Analys av hepariner, faktor Xahämmare och trombinhämmare
Maria Berndtsson
Karolinska Universitetssjukhuset
Ofraktionerat heparin
UFH
Intravenöst
Hämmar i komplex med Antitrombin både Faktor Xa och Trombin
För monitorering används främst APT-tid
•Påverkas av ex lupusantikroppar, faktorbrister mm
•Reagensskillnader
Även anti-Faktor Xa eller anti-Faktor IIa analys kan användas
Lågmolekylärt heparin
LMWH
Subkutan administrering
För monitorering tas prov ofta 3-4 h efter behandling då peak
koncentration förväntas
Hämmar i komplex med Antitrombin främst Faktor Xa (varierar mellan olika
preparat)
För monitorering används främst anti-Faktor Xa analys
Även klott-baserade tester förekommer
Anti-Faktor Xa test
Anti-FXa aktiviteten av hepariner uttrycks i kIE/L
Anti-Faktor Xa analys
Preanalys:
Centrifugering inom 30 minuter /1 timme efter provtagning
Dubbelcentrifugering: Viktigt om provet ska frysas
Platelet factor 4 (PF4) kan frisättas från trombocyter och hämmar heparin.
Interferenser:
Bilirubin, hemoglobin och triglycerider
Ej känsligt för faktorbrist, lupusantikroppar osv
Anti-Faktor Xa analys
Kalibratorer specifika för UFH resp. LMWH med spårbarhet till WHOstandarder.
Flera tillverkare har kalibratorer som kan kombineras i gemensam
kalibreringskurva.
Specifika kalibratorer kan behövas för vissa preparat, ex fondaparinux
Antitrombin-innehållande reagens
•För att patientprovets antitrombin inte ska vara begränsande för
reaktionen
•Resultaten avspeglar inte den verkliga behandlingseffekten
UFH, LMWH
Externkontroller
ECAT
För få deltagare för att EQUALIS ska ha eget program
När behöver analyserna utföras?
Vid blödningar
Bedöma blödningsrisk inför operation
Misstanke om överdosering
Patienter med nedsatt njur- eller leverfunktion
Risk för läkemedelsinteraktioner
Trombos hos patienter som behandlas med läkemedlen
NOAKs
Non-vitamin K dependent Oral Anticoagulants
LC-MS/MS – referensmetod för direkt mätning av koncentration
•Begränsad tillgänglighet
•Kostnad
•Långa svarstider – ej användbart vid akuta frågeställningar
Koagulationsanalyser – indirekt uppskattning av koncentration
Faktor Xa-hämmare
Rivaroxaban, Apixaban
Anti-Faktor Xa metoder med specifika kalibratorer
Anti-Faktor Xa aktiviteten omvandlas till en masskoncentration ug/L
Reagens innehållande antitrombin kan ge falsk höga rivaroxabanvärden
(Mani et al, Thromb Haemost, 2012)
Anti-Faktor Xa analys
Rivaroxaban, anti-Faktor Xa vs LC-MS/MS
Douxfils et al, Thromb Haemost 2013
Apixaban, anti-Faktor Xa vs LC-MS/MS
Karolinska Universitetslaboratoriet
Anti-Faktor Xa analys
Rivaroxaban och Apixaban
Preanalys:
Centrifugering inom 30 minuter /1 timme efter provtagning
Enkel- /Dubbelcentrifugering före frysning?
Interferenser:
Bilirubin, hemoglobin och triglycerider
Ej känsligt för faktorbrist, lupusantikroppar osv
UFH, LMWH
Trombinhämmare
Dabigatran
Trombintids-analyser
Ecarin-baserade analyser
Kromogena anti-Faktor II analys
Trombintid
Tiden till koagelbildning mäts (s)
För känslig metod för kvantitativ
bestämning av dabigatran
Trombintid
Diluted Trombintid
Spädd testplasma blandas med
normalplasma före tillsats av trombin
Tiden till koagelbildning mäts (s)
För känslig metod för kvantitativ
bestämning av dabigatran
Metoden kalibreras med dabigatran.
Tiden till koagelbildning omvandlas
till koncentration ug/L
Diluted Trombintid vs LC-MS/MS
Antovic et al, Eur J Clin Pharmacol, 2013
Trombintid
Prover från 70 dabigatranbehandlade patienter analyserades med LCMS/MS samt “vanlig” trombintid
Trombintidsresultaten var inom referensområdet endast i prover där ingen
dabigatran detekterats med LC-MS/MS (< 2 ng/mL).
Dabigatrankonc upp till 50 ng/mL korrelerade signifikant (p<0.0001) med
trombintidsresultat (R = 0.79, y = 2.4757x + 20.29).
Karolinska Universitetslaboratoriet
Ecarin
Sandrasselhuggorm, Echis carinatus.
Ecarin Clotting Time
(ECT)
Ecarin Chromogenic Assay
(ECA)
Ecarin Chromogenic Assay vs LC-MS/MS
Antovic et al, Eur J Clin Pharmacol, 2013
Anti-Faktor IIa analys
Dabigatran analys
Problem med känslighet i låga området
För att mäta låga (<30-50µg/L) koncentrationer eller kunna utesluta att det
finns läkemedel kan LC-MS/MS behövas. Trombintid kan vara till hjälp
NOAK-analyser utförda på Klinisk kemi,
Karolinska 2014
NOAK-analyser
ECAT externkontrollprogram finns för dabigatran, rivaroxaban och
apixaban.
NPU-koder:
NPU28683
P-Dabigatran (µg/L)
NPU28689
P-Rivaroxaban (µg/L)
NPU28690
P-Apixaban (µg/L)
Information om vilken metod som använts saknas
Rapportnamnen ser olika ut på olika sjukhuslab i Sverige
Sammanfattning
• UFH monitoreras främst med APT-tid
• LMWH monitoreras främst med anti-faktor Xa analys
• För analys av NOAKs är LC-MS/MS referensmetod
• Anti-Faktor Xa metoder med specifika kalibratorer används för analys av
rivaroxaban och apixaban
• För mätning av dabigatran finns flera alternativ, varav diluted Trombintid
med specifika kalibratorer är vanligast förekommande.