FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Renal Cell Carcinoma Marker
Clone SPM314
Ready-to-Use
(Link)
Kod IR075
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik.
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Renal Cell Carcinoma Marker, Clone SPM314, Ready-to-Use, (Link), är
avsedd för användning vid immunhistokemi tillsammans med Autostainer Link-instrument. Denna antikropp är
användbar vid identifieringen av njurcellskarcinom. Den kliniska tolkningen av all färgning eller frånvaro av
färgning måste göras genom morfologiska studier, med användning av lämpliga kontroller, och måste utvärderas
av en kvalificerad patolog inom ramen för patientens anamnes och andra diagnostiska tester.
Synonym för antigen
gp200 (1)
Sammanfattning
och förklaring
Njurcellskarcinommarkören, gp200, är ett ytmembranglykoprotein beläget i borstbrämen hos pars convoluta- och
pars recta-segment i proximala njurtubuli och fokalt på den luminala ytan hos Bowmans kapsel, angränsande
utgående proximala tubuli. Uttryck bland andra normala vävnadstyper rapporteras vara begränsat till den
luminala ytan hos bröstlobuli och ducti och epididymalt tubulärt epitel. Dessutom har cytoplasmiskt uttryck
rapporterats i parenkymala bisköldkörtelceller och fokal immunreaktivitet som påträffats i kolloid i sköldkörteln.
Uttryck av RCC-markör har rapporterats i 80–93 % av primära njurcellskarcinom och i 67–84 % av fallen av
metastatiskt njurcellskarcinom från platser innefattande binjure, urinblåsa, ben, hjärna, bröst, lever, lunga,
lymfkörtel, muskel, pankreas, tunntarm, sköldkörtel och luftstrupe (1, 2). Flera publicerade studier påvisar att
majoriteten av njurcellskarcinom av klarcells- (84–92 %) och papillär typ (93–100 %) är RCC-markörpositiva, men
lägre positivitetsfrekvenser har emellertid också rapporterats (1–5). Uttryck av RCC-markör är däremot mycket
mindre frekvent i kromofobcellskarcinom (0–45 %) och endast sällsynt fokal reaktivitet har observerats i
njuronkocytom (0–14 %) (2–5).
Uttryck av RCC-markör i andra tumörer än njurcellskarcinom har rapporterats i 10/22 (45 %) intraduktala och
infiltrerande duktala karcinom i bröst och i 7/8 (88 %) in situ och infiltrerande lobulära bröstkarcinom (1, 2).
Uttryck på cellytan och cytoplasmiskt uttryck observerades i 13/13 (100 %) bisköldkörteladenom, medan fokalt
uttryck uppvisades i 4/11 (36 %) embryonala karcinom i testikel och 3/40 (8 %) epiteloida mesoteliom, där
färgningen begränsades till några få celler eller små foci hos tumören (1, 2, 5).
Se Dakos Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning eller detektionssystemets instruktioner om IHCprocedurer för: (1) Procedurprincip, (2) Material som behövs men inte medföljer, (3) Förvaring, (4) Provberedning,
(5) Färgningsprocedur, (6) Kvalitetskontroll, (7) Felsökning, (8) Tolkning av färgningen, (9) Allmänna begränsningar.
Medföljande reagens
Bruksfärdig monoklonal musantikropp levererad i flytande form i en buffert innehållande stabiliseringsprotein och
0,015 mol/L natriumazid.
Klon: SPM314 Isotyp: IgG2b, kappa
Immunogen
Mikrosomal fraktion av humant kortikalt vävnadshomogenat från njure.
Specificitet
I Western blotting av Caki-1-cellysat märker antikroppen ett band på cirka 200 kDa, motsvarande den förväntade
molekylvikten hos njurcellskarcinommarkören.
Försiktighetsåtgärder
1.
2.
3.
4.
5.
Förvaring
(119003-001)
För yrkesmässigt bruk.
Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I
produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och
kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte
metallazider ansamlas i avloppet.
I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögonen och huden.
Oanvänd lösning måste kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter.
Förvaras vid 2–8 °C. Använd inte efter utgångsdatum et tryckt på flaskan. Användaren måste validera alla
förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som tyder på
instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller analyseras samtidigt med
patientproverna. Kontakta Dako Teknisk Support om du observerar en oväntad färgning som inte kan förklaras
med variationer i laboratorieprocedurerna och om du misstänker att det är något problem med antikroppen.
307711SE_001 s. 1/3
Provberedning
inklusive material
som behövs men inte
medföljer
Antikroppen kan användas för märkning av formalinfixerade paraffininbäddade vävnadssnitt. Vävnadsprover skall
snittas i cirka 4 µm tjocka snitt.
Förbehandling med värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) krävs. Optimala resultat erhålls genom att
förbehandla vävnader med EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH (10x), (Link) (kod K8005).
Avparaffinerade snitt: Förbehandling av avparaffinerade formalinfixerade paraffininbäddade vävnadssnitt med
Dako PT Link (kod PT100/PT101) rekommenderas. Se användarhandboken för PT Link för detaljer.
Följ förbehandlingsproceduren som beskrivs i bipacksedeln för EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low
pH (10x), (Link) (kod K8005). Följande parametrar skall användas för PT Link: Förvärmningstemperatur: 65 °C,
temperatur och tid för epitopåtervinning: 97 °C i 2 0 (±1) minuter, nedkylning till 65 °C. Ta bort Auto stainerobjektglasstället med objektglas från PT Link-tanken och doppa omedelbart ned objektglasen i ett kärl/en tank
(t.ex. PT Link-sköljningsstation, kod PT109) innehållande spädd rumstempererad EnVision FLEX Wash Buffer
(10x), (Link) (kod K8002). Lämna objektglasen i tvättbufferten i 1–5 minuter.
Paraffininbäddade snitt: Som alternativ provberedning kan både avparaffinering och epitopåtervinning utföras i
PT Link med en modifierad procedur. Se användarhandboken för PT Link för anvisningar. När
färgningsproceduren är slutförd måste snitten dehydreras, klargöras och monteras med permanent
monteringsmedium.
Låt inte vävnadssnitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska
färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av
Dako Silanized Slides (kod S3003).
Färgningsprocedur
inklusive material
som behövs men inte
medföljer
Det rekommenderade visualiseringssystemet är EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (kod K8002), vilket
ersätter High pH Target Retrieval Solution från denna sats med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low
pH (10x), (Link) (kod K8005). Färgningsstegen och inkubationstiderna är förprogrammerade i programvaran för
Autostainer Link. Se användarhandboken för Dako Autostainer Link för mer information om laddning av
objektglas och reagenser. Kontakta Dako Teknisk Service om protokollen inte finns tillgängliga på Autostainerplattformen som används. Alla inkubationssteg skall utföras vid rumstemperatur.
Optimala förhållanden kan variera beroende på prov- och beredningsmetod och bör bestämmas av varje enskilt
laboratorium. Om den utvärderande patologen önskar en annan färgningsintensitet kan en
applikationsspecialist/teknisk servicespecialist från Dako kontaktas för information om omprogrammering av
protokollet. Bekräfta att prestandan för det justerade protokollet fortfarande är giltig genom att utvärdera att
färgningsmönstret är identiskt med det färgningsmönster som beskrivs i "Prestandaegenskaper".
Kontrastfärgning i hematoxylin med EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (kod K8008) rekommenderas. Ickevattenhaltigt, permanent monteringsmedium rekommenderas.
Positiva och negativa kontroller bör analyseras samtidigt med patientproverna med samma protokoll. Den
positiva kontrollvävnaden bör inkludera njure och cellerna/strukturerna bör visa reaktionsmönster som beskrivs
för denna vävnad i "Prestandaegenskaper" i alla positiva prover. Den rekommenderade negativa kontrollen är
FLEX Negative Control, Mouse, (Link) (kod IR750).
Tolkning av
färgningen
Det cellulära färgningsmönstret är membranöst. Cytoplasmisk färgning kan förekomma.
Prestandaegenskaper
Normala vävnader: Bland normala vävnader märker antikroppen den apikala ytan hos kortikalt njurtubuliepitel
(proximala tubuli) och fokala områden hos Bowmans kapsel i 3/3 njurar. Endokrina celler märktes i 2/3
bisköldkörtlar och fokalt uttryck observerades i follikulära celler och kolloid hos 1/2 sköldkörtlar. I 2/2
bröstvävnader förekom märkningen regionalt längs de luminala ytorna och i intraluminalt sekretoriskt material hos
lobuli och ducti. Ingen märkning har observerats i andra vävnadstyper som testats, inklusive binjure, benmärg,
cerebellum, cerebrum, cervix, tjocktarm, matstrupe, hjärta, lever, lunga, mesotelceller, perifer nerv, äggstock,
pankreas, hypofys, prostata, spottkörtel, skelettmuskel, hud, tunntarm, mjälte, magsäck, testikel, tymus, tonsill
och livmoder.
Referenser
1.
Yoshida S, Imam A. Monoclonal antibody to a proximal nephrogenic renal antigen: immunohistochemical
analysis of formalin-fixed, paraffin-embedded human renal cell carcinomas. Cancer Res 1989;49:1802-9.
2.
McGregor DK, Khurana KK, Cao C, Tsao CC, Ayala G, Krishnan B, et al. Diagnosing primary and metastatic
renal cell carcinoma. Am J Surg Pathol 2001;25(12):1485-92.
3.
Avery AK, Beckstead J, Renshaw AA, Corless CL. Use of antibodies to RCC and CD10 in the differential
diagnosis of renal neoplasms. Am J Surg Pathol 2000;24(2):203-10.
4.
Pan C-C, Chen PC-H, Ho, D M-T. The diagnostic utility of MOC31, BerEP4, RCC marker and CD10 in the
classification of renal cell carcinoma and renal oncocytoma: an immunohistochemical analysis of 328 cases.
Histopathol 2004;45:452-9.
5.
Ordonez NG. The diagnostic utility of immunohistochemistry in distinguishing between mesothelioma and
renal cell carcinoma: a comparative study. Human Pathol 2004;35(6):697-710.
(119003-001)
307711SE_001 s. 2/3
Utgåva 04/08
(119003-001)
307711SE_001 s. 3/3