Plodova prostocelična DNA v
materinem obtoku: Vloga NIFTY testa
pri odkrivanju kromosomskih
nepravilnosti pri plodu
Doc. dr. Faris Mujezinović, dr. med.
Prenatalna diagnostika v Sloveniji
Plodova prostocelična DNA v materinem obtoku
NIFTY test v kliničnem delu
Prenatalna diagnostika v Sloveniji
Plodova prostocelična DNA v materinem obtoku
NIFTY test v kliničnem delu
Prenatalna diagnostika v Sloveniji
Prenatalna (predrojstvena) diagnostika vključuje preiskave s katerimi
odkrivamo nepravilnosti otroka že v času nosečnosti oz. že preden se on rodi.
Prednosti:
•Kontrola
stanja in prepričanost, da se plod primerno razvija
•Spremljanje
•Uvedba
zdravljenja
•Priprava
za nadaljevanje nosečnosti in ukrepe po porodu
•Odločitev
•Timsko
stanja ploda
o mestu rojstva otroka
sodelovanje več specialnosti
•
Neinvazivne preiskave (ultrazvok, nuhalna svetlina, hormonski
testi)
Invazivne preiskave (amniocenteza, biopsija horionskih resic)
Prenatalna diagnostika v Sloveniji
•
Za mlajše od 37. let - meritev NS ploda in
dvohormonski test (za nosečnice mlajše od 35 let
samoplačniška preiskava).
•
Za starejše do 37. let - invazivni testi (AC ali BHR)
•
Trisomija 21 (Downov sindrom), trisomija 18
(Edwardsov sindrom), trisomija 13 (Patau sindrom)
Pomanjkljivosti testov
NS in dvohormonski test - 95 % občutljivost s 5 %
lažno pozitivnih rezultatov
AC in BHR - 1% tveganje za splav
Pravila zavarovalnice - okoli 8 % vseh nosečnic ima
invazivno preiskavo.
•
Samo v 12-15 % je rezultat patološki.
8 % je 1.600 žensk letno,
kar pomeni da vsako leto
pri 16 žensk s preiskavo povzročimo splav,
ne glede, ali je s plodom vse v redu ali ne.
Ali obstaja način, da se temu izognemo?
Ali obstaja način, da zmanjšamo število
nosečnic, ki imajo invazivno preiskavo?
Prenatalna diagnostika v Sloveniji
Plodova prostocelična DNA v materinem obtoku
NIFTY test v kliničnem delu
Odkritje plodove prostocelične
DNA v materinem obtoku
•
Leto 1995 - prof. Kozak v
ruski reviji
•
Leto 1997 - Dennis Lo v
reviji Lancet
Tehnologija je šele pred
kratkim postala klinično
izvedljiva in dostopna.
•
Prostocelično DNA lahko izoliramo iz materine krvi, ker je 10 % DNA
v materinem serumu plodovega izvora, ki prihaja iz posteljice.
http://www.fetalmedicine.com/var/uploads/File/0/0/c/f/d/cfdna_1.png
Kako poteka preiskava?
•
Z uporabo močnih bioinformatičnih orodij se
določajo razlike
•
Med nukleotidnimi zaporedji
•
količin identičnih nukleotidnih zaporedij
•
količin referenčnega kromosoma
•
trenutno najbolj uporabna metoda - massive
parallel sequencing
•
Moderne metode sekvenciranja se razlikujejo po
tem katere regije genoma amplificirajo.
•
Podatki se lahko uporabljajo za neinvazivno
presejanje za plodove anevploidije.
http://www.degruyter.com/view/j/cclm.2013.51.issue-6/cclm-2012-0281/graphic/cclm-2012-0281_fig1.jpg
http://www.pnas.org/content/105/42/16266/F3.large.jpg
Prednosti NIPT
•
Visoka občutljivosti in specifičnost z izredno nizko
stopnjo lažno pozitivnih rezultatov.
https://www.statstodo.com/Pics/ROC1.gif
Slabosti NIPT
•
Specifičnost in občutljivost ni enaka za
vse kromosome
•
Lažno pozitivni rezultati so še vedno
prisotni
•
Pridobljene sekvence prihajajo iz
placente, kar pomeni, podobno kot pri
BHR, da ni nujno, da odražajo fetalni
kariotip.
•
Zato se priporoča potrditev pozitivnega
testa z invazivno preiskavo.
http://www.niftytest.com/uploads/allimg/140504/1-140504200625514.png
Kam sodi NIPT v trenutnem sistemu prenatalnega presejanja na anevploidije?
•
NIPT je presejalni test, ki
odkriva nosečnosti s
tveganjem za pogoste
autosomalne anevploidije pri
plodu (trisomija 21, 13 in 18).
•
Za definitivno diagnozo
statusa kromosomov ploda je
potrebna invazivna preiskava.
Katere so omejitve NIPT
•
Samo na določene anevploidije
(trisomija 21, 18 in 13).
•
Okoli 50 % citogenetskih
nepravilnosti, ki se rutinsko
odkrijejo z amniocentezo se ne
bo odkrilo, če je presejanje
samo na anevplodije (75 % pri
mlajših in 43 % pri starejših od
35 let starosti).
http://www.dovemed.com/uploads//article_pics/image_83.jpg
•
Plodova prostocelična DNA nam ne pomaga pri
odkrivanju kromosomskih nepravilnosti kot so
nebalansirane translokacije, delecije in duplikacije.
•
UZ odkrite nepravilnosti - invazivni testi.
http://3.bp.blogspot.com/-gHgdNwqoN0c/Tx3hehGuiwI/AAAAAAAAABU/_8uXTB3d92s/s1600/IMG_1332.JPG
https://www.ceessentials.net/images/rbpt2/image018.gif
•
NIPT ne more ločiti posamezne
oblike anevploidije.
•
Down
sindrom
posledica
prisotnosti
extra
kromosoma
(trisomija 21), Robertsonove
translokacije,
ki
vključuje
kromosom 21, ali mozaicizma
visoke stopnje?
•
Ugotavljanje
mehanizma
anevploidije je pomembno za
svetovanje v naslednji nosečnosti
in poudarja pomen invazivne
diagnostike po pozitivnem izvidu
NIPT testa.
http://dundeemedstudentnotes.files.wordpress.com/2012/04/picture116.png
•
NIPT ne odkriva mutacije na enem genu.
http://bio.biomedicine.gu.se/courses/ht09/genomics/magni_seq.jpg
visok BMI
Zgodnja gestacija (pred
10. tednom gestacije)
Nezadostna izolacija plodove
prostocelične DNA - zamik
diagnostike ali nezmožnosti
ocene tveganja.
http://jaynelc.files.wordpress.com/2011/12/102481200.jpg
Postopek traja 7-14 dni, kar je lahko
počasneje, če želimo narediti dokončno
hitro diagnozo.
Večinoma se opravi med 10. in 20. tednom
nosečnosti, kar je dovolj časa za
informiranje.
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/70/Wooden_hourglass_3.jpg
•
NIPT ne preseja za nepravilnosti
nevralne cevi.
•
Za to je bolj ustrezno določanje
alfa feta proteina v materinem
serumu ali zgodnja ultrazvočna
diagnostika, celo ko je opravljen
NIPT.
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/7e/Spina-bifida.jpg
•
NIPT ne izključuje potrebo po UZ pregledu v 1.
trimestru za določanje
•
gestacijske starosti
•
oceno nuhalne svetline
•
potrditev večplodnih nosečnosti
•
odkrivanje drugih prirojenih nepravilnostih
•
Manjša količina podatkov o učinkovitosti NIPT pri
večplodnih nosečnosti.
•
Uporaba NIPT v teh primerih je odvisna od metode
testa, bioinformatike, ki se uporablja in potrditev
učinkovitosti v kliničnih študijah.
•
NIPT nima vloge pri napovedovanju zapletov
kasneje v nosečnosti.
Genetski posvet pred in po testu
•
Presejanje naj bi izvajal perinatolog, osposobljen
zdravstveni delavec ali genetik.
•
Zaenkrat ni rutinski prenatalni test
Pred testom genetski posvet
vključuje:
•
Kratka razlaga pomena NIPT in način delovanja
•
Prednosti NIPT
•
Slabosti NIPT
•
Kaj NIPT ni
1. Prenatalna diagnostika v Sloveniji
Plodova prostocelična DNA v materinem obtoku
NIFTY test v kliničnem delu
Komercialni testi
NIFTY test
Non-invasive fetal trisomy test
300.000 žensk
HVALA za pozornost!