Charlotte Dahle, ANA-diskussion, ANCA och IU passar inte

PR3-ANCA och IU passar inte
ihop
Charlotte Dahle
Klinisk immunologi
Universitetssjukhuset
Linköping
Princip oavsett metod
Serum med
ANCA
Y
Y
Y
YY
YY
Y
Y
Y Y
Y
Y Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
IF-ANCA
Y Y
Blot
YY Y Y Y
ELISA
Multiplex
Detektion av PR3-ANCA
• Olika metoder ger olika resultat
Beror på vilka epitoper som
exponeras i testen
ANCA epitoper
25 epitoper
7 epitoper
4 epitoper
Diagnos
Prognos
Terapi
PR3
C-ANCA
1985
2013
Van der Woude...........................................................Roth
Proteinas 3
• PR3 – serin proteas
• Olika patienter har ak mot olika
epitoper
• Ett mönster under ett skov
• Ibland nytt mönster
vid nytt skov
Proteinas 3
PR3 - ett proteas (alpha 1
antitrypsin är inhibitor)
Alfa-1-antitrypsinbrist värre sjd vid PR3-ANCA
vaskulit
ANCA med vissa specificiteter
kan hämma enzym aktivitet
eller blockera bindning till
alfa-1-antitrypsin
ELISA
capture/sensitive eller direkt?
Monoklonala antikroppar mot PR3
PR3G-3
4A5
WGM2
WGM3
4A3
MC-PR3-2
Hz1F12
12.8
PR3G-2
6A6
PR3G-4
PR3G-6
PR3 MABs
% inhibition av
patient sera
4A5
39
6A6
11
4A5 and 4A3
22
None of the mabs
28
Sommarin 1994, Van der Geld et al. 1999
Epitopspridning under sjukdomsförlopp
At diagnosis
At relapse
Rarok et al. 2003
Vilken metod bör användas för screening?
IF eller ELISA för screening?
Epidemiologisk studie i Skåne
• Uppföljning av alla positiva ANCA-resultat
1997-2003 (analyserade vid 2 lab)
• Retrospektiv journalgenomgång för diagnos
• Lab 1 IF: 227 positiva, 29 med vaskulit
– (annan diagnosis 174, ingen diagnosis 25)
• Lab 2 ELISA: 77 positiva, 50 med vaskulit
– (annan diagnosis 16, ingen diagnosis 11)
Mohammad et al. Rheumatology (Oxford), 2007
Capture PR3-ANCA international jämförelse
Medelvärde från 6 lab, 60 patienter och 60 kontroller
Teknik
Direkt
Capture
Sensitivitet
%
64
Specificitet
%
99
74
100
Csernok Rheumatology 2004; 43:174
Vilken metod är bäst för PR3-ANCA?
• capture- eller sensitive teknik eller
motsvarande
• direkt ELISA
• IF-screening (C-/P-ANCA)
• Blot
Ingen metod är heltäckande!
Utsvarning av resultat
• PR3-ANCA besvaras i IU/ml
• CDC-reference serum (IS 2721)
• Frystorkat serum från en patient med PR3-ANCA
vaskulit dvs ak mot vissa epitoper
• Godkänd av “International standardisation
committee of autoantibodies in Rheumatic and
related disorders”
Viktigt att komma ihåg
Resultaten varierar mellan olika metoder
även om resultaten anges i IU/ml!
Bakgrund till fallbeskrivning
• Läkaren på aktuell klinik var van vid PR3-ANCAresultat från Wieslab (capture-ELISA) . Metoden
ger ofta resultat >200 IU/mL (ref <7,0)
• 50 årig kvinna utreds pga oklar njurpåverkan
• PR3-ANCA beställs. Serum skickas till ett “nytt”
rutinlab som analyserar PR3-ANCA med Phadia
sensitive teknik.
Resultat: PR3-ANCA 26 IU/mL (ref <2,0)
• Med “Wieslab ögon” är det ett lågt värde och
vaskulitmisstanken tonas ner.
• 2 veckor senare inkommer patienten akut med
lungblödningar.
• Ny provtagning och provet skickas både till
Wieslab och laboratoriet som analyserar med
Phadia sensitive teknik.
Resultat PR3-ANCA
– Wieslab: 226 IU/ml
– Phadia: 40 IU/ml
PR3-ANCA med Phadias sensitive-metod ger andra
numeriska värden än Wieslabs capture-metod
CapPR3 Wieslab vs PR3s Phadia
y = 0,3727x
R2 = 0,3604
PR3s Phadia
500
400
Serie1
300
Linjär (Serie1)
200
Linjär (Serie1)
100
0
0
100 200 300 400 500 600
CapPR3 Wieslab
CapPR3 Wieslab vs PR3s Phadia låga nivåer
y = 0,4662x
R² = 0,5121
120
100
80
60
40
20
0
Serie1
Linjär (Serie1)
0 20 40 60 80 100 120 140 160
50
PR3s Phadia
PR3s Phadia
CapPR3 Wieslab vs PR3s Phadia lågt område
y = 0,5947x
R2 = 0,146
40
30
Serie1
20
Linjär (Serie1)
10
0
0
CapPR3 Wieslab
10
20
30
CapPR3 Wieslab
40
50