ia Commons ed Kyhn, Wikim Foto Stefan Laboration Bestämning av kaseinets IP Proteiners löslighet är minst vid den isoelektriska punkten (Ip). Ip är det pH vid vilket sum man av proteinets alla laddningar är 0. Vid Ip finns inga repulsionskrafter mellan protein molekylerna, men de laddade sidokedjorna som finns kan attraheras av motsatt laddning på andra proteinmolekyler. Molekylerna kan därför attraheras till varandra och bilda stora aggregat av molekyler, dvs. proteinet fälls ut. Fällningen kan lösas igen om lösningens pH ändras. Denna upplösning sker gradvis. Ip kan därför bestämmas som det pH då fällningen är maximal. Kasein, som används vid laborationen, är det viktigaste proteinet i mjölk. I laborationen undersöker du hur utfällning av kasein varierar i lösningar av olika pH. Uppgiften är att bestämma proteinets isoelektriska punkt. Läs igenom hela beskrivningen innan du påbörjar experimentet. Säkerhet Material och kemikalier Utförande Både syra och bas är frätande, iaktta försiktighet. En riskbedömning ges av undervisande lärare. 9 provrör (ca 15 cm, väldiskade), 9 korkar (till provrören), mätpipetter eller byrett, kasein lösning 0,5 % -ig, natriumhydroxid 1 mol/dm3, ättiksyra med koncentrationerna 0,01 mol/ dm3, 0,1 mol/dm3 och 1 mol/dm3 Framställ kaseinlösningen enligt följande: 1. Lös 0,25 g kasein i ca 20 cm3 ljummet vatten och exakt 5,0 cm3 natriumhydroxidlös ning. Låt stå på omrörare. När allt har löst sig, tillsätt exakt 5,0 cm3 ättiksyra. 2. Späd därefter lösningen till 50 cm3 och justera pH till 7,0. Lösningen kan ha opalescent utseende, men får inte ha fällning! 3. Gör i ordning 9 provrör (och numrera dessa) enligt tabellen nedan, genom att pipet tera med mätpipett eller använda byrett. 4. När alla lösningar är färdiga, tillsätt 1 cm3 kaseinlösning till varje rör. Försök göra Laborationen har utarbetats av Kemilärarnas resurscentrum, 2014. Vux-projektet genomförs med stöd av Skolverket, se www.bioresurs.uu.se/Vuxenwebben tillsättningarna samtidigt. Skaka, gärna med en provrörsskak, och studera lösningarnas utseende. Notera om det bildats opalescens eller fällning. 5. Studera lösningarnas utseende igen efter 30 minuter och notera även här om det bil dats opalescens eller fällning. Skaka rören så att eventuell fällning syns bra. 6. Ange fällning (+) respektive gradera opalescens (1-3) genast, samt efter 30 minuter. Rör Lösningens pH 1 5,9 2 5,6 3 5,3 4 5,0 5 4,7 6 4,4 7 4,1 8 3,8 9 3,5 Dest vatten cm3 8,4 7,8 8,8 8,5 8,0 7,0 5,0 1,0 7,4 Ättiksyra 0,01 M cm3 0,6 1,3 - - - - - - - Ättiksyra 0,1 M cm3 - - 0,3 0,5 1,0 2,0 4,0 8,0 - Ättiksyra 1 M cm3 - - - - - - - - 1,6 Opalescens/Fällning genast Opalescens/Fällning 30 min Resultat och utvärdering Frågor att fundera över: • Varför är proteinerna svårare att fälla ut vid pH utanför Ip? • Vid Ip är proteinernas laddning 0. Vilken är laddningen i rör 2 resp. 9? • Om lösningen skulle innehålla ytterligare ett protein med Ip 4,9, skulle Isoelektrisk utfällning vara ett bra sätt att skilja proteinerna åt? Begrepp eleven ska ha förväntade kunskaper om efter laborationen: • • • • Isoelektrisk punkt = summan av proteinets alla olika laddningar är 0 Aminosyrors olika sidogrupper (deras funktionella grupper, laddningar etc) Utfällning av protein Påverkan av pH Laborationen har utarbetats av Kemilärarnas resurscentrum, 2014. Vux-projektet genomförs med stöd av Skolverket, se www.bioresurs.uu.se/Vuxenwebben