm
0.048
C
D
G
A
H
E
0.012
F*
0.000
: 2-EP
ACQUITY UPC2 Hybrid 2-EP 1.7 µm
B
0.036
C
D
G
AU
0.024
E
API
0.048
A
H
0.012
F
0.000
0.00
0.60
©2012 Waters Corporation
1.20
1.80
2.40
3.00
Minutes
3.60
4.20
4.80
5.40
6.00
24
UPC2 kromatografia
kromatografia::
Lisää selektiivisyyttä haastaviin erotuksiin
Stationary Phase
Superkriitinen
CO2
Heikko
Silica / BEH
Rasvaliukoiset
vitamiinit
2-ethylpyridine
% Orgaaninen
Cyano
Aminopropyl
Diol
Amide
PFP
Phenyl
Vahva
Orgaaninen
liuotin
©2012 Waters Corporation
C18 < C8
25
UPC2 kromatografia
kromatografia::
Vitamin E isomers
0.489
α-tocopherol
Rasvaliukoiset vitamiinit
1.04
 Analyysiaika nopeampi verrattuna
käänteis- ja normaalifaasierotuksin
ACQUITY UPC2 BEH
0.78
AU
0.763
γ-tocopherol
 UPC2 sopii hyvin erilaislle valmisteille
Öljypohjaisille, jauhoille ja tableteille
δ-tocopherol
 Näyte voidaan injektoida suoraan
uutttoliuoksessa
β-tocopherol
0.695
0.26
0.893
o
0.52
0.00
0.00
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB
0.70
0.60
Vitamin A
acetate
0.24
0.36
0.48
0.60
Minutes
1.00
trans-vitamin A
palmitate
retinol
0.72
0.84
0.96
1.08
1.20
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB
0.024
0.018
0.55
0.75
0.50
AU
0.012
0.45
0.40
0.006
Vitamin D3
cholecalciferol
6 .8 6 2
0.65
Vitamin A
palmitate
0.12
0.50
AU
AU
0.35
0.000
0.30
4.20 4.40 4.60 4.80 5.00 5.20 5.40 5.60 5.80 6.00 6.20 6.40 6.60 6.80 7.00 7.20 7.40 7.60 7.80 8.00 8.20 8.40 8.60 8.80 9.00
Minutes
0.25
0.20
0.25
0.15
0.10
cis-vitamin A
palmitate
0.05
0.00
Vitamin D3
cholecalciferol
0.00
-0.05
0.00
0.20
0.40
©2012 Waters Corporation
0.60
0.80
1.00
1.20
1.40 1.60
Minutes
1.80
2.00
2.20
2.40
2.60
2.80
3.00
0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00
Minutes
26
UPC2 kromatografia
kromatografia::
Lisää selektiivisyyttä haastaviin
erotuksiin
Kiinteäfaasi
Superkriittine
n CO2
Heikko
Silica / BEH
2-ethylpyridine
% Orgaaninen
Cyano
Aminopropyl
Lipidit
Diol
Amide
PFP
Phenyl
Vahva
Orgaaninen
liuotin
©2012 Waters Corporation
C18 < C8
27
UPC2 kromatografia
kromatografia::
Pooliset ja neutraalit lipidit
Neutraalit ja pooliset lipidit
 UPC2 :lla voidaan yhdellä menetelemällä erottaa eri
lipidiryhmiä, kun GC.llä ja RPLC.llä voidaan erottaa
vain yksi ryhmä kerrellaan
 Hyvä erotuskyky sekä ryhmien välille, että piikeille
ryhmän sisällä
 Selektiivinen monille biologisille uutteille
PC
TAG
PE
SM
LPC
TAG: Triacylglycerides
SM: Sphynogomyelin
©2012 Waters Corporation
PE: Phosphotidylethanolamine
LPC: Lysophosphotidylcholine
PC: Phosphotidylcholine
28
UPC2 kromatografia
kromatografia::
Neutraalit lipidit
FFA
ESI-
TAG mix
ESI+
CE mix
All mix
©2012 Waters Corporation
29
Lisää selektiivisyyttä haastaviin
erotuksiin luonnontuotteiden
analyyseissä
Kiinteäfaasi
Superkriittinen
CO2
heikko
Silica / BEH
2-ethylpyridine
% Orgaaninen
Cyano
Aminopropyl
Diol
Luonnontuotteet
Amide
PFP
Phenyl
Vahva
Orgaaninen
liuotin
©2012 Waters Corporation
C18 < C8
30
UPC2 kromatografia
kromatografia::
Luonnontuotteet
Anthemis nobilis
(kamomilla)
Kamomilla
 Luonnontuotteiden määritys on erityisen
hankalaa johtuen näytteiden
monimutkaisuudesta
 Usein tarvitaan ortogonaalinen erotus, jotta
voidaan varmistaa näytteen karakterisointi
0.20
1
 Näytteiden uuttoliuokset on injektoitavissa
sellaisenaan UPC2 kolonniin
3
AU
0.15
0.10
1. apigenin-7-O-glucoside
2. chamaemeloside
3. apigenin
2
0.05
0.00
0.00
2.20
©2012 Waters Corporation
4.40
6.60
8.80
11.00
Minutes
13.20
15.40
17.60
19.80
22.00
31
UPC2 kromatografia
kromatografia::
Luonnontuotteet
1.6x106
UPC2
MS tekniikalla analysoitu käyttäen sekä LC että
SFC tekniikkaa
Intensity
1.2x106
8.0x105
XIC of m/z=475 UPC2 tekniikalla löytyi uusi
isobaarinen komponentti
*
4.0x105
0.0
4.62
320000
5.28
5.94
6.60
7.26
7.92
Minutes
8.58
9.24
9.90
10.56
…joka puuttuu UPLC-RP kromatogrammista
UPLC
Intensity
240000
160000
80000
0
11.60 11.80
©2012 Waters Corporation
12.00
12.20
12.40
12.60
12.80
13.00
13.20
13.40
13.60
Minutes
13.80
14.00
14.20
14.40
14.60
14.80
15.00
15.20
15.40
32
Binolin kiraalinen erotus
AU
0.06
NPLC
Rs=1.67
0.04
0.02
0.00
0.0
5.0
10.0
1.00
AU
0.80
15.0
20.0
Rs=2.61
UPC2
0.60
0.40
0.20
Experimental Conditions
©2012 Waters Corporation
0.00
0.0
5.0
10.0
Minutes
15.0
20.0
33
Edut kiraalisessa UPC² erotuksessa
 BINOLin enantiomeerien erotus alle 2:n minuutin
Waters ACQUITY UPC² laitteistolla
 UPC² on 9 kertaa nopeampi kuin NPLC
 Ympäristön kannalta parempi vaihtoehto
– Ei tarvita heksaania
 Paljon pienemmät analyysikustannukset
– $2.85/analyysi NPLC :llä vs. $0.08/analyysi for UPC²:lla
o
Nopeampi
o
CO2 ja metanoli ovat halpoja liuottimia
©2012 Waters Corporation
34
Pienet partikkelit kiraalisissa
erotuksissa
 Perustuu ACQUITY laitteistoon
– UPC² systeemin tilavuus on n. 66 µL
– UPC² systeemin dispersio on n. 25 µL
2 mL/min virtauksella
Warfarin
0.48
UPC²
ACQUITY UPLC : dispersio on n.16
µL
o
Alliance :n dispersio on 40 µL
IB3 (2.1  50 mm, 3 µm)
15% methanol
0.36
3 mL/min
AU
o
120 bar
0.24
Total analysis time: 18 s
 Pienempi dispersio UPC²:lla
vähentää vyöhykkeen leviämistä
0.12
0.00
0.00
0.10
0.20
0.30
0.30
0.40
0.50
Minutes
NPLC
0.60
0.70
0.80
0.90
AD-H (4.6  150 mm, 5 µm)
 Nopeampi erotus vähentää
kustannuksia huomattavasti
70/30 hexane/ethanol
1 mL/min
AU
1.00
0.30
0.00
0.00
2.00
©2012 Waters Corporation
4.00
6.00
8.00
Minutes
10.00
12.00
14.00
35
AU
Enantiomeeri-epäpuhtauden
Enantiomeerimääritys UPC²:lla
OH
OH
O
O
(R)
0.00
0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20
Minutes
(S)
O
0.004
AU
O
R
0.20
R
S
RS=7.28
1.40 1.60 1.80 2.00
S
0.002
Benzyl Mandelate
0.000
0.00 0.20 0.40 0.60 0.80 1.00 1.20 1.40 1.60 1.80 2.00
Minutes
Analyte
Benzyl mandelate
Isomer
R-
S-
tR (min)
0.933
1.344
Std. Dev.
0.00179
0.00283
% RSD
0.23
0.21
Peak area (µV*sec)
593374
594972
Std. Dev.
2815.47
2986.23
% RSD
0.47
0.50
Retention
Peak area
©2012 Waters Corporation
36
Parempi kvantitointi
 R- ja S-benzyl mandelaatin enantiomeerit n. 1,5 minuutissa
Waters ACQUITY UPC² laitteistolla
 Erinomainen toistettavuus
– < 0.23% RSD retentiolle
– < 0.5% RSD piikin pinta-alalle
 Parempi detektointi herkkyys mahdollistaa 0.02 prosenttisen
enantiomeeri epäpuhtauden määrityksen
– Parempi pumppu
– Laite suunniteltu siten, että paineenvaihtelu on melkein olematon
– Detektorissa hyvä lämpötilakontrolli
o Vähemmän altis ympäristön lämpötilan muutoksille
– Injektioventtiili erikoisesti UPC²:een suunniteltu, koska pulssin oltava
mahdollisimman pieni
©2012 Waters Corporation
37
R, SS-methamfetamiinien erotus
UPC2 menetelmällä
 Kiraalinen erotus 5:ssä minuutissa
0.004 Rs=1.84
2
AU
1
 Huomattavasti nopeampi kuin GC
tai CE
0.000
0.00
1.00
2.00
Minutes
3.00
4.00
Optimoitu metamfetamiinin UPC2 ckromatogrammi
1: S-MA
2: R-MA
©2012 Waters Corporation
38
Methamfetamiinin ja sen
lähtöaineiden erotus
1
4
2
AU
0.002
3
 R, S-enantiomeerien ja kahden
yleisen lähtöaineen erotus 6:ssa
minuutissa.
0.000
0.00
 R/S enentiomeerisuhde antaa
arvokasta tietoa metamfetamiinin
lähtöaineista, maantieteellisestä
alkuperästä sekä valmistuksen
tasosta.
1.00
2.00
3.00
4.00
Minutes
5.00
6.00
UPC2 UV kromatogrammi
1: S-MA
2: R-MA
3: (1S,2S)-pseudoephedrine
4: (1R, 2S)-ephedrine.
©2012 Waters Corporation
39
UPC2 Sovelluksia
Pharmaceutical
Food/Env
Chemical Materials
Clinical
Chiral drugs
Transfer from USP methods
Fat-soluble vitamins
Lipid analysis
Achiral impurity analysis
Chiral pesticides
Explosives
OLEDs
Azo dyes
Non-ionic surfactants
Polymer additives
Drugs of abuse
Vitamin D metabolites
Carotenoids
Positional isomers
Steroids
Extractables and leachables
Reaction monitoring
Library screening
DMPK/Bioanalysis
Natural products
Metabolomics
Glycerides
PAH
©2012 Waters Corporation
Steroids
Lubricants
40
ACQUITY UPC² System
©2012 Waters Corporation
41
Yhteenvetona
 ACQUITY UPC2 teknologia käyttää kompressoitua hiilidioksidia (CO2)
pääasiallisena eluenttina ja sopii hyvin sekä rutiini, että monimutkaisempiin
analyyseihin, etenkin näytteisiin jonka komponentit edustavat laajaa
poolisuusaluetta .
 UPC2 tarjoaa erinomaisen työkalun perinteisten LC ja GC tekniikoiden
tilalle/rinnalle
 UPC2 tekniikka perustuu luotettavaan UPLC teknologiaan .
 UPC2 tarjoaa poikkeuksellisen paljon mahdollisuuksia selektiivisyyden
lisäämiseksi ja näin ollen se soveltuu monille erilaiselle yhdistetyypeille
–
80-85% yhdisteistä, joita analysoisaan RPLC tekniikalla voidaan analysoida
UPC2 -tekniikalla
–
Mikä tahansa yhdiste, joka liukenee orgaaniseen liuottimeen sopii
analysoitavaksi UPC2 -tekniikalla.
©2012 Waters Corporation
42
ACQUITY UPC2 System
©2012 Waters Corporation
43