ISO/IDF- Metoder i det Mikrobiologiske
Laboratorium
Susanne Nielsen
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
www.eurofins.com
MEJERITEKNISK SELSKAB D. 28. MAJ 2015
Hvad er IDF
Standardisering af Mikrobiologiske Metoder
Udvikling af en Analyse Standard
Igangværende og måske kommende projekter
Hvorfor Standardisering
Source presentation EDR:
Source modification date: 09/06/2009
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
2
MEJERITEKNISK SELSKAB D. 28. MAJ 2015
FIL-IDF: Federation Internationale de Laiterie- International Dairy Federation
Uafhængig, non-profit, non- politisk Forening
Grundlagt i 1903 i Bruxelles i forbindelse med den første Internationale Mejeri Kongres
Arbejdsområder:
Animal health and welfare
Dairy Science and Technology
Economics, Policies and Marketing
Environment
Farm Management
Food Standards
Hygiene and Safety
Methods of Analysis and Sampling
Nutrition
Source presentation EDR:
Source modification date: 09/06/2009
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
3
IDF er organiseret i National Kommitéer
Den Danske National Komité’s formål
•er omdrejningspunktet for nationale input til IDF
•viderebringer resultatet af arbejdet i FIL-IDF Danmark
•nominerer repræsentanter til IDF's stående komitéer
•virker til at fremme IDF inden for mejeriindustrien
•er ansvarlig for at formidle det nationale bidrag til IDF's finansiering (via
Mejeriforeningen)
Sekræter for den danske kommitè: Sanne Bastholm Rasmussen [email protected]
PT er 46 lande medlemmer og repræsenteret ved en National Komité
F.eks. Zimbabwe, Mongoliet og Norge
Under National Komitéen er en række arbejdsgrupper
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
4
IDF’s organisation
Science and Programme
Coordination Committee
SPCC
Methods Standards Steering
Group
MSSG
SCHMM
SCAMDM
Harmonization
of
Microbiological
Methods
Analytical
Methods for
Dairy
Microorganisms
PG D07
Lb
casei/paracasei
Food Standards Steering
Group
FSSG
PG D06
QUA LAB
Flowcytometri
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
5
Standardisering og harmonisering af Mikrobiologiske Metoder
FIL-IDF
ISO
CEN
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
6
Udvikling af en Analyse Standard
Stage 0: Undersøgelse af et emne, f.eks en ny analyse teknik, som endnu ikke er
klar til de næste trin
Stage 1: New Work Item (NWI)
Forslag til ny metode sendes typisk fra en National komité til IDF
Forslaget skal indeholde en Working Draft eller min. en klar beskrivelse OG forslag
til Projektleder
NWI accepteres efter afstemning
Krav: Min. 50% af medlemslandene skal svare på afstemningen og min. 50% af
svarene skal være positive
Stage 2: Udabejdelse af Committee Draft (CD) og fremsendelse til kommentering
bland Projektgruppens medlemmer og SC
Bearbejdning af kommentarer, udarbejdelse af rapport med indkomne kommentarer
og PL ‘s svar på kommentarer, planlægning af et ‘Interlaboratory study’ til
fastlæggelse af præcisionsdata
Stage 2 slutter når resultaterne fra dette studie er godkendt af PG og SC
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
7
Interlaboratory Study 2007 ISO 22964 Detection of Cronobacter
spp.
ESIA
CSB
mDFI
ESPM
ESIA
CB- 44°C
mDFI
ESPM
67 prøver
ESIA
CB- 41,5°C
804 resultater
x 12
laboratorier
9648
resultater !
mDFI
ESPM
ESIA
mLST
mDFI
ESPM
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
8
I 2013 ny ILS med Standardens endelige media
Milk based Infant Formula
Soy based Infant Formula
Lactose
Starch
Environmental Samples
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
9
Stage 3:
EN Draft International Standard (DIS) udarbejdes på engelsk og evt. fransk
DIS sendes til National Komitéer for godkendelse
IDF og ISO udarbejder rapporter der inkluderer alle indkomne kommentarer
Stage 3 afsluttes med at PL sender den godkendte og afsluttede DIS (nu FDIS)
sammen med kommentarer og svar til IDF’s og ISO’s sekretariat
Stage 4:
Iht. ISO procedurer skal FDIS til afstemning internt i ISO før udgivelse
Der afgives ja/nej stemme og kun stavefejl/trykfejl kan rettes
IDF godkender DIS versioner til direkte udgivelse
Stage 5:
Standarden gennemgåes en sidste gang for trykfejl etc. hvorefter den udgives.
Projektgruppen nedlægges herefter
Review:
Senest 3 år efter udgivelse skal Standarden revurderes og herefter hvert 5. år
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
10
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
11
Igangværende projekter
2 Stående komitéer:
SCAMDM: Analytical Methods for Dairy Microorganisms- de gode bakterier
SCHMM: Harmonization of Microbiological Methods- de onde bakterier
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
12
SCAMDM Igangværende Projekter
Project D06
PL : S Casani (DK)
Project D07
PL : G Fischer (DE)
and A Galat (FR)
Quantification of Lactic acid bacteria by Flow Cytometry
Enumeration of Lactobacillus casei/paracasei in fermented milks and
starter cultures
NWI
Project D08
PL : TBD
Quantification of LAB (Lactic acid bacteria) by use of qPCR or v-qPCR
PL Report
Project D09
PL : T Odamaki (JP)
PL Report
Revision of ISO 29981 | IDF 220 – Enumeration of bifidobacteria
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
13
Forslag til revision af ISO 22981/IDF 220 Enumeration of presumptive
Bifidobacteria
Our results suggested that the suspension conditions including diluents, retention
time and shaking had much impact on enumeration of bifidobacteria. We found that in
comparison to ISO 29981|IDF 220 method, lower temperature for suspension without
retention and shaking with a rotary blender using Mitsuoka’s buffer, a diluent devised
and reported by Professor Mitsuoka who received IDF Elie Metchnikoff Prize 2007,
could provide stable and adequate counts for enumeration of bifidobacteria.
-
Brug Mitsuoka’s buffer i stedet for Ringers
Temperatur under opløsning skal være 35°C
Brug blender til opløsning
‘Til næste gang’:
- Lav sammenligning mellem Mitsuoka’s buffer og MRD
istedet for Ringers (som ingen bruger)
- Start med -2 fortynding for at få bedre opløsning
istedet for at bruge en blender
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
14
SCHMM Igangværende Projekter
Project H03
IDF representative:
H Joosten (CH)
ISO/TS 22964 | IDF/RM 210. (revision to horizontal IS) New title: Detection
of Cronobacter spp.) – CEN TC275 WG6 TAG 14
(Revision of EN ISO 22964)
Ny standard senest Oktober 2016
Project H17
IDF representative &
PG co-convenor:
B Gerten
ISO/TC 34/SC 9-WG 16 - Yeasts and moulds (Revision of EN ISO 215271/-2)
 Ask SC5/IDF delegates about the possible change in ISO 6611 of YGC to DRBC
 Decide to perform the revision with these recommendations:
 Base the revision on previous ISO 7954 from SC9 or ISO 6611 from SC5, and update all
parts such media performance, if we take ISO 6611 we can harmonize with SC5.
 choose between DRBC or YGC,
 choose between surface inoculation or pour plate,
 maintain a general assay with YGC/DRBC and put an annex for DG18 and products for aw
between 0.95 and 0.6
 For product below aw<0.6, Management? No real media
 For WG3, data of validation are enough or not to establish this standard.
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
15
Project – new (tbd)
IDF representative:
TBD
ISO/TC 34/SC 9-WG 20 – Confirmation of Bacillus cereus
(Revision of EN ISO 7932)
Project – new (tbd)
IDF representative:
TBD
ISO/TC 34/SC 9-WG 26 – Detection of Clostridium botulinum toxins
Den selektive opformering udgår
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
16
Does ISO/TC34/SC9 agree with following WG 20 proposal:
- To not include additional tests for differentiation of Bacillus
thuringiensis from presumptive B. cereus in the revision of ISO
7932;
- To not include additional tests for confirmation of B. cereus sensu
stricto;
- To investigate possible additional tests to identify pathogenicity of
presumptive B. cereus colonies.
Proposed recommendations to be approved by ISO/TC 34/SC 9
To revise EN ISO 7932:2004 by adding in the confirmation stage PCR
detection of 2 specific genes, as optional tests on isolated colonies:
- Cytk1, specific of the new B. cytotoxicus species, an emerging and
virulent pathogen from the B. cereus group;
- Cereulide genes, harboured by emetic toxin producing strains of B.
cereus (sensu lato).
Benefits and limitations of such additional tests should be added in the
standard.
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
17
Problem: Tilstedeværelsen af visse Mælkesyrebakterier og Bifidobakterier
hæmmer væksten af Enterobacteriaceae, Cronobacter spp., Salmonella spp
Improvement of enrichment procedure for Enterobacteriaceae (incl. Salmonella and
Cronobacter).
• Previous work with an alternative buffer (tricine)
addition of iron citrate and application of a higher initial pH was unsuccessful.
• Poor recovery was associated with strong acidification (final pH often below <5)
• A new pre-enrichment broth is proposed based on BPW with a six-fold increased
phosphate buffer strength (“xsBPW”)
• Study of growth kinetics of Salmonella and Cronobacter in xsBPW shows major
improvement.
• LOD50 values below 1 cell per 25 g sample were obtained with the most
demanding matrices
• Cost xsBPW similar to that of “double strength BPW”
• Variability of growth potential among different Enterobacteriaceae raises concern
about current validation requirements
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
18
Revideret standard forventes ved udgang 2016
Væsentligste ændringer:
Inkubationstider, herunder mulighed for inkubation af hel Fraser i 24 timer i
stedet for 48, såfremt fokus er Listeria monocytogenes
Konfirmerings og identifikations trin
Præcisionsdata fra ILS fremgår af standarden
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
19
Hvorfor er standardiserede analysemetoder en god idé?
-
Et analyseresultat er en funktion af forekomst og fordeling af den givne parameter,
den anvendte metode og metodens usikkerhed
-
Et mikrobiologisk kriterie bør altid bestå af en fastsat værdi og en analysemetode
BEK om mælkeprodukter m.v. Nr. 2 af 04/01/2013
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
20
Case: Bestemmelse af L. delbrueckii subsp. bulgaricus i fermenteret produkt.
Metode: ISO 7889/IDF 117:2003
Problem: Udover L. delbrueckii subsp. bulgaricus indeholdt produkt også L. acidophilus
L. acidophilus vokser udmærket i substratet og kolonier ligner
Løsning: Udfør MALDI-TOF identifikation på 5-10 kolonier
Resultat: Alle kolonier (20 ialt) blev identificeret som L. rhamnosus!
MALDI-TOF resultat blev efterfølgende konfirmeret ved 16S seq
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
21
Case: E. coli
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
22
Case: Aerobe sporedannere
Problem: Kunde hævder vi finder væsentligt færre sporedannere end de selv og
deres kunde gør i udvalgte produkter
3 metoder:
Metode Forbehandling
Udsæd
Substrat
Inkubations
tid
Inkubations
temp.
FVST
2007
80°C/
10 min
overflade
Blodagar
6 døgn
30
NMKL
189
80°C/
10 min
overflade
Blodagar
8 døgn
30
‘Tysk80°C/
metode’ 10 min
overflade
TSA
3 døgn
30
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
23
Analyseresultater metode sammenligning
Aerobe mesofile sporedannere/g
Prøve
FVST 2007
NMKL 189
‘Tysk metode’
1
270
230
420
2
270
300
390
3
370
520
530
4
380
150
560
5
200
220
310
6
440
370
770
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
24
Tilsyneladende overensstemmende resultater- men stadigvæk for lavt- nu på alle metoder
Prøve
pH i 10% opl. Aerobe sporer cfu/g,
FVST 2007
10 g prøve 1a + 90 g SPO
4,36
310
10 g prøve 1a + 90 g BPW
6,66
4600
10 g prøve 1b + 90 g SPO
4,36
190
10 g prøve 1b + 90 g BPW
6,66
3600
10 g prøve 1c + 90 g SPO
4,36
150
10 g prøve 1c + 90 g BPW
6,66
3800
10 g prøve 2 + 90 g SPO
5,36
7400
10 g prøve 2 + 90 g BPW
6,56
6300
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
25
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
26
ISO-IDF metoder er referencemetoder
Brug kun alternative metoder der er valideret iht. ISO 16140 eller tilsvarende
overfor referencemetoden
Når du udarbejder specifikationer for dine produkter:
Referer til analysestandard
Vær specifik vedr.
-
Prøveudtagning- repræsentativ, kun overflade, kun indre etc.
Prøveforberedelse
Vær bevidst om de kritiske step i metoden
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
27
TAK FOR OPMÆRKSOMHEDEN
Title: Presentation title
Document name: Powerpoint template.ppt
EDR:
Document owner: Author
Last modified on: 09/06/2009
28