Diagnostikken rundt på ½ time
Præanalytiske
faktorer
af
Charlotte Hoffmann-Timmol
Nordic Manager, DVM
Hvor kan det gå galt?
Patient forberedelse (faste, stress, motion)
Blodprøvning (korrekt reagensglas, kompressionstid,
kanylestørrelse, vacutainer)
Før prøve udtagning...
Hvad skal bruges ?
Serum eller plasma (hvilken slags plasma?)
Håndtering/Tid fra udtagning til færdigt serum/plasma
Hvor meget skal bruges ?
Opbevaring (temperatur, sollys)
Mærkning af prøver ?
Tid på dagen, tid på året
Kurer / Postforsendelse
Test procedurer
(Test metode)
Resultat fortolkning
Mærkning på reagensglas evt. brug af stregkoder
Antikoagulanter / reagensglas
Hæmatologi:
EDTA-blod (+ tynd blodudstrygning)
Serologi, klinisk kemi: Serum (sjældent plasma)
PCR tests:
Steril tørsvab
Glukose:
NaFl-blod
Hormoner:
Kølet serum el. plasma!!
Serum / Plasma
Serum:
er den cellefrie del efter
centrifugering af en:
Plasma:
er den cellefrie del efter
centrifugering af en:
komplet koaguleret
prøve uden fibrin
ukoaguleret prøve
Ca. 1/3 serum udbytte
Ca. ½ plasma udbytte
Tid på dagen/året
med fibrin
Undgå hæmolyse
Stas venen så kort tid som muligt
Daglig krops-rytme / fluktuation
Glukose niveau
Hormoner (specielt T4, TSH, Cortisol)
Kort, stor kanyle - så stor G som muligt
Hold reagensglasset skråt, så blod rinder ned af væggen
Vend prøven 6-10 gange straks efter udtagning
Undgå sollys
Centrifuger snarest muligt (samme dag)
Årlig variation
ACTH
Kun serum/plasma tåler frysning
Opbevaring ved 4 grader holder prøven stabil i 24 timer
(frysning anbefalet ved ACTH- samt insulinprøver)
Undgå hæmolyse
Hæmolyse
ASAT, ALP, -HBDH
LDH, CK
Amylase
total bilirubin
Creatinin
Glukose
GGT
Fe, Mg, P, K, total protein
UREA (BUN)
Pak rigtigt....
Forpakning - Transport
Korrekt forpakningsmateriale
(UN 3373)
Tid (kurer eller post?)
Korrekt identifikation / stregkoder
Komplet udfyldt rekvisition
Praksisstempel, dyreart, chipnummer mm.
Temperatur
Forstyrrende faktorer
Pålidelighed ??
Lipæmi
Lige spist
Hæmolyse!!
Prøveudtagnings-teknik,
håndtering, Transport!
Ikterus
Leversygdom, hæmolyse
mm.
Medicin
Corticosteroider,
sulfunamider, NSAID m.m.
Sensitivitet/specificitet
Sand sygdomsstatus
Test
resultat
Analyseapparater
Syg
Rask
Total
A = sand positive
Positiv
A
B
A+B
B = falsk positive
Negativ
C
D
C+D
Total
A+C
B+D
N
C = falsk negative
D = sand negative
N = totale antal dyr
Sensitivitet: A/(A+C) hvor god er testen til at påvise syge dyr
Specificitet: D/(B+D) hvor god er testen til at påvise sygdomsfrie dyr
Test procedurer (hvem laver hvad, hvornår)
Test metode (sensibilitet/specificitet)
Vedligeholdelse / service
Præcision og nøjagtighed (kalibrering)
Validering / akkreditering
Arbejd standardiseret
Benyt samme rutiner hver gang
Udtag prøver på samme tidspunkt hver gang
Benyt det samme laboratorium til samme
test hver gang!!
hvert lab har sine egne reference intervaller
Benyt kun akkrediterede tests
Sæt alt i system
PPID Diagnostik
ACTH
PPID Diagnostik
Bi-fund ved Cushing-Patienter:
Dexamethason Suppressions Test (DST)
Glukose ( 64%)
(evt. glukose i urin!)
Insulin (kend EMS-status!!)
Stress-leucogram hos nogle
Proxies
Triglycerider
-GT, GOT, CK, AP: ofte forhøjede
(TRH-Stimulation Test)
Insulin
ACTH måling
ACTH måling
PPID (n)
Afslappet hest (ikke ved akut laminitis!)
EDTA-blod udtages
( 70%)
Healthy (n)
Cut-Off
Sensitivity
Specificity
Reference
24
7
55 pg/ml
100 %
100 %
100 %
Van der Kolk et al.
1995
6
10
35 pg/ml
67 %
100 %
88 %
Beech et al. 2007
25
23
35 pg/ml
Beech et al. 2011
Centrifugeres indenfor 1 time
71 %
96 %
83 %
84 %
97 %
90 %
EDTA-plasma pipetteres fra og fryses
Hæmolyse fri!!
Sendes fra fryser via kurer til laboratoriet
Udtagning: 8.00 10.00 stress-frie!
(ikke nødvendigt at sende i frysebeholder til LABOKLIN!)
Accuracy
Cave: Smerte, Sæson variation!
Dexamethasone Suppression Test
150
125
15:00
100
- Basal Cortisol
- 40 g/kg Dexamethasone i.m./i.v. (10 ml/500 kg)
75
Horses with PPID
50
Reference value
25
19 Hours
Healthy Horses
0
10:00
- Cortisol value after stimulation
Reference intervaller:
< 29 pg/ml
< 47 pg/ml August-Oktober
Dexamethasone Suppression Test
8
7
PPID / ECS
6
Normal values
5
4
Normal response
19h : < 1 g/dl
3
(< 27 nmol/l)
2
1 g/dL
1
0
0
4
8
12
Time in hours
16
20
Interpretation:
Raske heste supprimerer cortisol til < 10 ng/ml
PPID
Nogle heste med Cushing har samtidig Insulin-resistens (IR)
Forøget laminitis risiko
Derfor: Altid test PPID-heste for insulin-resistens!
Insulin (kraftfoder fastet)
Serum indenfor 1h
Fryses, fra fryser til kurer
CLIOs (chemiluminescence-Metode (lig Liverpool)
Reference interval < 23 U/ml
Glukose (NaFl-rør, kraftfoder fastet)
Proxies
RISQI = 1 : Insulin-0.5
= Insulin sensitivity
Proxies
MIRG = [800-0.3x(ins-50)2] : [gluc-30]
= Pancreatic ß-cell function
reciprocal inverse square of insulin
modified insulin to glucose ratio
Reference: > 0.32
Reference: < 5.6
Proxies
Faldgrubber
1. Stress / Smerte
I/G-ratio = Fasted-Ins : Fasted-Glucose
Kraftig smerte eller hårdt arbejde (30 min) influerer ACTH
2. Stabilitet
= Pancreatic ß-cell function
Plasma indenfor 1h og på frys for ACTH og Insulin .
3. Sæsonafhængig
En vis grad af hypofyse-hyperaktivitet Aug-Okt er normalt
Reference: < 6
Optimalt at teste August-Oktober
4. Sikkerhed
ACTH mere sikker end DST
ACTH anbefalet som rutine diagnostisk test for PPID
(i stedet for DST)
Hvis stadig tvivl test igen til efteråret!
Sæson variation kan modvirkes ved at anvende
laboratorier, der benytter sæsonafhængige reference
værdier
ACTH test til behandlingskontrol
Hurtig/korrekt håndtering, frysning, <20 timer
transport!
Test hesten for både EMS og PPID
[email protected]