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昭 和39年11月20日
277
組 織培 養 に よる 日本 脳 炎 ウイル スの研 究
V.二
三 の哺 乳 動物 小脳 組 織 の培 養に お け る
ウィル スの増殖 と細 胞 変 性 効果
(神戸大学医学部微生物学教 室)
堀
大
田
野
進,大
幹
山
人,彦
昭
秋
近 時,組 織 培 養 術 式 の進 歩 に伴 ない 各 種 ウ イル
ス を増 殖 せ しめ る培 養 材料 と して多 種 類 の組 織 が
用 い られ てい る が,そ
(non-nema1)の
れ らは 主 と し て 非 神 経 性
もの で あ.日 脳 ウ イル ス に つ い
て もそ の点 は同 様 で あ り,わ
26),37),48)篇)に
れ わ れ が 前 報(第
蔵
か しなが
ら,定 型 的 な 日脳 感染 が 中枢 神経 障 害 の症 状 を も
の 意 味 で 日脳 ウ イ ル ス が
宏*
磋
織 の 培 養 に お け る狂 犬 病 ウ イ ル ス の 感 染 を,そ
ぞ れ 観 察 し て い る に す ぎ な い.著
に か ん が み2,3の
れ
者 らは 以上 の 点
哺 乳動 物 の小 脳 組織 の培 養 に
日脳 ウ イ ル ス を感 染 せ し め る 実 験 を試 み た の で そ
の 成 績 を 報 告 す る こ と ゝす る.
実 験 材 料 並 び に実 験 方 法
報 告 した 成 績 も大 部分 は 非
神 経 性 組 織 に 関 す る もの で あ つ た.し
つ て特 徴 づ け られ,そ
夫,武
組 織 培 養:
供 試 組 織 は 生 後1週
以 内 の イ ヌ お よ び ネ コ,並
び に 人 工 妊 娠 中 絶 に よ つ て 娩 出 さ れ た ヒ ト胎 児 の
向 神経 性 とみ な され て い る以 上,神 経 組 織 の培 養
小 脳 皮 質 で あ つ た.別
に対 す る本 ウ イル スの親 和 性 は 当 然 検 討 され な け
約1m立
方 の 大 き さ に 細 切 し,そ
0.15mmの
カ バ ー ス リ ツ プ 上 に ほ ゞ4コ ず つ 載 せ,
れ ば な らない 問 題 で あ る.す で に川 喜 田(193910))
は ニ ワ トリ胎 児 脳 組 織 を用 い て初 め て 日脳 ウ イル
ス の培 養 に成 功 し,次 い で 島越(193919))は
マウ
出 した 組 織 を メ ス を も つ て
れ を12×15×
ヘ パ リ ン加 ニ ワ ト リ血 漿 と ニ ワ ト リ胎 児 圧 搾 液 を
も つ て 固 定 し,こ
れ を15×150mmの
試 験 管 に納 め
ン性 ヒ ト腹 水50%,ニ
ワ ト リ胎 児 圧
ス胎 児 脳 組 織 の 培 養 に お け る本 ウ イル スの 増殖 を
て 培 養 液(ガ
報告 した.し か し,そ の 際 の 病 理 組 織 学 的 所 見 に
つ い て は 未 だ 詳 細 な記 載 が ない 現 状 で あ る.
一 方 ,中 枢 神 経 組 織 の培養 手 技 自体 が最 近 急 速
搾 液5%,Gey液45%,ブ
に 進 展 し,培 養 神 経 組 織 を用 い た 研 究 が注 目 をひ
材 料 並 び に 術 式 に つ い て は 前 報(第2篇)6)の
きつ ゝあ る(た とえ ば,綜 説,中 井(195614))参
に 従 い,ま
照 の こ と).従 つ て,か
Pomerat
&
Okamoto
(1958), 15)岡本(1959)16),武
よ うな進 歩 した見 地 か らの
神 経 組 織 培 養 を利 用 して,い わ ゆ る向 神経 ウ イル
スの 感染 を老 究 す る こ とは 重要 か つ 興 味 あ る題 目
とい わ な け れ ば な らない.し か る に,こ の種 の研
究 は 今 日ま で の と ころ比 較 的 少 数 で あつ て,わ ず
か にHogueら(19553),19584))が
ヒ ト胎 児 脳 組
織 の 培 養 に対 す るポ リオ ウ イル ス の作 用 を,ま た
Fernandes
& Pomerat
(19611))が イ ヌ小 脳 組
*神 戸 大学 医学 部 解 剖 学 教 室所 属
シ リ ンG1,000u/mlよ
ドウ 糖300mg%,ペ
り成 る)2m1を
約10回 転 の 回 転 培 養 を お こ な つ た.こ
た,Lumsden
Costero
&
時
れ らの 培 養
Pomerat
(1956),
ニ
加 え,毎
記 載
(1951), 11)
18) Hild
(1957), 2)
蔵(1960)13)
ら の 報 告 を参 照 し た.
ウ イ ル ス:
第2篇
が,そ
に 記 載 し たG1株
が主 と して使 用 され た
の 他 にJATH260株,K.
に 根 岸 ウ イ ル ス(第4篇
用 い ら れ た.接
脳 乳 剤,時
Inoue株
参 照)が
種 ウ イ ル ス 材 料(主
並 び
比較 の た め併 せ
と して マ ウ ス
に ハ ム ス タ ー 腎 細 胞 培 養 液)中
に含 ま
日本 伝 染 病 学会 雑 誌
278
れ る爽 雑 物 が 培 養 細 胞 に 毒 性 を お よ ぼ す 可 能 性 を
考 慮 した 結 果,各
材 料 と も接 種 に の ぞ ん で 前 記 組
織 培 養 液 で 適 宜 に 稀 釈 さ れ た.多
剤 は10}3∼10-4,腎
の と し た.こ
くの 場 合,脳
細 胞 培 養 液 は10-1の
乳
濃度 の も
れ らの ウ イ ル ス 材 料 を 組 織 培 養 に接
種 した の ち前 報 記 述 の方 法 に従 つ て ウ イル ス増 殖
曲 線 を定 め た.
法 お よ びNissl法
実 験 で は 特 にBodian
に よ る染 色 標 本 の 検 討 に 重 点
を置 く こ とに した.そ
の 手 技 は 常 法 の そ れ と本 質
的 に 異 る と こ ろ は な い が,細
部 につ い て は組 織 培
養 標 本 の 特 殊 性 が 考 慮 さ れ た.そ
の 大 略 は下 記 の
通 りで あ る.
に 温 め たGey
ル コ ー ル で弁
色.
(5)常 法 に従 つ て ア ル コ ー ル脱 水,キ
シ ロー ル
ルサ ム封 入 をお こな う.
下 記 の ご と き対 照 培 養 が作 製 され た.
(1)ウ
イ ル ス を接 種 さ れず に培 養 され た もの.
(2)ウ
イル ス浮游 液 の代 りに健 常 マ ウ ス脳 乳 剤
また は 非 感 染 組 織 培養 液 を加 え た もの.
(3)ウ
イル ス とウ サ ギ免 疫 血 清 と を等 量 に混 じ
37℃ に1時 間,つ い で4℃ に1時 間 置 い た後,そ
以 上)継 続 して培 養 細
胞 を非特 異 的 な 変 性 に 陥 らせ た もの.
液 に て 洗 滌 す る.
これ らは い ず れ も ウ イル ス感 染 培 養 と同 一 条 件
れ をFormo1
bromide(10%ホ
水 に 臭 化 ア ン モ ン を2%の
い で80%ア
ル マ リン
下 で 上 記 の 固 定 染 色 操 作 を施 さ れ た.
割 に溶 解 す る)で12∼
ル コ ー ル で1∼2週
実験成績
間 固定
す る.
(3)水
ル コ ー ル お よび80%ア
(4)培 養 を長 期 間(3週
検 カ バ ー ス リ ツ プ を37℃
24時 間,次
(4)50%ア
の混 液 を接 種 した もの.
(A)Bodian法:
(2)こ
レジ ー ル 紫 液
対 照 試 験:
ウ イ ル ス 増 殖 曲 線 実 験 と併 行 して 培 養 組 織 の 形
態 学 的 観 察 が な さ れ た.本
第8号
(ま た は0.1%ト
ル イジ ン青 液)中 に て徐 々 に80
∼90℃ まで加 温 し,そ れ を自然 冷 却.
透 徹,バ
培 養 細 胞 の 形 態 学 的 観 察3
(1)被
(3)充 分 に水 洗 した後,1%ク
第38巻
ウイ ル ス 増殖 曲 線:
各小 脳 組織 の 培 養 に お け る供 試 ウ イル ス の増 殖
洗 後,銅
er製)液
粒 加1%プ
ロ タ ル ゴ ー ル(Bay-
の定 型 的 な 成續 は 第1,2お
中 に 浸 し37℃ に24時 間 保 つ.
(4)こ
れ を水 洗 した 後,ハ
マ リ ン(1%ハ
マ リ ン を5容
の 割 に 加 え る)で15分
に示 され
る.
イ ド ロ キ ノ ン ・ホ ル
イ ド ロ キ ノ ン液100容
よび3図
に局 方 ホル
間 処 理 ,次
い
で 充 分 に 水 洗 す る.
液 相 中 の ウ イル ス量 は接 種 後1日
で低 下 す るの
を常 とす るが,そ の後 は上 昇 して3∼7日
で最 高
に達 し,以 後 減 少 して接 種 後 約3週 間 で見 掛 け上
消 失 す るに至 る.液 相 中 の最 高 ウ イル ス力 價 は,
(5)前
記(3),(4)の 操 作 を も う一 度 く りか え す.
本 実 験 条 件 下 に お け る限 り,イ ヌ小 脳 組 織 培 養 の
(6)下
記 の 順 序 に よ り金 調 色 を お こ な う:(i)
方 が ネ コ のそ れ よ り も高 い 傾 向 を示 した.
1%塩
化 金 水 溶 液 に 約45秒,(ii)水
2%蔭
酸 液 に2分,(iv)水
硫 酸 ソ ー ダ液 に5分,(vi)水
(7)法
徹,バ
洗,(iii)
洗,(v)5%次
ウ イル ス の株 に よ り増 殖 の程 度 に若 干 の差 が認
亜
洗.
の ご と くア ル コ ー ル 脱 水,キ
シロ ー ル透
は供 試 各
小 脳 組 織 培 養 系 のい ず れ に おい て も比 較 的 良 好 に
増殖 す るに対 し,K.Inoue株
(B)Niss1法:
の増 殖 は余 り良 好
で ない とい う傾 向 が 示 さ れた.
と同 様 に カ バ ー ス リ ツ プ を洗 滌
す る.
(2)96%ア
成 續 に も一 脈
連 関 す る も の と考 え られ た.JATH株
ル サ ム 封 入 を お こ な う.
(1)Bodian法
め られた こ とは前 報(第4篇)8)の
培 養液 中 の ウ イル スは ウサ ギ 免疫 血 清 に よつ て
完全 に 中和 され,そ れ に も とず い て各 ウ イ ル ス の
ル コ ー ル に て3∼7日
間 固 定.
同定 が な さ れた.
昭 和39年11月20目
第1図
279
イ ヌ 小 脳(PupPy
cerebellum)
第3図
イ ヌ小 脳 皮 質 の培 養 にお け る ウイ ル ス増 殖 曲線
ヒ ト胎 児 小 脳(Human
bellum)
embryonic
cere-
ヒ ト胎 児 小 脳 皮 質 の 培 養 に お け る ウ イ ル ス 増 殖
曲線
(説 明 は第1図
タ テ 軸:液
相 中 の活 性 ウ イ ル ス 力 価
ヨ コ軸:培
(マ ウ ス 脳 内LD50/0.02ml)
養 期 間(日)
◎,◎,▲,(×):最
初 に接 種 され た ウ イ ル ス量
(こ れ ら の 説 明 は 第2,3図
第2図:
ネ コ 小 脳(Kitten
片 の 内部 に の み見 出 され る.小 脳 皮 質 に認 め られ
る神 経 細 胞 に はPurkinle細
細 胞(Basket
を示す
に つ い て も 同 じ)
cerebellum)
ネ コ小 脳 皮 質 の培 養 にお け る ウイ ル ス増 殖 曲線
に同 じ)
の 内Purkinle細
胞,Golgi細
胞,籠
cell),皮質 小 細 胞 な どが あ る が,こ
胞(以 下P細 胞 と略記 す る)は
數 的 に最 も多 く存 在 す る の み な らず,細 胞 自身 が
他 種 神 経 細 胞 に此 して格 段 に大 型 で比 較 的 容 易 に
同 定 され,さ よ うな点 か ら観 察 上最 も便 利 で あ る
ゆ え,本 研 究 で は検 討 の重 点 を これ に お くこ と ゝ
した.
な お本 研 究 は イ ヌ材 料 を最 も 多数 使 用 し た の
で,以 下 の記 載 は主 と して イ ヌに 関 す る もの で あ
る.ネ コ お よ び ヒ ト材 料 の所 見 は本 実 験 に 関 す る
限 り,イ ヌのそ れ と本 質 的 に異 る と ころ は な く,
補 足 的 に述 べ られ る.
(A)対
照 非感 染 培 養 の所 見;
培 養P細 胞 に 及 ぼ す ウ イル スの作 用 を論 ず るに
(説 明 は 第1図 に 同 じ)
前 報 の 記 載 と同 じ く,生 きた 細 胞 を含 まな い培
養 液 中 に37℃ に保 た れた ウ イ ル ス は48∼72時 間 後
に 見掛 け上 の 感 染 性 を完全 に喪 失 した.
さ き立 り て,対 照培 養 に お け る所 見 を充分 に 観 察
す る こ とが 必 要 で あ る.以 下,前 述 の 対 照 培 養 群
のそ れぞ れ につ い て 記 載 す る.
(1)培 養 が 良 好 に な され た 場 合 の 所 見:
形 態 学 的 観 察;
P細 胞 は樹 状 突 起 お よび神 経 突 起 を充 分 に伸 長
培 養 開始1∼2週
す る.核 お よび核 小 体 は楕 円 形 で,核 は淡 い 微 細
間 後 に原 組 織 片 の周 囲 か ら細
胞 の遊 走 ない し増 殖 が起 る.い わ ゆ る成 長 帯 は大
貧 喰 球,グ リア細 胞 お よび線 維 芽 細 胞 か ら成 つ て
い る.神 経 細 胞 は遊 走 能 力 を有 しな い た め原 組 織
顆 粒 状 を呈 し,桑 実 状 をな す こ とが多 い.
神 経 原 線 維 は核 を中心 と して クモ の 巣 様 の 細 網
構 造 を呈 し,胞 体 周 辺 部 に行 くに従 つ て や ゝ粗 大
日本 伝 染 病 学会 雑 誌
280
第8号
と な り,樹 状 突 起 の 起始 部 附 近 では連 続 的 に樹 状
た場 合),(iii)線
突 起 の 方 向 に 収 敏 して 突 起 内 部 へ 移 行 してい る.
細 胞 以 外 の エ レ メ ン トに 明 らか な変 性 の傾 向 を認
樹 状 突 起 は 充 分 に伸 長 した場 合 数 百 μ に も達
し,多 數 の小 分 枝 を出 し,お の お の末 端 は細 小 な
原 線 維 とな つ て分 散 す る.
合,な
胞 な ど神 経
初 か ら成 長 帯 の発 育 の 悪 い 場
どに おい てP細 胞 は 多少 と も形 態 的 変 化 を
呈 す る.こ れ は端 的 に い つ て 比較 的 緩徐 に進 行 す
神 経 突起 はそ れ 自体 が一 本 の太 い線 維 と して濃
染 され,培 養 組 織 片 内 を不 規 則 に蛇 行 しつ ゝ伸 長
し,そ の分 枝 數 は樹 状 突 起 の そ れ に 比 して少 数 で
あ る.神
め る場 合,(iv)最
維 芽 細 胞,Glia細
第38巻
る変 性 状 態 で あ り,以 下,便
宜 上"慢 性 変 性"と
呼 ぶ こ と ゝす る.こ れ に共 通 的 に認 め ら れ る所 見
は お ゝむ ね次 の通 りで あ る.
経 突 起 の起 始 部 は 多 くの 場合 比 較 的 細
(a)胞 体 内 お よび樹 状 突 起 内 の神 経 原 線 維 は微
く,胞 体 か ら急 に 突 出 す る形 を と り,そ の 後太 く
細 な網 状 構 造 を失 い,粗 大 な針 金 細 工 様 の形 態 に
な つ て 主幹 とな り,末 端 に 向 つ て 漸 次 繊 細 に なつ
変 化 す る.そ の鍍 銀 性 は高 ま り,黒 味 を帯 び た色
て 行 くも の で あ る.
調 を呈 す る.
Niss1染 色 に よれ ば胞 体 内 に著 明 なNiss1物
(Tigroid
substances)が
質
認 め られ る.
た ゞし こ ゝで注 意 すべ き点 は,か
(b)核
は円 形 化 す る傾 向 が あ り,核 内 の微 細 顆
粒 は 消失 す る.そ の 前段 階 で は ない か と思 わ れ る
くの ご と く培
養 さ れ た神 経 細 胞 の分 布 が あ る程 度 不 均 一 で あ る
数 コの や ゝ大 き な顆 粒(核 小 体 の數 分 の1程 度)
の散 在 を見 る こ と もあ る.核 小 体 も円形 化 す る傾
とい うこ とで あ る.す なわ ち,同
向 が み ら れ,時 にそ の表 面 が粗 とな り,金 平 糖 状
じ条 件 下 に植 込
ま れた 組 織 培 養 群 にお い て も各 培 養管,各
培養 片
に観 察 さ れ る こ と もあ る.
に よ り,ま た同 一 培 養 片 に おい て も部 位 に よつ て
(c)樹 状 突 起 は短 小 とな り,そ の分 枝 數 も減 少
神 経 細 胞 の分 布 が か な り異 るの で あ る.そ の理 由
し,極 端 な場 合 は あ た か も ヒ トデ の ご とき状 態 に
と して は,分 化 度 の高 い 神 経 細 胞 は培 養 中 に もは
な る.そ の原 線 維 構 造 は胞 体 内 の そ れ と連 続 的 で
や 分 裂 増 殖 を営 む こ とが な い ゆ え,最 初 に切 り出
あ る関 係 上,同
され た組 織 片 中 の 神経 細 胞 の 分 布 は い わ ばat
端 で急 に切 断 され た ご と く終 るか,ま た は あ た か
fandomの
ま ゝ培 養 経 過 中 もひ きつ が れ るた め で
も古 ナ ワ をほ ぐ した よ うな観 を呈 す る.
あ る莞.そ
れ と共 に,手 技 上 の 諸 条 件 が 鋭 敏 に影
(d)神 経 突 起 は,樹 状 突起 と異 な り,慢 性 変 性
響 す るた め,か な りの数 の 神 経 細 胞 が 培 養 開 始 後
の程 度 は比 較 的軽 度 で あ る.し か しな が ら,時 々
、
間 も な く死 滅 崩 壊 して 消 失 す る こ とに も よ る.
著 明 な腫 瘤 を形 成 す る こ とが あ る.こ れ は 一 旦 充
しか し多 數 の 組織 培 養 を作製 し,そ の 内 か ら良
好 に 培 養 され た もの を選 ん で観 察 す る と,前 記 の
ご とき定 型 的 なP細 胞 を認 め る こ とは さ して 困 難
でな い.
(2)対
(i)培
じ く濃 染 粗 大 とな り,そ れ らは尖
分 に再 生 した神 経 細 胞 が培 養 条 件 不 良 の た め に 成
生 した と老 え られ る もの で,神 経 突 起 主幹 部 に お
い て胞 体 よ り数 百 μ の部 分 に 生 じ,同 一 培 養 片 内
に在 る神 経 細 胞 の多 数 に同 時 に 出現 す る こ とが 多
い.
照 非感 染 神 経 細 胞 の 変性 像:
養 期 間 を長 期(3週
め た場 合,(ii)培
(3)健 常 マ ウ ス脳 乳 剤 も し くは非 感 染 組 織 培 養
以上)に
わた ら し
養 条 件 を不 良 に した 場合(培
養 液 交 換 をお こ なわ ない とか,培 養 温 度 が変 動 し
液 を加 えた 場 合,そ れ らが一 定 度 以 上 稀 釈 され て
い る限 り,培 養 神経 細 胞 に 特 殊 な変 化 を生 じ る こ
とは な か つ た.す な わ ち,上 記 の慢 性 変 性 あ るい
は後 述 の ウ イル ス感 染 に よ る変 性 豫 に類 似 す る所
*
そ の 意 味 で,神
経 細 胞 の"培
段 階 に お け る 限 り,細
と考 え る べ き で あ る.こ
養"は
胞 の"超
現 在 の技 術
生"(Uberleben)
の点 に 関 す る詳 細 の論
議 は こ ゝ で は 省 略 す る こ と ゝす る.
見 は全 く認 め られ なか つ た.
(B)ウ イ ル ス感 染 培 養 の 所見:
日脳 ウ イ ル ス に感 染 した培 養 に お け る神 経 細 胞
昭 和39年11月20日
281
第4図
第5図
第6図
第7図
第8図
第9図
日 本伝 染 病 学 会 雑 誌
282
第10図
第11図
第12図
第13図
第14図
第15図
第38卷
第8号
昭 和39年11月200
283
第16図
第18図
第20図
第17図
第19図
第21図
284
日本 伝 染 病 学 会 難 誌
第22図(a)
第22図(b)
第22図(c)
第22図(d)
第38巻
第8号
2851
昭 和39年11月20日
図
第4図2生
後3日
Bodian染
イ ヌ 小 脳,非
色,10×100.
Purkinje細
感 染,培
養14日.
説
第13図:第12図
と 同 じ.Bodian染
高 度 変 性.細
胞 の 核 は 微 細 願 粒 状 で1コ
の
色,10×100.
胞 は嗜 銀 性 の顆粒 状 物 質 の 集
団 と化 し て い る.
明 瞭 な 核 小 体 を 有 す る.胞 体 内 お よ び樹 状
突起 内 に は 微 細 網 状 の 神 経 原 線 維構 造 が
第14図:8ヵ
認 め ら れ る.細 胞 周 辺 の 円 形 物 は お そ ら く
月 ヒ ト胎 児 小 脳,非
Bodian染
色,10×100.
感 染,培
養14日.
イ ヌお よび ネ コの それ に 比 して 胞 体 は穂
グ リ ア 細 胞 の 核 と 思 わ れ る.
小 型 で あ り樹 状 突 起 も 繊 細 で あ る,し
第5図:生
後5日
ル スG1株
の.Bodian染
第15図:8ヵ
色,10×100.
軽 度 変 性.胞
月 ヒ ト胎 児 小 脳,培 養10日 目 に 日脳 ウ
イ ル スG1株
を 接 種 し3日
目に 固 定 した
体 内 の 神 経 原 線 維 構 造 は 粗雑
も の.Bodian染
と な り,一 方 核 は や ゝ膨 大 して 円 形 に 近 づ
い て い る.核
か し
基 本 的 構 造 に は 差 異 は な い.
イ ヌ小 脳,培 養10日 目 に 日 脳 ウ イ
を 接 種 し5日
目 に 固 定 した も
色,10×100.
軽 度 変 性 に 該 当 す る も の と考 え ら れ る.核
内 物 質 は や ゝ粗 大 な 顯 粒 物 と
内 物質 は粗 大顯 粒 とな り 胞 体 の 原 線 維 構
な つ て い る.
造 は 粗 雑 化 し て い る.
第6図3第5図
と同 様 の も の.
中 等 度 変 性.胞
体 は 淡 染 し,樹
状突起は
第16図:生
後5日
Bodian染
そ の基 幹 部 を残 存 す る の み で 小 分 岐 は 全
く失 わ れ て い る.核
イ ヌ小 脳,非
色,10×100.
Purkinje細
は崩壊直前の状態 と
養14日.
胞 の 神 経 突 起 主 幹 部.神
経 突,
起 は概 して直 線 的 に走 行 し 弧 状 の 屈 曲 を
考 え ら れ る.
な す か,ま
第7図:第5図
感 染,培
と 同 様 の も の.高
度 変 性,細
胞 の残
た は 角 度 を 持 つ て 折 れ 曲 る.
細 か い 蛇 行 は み ら れ な い.
骸 で あ るが 胞 体 周 囲 に 樹 状 突 起 の 痕 跡 を
認 め る.核
は 不 規 則 穎 粒 物 の 集 団 と化 し
第17図:生
て い る.
後5日
ル スG1株
イ ヌ小 脳,培 養10日 目 に 日脳 ウ イ
を 接 種 し5日
目 に固 定 した も
の.Bodian染
第8図2第4図
と 同 じ.Niss1染
色,10×100.
状 屈 曲,断
物 質(Tigroid
異 的 に変 性 に陥 つ た 神 経 突 起 に は 観 察 さ
第9図:第6図
substances)カ
れ な い 特 徴 的 な 像 で あ る.
と 同 じ.Nissl染
色,10×100.
は 失 なわ れ虎 斑 物質 は礪 漫 性
第18図3生
に 核 構造
に 胞体内に
後4日
Bodian染
ネ コ小 脳,非
色,10×100.
Purkinje細
感 染,培
ち,群
定 し た も の.Bodian染
軽 度 変 性.核
の.数
等 度 変 性.核
は崩 壊 して 願粒 状 物 質 と化
し 樹 状 突 起 は 小 分 枝 を 失 な つ て い る.
経
箇 のPurkinje細
胞 は 程 度 の差 こ
そ あ れ い ず れ も 変 性 に 陥 い っ て い る.こ れ
に 比 し,周 囲 の グ リ ァ細 胞 に は 著 変 を 認 め
な い.
維 線 構 造 の 粗 雑 化 が み ら れ る.
色,10×100.中
なわ
胞 は いず れ も
第19図:第18図
と 同 じ ロ ッ トの 培 養 に 免 疫 血 清
を 加 え な い ウイ ル ス の み を 接 種 し た も
内 物 質 の 顯 粒 化 と胞 体 内 原
定 し た も の.Bodian染
在 す るPurkinje細
突 起 は 比 較 的 直 線 的 に 走 行 す る.
色,10×100.
生 後5日
ネ コ小 脳,培
養10日 目 の も の に
日脳 ウ イ ル スG1株
を 接 種 し7日
目に 固
目 に 固 定,
非 感 染 培 養 の そ れ と 同 じ像 を 示 し,神
胞 特有 の微 細網 様 の原 線 維 構
造 が 胞 体 よ り 樹 状 突 起 内 に 連 続 的 に移 行
後5日
ネ コ 小 脳,培
養110日 目 の も の に
日 脳 ウ イ ル スG1株
を 接 種 し5日
目 に固
種 後7日
非 感 染 培 養 と 差 異 な き 所 見 を 示 す,す
養14日,
す る 状 態 が 明 確 に 観 察 さ れ る.
後5日
イ ヌ小 脳,培 養10日 目 に 抗 日脳 ウ
サ ギ 免 疫 血 清 に 混 じ た 日 脳 ウ イ ル スG1
株 を 接 種 し た も の.接
Bodian染
色,10×40.
拡 が り多 数 の 小 空 胞 が 形 成 さ れ て い る.
第12図
裂 な ど の 異 常 所 見 が 見 ら れ る.
これ らは ウイ ル ス感 染 以 外 の 原 因 で 非 特
ミ認 め ら れ
中 等 度 変 性 と考 え ら れ る も の.既
第11図:生
波
2箇 のPurkinje細
胞 が あ る.そ
の 内1箇
の 核 は 焦 点 面 外 に あ る.細
胞質 内 に 虎斑
る.
第10図:生
色,10×100.
神 経 突 起 主 幹 部 に 念 珠 様 腫 瘤 の 形 成,小
第20図:生
後7日
イ ヌ 小 脳,培
養i7日
目 よ り10日
間 培 養液 交 換 を お こ な わ ず に 培 養 を 継続
し た も の.Bodian染
色,10×100.
核 は円 形 化 し胞 体 内 の 原 線 維 構 造 は や ゝ
粗 大 で む し ろ 対 照 群 よ り濃 染 し て い る.環
286
日本 伝 染 病 学会 雑 誌
境 不 良 に よ る非 特 異 的 な 変 性 像 と 思わ れ
る が,ウ イ ル ス感 染 の 場 合 の 変 性 像 と見
掛 け上 異 っ て い る.
第38巻
第8号
ゆ く.
(3)樹 状 突 起 の 変 化
突 起 内 原 線 維 は 胞 体 内 原 線 維 と連 続 してい るの
第21図:第20図
と同 じ.
環 境 条 件 が 比 較 的 緩 徐 に 悪化 した 場 合 に
しぼ しぽ 出現 す る 神 経 突起 主幹 部 の大 型
腫 瘤 が 見 られ る.内
あ る.
第22図:培
養Purkinje細
部 は 嗜 銀 性 無構 造 で
で 両 者 の 変 化 は ほ"平 行 して進 展 す る.軽 度 変 性
の段 階 では樹 状 突 起 は小 分 枝 を失 つ て 短 小 と な
り,主 幹 部 だ け を残 存 し,そ の尖 端 が急 に切 断 さ
れ た よ うに観 察 され る.中 等 度 変性 で は この程 度
胞 の 形態 の模 式 図
(a)対 照 非 感染 像.
が 一層 進 行 す る.高 度 変 性 の段 階 に な る と,少 数
の 濃染 した樹 状 突 起 幹 の残 存 物 が放 射 状 に 配 列 す
(b)軽 度 変 性 像.
(c)中 等 度 変 性 像.
る状 態 とな る.
(d)高 度 変 性 像.
(4)神 経 突 起 の変 化:
は 前 記 対 照 非 感 染 培 養 のそ れ に全 くみ られ なか つ
感染 培 養 内 の 神 経 突 起 の全 般 的 な状 況,た
とえ
れ ら の変化は ウイ
ば そ の伸 長 度 や 分 枝 数 な どは対 照培 養 の そ れ に く
後 に す で に軽 度 なが ら明 らか に
らべ 著 しい 差 は ない.し か し,局 所 的 に検 す る と
認 識 せ られ るが,時 間 の 経 過 と共 に次 第 に 高 度 と
下 記 の ご とき特 徴 的 所 見 が 認 め られ る.こ れ らの
な り,最 後 に は 神経 細 胞 の 完全 な崩 壊 に ま で至 る
変 化 は,上 述 の胞 体,核,樹
の で あ る.以 下,便 宜 上 変 性 像 を軽 度 ,中 等 度,
高 度 の3段 階 に分 つ て論 ず る こ と ゝす る.
中等 度 な い し高 度 に な る段 階 で と りわ け著 明 とな
た 特 徴 的 な変 化 を示 した.こ
ル ス接 種2∼3日
(1)胞 体 内 に お け る変 化:
状 突 起 な どの変 性 が
る傾 向 を示 す.
(i)対
照 培 養 で は此 較 的 直 線 的 に 走 る神 経 突
神 経 原 線 維 の変 化 が最 も 目立 つ点 で あ る.軽 度
起 が感 染 培 養 で は細 かい ラセ ン状 あ るい は 波 状 と
変 性 の段 階 で は胞 体 内原 線 維 構 造 は粗 大,不 規 則
な り,と ころ どころ で あ た か も縮 れ た 毛 髪 の ご と
とな り,繊 細 な網 状 構 造 は 消 失 す る .中 等 度 変 性
で は そ の 程 度 が 進 展 し,原 線 維 の乱 れ は著 し くな
き観 を呈 す る.
る・変 性 が高 度 に な る と胞 体 は崩 壊 し,原 線 維 構
造 は 全 く認 め られ な くな る.Niss1物
質 の 分布
じる こ とが あ る.そ れ が次 々 と連 な り,そ の 結果
あた か も神 経 突 起 自体 の太 さが不 規 則 に な つ た か
お よび染 色 性 は対 照 に くらべ 著 し く 変 化 し て い
の ご と く見 られ る こ とも あ る .非 感 染 の神 経 突 起
る.
は一 般 に滑 らか な 線 維 と して 見 出 さ れ,時
(2)核
お よび核 小 体 の 変化:
(ii)感 染 培 養 の 神 経 突 起 に 不 規 則 な腫 瘤 の 生
と して
主幹 部 に大 型 の膨 隆 や末 端 部 に小 型 の 念 珠 形 成 を
軽 度 の変 性 に おい ては 核 は まだ 明瞭 で あ つ て 円
示 す こ とが あ るが,こ れ らは 感染 培 養 に お け る不
形 化 は 顯 著 で な く,核 内 に不 均 等 な数 コ の穎 粒 が
規 則 な腫 瘤 形 成 と一 見 して 明 白 に 区 別 せ られ る も
出 現 す る.核 小 体 には さ して著 しい 変 化 は認 め ら
の で あ る.
れ な い.中 等 度 変 性 の 場 合 は 核 は 崩 壊 し数 コ ない
し十 数 コの 粗 大,不
り,核
規 則 な穎 粒 状 物 の集 合 と な
小 体 も崩 壊 し,上
(iii)感 染 培 養 に お け る神 経 突 起 の主 幹 部 に は
しば しば縦 あ るい は横 の方 向 の 断裂 が み られ る.
述 の顯 粒 状 物 と混 在 す
そ のた め神 経 突 起 は濃 淡 不 定 の数 本 の線 維 の集 合
る.こ の状 態 は比 較 的長 く持 続 し,高 度 変 性 の 結
の ご と き観 を呈 した り,あ るい は破 線 状 に見 え た
果 胞 体 成 分 が ほ とん ど消 失 した後 も残 存 す る こ と
りす る.
が 少 くない.む
しろ か よ うな穎 粒 状 物 か ら,そ の
以 上 の 変性 像 は,免 疫 血 清 と混 じた ウ イル ス を
部 位 にか つ て 核 の 存 在 した こ と を推 定 す る こ とが
接 種 した 揚合 に は全 く現 わ れ な か つ た.従
可 能 で あ る.し か し,こ れ も窮 極 的 に は消 失 して
この 変 性 は ウ イル ス に よつ て 特 異 的 にひ きお こ さ
つ て,
287
昭 和39年11月20日
高 度 に分 化 した神 経 細 胞 の培 養 には 種 々 の 困難
れ た もの と到 定 す る こ とが出 来 た.
供 試 動 物 の種 あ るい は ウ イル ス の株 に よつ てP
が 伴 うゆ え,成 績 の均 一 性 再 現 性 を期 す る た め諸
細 胞 の 変 性 に相 違 が あ る か否 か,と い う点 に つ い
種 の要 因 を可 及 的 厳 密 に老 慮 す る必 要 が あつ た.
て は,本 研 究 の範 囲 内 に 関 す る限 り本 質 的 な 差異
本 研 究 では 特 に下 記 の 点 に 注 意 が 払 わ れ た.
は ない も の と考 え られ た.し か し一 方,変 性 の量
(1)可
能 なか ぎ り新 鮮 な材料 を用 い,か つ 培
的 な強 弱 も し くは出 現 様 式 に若 干 の微 妙 な差 異 の
養操 作 に要 す る時 間 を出 来 るだ け短 縮 して 非 特 異
あ る こ とも否 定 し得 な かつ た.特 に イ ヌ,ネ コ の
的 な影 響 を極 力 除 くよ うに した.
小 脳 組 織 に つい て,根 岸 ウ イル ス に よ るP細 胞 の
変 性 が 日脳 ウ イル ス(G1株
お よ びJATH株)
(2)ウ
イル ス接 種 あ るい は 固定 染 色 に先 立 つ
て カ バ ー ス リ ヅプ上 の培 養 組 織 片 をル ー ペ で丁寧
に よ るそ れ よ りも激 甚 で あ り,経 過 も急 速 で あ る
に検 し,成 長 帯 の 良好 に発 育 した培 養 片 の み を選
傾 向が 認 め られ た.
揮 した.
神 経 細 胞 以外 の エ レメ ン ト,た とえ ば グ リア細
(3)ウ
イル ス感 染 並 び に対 照非 感 染 の 培 養 を
胞,線 維 芽 細 胞,大 貧 喰 球 な どに ウ イル ス感 染 に
な るべ く多 数 に作 製 す る と と もに,そ れ ら を出来
伴 う特 異 的 な変 性 が 出現 す るか 否 か,と い う問 題
る だ け同 一 条 件 下 に処 理 して両 者 の所 見 を綜 合 的
に つい て は現 在 の とこ ろ確 実 な結論 を 得 て い な
に対 比 した.
い.し
か しあ る種 の変 化 の観 察 され る こ とは 否定
神 経 細 胞 培 養 の成 否 を左 右 す る重 要 な 因子 の1
出 来 ない よ うで あ り,今 後 検 討 を進 め る必 要 が あ
つ は 出 発 材 料 の幼 若 度 で あ る が,本 実 験 に供 試 し
る.
た 組 織 は この点 で は問 題 が な か つ た ・わ れ わ れ の
対 照 非 感染 お よび ウ イル ス感 染Purkinje細
胞
の定 型 的 所 見 を第4∼17図 に示 す.免 疫 血 清 に よ
経 験 した 限 り,ヒ
る変 性 抑 制 の模 様 は第18お よび19図 に,ま た 非 特
得 る こ とに は成 功 しな かつ た.
異 的 な慢 性 変 性 像 の例 は第20,21図
にそれぞれ示
ト,サ ル,イ
ヌ,ネ コ の い ず れ
につ い て も成 熟 体 の脳 組 織 か ら神 経 細 胞 の培 養 を
これ らの材 料 を使 用 して まず ウ イル ス増 殖 曲線
され る通 りで あ る.な お,感 染 経 過 の概 略 を模 式
実 験 をお こなつ た 成 績 は,前 報(第4篇)8)と
1的に あ らわ す と第22図a,b,c,dの
様 に,ウ
考
ご と く とな る.
察
同
イル ス の株 に よつ て か な りの差 異 を示 し
た.特 にJATH株
が ヒ トお よび イ ヌの小 脳 組 織
本 研 究 の 目的 は,い わ ゆ る 向神 経 性 ウ イル ス の
一 種 で あ る 日脳 ウ イ ル スお よびそ れ に 関連 す る根
の 培 養 で比 較 的 良 好 な増 殖 を営 ん だ が,こ れ に反
岸 ウ イル スの 神 経 組 織 培 養 に対 す る親 和 性 を検 討
よ うな ウ イ ル スの 株 に よ る増 殖 曲線 の相 異 に関 す
す る こ とに あつ た.す
なわ ち,培 養 神 経 組 織 に お
しK.Inoue株
の 増 殖 は 余 り良 好 で な か つ た.か
る意義 は 前 報 でや ゝくわ し く老 察 したゆ え ・ こ ゝ
け るウ イ ル スの 増 殖 を し らべ る と と もに,出 現 し
で は これ 以 上 に 触 れ ない.大
得 べ き形 態 学 的 変 化 を特 にPurkinje細
数 の 日脳 ウ イル ス株 の マ ウ ス病 原 性 を此 較 した 結
胞 を中心
と して 追 求 した の で あ る.
果,ウ
供 試 組 織 は生 後1週 以 内 の イ ヌお よび ネ コ,並
び に ヒ ト胎 児 の小 脳 皮 質 で あつ た.イ
ヌ,ネ コ を
選 ん だ理 由 は,こ れ らが系 統 発 生 的 に ヒ トに此 較
的 近 い こ と,そ の 神 経 細 胞 の組 織 培 養 学 的 知 見 が
谷(1963)17)は
多
イル スの マ ウ ス脳 内 増 殖 性 に差 の あ る こ と
を明 らか に して い る.そ の 成 績 と著 者 らが こ ゝに
得 た 神経 組織 培養 に お け る成 績 とが 関 連 す るか 否
か の 問題 は将 来 検 討 の 必要 が あろ う と思 わ れ る.
次 に,以 上 の ご と くウ イル スに 感染 した 培 養 組
あ る程 度 明 らか に され て い る こ とな どに よ る もの
織 に お い て毎 常 一定 の 変 化 がPurkinle細
で あ つ た.ヒ
う まで も
め られ た.前 述 した よ うに,培 養 神 経細 胞 の 所 見
な く日脳 ウ イル ス を ヒ ト病 原性 の もの と してi理解
の解 釈 は慎 重 で な け れ ば な らな い が,そ の 点 を充
した い た め で あ る.
分 に 老慮 した上 でな お か つ 感 染 細 胞 に み られ る変
ト組織 を用 い た理 由 は,い
胞 に認
288
日本 伝 染 病 学会 雑 誌
化 は有 意 で あ る と到 定 され た.さ
らに,免 疫 血 清
第38巻
第8号
胞 を変 性 に 陥 らせ る とい う可能 性 も想 定 され る.
と混 じた ウ イル ス に よつ て は 惹 起 され な い こ とか
これ らの 点 は ウ イル スの感 染 とい う見 地 か らの み
ら,か
ゝる変 化 は ウ ィル ス感染 に伴 う特 異 的 な も
な らず,神 経 組 織 の機 能 とい う観 点 か らも重 要 な
の と結 論 され た.従 つ て これ は 日脳 ウ イ ル スに よ
問題 で あ り,将 来 さ ら に深 く追 求 さ るべ き こ とが
る一 種 の細 胞 変 性効 果(CPE)と
らで あ る.
み るべ きで あ
る.
最 後 にわ れわ れ は培 養 イ ヌ神 経 細 胞 の変 性 か ら
こ の事 実 の もつ 意 義 の一 つ は,日 脳 ウ イル ス の
類 推 して,イ
ヌ脳 内 に直 接 日脳 ウ イル ス を接 種 す
感 染 を生 体 外 の神 経 細 胞 の レベ ル で追 求 す る手 段
る実 験 を試 み た.イ
が 与 え られ た とい う こ とで あ ろ う.今 後 は,単 に
い て は笠 原 ら(1936),9)三
本 研 究 で採 用 され た観 察 方 法 の み で な く,各 種 特
ら(1956)20)の
殊 染 色 法,螢 光 抗 体 法,電 子 顯 微 鏡 観 察 な ど諸 技
性 成 績 も報告 され て お り,な お 検 討 の 余 地 が あ る
術 を併 行 的 に適 用 して研 究 を進 め るべ き で あ る.
もの と老 え られ た.著 者 らの 実 験 成 績 に よれ ば,
これ に 関連 して な お次 の 点 を考 慮 す る必 要 が あ
る.第1に,ウ
イル ス の 種 類 ない し株 に よつ て
ヌの 日脳 ウ イル ス感 受性 に つ
田村 ら(1938),12)戸 田
感 染 陽 性 成 績 が あ るが,一 方,陰
日脳 ウ イ ル ス を脳 内注 射 された 幼 若 イ ヌが高 率 に
特 異 な麻 痺 症 状 を発 す る こ と,そ の脳 内 で ウ イル
神 経 細 胞 侵 襲 に質 的 あ るい は 量 的 の 差 異 が あ る
スが 増 殖 す る こ と,お
か 否 か とい う こ と で あ る.こ
徴 的 な変 性 像 が認 め られ る こ とな どが 示 さ れ た
の こ とは,ウ
ス の 向 神1経性(Neurotropism)な
(Neurovirulemce),よ
(Neuromoviruleme)の
に な るか も しれ ない.今
る限 り,Purkinle細
い し神 経 毒性
り 厳 密 に い え ば,向
細 胞 性(Neuromtropism)な
イル
神経
い し神 経 細 胞 毒性
(Hottaら,1964).5)こ
の こ とは,組 織 培 養 の成
績 が 生 体 の成 績 に直 接 結 び つい た1例
とみ る こ と
も出 来 る.さ よ うな意 味 で,日 脳 ウ イル スの感 染
一 側 面 に光 を 投 げ る こ と
機 作 を生 体 内 と生 体 外 の両 面 か ら併 行 的 に追 求 す
回 の実 験 の範 囲 内 に お け
る上 に幼 若 イ ヌお よび そ の 神経 組織 の 培 養 が 用 う
べ き手 段 の1つ で あろ う と老 え られ る.
胞 の変 性 像 は供 試 各 材料 の
間 で本 質 的 に ほ ぐ同様 の もの と考 え られ た が,一
方,相 互 に微 妙 な差 異 の存 す る こ と も否 定 出 来 な
か つ た.全 般 的 に み て,根 岸 ウ イル スの 培 養 神 経
細 胞 に対 す る侵 襲 は 日脳 ウ イル スの そ れ よ りも強
度 で あ る傾 向 が うか"わ れ た.も
と,培 養 神 経 細 胞(特
よび感 染 イ ヌ脳 組織 に 特
しそ うだ とす る
に1ヒ トの そ れ)に 対 す る親
結
論
(1)ヒ ト,イ ヌ,ネ コ の小 脳 皮 質 を培 養iし,
Purkinje細 胞 を主 とす る神 経 細 胞 の培 養 を得 た.
(2)こ
れ に マ ウ ス通 過 日脳 ウ イ ル ス(G1株,
JATH260株,
K.Inoue株)お
よび 根 岸 ウ イ
ル ス を接 種 して ウ イ ル ス増 殖 曲線 実 験 を お こ な
和 性 を もつ て ヒ ト病 原 性 ウ イル ス の"向 神 経 性"
い,い ず れ の 場 合 に もウ イル ス の 増 殖 を 証 明 し
を推 定 す る こ とは あ なが ち不 可能 で ない こ とに も
た.た"し
な り,さ よ うな推 論 の 可 否 は さ ら に検 討 の償 値 が
は 供 試 ウ イル ス株 の間 で有 意 の差 を示 した.さ
あ る と思 わ れ る.
第2に,"ウ
イ ル スの 見掛 け上 の増 殖"と"神
経 細 胞 の 変性 の程 度"と の 関 係 のい か ん で あ る.
培 養液 相 中 の活 性 ウ イル ス の最 高 力 償
よ
うな意 味 で,日 脳 ウ イル ス の 神経 組 織 培 養 に 対 す
る親 和 性 は株 に よつ て か な り相 違 す る こ とが 知 ら
れ た.組 織 の種 類 に つ い て は,本 実 験 条 件 下 に関
この 両 者 が 平 行 す る揚 合 と,平 行 しない 場 合 とが
す る限 り,イ ヌ小 脳 組 織 に お け る各 種 ウ イ ル ス の
考 え られ る.平 行 しない 揚 合 の 内 に は,ウ イル ス
の 見掛 け上 の増 殖 が良 好 で あ るに か ゝわ らず 神 経
増 殖 が ネコ の そ れ よ りも此較 的 高 い,と い う傾 向
細 胞 の 変 性 が あ ま り強 度 で ない とい う例 も あ り得
る で あ ろ う.さ よ うな 場合,ウ
イル ス は まず 神経
細 胞 以 外 の細 胞 で増 殖 し,つ い で 二次 的 に 神 経 細
が認 め られ た.
(3)ウ
イル ス を接 種 さ れた 培 養 組 織 に お い て,
Purkinle細
胞 は特 徴 的 な変 性 像 を示 した.と
わ けBodian鍍
り
銀 法 に よ る所 見 の概 略 は次 の通 り
昭 和39年11月20日
289
で あつ た.
(i)胞
6)
体 内神 経 凍 線 維 は粗 大 とな り,そ の 配
れ ら の変 化 は感 染 経 過 の進 行 と とも にそ の程 度 を
7)
(ii)樹 状 突 起 は小 分 枝 を失 い,樹 状 突 起 内 の
神 経 原 線 維 は胞 体 内 のそ れ と同 じ経 過 をた どつ て
8)
変 化 す る.
(iii)神 経 突 起 はそ の 主幹 部 に不 規 則 な膨 隆 あ
な お,Nissl染
色 に よ れ ば,胞 体 内Niss1物
質
ル ス以 外 の要 因,特 に培 養 条 件 の不 利 に よつ て惹
起 され た変 化 とは 明 らか に 区別 され ,ま た,ウ イ
ル ス に免 疫 血 清 を添 加 す る こ とに よつ てそ の出 現
が 麹 制 さ れ る事 実 か ら,ウ イル ス感 染 に伴 う特 異
的 な現 象 と到 定 され た.
(4)以 上 の成 績 に 関 しウ イル ス学 的,神 経 病 理
学 的 考 察 の 二,三 を加 え た.
2)
3)
4)
5)
に よ る各
応 に つ い て, 日伝 染 会 誌 , 37:
369-377,
1964,
堀 田 進, 大 山 昭 夫 , 広 瀬 長 敏, 大 野 幹 人:
組
織 培 養 に よ る 日本 脳 炎 ウ イ ル ス の 研 究, IV ヒ ト
38,
10)
124-132,
笠 原 四 郎,
田 良 三,
現 す る こ とが認 め られ た.こ れ らの 変性 像 は ウ イ
1)
血 漿 包埋 チ ェ ー ブ培 養 法
種 組 織 の 培 養 に お け る ウ イ ル ス の 増 殖 , 日伝
染 会 誌, 37:
335-342,
1963.
堀 田 進, 大 山 昭 夫, 竹 原 学 , 青 木 英 夫: 組 織 培
養 に よ る 日本 脳 炎 ウ イ ル ス の 研 究. IIIト リ プ シ
ン処 理単 層 細 胞 培 養 を用 い た一 二 の 検 討
,特 に
無 血 清培 養液 に よ る培 養 並 び に 赤 血 球 吸着 反
会 誌,
9)
が減 少 あ るい は消 失 し,胞 体 内 に異 常 な空 胞 の出
文
献
Fernandes, M. V. & Pomerat, C. M
Cytopathogenic effects of rabies virus on nervous tissue in vitro. Z. Zellforsch., 53: 431
437, 1961.
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Observations
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Hogue, M. J., Mc Allister, R., Greene, A. E.
& Coriell, L.L.: The effect of poliomyelitis virus on human brain cells in tissue
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Hogue, M.J., Mc Allister, R., Greene, A. E.
& Coriell, L. L.: A comparative study of the
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and 3 on human brain cells grown in tissue
culture. Am. J. Hyg., 67: 267-275, 1958 .
Hotta, S., Kuromaru,
S., Funasaka,
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Mizoguti, H.:
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石 井 信 享 , 藤 田 宣 哉,
坂
組 織 培 養 に よ る 日本 脳 炎 ウイ ル ス の
組 織 の培 養 にお け る ウ イル ス増 殖 曲線
るい は念 珠 形 成 を示 し,ま た縮 毛 状 ない し破 線 状
の走 行 異 常 を呈 す る.
大 山 昭 夫,
研 究II,
列 は乱 れ,核 は粗 大 な顯 粒 状 物 質 を含 有 す る.こ
増 強 し,つ い に は胞 体 お よび核 は 完全 に 崩 壊 す る
に 至 る.
堀 田 進,
本 辰 雄:
上 田 守 長,
河 野 通 俊:
日伝 染
1964,
岡 本 豊 , 浜 野 麓 一 郎, 山
流行性脳炎の実験的研究
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12)
三 田 村 篤 四 郎, 大 久 保 薫 , 北 岡 正 見:
日本流
行 性 脳 炎 病 毒 に 感 受性 を 有 す る 動 物種 に っ い
て,
13)
14)
仔 犬 及 び 養 狐 に 於 け る 実 験,
東 京 医 事新
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1097-1099,
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武 蔵 宏: 神 経 細 胞 の 組 織 培 養 ,
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1-28,
1960.
中 井 準 之 助: 神 経 組 織 の 培 養, 基 礎 医 学 最 近 の
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15) Okamoto, M.: Observation on neurons and
neuroglia from the area of the reticular
formation in tissue culture. Z. Zellforsch. ,
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16)
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目本 脳 炎
日本 獣
日本 伝 染 病 学 会 雑 誌
290
Tissue
V.
Culture
Growth
Studies
on Japanese
and Cytopathogenicity
Cultures
Susumu
of JBE
of Mammalian
HOTTA,
Akio
Mikito
OHYAMA,
Hiroshi
and
Chu Cha
Cerebellar
tissues
from
were cultivated
sisted of 50% human
salt
solution,
cellular
JATH
in
MUSASHI,
LIAO.
and
Kobe.
kittens,
1 to 15-day-old, as well as from human
by the roller-tube
technique.
Culture
ascitic fluid, 5% chick embryo extract,
glucose
growth was 37C.
brain passages;
puppies
cancerous
Viruses
Tissues.
of Microbiology, School of Medicine,
on a coverslip
300 mg%
and
Viruses
1,000 u/ml penicillin.
used were:
260 strain,
45% Gey's balanced
Temperature
JBE G1 strain,
medium con-
of incubation
K. Inoue strain,
perature of incubation following virus inoculation was 34C.
All of the viruses tested multiplied in the cerebellar tissue cultures.
however,
tion.
JBE
JATH
cultures;
strain
the highest
virus
virus
about 106, which usually
were different
in each virus
multiplied
titers
strain-culture
of the
Tem-
The grades
system
of
combina-
well in puppy and human embryonicerebellar
in fluid phase
were attained
for
of the 240th to 245thmouse
of the 1st to 4th mouse brain passages;
of the 2nd or 3rd mouse brain passages;
and Negishi strain virus, a member
Russian Spring-Summer
encephalitis group, of the 7th to 10th mouse brain passages.
viral multiplication,
第8号
Virus.
Related
Nervous
Kobe University,
embryos
and
Central
OHNO
Department
B Encephalitis
第38巻
(mouse-intracerebral
5 to 7 days after inoculation
LD50/0.02 ml)
of virus.
were
Contrarily,
growth of K. Inoue strain virus was inferior in every of the culture systems employed,
the highest titers in fluid phase being 102 to 102.5. Viral growth in kitten cerebellar tissue
cultures
was generally
slighter
in the affinity between
In the
cells exhibited
stain
were
staining
virus
virus-infected
as follows:
strains
cultures
degeneration.
properties
than that in puppy
and nervous
stained
cerebellar
tissue cultures
by either
(1) In, the
mild
unusual
infection
granules;
cultures.
Difference
was evident.
Bodian or Nissl method, the Purkinje
Some of the characteristic
and contained
tissue
changes
stage,
revealed
by the
the nuclei changed
the neurofibrils
Bodian
the original
both in the
cell
body
and in the dendrited staines rather roughly; branches of the dendrites were shortened or
reduced in number; the neurites showed abnormal appearance such as breaking, swelling,
serpentine
turnings,
etc. (2) In the advanced
into masses of debris and the neurofibrilar
became rudimentary;
the neurites were
stained preparations,
of various
These
antisera
which
the tigroid
been
subjected
Morphological
stage, the nuclei were
disintegrated
patterns
were completely lost; the
broken and could not be fully traced.
lost their original
sizes were seen in the cytoplasm.
alterations
were prevented
by mixing
prior to inoculation.
had
substances
infection
changes
to disadvantageous
the
staining
viruses
ability,and
such
vacuoles
with the specific anti-viral
noted in the Purkinje
conditions
dendrites
In Nissl
cells in cultures
as prolonged
incubation
291
昭 和39年11月20日
without
changing
from the changes
therefore,
medium
or incubation
that occurred
that the degeneration
by the viruses.
Virological
in higher
inevitably
of Purkinje
temperatures,
in the virus-infected
cells observed
and neuropathological
significances
were apparently
cultures.
different
It was concluded,
as above was caused specifically
of the findings are discussed.