1. No category

NO/EP2600719
(12) Oversettelse av
(11) NO/EP 2600719 B1
europeisk patentskrift
(19)
NORGE
NO
(51) Int Cl.
A01N 43/90 (2006.01)
A61K 31/505 (2006.01)
A61K 31/519 (2006.01)
Patentstyret
(21)
Oversettelse publisert
2015.03.09
(80)
Dato for Den Europeiske
Patentmyndighets
publisering av det meddelte
patentet
2014.10.08
(86)
Europeisk søknadsnr
11815012.7
(86)
Europeisk innleveringsdag
2011.07.21
(87)
Den europeiske søknadens
Publiseringsdato
2013.06.12
(30)
Prioritet
2010.08.05, US, 370946 P
(84)
Utpekte stater
AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB
GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO
PL PT RO RS SE SI SK SM TR
Utpekte
samarbeidende stater
BA ME
(73)
Innehaver
Temple University - Of The Commonwealth System of Higher Education, Broad
Street and Montgomery Avenue, Philadelphia, PA 19122, US-USA
(72)
Oppfinner
REDDY, E., Premkumar, 547 Atterbury Road, Villanova, PA 19085, US-USA
REDDY, M. V., Ramana, 921 Saint Joseph Drive, Upper Darby, PA 19082, US-USA
(74)
Fullmektig
Murgitroyd & Company, 165-169 Scotland Street, GB-G58PL GLASGOW,
Storbritannia
(54)
Benevnelse
(56)
Anførte
publikasjoner
2-SUBSTITUERT 8-ALKYL-7-OKSO-7,8-DIHYDROPYRIDO[2,3-D]PYRIMIDIN-6KARBONITRILER OG ANVENDELSER DERAV
US-A1- 2001 027 196
US-A1- 2008 004 285
US-A1- 2009 062 274
NO/EP2600719
1
2-SUBSTITUERT 8-ALKYL-7-OKSO-7,8-DIHYDROPYRIDO[2,3-D]PYRIMIDIN-6KARBONITRILER OG ANVENDELSER DERAV
Oppfinnelsen angår forbindelser, fremgangsmåter for deres fremstilling, sammensetninger
5
som innbefatter dem til behandling av cellulære proliferative sykdommer, herunder, men ikke
begrenset til, kreft.
Cellulære proliferative tilstander1 slik som kreft, er blant de mest alminnelige dødsårsaker i
industriland. For sykdommer som det finnes behandling for, slik som kreft har de eksisterende
10
behandlinger, på tross av vedvarende fremskritt, uønskede bivirkninger og begrenset
effektivitet. Identifikasjon av nye effektive legemidler mot cellulære proliferative sykdommer,
herunder kreft, er et vedvarende fokus for medisinsk forskning.
Det har vist seg at visse forbindelser og sammensetninger er nyttige i behandlingen av kreft
15
og andre cellulære proliferative sykdommer. De biologisk aktive forbindelser ifølge
oppfinnelsen er 2-substituert-8-alkyl-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitriler.
I visse utførelsesformer tilveiebringes forbindelser ifølge formel I, eller et salt derav.
Formel I
20
I en forbindelse ifølge formel I,
R1 er (C1-C6)alkyl eller (C3-C8)sykloalkyl;
R2 er 4-(4-metylpiperazin-1-yl)anilinyl, 4-morfolinoanilinyl, eller
25
R3 er uavhengig ved hver forekomst (C1-C6)alkoksy; og
1
O.a. Kildetekst ”orders”, skal muligvis være ”disorders”. Oversatt i henhold til kildetekst.
NO/EP2600719
2
R4 er H eller (C1-C6)alkoksy.
I bestemte utførelsesformer er R2 4-(4-metylpiperazin-1-yl)anilinyl.
5
I noen utførelsesformer er R1 (C3-C8)sykloalkyl.
I bestemte utførelsesformer er R1 syklopentyl eller sykloheksyl.
I noen utførelsesformer er R2
10
I bestemte utførelsesformer er R1 syklopentyl.
I visse utførelsesformer er hver forekomst av R3 metoksy.
15
I noen utførelsesformer er R4 hydrogen.
I noen utførelsesformer er R4 metoksy.
20
I noen utførelsesformer er R2 4-morfolinoanilinyl.
I visse utførelsesformer er R1 syklopentyl.
I visse utførelsesformer velges forbindelsen ifølge formel I fra gruppen bestående av 8-
25
syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3d]pyrimidin-6-karbonitril; 8-sykloheksyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril; 8-syklopentyl-2-((3,5-dimetoksyfenyl)amino)-7okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril; 8-syklopentyl-7-okso-2-((3,4,5trimetoksyfenyl)amino)-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril; og 8-syklopentyl-2-((4-
30
morfolinofenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril.
NO/EP2600719
3
I bestemte utførelsesformer er forbindelsen ifølge formel I 8-syklopentyl-2-((4-(4metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril eller et
salt derav.
5
Den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre en farmasøytisk sammensetning som
omfatter en farmasøytisk akseptabel bærer og en forbindelse ifølge formel I, eller et
farmasøytisk akseptabelt salt derav.
I noen utførelsesformer innbefatter den farmasøytiske sammensetning en forbindelse ifølge
10
formel I valgt fra gruppen bestående av 8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril; 8-sykloheksyl-2-((4-(4metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril; 8syklopentyl-2-((3,5-dimetoksyfenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6karbonitril; 8-syklopentyl-7-okso-2-((3,4,5-trimetoksyfenyl)amino)-7,8-dihydropyrido[2,3-
15
d]pyrimidin-6-karbonitril; 8-syklopentyl-2-((4-morfolinofenyl)amino)-7-okso-7,8dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril; og farmasøytisk akseptable salter derav.
I visse utførelsesformer velges den cellulære proliferative sykdom fra gruppen bestående av
hemangiomatose hos nyfødte, sekundær progressiv multippel sklerose, aterosklerose,
20
kronisk progressiv myelodegenerativ sykdom, nevrofibromatose, ganglionevromatose,
keloiddannelse, Pagets sykdom, fibrosystisk brystsykdom, uterinfibromer, Peyronies sykdom,
Dupuytrens sykdom, restenose, benign proliferativ brystsykdom, benign prostatahyperplasi,
X-bundet lymfocellulær proliferativ sykdom, lymfocellulær proliferativ sykdom etter
transplantasjon, makuladegenerasjon, retinopatier, proliferativ vitreoretinopati og ikke-
25
kankrøse lymfocellulære proliferative sykdommer.
I bestemte utførelsesformer er den cellulære proliferative sykdom kreft. I noen
utførelsesformer velges kreften fra gruppen bestående av eggstokkreft; livmorhalskreft;
brystkreft; prostatakreft; testikkelkreft, lungekreft, nyrekreft; kolorektal kreft; hudkreft;
30
hjernekreft; leukemi, herunder akutt myeloid leukemi, kronisk myeloid leukemi, akutt lymfoid
leukemi og kronisk lymfoid leukemi.
I noen utførelsesformer er kreftcellene tumorceller. I bestemte utførelsesformer velges
tumorcellene fra gruppen bestående av ovarieceller, cervikale celler, uterine celler, vaginale
35
celler, brystceller, prostataceller, testikkelceller, lungeceller, nyreceller, kolorektalceller,
mageceller, adrenalceller, munnceller, spiserørsceller, hepatiske celler, galleblæreceller,
knokkelceller, lymfeceller, øyeceller, hudceller og hjernesvulstceller.
NO/EP2600719
4
Den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre en fremgangsmåte for fremstillingen av en
forbindelse ifølge formel I. I noen utførelsesformer omfatter fremgangsmåten å behandle en
forbindelse ifølge formel II
Formel II
5
med et amin valgt fra gruppen bestående av 4-(4-metylpiperazin-1-yl)anilin, 4-morfolinoanilin,
og
hvor R1 er (C1-C6)alkyl eller (C3-C8)sykloalkyl; R3 er uavhengig ved hver forekomst (C1C6)alkoksy; og R4 er H eller (C1-C6)alkoksy. Fremgangsmåten innbefatter videre oppnåelse av
10
en forbindelse ifølge formel I.
I noen utførelsesformer fremstilles en forbindelse ifølge formel II ved å bringe en forbindelse
ifølge formel III
Formel III
15
til å reagere med en oksidant.
I noen utførelsesformer fremstilles en forbindelse ifølge formel III ved å bringe en forbindelse
ifølge formel IV
NO/EP2600719
5
Formel IV
til å reagere med 2-cyaneddiksyre i nærvær av benzylamin og eddiksyre.
I noen utførelsesformer fremstilles en forbindelse ifølge IV ved selektivt å oksidere en
5
forbindelse ifølge formel V
Formel V.
I noen utførelsesformer fremstilles en forbindelse ifølge formel V ved å redusere en
forbindelse ifølge formel VI
Formel VI
10
I ytterligere utførelsesformer fremstilles en forbindelse ifølge formel VI ved å bringe en
forbindelse ifølge formel VII
Formel VII
til å reagere med et amin som har formelen NH2R1.
NO/EP2600719
6
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
Forbindelsene og sammensetningene ifølge oppfinnelsen menes å selektivt inhibere
proliferasjon av kreftceller og drepe ulike tumorcelletyper. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen
5
inhiberer ulike proteinkinaser. Selv om det har blitt rapportert at lignende forbindelser
inhiberer kinaseaktivitet (se for eksempel U.S. 6,498,163), har forbindelsene ifølge den
foreliggende oppfinnelse en overraskende annerledes kinaseinhibisjonsprofil og inhiberer et
bredere område av proteinkinaser.
10
Det menes at forbindelsene ifølge oppfinnelsen inhiberer proliferasjonen av tumorceller og,
for noen forbindelser, induserer celledød. Celledød er et resultat av induksjon av apoptose.
Det menes at forbindelsene er effektive mot en lang rekke tumortyper, herunder, men ikke
begrenset til, følgende: eggstokkreft, brystkreft, prostatakreft, lungekreft, nyrekreft, kolorektal
kreft, hjernekreft og leukemi.
15
Det menes også at forbindelsene er nyttige i behandlingen av ikke-kankrøse cellulære
proliferative sykdommer, herunder, men ikke begrenset til følgende: hemangiomatose hos
nyfødte, sekundær progressiv multippel sklerose, kronisk progressiv myelodegenerativ
sykdom, nevrofibromatose, ganglionevromatose, keloiddannelse, Pagets sykdom, fibrocystisk
20
brystsykdom, uterine fibroider, Peyronies sykdom, Dupuytrens sykdom, restenose og
cirrhose.
Kort beskrivelse av tegningene
25
Den foregående korte beskrivelse så vel som den følgende detaljerte beskrivelse av
utførelsesformene, vil fremgå klarere under henvisning til de medfølgende tegninger. Av
illustrasjonshensyn vises i tegningene noen utførelsesformer som kan være fordelaktige.
Figur 1 er en graf som viser effektiviteten av 8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-
30
yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril i å inhibere vekst av
Colo-205-tumorfragmenter implantert i atymiske nakne hunnmus.
I. Definisjoner
35
A. Generelt
Som anvendt i beskrivelsen og de medfølgende krav, innbefatter entallsformene "en", "et",
"det" og "den" entalls- og flertallshenvisninger med mindre annet tydelig fremgår av
NO/EP2600719
7
sammenhengen.
Som anvendt heri anvendes uttrykkene "behandle" og "behandling" på ensbetydende måte og
er ment å indikere en utsettelse av en sykdoms utvikling og/eller en reduksjon i
5
alvorlighetsgraden av symptomer som har utviklet seg eller forventes å utvikle seg.
Uttrykkene innbefatter videre forbedring av eksisterende symptomer, forebygging av
ytterligere symptomer og forbedring eller forebygging av symptomenes underliggende
metabolske årsaker.
10
Som anvendt heri betyr "individ" (som i pasienten i behandlingen) både pattedyr og ikkepattedyr. Pattedyr innbefatter for eksempel mennesker; ikke-humane primater, f.eks.
menneskeaper og aper; kveg; hester; får; og geiter. Ikke-pattedyr innbefatter for eksempel
fisk og fugler.
15
Uttrykket "effektiv mengde" når det anvendes til å beskrive behandling til et individ som lider
av kreft eller en annen cellulær proliferativ sykdom, viser til den mengde av en forbindelse
ifølge formel I som inhiberer den abnormale vekst eller proliferasjon, eller alternativt induserer
apoptose av kreftceller, hvilket resulterer i en terapeutisk nyttig og selektiv cytotoksisk effekt
på proliferative celler.
20
Uttrykket "cellulær proliferativ sykdom" betyr en sykdom hvor uønsket celleproliferasjon av én
eller flere delmengder av celler finner sted i en multicellulær organisme. I noen slike
sykdommer dannes celler av organismen ved en atypisk, akselerert hastighet.
25
B. Kjemi
I de følgende avsnitt innbefatter noen av definisjonene eksempler. Eksemplene er ment å
være illustrerende, og ikke begrensende.
30
Uttrykket "alkyl", i seg selv eller som del av en annen substituent betyr, med mindre annet
fremgår, en rett, forgrenet eller syklisk hydrokarbonkjede (sykloalkyl) der antallet
karbonatomer er benevnt (Dvs. C1-C6 betyr ett til seks karbonatomer) og innbefatter
rettkjedede, forgrenede eller sykliske grupper. Eksempler innbefatter: metyl, etyl, propyl,
isopropyl, butyl, isobutyl, tert-butyl, pentyl, neopentyl, heksyl, sykloheksyl og
35
syklopropylmetyl. Foretrukne alkylgrupper er (C1-C3)alkyl, især metyl, etyl og isopropyl.
Foretrukne sykloalkylgrupper innbefatter (C3-C8)sykloalkyl, idet de mest foretrukne (C3C8)sykloalkylgrupper er syklopentyl og sykloheksyl.
NO/EP2600719
8
Uttrykket "alkoksy" anvendt alene eller i kombinasjon med andre uttrykk betyr, med mindre
annet er angitt, en alkylgruppe som har det benevnte antall karbonatomer, som definert
ovenfor, forbundet med resten av molekylet via et oksygenatom, slik som for eksempel
metoksy, etoksy, 1-propoksy, 2-propoksy (isopropoksy) og de andre høyere homologer og
5
isomerer. Foretrukne er (C1-C3)alkoksy, især etoksy og metoksy.
Uttrykket "cyano" viser til en -C≡N-gruppe.
Uttrykkene "halo" eller "halogen" i seg selv eller som en del av en annen substituent betyr,
10
med mindre annet er angitt, et monovalent fluor-, klor-, brom-, eller jodatom, fortrinnsvis fluor,
klor eller brom, mer foretrukket fluor eller klor.
Uttrykket "aromatisk" viser generelt til en karbosyklus eller heterosyklus som har én eller flere
flerumettede ringer med aromatisk karakter (dvs. som har (4n + 2) delokaliserte π (pi)-
15
elektroner, hvor n er et heltall).
II. Forbindelser ifølge oppfinnelsen
Forbindelser ifølge oppfinnelsen innbefatter forbindelsene ifølge formel I så vel som salter
20
derav:
Formel I.
I formel I er R1 (C1-C6)alkyl eller (C3-C8)sykloalkyl. I foretrukne utførelsesformer kan R1 være
syklopentyl eller sykloheksyl, mest foretrukket syklopentyl.
25
R2 er 4-(4-metylpiperazin-1-yl)anilinyl, 4-morfolinoanilinyl eller
R3 er uavhengig ved hver forekomst (C1-C6)alkoksy, fortrinnsvis metoksy eller etoksy, mest
NO/EP2600719
9
foretrukket metoksy.
R4 er H eller (C1-C6)alkoksy. Når R4 er (C1-C6)alkoksy, er det fortrinnsvis enten etoksy eller
metoksy, mest foretrukket metoksy.
5
I noen utførelsesformer er hver forekomst av R3 metoksy, og R4 er hydrogen. I andre
utførelsesformer er hver forekomst av R3 så vel som R4 metoksy.
De følgende forbindelser ifølge oppfinnelsen ble fremstilt: 8-syklopentyl-2-((4-(410
metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril, 8syklopentyl-2-((4-morfolinofenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril,
8-syklopentyl-2-((3,5-dimetoksyfenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6karbonitril, 8-syklopentyl-2-((3,5-dimetoksyfenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3d]pyrimidin-6-karbonitril2 og 8-sykloheksyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-
15
7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril.
Andre eksempler på forbindelser innenfor omfanget av den foreliggende oppfinnelse
innbefatter de følgende, og salter derav: 8-sykloheksyl-2-((4-morfolinofenyl)amino)-7-okso7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril, 8-sykloheksyl-2-((3,5-dimetoksyfenyl)amino)-7-
20
okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril, 8-sykloheksyl-7-okso-2-((3,4,5trimetoksyfenyl)amino)-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril, 8-syklopropyl-7-okso-2((3,4,5-trimetoksyfenyl)amino)-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril, 8-syklobutyl-7okso-2-((3,4,5-trimetoksyfenyl)amino)-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril, 8syklobutyl-2-((3,5-dimetoksyfenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-
25
karbonitril, 8-syklopropyl-2-((3,5-dimetoksyfenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3d]pyrimidin-6-karbonitril, 8-syklopropyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril, 8-syklobutyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril, 8-syklobutyl-2-((4morfolinofenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril og 8-syklopropyl-
30
2-((4-morfolinofenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril.
Det er klart at andre bestemte og foretrukne utførelsesformer av forbindelsene ifølge
oppfinnelsen vil kombinere de ovenfor uttrykkelig beskrevne trekk av de bestemte og
foretrukne utførelsesformer ifølge oppfinnelsen. Utførelsesformer som defineres av slike
35
kombinasjoner, betraktes som bestemte utførelsesformer ifølge oppfinnelsen.
I andre foretrukne utførelsesformer er forbindelsen ifølge formel I eller en hvilken som helst
2
O.a. To forekomster av samme forbindelse.
NO/EP2600719
10
utførelsesform derav, en isolert forbindelse. I andre foretrukne utførelsesformer er
forbindelsen ifølge formel I og sammensetninger som inneholder forbindelsene, herunder
farmasøytiske sammensetninger, i det vesentlige fri for farmasøytisk uakseptable
kontaminanter. En farmasøytisk uakseptabel kontaminant er en substans som, dersom den er
5
til stede i mer enn en ubetydelig mengde, vil gjøre forbindelsen eller sammensetningen
uegnet for anvendelse som et farmasøytisk legemiddel for terapeutisk administrasjon.
Eksempler innbefatter toksiske materialer slik som halogeniserte løsemidler og tungmetaller,
og potensielt infeksiøse materialer slik som bakterier, fungi, virus og bakteriesporer og
soppsporer.
10
III. Fremgangsmåter for fremstilling av forbindelser ifølge oppfinnelsen og
mellomprodukter som er nyttige i syntesen av forbindelser ifølge oppfinnelsen
Den foreliggende oppfinnelse tilveiebringer fremgangsmåter for fremstilling av forbindelser
15
ifølge formel I, mellomprodukter som er nyttige i fremstillingen av slike forbindelser, og
fremgangsmåter for fremstilling av slike mellomprodukter.
Forbindelsene kan fremstilles ved et mangfold av syntetiske veier. Representative prosedyrer
er vist i skjema 1-5. Det vil være åpenbart at forbindelsene kan syntetiseres ved substitusjon
20
av de formålstjenlige utgangsmaterialer, reaktanter og reagenser i de nedenfor viste synteser,
hvor R1, R2, R3 og R4 er som definert som tidligere anført heri. Det vil også være klart at
rekkefølgen av selve trinnene kan endres avhengig av reaksjonenes art.
Prekursorforbindelser, mellomprodukter og reagenser er kommersielt tilgjengelige eller kan
fremstilles fra kommersielt tilgjengelige utgangsmaterialer. De følgende skjemaer er
25
representative, og er på ingen måte begrenset til omfanget av forbindelsene i
utførelsesformene ifølge den foreliggende oppfinnelse.
Skjema 1
En syntese av forbindelser ifølge formel (2) er vist i skjema 1. Forbindelser ifølge formel (2)
kan fremstilles ved å bringe et kommersielt tilgjengelig 4-halopyrimidinkarboksylat slik som en
30
forbindelse ifølge formel (1), til å reagere med et amin, R1-NH2, i nærvær av en base i et
polart eller protonfritt løsemiddel. Nyttige baser innbefatter organiske baser, for eksempel
NO/EP2600719
11
tertiære aminer slik som diisopropyletylamin (DIPEA) eller trietylamin (TEA). Nyttige
løsemidler kan innbefatte tetrahydrofuran (THF), acetonitril, p-dioksan eller N,N,dimetylformamid3 (DMF). Reaksjonen kan varmebehandles i den grad det er nødvendig, ved
en temperatur som er passende for et gitt løsemiddel.
Skjema 2
5
En syntese av forbindelser ifølge formel (3) er vist i skjema 2. Ester (2) kan reduseres under
anvendelse av et reduksjonsmiddel, slik som litiumaluminiumhydrid (LAH) i et polart
løsemiddel for å tilveiebringe et alkoholmellomprodukt. Andre nyttige reduksjonsmidler
innbefatter diisobutylaluminiumhydrid (DIBAL-H, 2 ekvivalenter), boran-THF-kompleks og
10
lignende. Nyttige løsemidler innbefatter tetrahydrofuran (THF), dietyleter og lignende.
Mellomproduktalkoholen kan oksideres til aldehyd (3) under anvendelse av et
oksidasjonsmiddel slik som mangandioksid i et halogenisert løsemiddel. Andre nyttige
oksidasjonsmidler som er i stand til å oksidere en alkohol til et aldehyd, slik som kun som
eksempel Dess-Martin periodinan, er velkjente innenfor teknikken. Nyttige halogeniserte
15
løsemidler innbefatter diklormetan, kloroform og lignende.
I en alternativ utførelsesform kan esteren (2) omdannes direkte til aldehyd (3) ved behandling
med 1 ekvivalent DIBAL-H ved en passende temperatur i et løsemiddel slik som diklormetan,
THF eller toluen.
Skjema 3
20
3
O.a. ”N,N,-dimetylformamid” oversatt i henhold til kildetekst.
NO/EP2600719
12
En syntese av forbindelser ifølge formel (4) er tilveiebrakt i skjema 3. Ifølge skjema 3 kan
forbindelser ifølge formel (3) kondenseres med cyaneddiksyre i eddiksyre for å tilveiebringe
en forbindelse ifølge formel (4). En katalytisk mengde benzylamin kan anvendes i
kondenseringsreaksjonen. Temperaturer for kondenseringsreaksjonen kan være i området fra
5
cirka 100°C til cirka 120°C (reflux).
Skjema 4
En syntese av forbindelser ifølge formel (5) er vist i skjema 4. Forbindelsen ifølge formel (4)
kan oksideres til et sulfoksid ved å behandle (4) med et oksidasjonsmiddel. Nyttige
10
oksidasjonsmidler kan innbefatte, men er ikke begrenset til, meta-klorperoksybenzosyre (mCPBA), hydrogenperoksid, natriumhypokloritt, natriumperiodat, tert-butylhypokloritt og
persyrer slik som pereddiksyre. Støkiometrisk anvendelse av oksidasjonsmiddelet kan
benyttes ved behov for å kontrollere oksidasjonstilstanden av svovel. Nyttige løsemidler
innbefatter eddiksyre og halogeniserte løsemidler slik som kloroform eller diklormetan, og
15
lignende. Et foretrukket oksidasjonsmiddel er m-CPBA i diklormetan.
Skjema 5
Syntese av en forbindelse ifølge formel I er vist i skjema 5. Forbindelsen ifølge formel (5) kan
behandles med en aminforbindelse som har formelen R2-NH2 for å tilveiebringe en
20
forbindelse ifølge formel I. R2 kan være som definert tidligere heri. Eksempler på løsemidler
som er egnet for denne reaksjon, innbefatter benzenoidløsemidler slik som toluen, o-xylen,
m-xylen, p-xylen, xylenblandinger, anisol og blandinger derav. Andre nyttige løsemidler
innbefatter p-dioksan, 1,2-dimetoksyetan (DME), THF og lignende. Nyttige temperaturer til å
NO/EP2600719
13
fremkalle reaksjon kan være i området fra cirka 65°C til cirka 150°C, avhengig av
løsemiddelet som anvendes. Et molart overskudd av aminet R2-NH2 kan anvendes, herunder
hvor som helst fra cirka 1,05 til cirka 2,0 ekvivalenter.
5
De ovenfor beskrevne reaksjoner utføres, med mindre annet er anført, vanligvis ved et trykk
på cirka én til cirka tre atmosfære, fortrinnsvis ved omgivelsestrykk (cirka én atmosfære).
Den foreliggende oppfinnelse omslutter videre isolerte forbindelser ifølge formel I. Uttrykket
"isolert forbindelse" viser til et preparat av en forbindelse ifølge formel I, eller en blanding av
10
forbindelser ifølge formel I, hvor den isolerte forbindelse har blitt separert fra de anvendte
reagenser og/eller dannede biprodukter under syntesen av forbindelsen eller forbindelsene.
"Isolert" betyr ikke at preparatet er teknisk rent (homogent), men det er tilstrekkelig rent til å
blandes i en form hvori det kan anvendes terapeutisk. En "isolert forbindelse" viser til et
preparat av en forbindelse ifølge formel I eller en blanding av forbindelser ifølge formel I som
15
inneholder den benevnte forbindelse eller blanding av forbindelser ifølge formel I i en mengde
på i det minste 10 vektprosent av den totale vekt. Det foretrekkes at preparatet inneholder
den benevnte forbindelse eller blanding av forbindelser i en mengde på i det minste 50
vektprosent av den totale vekt; mer foretrukket i det minste 80 vektprosent av den totale vekt;
og mest foretrukket i det minste 90 prosent, i det minste 95 prosent eller i det minste 98
20
vektprosent av preparatets totale vekt.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen og mellomprodukter kan isoleres fra deres
reaksjonsblandinger og renses ved hjelp av standardteknikker slik som filtrering, væskevæske-ekstraksjon, fastfaseekstraksjon, destillasjon, rekrystallisering eller kromatografi,
25
herunder flash-kolonnekromatografi og HPLC. Den foretrukne fremgangsmåte for rensning av
forbindelsene ifølge formel I eller salter derav, omfatter å krystallisere forbindelsen eller salt
fra et løsemiddel til å danne, fortrinnsvis, en krystallform av forbindelsene eller salter derav.
Etter krystallisering fjernes krystalliseringsløsemiddelet ved en fremgangsmåte annet enn
fordampning, for eksempel filtrering eller dekantering, og deretter vaskes krystallene
30
fortrinnsvis under anvendelse av rent løsemiddel (eller en blanding av rene løsemidler).
Foretrukne løsemidler til krystallisering innbefatter vann, alkoholer, især alkoholer som
inneholder opptil fire karbonatomer, slik som metanol, etanol, isopropanol og butan-1-ol,
butan-2-ol, og 2-metyl-2-propanol, etere, for eksempel dietyleter, diisopropyleter, tbutylmetyleter, 1,2-dimetoksyetan, tetrahydrofuran og 1,4-dioksan, karboksylsyrer, for
35
eksempel maursyre og eddiksyre, og hydrokarbonløsemidler, for eksempel pentan, heksan,
toluen, og blandinger derav, især vandige blandinger slik som vandig etanol. Rene
løsemidler, fortrinnsvis i det minste analytisk kvalitet, og mer foretrukket farmasøytisk kvalitet,
anvendes. I en foretrukket utførelsesform av fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen, isoleres
NO/EP2600719
14
produktene således. I forbindelsene ifølge oppfinnelsen ifølge formel I eller salt derav, og
farmasøytiske sammensetninger derav, foretrekkes det at forbindelsen ifølge formel I eller
salt derav er i eller fremstilt ut fra en krystallform, fortrinnsvis fremstilt i overensstemmelse
med en slik fremgangsmåte.
5
De syntetiske fremgangsmåter som beskrives ovenfor, reflekterer en konvergent syntesestrategi. Således kan to komponenter syntetiseres og utarbeides separat forut for
kondensering eller kobling av de to komponenter for å danne målforbindelsene. Disse
konvergente syntetiske systemer tillater anordning av sammenstillingstrinnene for
10
målforbindelsenes backbone og derivatiseringen av derivatiserbare funksjonaliteter for å
legge til rette for funksjonell gruppe-sensitivitet og/eller for å muliggjøre at funksjonelle
grupper eller elementer kan introduseres enten før eller etter sammenstillingen av
målforbindelsenes backbone via de beskrevne kondenserings- eller koblingsreaksjoner.
15
Det vil være klart for fagmannen at visse aromatiske substituenter i forbindelsene ifølge
oppfinnelsen, mellomprodukter som anvendes i de ovenfor beskrevne fremgangsmåter, eller
prekursorer for disse, kan introduseres ved å benytte aromatiske substitusjonsreaksjoner til å
introdusere eller skifte ut en substituent, eller ved å anvende funksjonell gruppetransformasjoner til å modifisere en eksisterende substituent, eller en kombinasjon derav.
20
Slike reaksjoner kan utføres enten forut for eller umiddelbart etter de ovenfor nevnte
fremgangsmåter, og er inkludert som en del av fremgangsmåteaspektet ifølge oppfinnelsen.
Reagensene og reaksjonsbetingelsene for slike prosedyrer er kjente innenfor teknikken.
Spesifikke eksempler på prosedyrer som kan benyttes, innbefatter, men er ikke begrenset til,
elektrofil funksjonalisering av en aromatisk ring, for eksempel via nitrering, halogenisering
25
eller acylering; transformasjon av en nitrogruppe til en aminogruppe, for eksempel ved hjelp
av reduksjon, slik som ved hjelp av katalytisk hydrogenering; acylering, alkylering eller
sulfonylisering av en amino- eller hydroksylgruppe; utskifting av en aminogruppe med en
annen funksjonell gruppe via overføring til et mellom-diazoniumsalt etterfulgt av nukleofil eller
fri radikal-substituering av diazoniumsaltet; eller utskifting av et halogen med en annen
30
gruppe, for eksempel via nukleofil eller organometallisk katalyserte substitusjonsreaksjoner.
I tillegg kan i de ovennevnte fremgangsmåter visse funksjonelle grupper som ville være
sensitive overfor reaksjonsbetingelsene, beskyttes ved hjelp av beskyttende grupper. En
beskyttende gruppe er et derivat av en kjemisk funksjonell gruppe som ellers ville være ikke-
35
kompatibel med de betingelser som er nødvendige for å utføre en reaksjon, som etter at
reaksjonen har blitt gjennomført, kan fjernes for å regenerere den originale funksjonelle
gruppe, som derved betraktes som å ha blitt "beskyttet". En hvilken som helst kjemisk
funksjonalitet som er en strukturell komponent av en hvilken som helst av reagensene som
NO/EP2600719
15
anvendes til å syntetisere forbindelser ifølge denne oppfinnelsen, kan valgfritt beskyttes med
en kjemisk beskyttelsesgruppe dersom en slik beskyttende gruppe er nyttig i syntesen av
forbindelser ifølge denne oppfinnelse. Fagmannen vet når beskyttende grupper er nødvendig,
hvordan slike grupper velges, og fremgangsmåter som kan anvendes for selektivt å
5
introdusere og selektivt fjerne dem, ettersom fremgangsmåter for selektering og anvendelse
av beskyttende grupper er grundig dokumentert i den kjemiske litteratur. Teknikker for
selektering, inkorporering og fjerning av kjemiske beskyttende grupper finnes for eksempel i
Protective Groups in Organic Synthesis av Theodora W. Greene, Peter G. M. Wuts (John
Wiley & Sons, Inc. 1999), som det hermed henvises til, og som i sin helhet skal betraktes som
10
værende en del av den foreliggende søknad.
I tillegg til å anvende en beskyttende gruppe, kan sensitive funksjonelle grupper introduseres
som syntetiske prekursorer til den funksjonelle gruppe som ønskes i mellomproduktet eller
sluttproduktet. Et eksempel på dette er en aromatisk nitro (-NO2)-gruppe. Den aromatiske
15
nitrogruppe gjennomgår ikke noen av en aromatisk aminogruppes nukleofile reaksjoner.
Nitrogruppen kan imidlertid tjene som ekvivalenten av en beskyttende aminogruppe, fordi den
enkelt reduseres til aminogruppen under milde betingelser som er selektive for nitrogruppen i
forhold til de fleste andre funksjonelle grupper.
20
Det vil være klart for fagmannen at de beskrevne fremgangsmåter ikke vil være de eneste
midler ved hjelp av hvilke forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan syntetiseres, og at et svært
bredt utvalg av syntetiske organiske reaksjoner er tilgjengelig som potensielt kan benyttes til å
syntetisere forbindelser ifølge oppfinnelsen. Fagmannen vet hvordan slike egnede syntetiske
veier selekteres og implementeres. Egnede syntetiske fremgangsmåter kan identifiseres
25
under henvisning til litteraturen, herunder referansekilder slik som Comprehensive Organic
Synthesis, Ed. B. M. Trost og I. Fleming (Pergamon Press, 1991), Comprehensive Organic
Functional Group Transformations, Ed. A. R. Katritzky, O. Meth-Cohn, and C. W. Rees
(Pergamon Press, 1996), Comprehensive Organic Functional Group Transformations II, Ed.
A. R. Katritzky og R. J. K. Taylor (Editor) (Elsevier, 2. utgave, 2004), Comprehensive
30
Heterocyclic Chemistry, Ed. A. R. Katritzky og C. W. Rees (Pergamon Press, 1984),
Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, Ed. A. R. Katritzky, C. W. Rees og E. F. V. Scriven
(Pergamon Press, 1996), og Advanced Organic Chemistry, 4th Ed., J. March (John Wiley &
Sons, 1992).
35
IV. Behandling av cellulære proliferative sykdommer under anvendelse av forbindelser
ifølge oppfinnelsen
Oppfinnelsen er også rettet mot anvendelsen i medisin av en forbindelse ifølge formel I, eller
NO/EP2600719
16
et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
Oppfinnelsen er også rettet mot forbindelser ifølge formel I og farmasøytisk akseptable salter
derav med henblikk på behandling av en proliferativ sykdom, eller med henblikk på å indusere
5
apoptose av tumorceller.
Oppfinnelsen er også rettet mot et medikament som omfatter en forbindelse ifølge formel I
eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav til anvendelse i behandling av en proliferativ
sykdom, eller med henblikk på å indusere apoptose av tumorceller.
10
Oppfinnelsen er også rettet mot anvendelsen av en forbindelse ifølge formel I eller et
farmasøytisk akseptabelt salt derav i fremstillingen av et medikament for behandling av en
cellulær proliferativ sykdom, især kreft, eller med henblikk på å indusere apoptose av
tumorceller i et individ som er rammet av kreft.
15
Særlige og foretrukne utførelsesformer av dette aspekt ifølge oppfinnelsen er de hvor
forbindelsen ifølge formel I som anvendes i fremgangsmåten av behandling, enten alene eller
som en del av en sammensetning, er en særlig eller foretrukket utførelsesform av
forbindelsen ifølge formel I i beskrivelsen av forbindelsene og sammensetningene ifølge
20
oppfinnelsen som tilveiebrakt heri.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan administreres til individer (pattedyr, herunder dyr og
mennesker) som lider av en cellulær proliferativ sykdom, slik som kreft, maligne og benigne
tumorer, proliferative sykdommer i blodkar, autoimmune sykdommer og fibrotiske sykdommer.
25
I en bestemt utførelsesform ifølge oppfinnelsen er individet som behandles, et menneske.
Forbindelsene menes å være effektive mot en lang rekke tumortyper, herunder, men ikke
begrenset til de følgende: eggstokkreft; livmorhalskreft; brystkreft; prostatakreft; testikkelkreft,
lungekreft, nyrekreft; kolorektal kreft; hudkreft; hjernekreft; leukemi, herunder akutt myeloid
30
leukemi, kronisk myeloid leukemi, akutt lymfoid leukemi og kronisk lymfoid leukemi.
Kreft som kan behandles ved hjelp av forbindelsene, sammensetningene og ifølge
oppfinnelsen, innbefatter nærmere bestemt, men er ikke begrenset til, de følgende:
hjertekreft, herunder for eksempel sarkom, f.eks. angiosarkom, fibrosarkom,
35
rabdomyosarkom og liposarkom; myksom; rabdomyom; fibrom; lipom og teratom;
lungekreft, herunder for eksempel bronkogent karsinom, f.eks. plateepitelkarsinom,
udifferensiert småcellet karsinom, udifferensiert storcellet karsinom og adenokarsinom;
alveolært og bronkiolært karsinom; bronkialt adenom; sarkom; lymfom; kondromatost
NO/EP2600719
17
hamartom; og mesoteliom;
gastrointestinal kreft, herunder for eksempel kreft i spiserøret, f.eks. plateepitelkarsinom,
adenokarsinom, leiomyosarkom og lymfom; kreft i magen, f.eks. karsinom, lymfom og
leiomyosarkom; kreft i pankreas, f.eks. duktalt adenokarsinom, insulinom, glukagonom,
5
gastrinom, karsinoide tumorer og vipom; kreft i tynntarmen, f.eks. adenokarsinom, lymfom,
karsinoide tumorer, Kaposis sarkom, leiomyom, hemangiom, lipom, nevrofibrom og fibrom;
kreft i tykktarmen, f.eks. adenokarsinom, tubulært adenom, villøst adenom, hamartom og
leiomyom;
kreft i det urogenitale system, herunder for eksempel nyrekreft, f.eks. adenokarsinom, Wilms'
10
tumor (nefroblastom), lymfom og leukemi; kreft i blære og urinrør, f.eks. plateepitelkarsinom,
overgangsepitelkarsinom og adenokarsinom; kreft i prostata, f.eks. adenokarsinom og
sarkom; kreft i testis, f.eks. seminom, teratom, embryonalt karsinom, teratokarsinom,
choriokarsinom, sarkom, interstitielt cellekarsinom, fibrom, fibroadenom, adenomatoide
tumorer og lipom;
15
former for leverkreft, herunder for eksempel hepatom, f.eks. hepatocellulært karsinom;
kolangiokarsinom; hepatoblastom; angiosarkom; hepatocellulært adenom; og hemangiom;
knokkelkreft, herunder for eksempel osteogent sarkom (osteosarkom), fibrosarkom, malignt
fibrøst histiocytom, kondrosarkom, Ewings sarkom, malignt lymfom (retikulumcellesarkom),
multiple myelomer, malign kjempecelletumorkordom, osteokondrom (osteokartilaginære
20
eksostoser), benignt kondrom, kondroblastom, kondromyksofibrom, osteoid osteom og
kjempecelletumorer;
kreft i nervesystemet, herunder for eksempel kreft i hjerneskallen, f.eks. osteom, hemangiom,
granulom, xantom og osteitis deformans; kreft i meningene, f.eks. meningiom,
meningiosarkom og gliomatose; kreft i hjernen, f.eks. astrocytom, medulloblastom, gliom,
25
ependymom, germinom (pinealom), glioblastom multiforme, oligodendrogliom, schwannom,
retinoblastom og kongenitale tumorer; og kreft i ryggmargen, f.eks. nevrofibrom, meningiom,
gliom og sarkom;
gynekologisk kreft, herunder for eksempel kreft i livmoren, f.eks. endometriekarsinom; kreft i
livmorhalsen, f.eks. cervikalt karsinom og pre-tumor cervikal dysplasi; kreft i eggstokkene,
30
f.eks. ovariekarsinom, herunder serøst cystadenokarsinom, mucinøst cystadenokarcinom,
ikke-klassifisert karsinom, konus-thekale celletumorer, Sertoli-Leydig celletumorer,
dysgerminom og malignt teratom; kreft i vulva, f.eks. plateepitelkarsinom, intraepitelialt
karsinom, adenokarsinom, fibrosarkom og melanom; kreft i vagina, f.eks. klarcellet karsinom,
plateepitelkarsinom, botryoid sarkom og embryonalt rabdomyosarkom; og kreft i egglederne,
35
f.eks. karsinom;
hematologisk kreft, herunder for eksempel blodkreft, f.eks. akutt myeloid leukemi, kronisk
myeloid leukemi, akutt lymfoblastisk leukemi, kronisk lymfocytisk leukemi, myeloproliferative
sykdommer, multiple myelomer og myelodysplastisk syndrom, Hodgkins lymfom, ikke-
NO/EP2600719
18
Hodgkins lymfom (malignt lymfom) og Waldenstrøms makroglobulinemi;
hudkreft, herunder for eksempel malignt melanom, basalcellekarsinom, plateepitelkarsinom,
Kaposis sarkom, moles dysplastiske nevi, lipom, angiom, dermatofibrom, keloider, psoriasis;
og
5
kreft i binyrene, herunder for eksempel nevroblastom.
Kreft kan være solide tumorer som kan eller ikke kan være metastatiske. Kreft kan også
opptre i diffust vev, slik som i leukemi. Uttrykket "tumorcelle" som anvendt heri, innbefatter en
celle som er rammet av en hvilken som helst av de ovenfor identifiserte sykdommer.
10
Det menes også at forbindelsene er nyttige i behandlingen av ikke-kankrøse cellulære
proliferative sykdommer, det vil si cellulære proliferative sykdommer som er karakterisert av
benigne indikasjoner. Slike sykdommer kan også være kjent som "cytoproliferative" eller
"hyperproliferative" ved at celler dannes av kroppen ved en atypisk, forhøyet hastighet. Ikke15
kankrøse cellulære proliferative sykdommer som det menes kan behandles av forbindelser
ifølge oppfinnelsen, innbefatter for eksempel: hemangiomatose hos nyfødte, sekundær
progressiv multippel sklerose, aterosklerose, kronisk progressiv myelodegenerativ sykdom,
nevrofibromatose, ganglionevromatose, keloiddannelse, Pagets sykdom, fibrocystisk
brystsykdom, uterine fibroider, Peyronies sykdom, Dupuytrens sykdom, restenose, benign
20
proliferativ brystsykdom, benign prostatahyperplasi, X-bundet lymfocellulær proliferativ
sykdom (Duncans sykdom), lymfocellulær proliferativ sykdom etter transplantasjon (PTLD),
makuladegenerasjon, og retinopatier slik som diabetiske retinopatier og proliferativ
vitreoretinopati (PVR).
25
Andre ikke-kankrøse proliferative sykdommer som menes å kunne behandles ved hjelp av
forbindelser ifølge oppfinnelsen, innbefatter tilstedeværelsen av pre-kankrøse
lymfoproliferative celler assosiert med en forhøyet risiko for progresjon til en kankrøs sykdom.
Mange ikke-kankrøse lymfocellulære proliferative sykdommer er assosiert med latente
virusinfeksjoner, slik som Epstein-Barr-virus (EBV) og hepatitt-C. Disse sykdommene
30
begynner ofte som en benign patologi, og videreutvikler seg til lymfoid neoplasi som en
funksjon av tid.
V. Salter av forbindelser ifølge oppfinnelsen
35
Forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelse kan anta form av salter. Uttrykket "salter"
omslutter addisjonssalter av frie syrer eller frie baser som er forbindelser ifølge oppfinnelsen.
Uttrykket "farmasøytisk akseptabelt salt" viser til salter som innehar toksisitetsprofiler innenfor
et område som frembyr egnethet i farmasøytiske applikasjoner. Farmasøytisk uakseptable
NO/EP2600719
19
salter kan ikke desto mindre inneha egenskaper slik som høy krystallinitet, som er egnet i
utførelsen av den foreliggende oppfinnelse, slik som for eksempel egnethet i fremgangsmåten
av syntese, rensning eller formulering av forbindelser ifølge oppfinnelsen.
5
Egnede farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter kan fremstilles fra en uorganisk syre
eller fra en organisk syre. Eksempler på uorganiske syrer innbefatter salt-, brom-,
hydrogenjodid-, salpeter-, karbon-, svovel- og fosforsyre. Egnede organiske syrer kan velges
blant alifatisk, sykloalifatisk, aromatisk, aralifatisk, heterosyklisk, karboksyl- og sulfonklasser
av organiske syrer, eksempler på hvilke innbefatter maur-, eddik-, propion-, rav-, glykol-,
10
glukon-, melke-, eple-, tartar-, sitron-, askorbin-, glukoron-, malein-, fumar-, pyrodrue-,
asparagin-, glutamin-, benzo-, antranil-, 4-hydroksybenzo-, fenyleddik-, mandel-, embon(pamo-), metansulfon-, etansulfon-, benzensulfon-, pantoten-, trifluoreddik-,
trifluormetansulfon-, 2-hydroksyetansulfon-, p-toluensulfon-, sulfanil-, sykloheksylaminosulfon, stearin-, algin-, β-hydroksysmør-, salisyl-, galaktar- og galakturonsyre. Eksempler på
15
farmasøytisk uakseptable syreaddisjonssalter innbefatter for eksempel perklorater og
tetrafluorborater.
Alle disse salter kan fremstilles ved hjelp av konvensjonelle midler fra den tilsvarende
forbindelse ifølge formel I og den formålstjenlige syre. Det foretrekkes at saltene er i
20
krystallform, og fortrinnsvis fremstilt ved krystallisering av saltet fra et egnet løsemiddel.
Fagmannen vil vite hvordan egnede saltformer fremstilles og selekteres, for eksempel som
beskrevet i Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use av P. H. Stahl
og C. G. Wermuth (Wiley-VCH 2002).
25
VI. Farmasøytiske sammensetninger
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan administreres i form av en farmasøytisk
sammensetning i kombinasjon med en farmasøytisk akseptabel bærer. Den aktive ingrediens
i slike formuleringer kan omfatte fra 0,1 til 99,99 vektprosent. "Farmasøytisk akseptabel
30
bærer" betyr en hvilken som helst bærer, tynner eller eksipiens som er kompatibel med
formuleringens øvrige ingredienser og som ikke er deletære for mottakeren.
Det aktive stoff administreres fortrinnsvis med en farmasøytisk akseptabel bærer som velges
på bakgrunn av den valgte administrasjonsvei og standard farmasøytisk praksis. Det aktive
35
stoff kan formuleres i doseringsformer i overensstemmelse med standard praksis på området
for farmasøytiske preparater. Se Alphonso Gennaro, ed., Remington's Pharmaceutical
Sciences, 18th Edition (1990), Mack Publishing Co., Easton, PA. Egnede doseringsformer
kan for eksempel omfatte tabletter, kapsler, løsninger, parenterale løsninger, pastiller,
NO/EP2600719
20
stikkpiller eller suspensjoner.
Til parenteral administrasjon kan det aktive stoff blandes med en passende bærer eller et
passende fortynningsmiddel, slik som vann, en olje (fortrinnsvis en vegetabilsk olje), etanol,
5
saltløsning, vandig dekstrose (glukose) og relaterte sukkerløsninger, glyserol eller en glykol,
slik som propylenglykol eller polyetylenglykol. Løsninger til parenteral administrasjon
inneholder fortrinnsvis et vannløselig salt av det aktive stoff. Stabiliseringsmidler,
antioksiderende midler og preserveringsmidler kan også tilsettes. Egnede antioksiderende
midler innbefatter sulfitt, askorbinsyre, sitronsyre og dets salter, og natrium EDTA. Egnede
10
preserveringsmidler innbefatter benzalkonklorid, metyl- eller propyl-paraben, og klorbutanol.
Sammensetningen for parenteral administrasjon kan anta form av en vandig eller ikke-vandig
løsning, dispersjon, suspensjon eller emulsjon.
Til oral administrasjon kan det aktive stoff kombineres med én eller flere faste inaktive
15
ingredienser med henblikk på tillaging av tabletter, kapsler, piller, pulvere, granula eller andre
egnede orale doseringsformer. Eksempelvis kan det aktive stoff kombineres med i det minste
én eksipiens, slik som fyllstoffer, bindemidler, fuktighetsbevarende midler, desintegrerende
midler, oppløsningsforsinkende midler, absorpsjonsakseleratorer, fuktemidler, absorbenter
eller smøremidler. Ifølge i det minste én tablettutførelsesform kan det aktive stoff kombineres
20
med karboksymetylcellulosekalsium, magnesiumstearat, mannitol og stivelse, og deretter
formes til tabletter ved hjelp av tradisjonelle tabletteringsmetoder.
Den spesifikke dose av en forbindelse ifølge oppfinnelsen for å oppnå terapeutisk gagn med
henblikk på behandling av en cellulær proliferativ sykdom vil naturligvis bestemmes på
25
bakgrunn av den enkelte pasients bestemte omstendigheter, herunder pasientens størrelse,
vekt, alder og kjønn, den cellulære proliferative sykdoms art og stadium, den cellulære
proliferative sykdoms aggressivitet og forbindelsens administrasjonvei.
Eksempelvis kan en daglig dose på fra cirka 0,05 til cirka 50 mg/kg/dag anvendes, mer
30
foretrukket fra cirka 0,1 til cirka 10 mg/kg/dag. Høyere eller lavere doser betraktes også, da
det i noen tilfeller kan være nødvendig å anvende doseringer utenfor disse områdene. Den
daglige doseringen kan deles opp, slik som delt i like store deler i to til fire ganger per daglige
dosering per dag. Det foretrekkes at sammensetningene formuleres i en enhetsdoseform, idet
hver dose inneholder fra cirka 1 til cirka 500 mg, mer typisk cirka 10 til cirka 100 mg av aktivt
35
stoff per enhetsdose. Uttrykket "enhetsdoseform" viser til fysisk avgrensede enheter som
passer som enhetlige doseringer til mennesker og andre pattedyr, idet hver enhet inneholder
en forhåndsbestemt mengde aktivt materiale som er beregnet til å frembringe den ønskede
terapeutiske effekt i forbindelse med en passende farmasøytisk eksipiens.
NO/EP2600719
21
De farmasøytiske sammensetninger ifølge den foreliggende oppfinnelse kan også formuleres
slik at de tilveiebringer langsom eller kontrollert frigivelse av den aktive ingrediens deri under
anvendelse av for eksempel hydropropylmetylcellulose i varierende mengder for å
tilveiebringe den ønskede frigivelsesprofil, øvrige polymermatriser, geler, permeable
5
membraner, osmotiske systemer, flerlagsbelegg, mikropartikler, liposomer og/eller
mikrosfærer.
Generelt er et preparat med kontrollert frigivelse en farmasøytisk sammensetning som er i
stand til å frigi den aktive ingrediens i den ønskede hastighet for å bibeholde konstant
10
farmakologisk aktivitet i en ønsket tidsperiode. Slike doseringsformer tilveiebringer en tilførsel
av legemiddel til kroppen i løpet av en forutbestemt tidsperiode, og opprettholder således
legemiddelnivåer i det terapeutiske område i lengre tidsperioder enn konvensjonelle ikkekontrollerte formuleringer.
15
I US-patent nr. 5,674,533 beskrives farmasøytiske sammensetninger med kontrollert
frigivelse i flytende doseringsformer med henblikk på administrasjon av moguisteine, et potent
perifert antitussiv. I US-patent nr. 5,059,595 beskrives den kontrollerte frigivelse av aktive
stoffer under anvendelse av en gastroresistent tablett for behandlingen av organiske mentale
forstyrrelser. I US-patent nr. 5,591,767 beskrives et transdermalt plaster med væskereservoar
20
for den kontrollerte administrasjon av ketorolac, et ikke-steroid anti-inflammatorisk middel
med potente smertestillende egenskaper. I US-patent nr. 5,120,548 beskrives en
legemiddelavgivelsesanordning med kontrollert frigivelse bestående av svellbare polymerer. I
US-patent nr. 5,073,543 beskrives formuleringer med kontrollert frigivelse inneholdende en
tropisk faktor omsluttet av en gangliosid-liposom-vehikkel. I US-patent nr. 5,639,476
25
beskrives en stabil solid formulering med kontrollert frigivelse som har et belegg avledet fra
en vandig dispersjon av en hydrofob akrylpolymer. Biologisk nedbrytbare mikropartikler er
kjente for anvendelse i formuleringer med kontrollert frigivelse. I US-patent nr. 5,354,566
beskrives et pulver med kontrollert frigivelse som inneholder den aktive ingrediens. I USpatent nr. 5,733,566 beskrives anvendelsen av polymere mikropartikler som frigir
30
antiparasitære sammensetninger.
Den kontrollerte frigivelse av den aktive ingrediens kan stimuleres ved hjelp av ulike inducere,
for eksempel pH, temperatur, enzymer, vann eller andre fysiologiske betingelser eller
forbindelser. Det finnes ulike mekanismer for frigivelse av legemiddel. Eksempelvis i én
35
utførelsesform kan kontrollert frigivelse-komponenten svelle og danne porøse åpninger som
er store nok til å frigi den aktive ingrediens etter administrasjon til en pasient. Uttrykket
"kontrollert frigivelse-komponent" i forbindelse med den foreliggende oppfinnelse, defineres
heri som en forbindelse eller forbindelser, slik som polymerer, polymermatriser, geler,
NO/EP2600719
22
permeable membraner, liposomer og/eller mikrosfærer, som muliggjør den kontrollerte
frigivelse av den aktive ingrediens i den farmasøytiske sammensetning. I en annen
utførelsesform er kontrollert frigivelse-komponenten biologiske nedbrytbar, fremkalt ved
eksponering for det vandige miljø, pH-en, temperaturen eller enzymene i kroppen. I en annen
5
utførelsesform kan sol-geler anvendes, hvor den aktive ingrediens er inkorporert i en sol-gelmatrise som er et fast stoff ved romtemperatur. Denne matrisen implanteres i en pasient,
fortrinnsvis et pattedyr, som har en kroppstemperatur som er høy nok til å fremkalle
geldannelse av sol-gel-matrisen, idet den aktive ingrediens derved frigis i pasienten.
10
Komponentene som anvendes til å formulere de farmasøytiske sammensetninger, er av høy
renhet og er i det vesentlige fri for potensielt skadelige kontaminanter (f.eks. i det minste av
National Food-kvalitet, generelt i det minste analytisk kvalitet, og mer typisk i det minste av
farmasøytisk kvalitet). Især for inntak av mennesker foretrekkes det at sammensetningen er
fremstilt eller formulert under Good Manufacturing Practice-standarder, som definert i de
15
gjeldende bestemmelser fra det amerikanske Food and Drug Administration. Egnede
formuleringer kan for eksempel være i det vesentlige sterile og/eller i det vesentlige isotoniske
og/eller i full overensstemmelse med alle Good Manufacturing Practice-bestemmelser fra det
amerikanske Food and Drug Administration.
20
VII. Administrasjonsveier for forbindelser og sammensetninger ifølge oppfinnelsen
Forbindelsene kan administreres via en hvilken som helst vei, herunder, men ikke begrenset
til, oral, rektal, sublingval, buckal, okular, pulmonal og parenteral administrasjon eller som en
munn- eller nesespray (f.eks. inhalering av forstøvet damp, dråper eller faste partikler).
25
Parenteral administrasjon innbefatter for eksempel intravenøs, intramuskulær, intraarteriell,
intraperitoneal, intranasal, intravaginal, intravesikal (f.eks. til blæren), intradermal,
transdermal, topisk eller subkutan administrasjon. Det betraktes også som innenfor
oppfinnelsens område instillasjonen av et legemiddel i pasientens kropp i en kontrollert
formulering, idet systemisk eller lokal frigivelse av legemidlet finner sted på et senere
30
tidspunkt. Eksempelvis kan legemidlet befinne seg i et depot med henblikk på kontrollert
frigivelse til omløpet, eller med henblikk på frigivelse til et lokalt sted med tumorvekst.
Én eller flere forbindelser som er nyttige i utførelsen av den foreliggende oppfinnelse kan
administreres simultant, via den samme eller forskjellige veier, eller ved forskjellige
35
tidspunkter under behandling. Forbindelsene kan administreres før, sammen med, eller etter
andre medikasjoner, herunder andre antiproliferative forbindelser.
Behandlingen kan utføres så lenge det er nødvendig, enten i et enkelt, uavbrutt forløp, eller i
NO/EP2600719
23
separate forløp. Den behandlende lege vil vite hvordan behandlingen reduseres, økes eller
avbrytes basert på pasientrespons. Ifølge én utførelsesform gjennomføres behandling i fra
cirka fire til cirka seksten uker. Behandlingsplanen kan gjentas ved behov.
5
VIII. Eksempler
De følgende ikke-begrensende eksempler tilveiebringes av illustrasjonsmessige hensyn. De
illustrerte syntetiske baner er anvendelige på andre utførelsesformer ifølge oppfinnelsen. De
syntetiske prosedyrer beskrevet som "generelle fremgangsmåter", beskriver det som menes
10
typisk vil være effektivt for å utføre den angitte syntese. Fagmannen vil imidlertid innse at det
kan være nødvendig å variere prosedyrene i en hvilken som helst gitt utførelsesform ifølge
oppfinnelsen. For eksempel kan reaksjonsmonitorering, slik som under anvendelse av
tynnsjiktkromatografi (TLC) eller HPLC, anvendes til å bestemme den optimale reaksjonstid.
Produkter kan renses ved hjelp av konvensjonelle teknikker som vil variere, for eksempel i
15
overensstemmelse med mengden av biprodukter som dannes og forbindelsenes fysiske
egenskaper. I laboratoriemålestokk er rekrystallisering fra et egnet løsemiddel,
kolonnekromatografi, normal eller omvendt-fase HPLC eller destillering alle teknikker som kan
vise seg nyttige. Fagmannen vil innse hvordan reaksjonsbetingelsene skal varieres for å
syntetisere en hvilken som helst gitt forbindelse innenfor omfanget av oppfinnelsen uten
20
unødig eksperimentering. Se f.eks. Vogel's Textbook of Practical Organic Chemistry av A. I.
Vogel, et al, Experimental Organic Chemistry: Standard and Microscale av L. M. Harwood et
al. (2nd Ed., Blackwell Scientific Publications, 1998), og Advanced Practical Organic
Chemistry av J. Leonard, et al. (2. utgave, CRC Press 1994).
25
Eksempel 1: Syntese av 8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril
8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3d]pyrimidin-6-karbonitril ble fremstilt i henhold til følgende prosedyre.
NO/EP2600719
24
A. 4-syklopentylamino-2-metylsulfanyl-pyrimidin-5-karoksylsyreester (7):
Kommersielt tilgjengelig 4-klor-2-metylsulfanyl-pyrimidin-5-karboksylsyreetylester (6) (25 g,
5
107 mmol) ble oppløst i THF. Etterfølgende ble trietylamin (32,6 g, 322 mmol) og
syklopentylamin (10 g, 117 mmol) tilsatt til reaksjonsblandingen. Kombinasjonen ble omrørt
over natten ved romtemperatur. Utfelte salter ble frafiltrert fra løsemiddel og kassert. Det
oppsamlede løsemiddel ble deretter avdampet in vacuo for å gi en olje. Den resulterende olje
ble oppløst i etylacetat, vasket med natriumbikarbonat og deretter tørket over Na2SO4.
10
Tørkehjelpemiddelet ble frafiltrert og det resulterende løsemiddel inndampet under vakuum
for å gi 23,3 g av produkt (7). 1H NMR (300 MHz, CDCl3), δ 8,60 (s, 1H), 8,25 (br s, 1H), 4,494,54 (m, 1H), 4,30 (q, 2H), 2,52 (s, 3H), 2,00-2,10 (m, 2H), 1,50-1,79 (m, 6H), 1,35 (t, 3H).
B. (4-syklopentylamino-2-metylsulfanyl-pyridin-5-yl)-metanol (8):
15
Litiumaluminiumhydrid (10 g, 35,5 mmol) ble suspendert i THF under en nitrogenatmosfære
og avkjølt med tørris. 4-syklopentylamino-2-metylsulfanyl-pyrimidin-5-karboksylsyreetylester
20
(7), (2,02 g, 53,3 mmol) ble oppløst i THF og tilsatt dråpevis til den avkjølte LAH-løsning, idet
NO/EP2600719
25
reaksjonstemperaturen ble holdt under -20°C gjennom tilsetningens varighet. Reaksjonen ble
etterfølgende brakt til romtemperatur og omrørt i 5 h. Etter omrøring ble reaksjonen quenchet
ved tilsetningen av vann (5 ml), 15% NaOH (10 ml) og deretter vann (15 ml) igjen. Et hvitt
stoff som utfelte, ble frafiltrert, og filtratet inndampet in vacuo for å gi produkt (8) som et gult
5
fast stoff (7,2 g). Produkt (8) ble anvendt uten ytterligere rensning eller karakterisering.
C. 4-syklopentylamino-2-metylsulfanyl-pyrimidin-5-karbaldehyd (9):
10
(4-syklopentylamino-2-metylsulfanyl-pyridin-5-yl)-metanol (8), (5 g 20,8 mmol) ble oppløst i
kloroform hvortil MnO2 (10,39 g 119 mmol) ble tilsatt. Reaksjonen ble deretter omrørt over
natten. En ytterligere del av MnO2 (2,7 g, 31,3 mmol) ble tilsatt, og reaksjonen ble omrørt i
ytterligere 12 h. MnO2 ble fjernet ved filtrering gjennom en kiselgurplate som var grundig
15
vasket med kloroform. Kloroformen ble avdampet under vakuum for å gi det ønskede produkt
(9) som en tykk væske (4,7 g) som ble fast etter henstand noen tid. 1H NMR (300 MHz,
CDCl3), δ 9,65 (s, 1H), 8,60 (br s, 1H), 8,25 (s, 1H), 4,49-4,54 (m, 1H), 2,52 (s, 3H), 2,01-2,12
(m, 2H), 1,50-1,82 (m, 6H).
20
D. 8-syklopentyl-2-(metyltio)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin (10):
NO/EP2600719
26
En blanding av 4-syklopentylamino-2-metylsulfanyl-pyrimidin-5-karbaldehyd (9), (1 g, 4,2
mmol), 1,2 ekvivalent cyaneddiksyre, og en katalytisk mengde benzylamin ble tatt i eddiksyre
og tilbakestrømmet (refluxed) i cirka 6h. Etter fullføring av reaksjonen ved hjelp av TLC, ble
reaksjonen avkjølt til romtemperatur og produkt utfelte fra reaksjonsblandingen. Ytterligere
5
produkt utfelte fra reaksjonsblandingen via tilsetningen av heksan. Det resulterende faste stoff
ble samlet sammen, vasket med mettet NaHCO3, vann, og etterfølgende tørket under
vakuum. Det resulterende råprodukt (10) ble rekrystallisert i 2-propanol.
E. 8-syklopentyl-2-(metylsulfinyl)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin (11):
10
En løsning av 8-syklopentyl-2-(metyltio)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin (10), (3,5
mmol) og MCPBA (5,25 mmol) i CH2Cl2 ble omrørt ved romtemperatur i cirka 12h. Etter
15
fullføring av reaksjonen ble reaksjonsblandingen vasket med mettet NaHCO3. Den organiske
fasen ble tørket over Na2SO4, filtrert bort fra tørkemiddelet, og konsentrert for å gi det
ønskede produkt (11), som ble anvendt uten ytterligere rensning.
NO/EP2600719
27
F. 8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3d]pyrimidin-6-karbonitril (12):
5
En blanding av 8-syklopentyl-2-(metylsulfinyl)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin (11),
(1,65 mmol) og 4-(4-metylpiperazin-1-yl)anilin (2 mmol) i toluen ble omrørt ved 100°C over
natten. Reaksjonsblandingen ble avkjølt, og et fast stoff som var dannet, ble samlet ved
filtrering. De faste stoffene ble deretter vasket med toluen og tørket for å gi det ønskede
10
produkt (12). 1H NMR (300 MHz, CDCl3), 8,55 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,40-7,45 (m, 2H), 6,916,99 (m, 2H), 3,23-3,27 (m, 4H), 2,63-2,66 (m, 4H), 2,43 (s, 3H), 2,21-2,30 (m, 2H), 1,85 (br s,
4H), 1,62 (br s, 2H). m.p: 290-292°C.
Eksempel 2 til 6
15
Forbindelser 13-16, vist i tabell 1 nedenfor, ble fremstilt ved å følge de generelle prosedyrer i
skjema 1-5, som eksemplifisert ved fremstillingen av forbindelse (12). Tabell 1 viser videre 1H
NMR spektraldata og smeltepunktdata for forbindelser 13-16.
NO/EP2600719
28
Tabell 1
Forb.
Forbindelse
Navn på forbindelse
1
H NMR og MP Data
#
13
8-syklopentyl-2-((4-
8,55 (s, 1H), 7,98 (s,
morfolinofenyl)amino )-7-
1H), 7,43-7,48 (m,
okso-7,8-dihydropyrido[2,3-
2H), 6,93-6,99 (m,
d]pyrimidin-6-karbonitril
2H), 5,82-5,89 (m,
1H), 3,87-3,92 (m,
4H), 3,15-3,22 ((m,
4H), 2,22-2,31 (m,
2H), 1,80-1,91 (m,
4H), 1,59-1,68 (m,
2H). MP: 294-296°C
14
8-syklopentyl-2-((3,5-
8,60 (s, 1H), 7,99 (s,
dimetoksyfenyl)amino) -7-
1H), 6,83-6,84 (m,
okso-7,8-dihydropyrido[2,3-
2H), 6,30-6,31 (m,
d]pyrimidin-6-karbonitril
2H), 5,88-5,94 (m,
1H), 3,82 (s, 6H),
2,23-2,36 (m, 2H),
2,05-2,18 (m, 2H),
1,83-1,93 (m, 2H),
1,62-1,64 (m, 2H).
MP: 150-151°C
15
8-syklopentyl-7-okso-2-
8,59 (s, 1H), 8,01 (s,
((3,4,5-
1H), 6,91 (s, 2H),
trimetoksyfenyl)amino) -7,8-
5,93-5,99 (m, 1H),
dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin- 3,90 (s, 3H), 3,87 (s,
6-karbonitril
3H), 2,23-2,32 (m,
2H), 2,03-2,14 (m,
2H), 1,85-1,92 (m,
2H), 1,52-1,58 (m,
2H). MP: 169-170°C
NO/EP2600719
29
16
8-sykloheksyl-2-((4-(4-
8,53 (s, 1H), 7,94 (s,
metylpiperazin-1-
1H), 7,45-7,66 (m,
yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-
2H), 6,95-6,98 (m,
dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin- 2H), 5,43-5,47 (m,
6-karbonitril
1H), 3,22-3,26 (m,
4H), 2,62-2,65 (m,
4H), 2,39 (s, 3H),
1,88 (br s, 2H), 1,64
(br s, 4H), 1,33 (br s,
4H). MP: 279-280°C
Eksempel 7: Cytotoksisitetsassay for 8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril
5
Celler (1x105) ble dyrket i skåler med 6-brønner, og 24 h senere ble 8-syklopentyl-2-((4-(4metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril (12)
tilsatt i fem forskjellige konsentrasjoner over en 2 log-fortynning (1-100 µM). Det totale antall
levedyktige celler ble bestemt etter 96 timers kontinuerlig behandling ved farging med
trypanblått og telling av antallet ikke-fargende celler (levedyktige) som var igjen i hver brønn
10
under anvendelse av et tellekammer. Prosentandelen av gjenværende levedyktige celler ble
beregnet som følger: # levedyktige celler (forbindelse behandlet)/ # levedyktige celler (DMSObehandlet)*100. GI50 (konsentrasjonen av legemiddel som resulterte i 50% nettotap av
vekstinhibisjon) ble bestemt. Resultatene er vist i tabell 2.
15
Tabell 2
CELLELINJE
Tumortype
GI 50 (µM)
K562
CML
0,5
DU145
PROSTATA
0,75
BT474
ErbB2+bryst
0,25
SK-BR-3
ErbB2+bryst
0,6
MCF-7
ER+bryst
0,15
NO/EP2600719
30
BT20
Bryst
0,1
MDA-MB-468
BRYST (trippel neg;RB neg)
1,5
Z138C
MCL
0,025
GRANTA-519
MCL
0,075
SK-OV-3
Eggstokk
0,75
U87
Glioblastom
0,1
MIA-PaCa-2
Pankreas
0,25
HCT-15
Colon (MDR-elevert)
0,4
COLO-205
Colon
0,2
HELA
Cervikal
0,75
A549
NSCLC
0,2
N417
SCLC
0,25
N87
Mage (ErbB2+)
0,9
SNU-5
Mage
0,2
SNU-398
Mage
0,5
SNU-449
Mage
0,75
SNU-475
Mage
0,3
U266
Multiple myelomer
0,2
RAJI
B-celle-lymfom
0,25
JURKAT
T-celle-lymfom
0,15
DLD-1
KOLOREKTAL
0,1
SW480
KOLOREKTAL
0,1
Eksempel 8: ARK5-kinaseassay
20 ng His-merket fullengde-ARK5 (Invitrogen PV4127), en proteinkinase, ble fortynnet til
5
kinasebuffer (25 mM HEPES pH 7,5, 10 mM MgCl2, 0,5 mM EGTA, 0.5 mM Na3V04, 5 mM β
Glycerophosphate, 2,5 mM DTT, 0,01% Triton X-100) og inkubert med den indikerte
konsentrasjon av en forbindelse i tabell 3 ved romtemperatur i 30 minutter.
Kinasereaksjonene ble deretter initiert ved tilsetningen av 1 µg (3,28 µM) CHKtide
substratpeptid (Upstate 12-414), 1 µM ATP og 10 µCi γ32 P-ATP. Reaksjonene ble inkubert
NO/EP2600719
31
ved 30°C i 10 minutter.
Etterfølgende ble reaksjonene stanset ved tilsetning av 3% fosforsyre. En 10 µl alikvote ble
deretter overført til et passende område på en p30 filtermatte. Filtermatten ble latt tørke i 20
5
minutter ved romtemperatur og deretter vasket tre ganger med 75 mM fosforsyre og to
ganger med metanol. Filtermatten ble deretter tørket i 20 minutter ved romtemperatur.
Filtermatten ble deretter eksponert for røntgenfilm eller avlest i en scintillasjonsteller.
Scintillasjonstelleverdiene ble plottet som funksjon av log legemiddelkonsentrasjon under
anvendelse av Prism 4 Graph pad-programvare, og IC50-verdier ble bestemt ved å plotte
10
sigmoidale ikke-lineære regresjonskurver med variabel steilhet.
Som vist i tabell 3 inhiberte forbindelsene i eksempel 1-6 i vesentlig grad ARK5's
kinaseaktivitet. Komparative eksempler som manglet nitrilfunksjonaliteten til forbindelser
ifølge oppfinnelsen, utviste liten eller ingen evne til å inhibere ARK5.
15
Tabell 3: ARK5-inhibisjonsassay
Forb. #
Forbindelse
IC50
(nM)
12
8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-
27,3
dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril
15
8-syklopentyl-7-okso-2-((3,4,5-trimetoksyfenyl)amino)-7,8-
49,8
dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril
16
8-sykloheksyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-
43,41
dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril
13
8-syklopentyl-2-((4-morfolinofenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-
75
d]pyrimidin-6-karbonitril
14
8-syklopentyl-2-((3,5-dimetoksyfenyl)amino)-7-okso-7,8-
75
dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril
Komp.
8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-6-
Eks. 1
(metylsulfonyl)pyrido[2,3-d]pyrimidin-7(8H)-on
Komp.
6-((4-klorfenyl)sulfonyl)-8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-
Eks. 2
yl)fenyl)amino)pyrido[2,3-d]pyrimidin-7(8H)-on
Komp.
6-((4-klorfenyl)sulfonyl)-8-sykloheksyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-
Eks. 3
yl)fenyl)amino)pyrido[2,3-d]pyrimidin-7(8H)-on
>10 000
>10 000
1000
NO/EP2600719
32
Komp.
8-syklopentyl-2-((3,4-dimetoksyfenyl)amino)pyrido[2,3-d]pyrimidin-
Eks. 4
7(8H)-on
Komp.
8-syklopentyl-2-((2,4-dimetoksyfenyl)amino)pyrido[2,3-d]pyrimidin-
Eks. 5
7(8H)-on
>1000
>5000
Eksempel 9: In vivo-effektivitet av 8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril mot
tykktarmskreft hos mennesker.
5
Colo-205-fragmenter ble implantert i atymiske, nakne hunnmus og dyrket til en
gjennomsnittsstørrelse på 150 mm 3. Etterfølgende ble musene behandlet med placebo
(n=10) eller 100 mg/kg 8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitrilhydroklorid formulert i sterilt vann (N=10) ved IP10
injeksjon i overensstemmelse med den følgende plan: QD dag 1-21; fridager 22 og 23;
dosering gjenopptatt dag 24-28. Én mus ble avlivet på dag 25 på grunn av ikkelegemiddelrelatert peritonitt. Tumorvolumer ble bestemt og medianen (+/-SEM) ble plottet mot
behandlingsdag. Se figur 1.
15
Eksempel 10: Sammenligning av kinaseinhibisjon av 8-syklopentyl-2-((4-(4metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril
til med kinaseinhibisjon av PD0332991
PD0332991 har strukturen:
NO/EP2600719
33
Ifølge National Cancer Institute er PD0332991 en oralt tilgjengelig pyridopyrimidin-avledet
syklin-avhengig kinase (CDK)-inhibitor med potensiell antineoplastisk aktivitet. Nærmere
bestemt inhiberer PD-0332991 selektivt syklinavhengige kinaser (især Cdk4/syklin D1kinase), som kan inhibere retinoblastom (Rb)-proteinfosforylering, som forebygger Rb-positive
5
tumorceller fra å gå inn i cellesyklusens S-fase (arrest i G1-fasen). Dette fører til suppresjon
av DNA-replikasjon og redusert tumorcelleproliferasjon.
Forbindelsene i tabell 4 ble testet for evnen til å inhibere de anførte proteinkinasers
kinaseaktivitet. Forbindelser ble testet i 5 dose IC50-mode med 10-ganger seriell fortynning
10
startende ved 10 µM. Staurosporin, en kjent proteinkinaseinhibitor, ble testet i 5 dose IC50modus med 3-ganger seriell fortynning startende ved 20 µM. Reaksjoner ble utført i 10µM
ATP.
Tabell 4
15
IC50 (nM)
Kinase
PD0332991 8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-
Staurosporin
1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6karbonitril
ABL1
ND
75,64
66,37
ABL2/ARG
ND
91,57
21,58
ARK5
3388,00
7,85
<1,0
c-Kit
>10000
407,50
28,47
c-MET
ND
ND
378,10
c-Src
ND
93,01
1,49
CDK2/syklinA
5986,00
97,32
<1,0
CDK2/syklinE
>10000
769,50
2,13
CDK3/syklinE
ND
3219,00
10,13
CDK4/syklin D1
7,41
4,00
22,14
CDK4/syklin D3
25,81
21,23
47,22
CDK5/p25
5987,00
263,70
1,91
CDK5/p35
5928,00
181,50
1,89
NO/EP2600719
34
CDK6/syklinD1
12,75
18,39
14,19
CDK6/syklinD3
36,48
38,67
128,00
CDK7/syklinH/MNAT1 ND
>10000
195,80
CDK9/syklin K
351,60
27,10
7,52
CDK9/syklinT1
2245,00
85,36
12,55
EPHA1
ND
37,13
55,56
EPHA2
ND
113,70
108,20
EphB1
ND
26,74
49,32
EphB2/HEK5
ND
130,30
50,48
EphB4
ND
120,40
165,30
FGFR1
ND
68,15
3,44
FGFR2
ND
54,79
1,70
FGFR3
ND
123,60
6,45
FGFR4
ND
3548,00
104,60
FGR
>10000
112,20
<1,0
FLTINEGFRI
>10000
94,14
4,32
FLT3
324,20
13,57
<1,0
FLT4NEGFR3
>10000
63,51
4,99
FMS
1990,00
1,46
1,14
FRK/PTK5
ND
574,70
51,44
FYN
>10000
26,59
2,26
LCK
>10000
50,41
2,07
LIMK1
ND
70,84
3,26
LOK/STK10
2443,00
180,90
4,68
LYN
>10000
68,53
<1,0
LYNB
ND
6645,00
27,33
NLK
ND
45,27
51,44
PAK3
ND
1929,00
<1,0
NO/EP2600719
35
PDGFRb
980,30
2,64
<1,0
PKCmu
126,50
142,10
1,63
PKCnu/PRK D3
60,87
55,76
<1,0
PKG2/PRKG2
ND
ND
1,46
RIPK2
ND
40,75
138,50
SIK2/SNF1LK2
ND
96,79
33,78
SNARK/NUAK2
8667,00
20,71
3,08
TAOK1
2844,00
78,68
<1,0
TAOK2ITA01
1781,00
69,64
4,41
TBK1
ND
71,78
<1,0
TGFbR2
ND
62,28
17780,00
TTK
696,60
155,80
71,49
YES/YES1
3675,00
38,08
<1,0
ZAK/MLTK
ND
29,49
19480,00
ND = ikke utført
Som observert fra tabell 4 har 8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril, en signifikant annerledes
5
proteinkinaseinhibisjonsprofil sammenlignet med PD0332991. Forbindelsen ifølge
oppfinnelsen er en multispesifikk proteinkinaseinhibitor som er inhibitorisk mot en bredere
rekke proteinkinaser enn PD0332991.
NO/EP2600719
36
PATENTKRAV:
1.
Forbindelse ifølge formel I eller et salt derav,
Formel I
5
hvor
R1 er (C1-C6)alkyl eller (C3-C8)sykloalkyl;
R2 er 4-(4-metylpiperazin-1-yl)anilinyl, 4-morfolinoanilinyl eller
R3 er uavhengig ved hver forekomst (C1-C6)alkoksy; og
10
R4 er H eller (C1-C6)alkoksy.
15
2.
Forbindelse ifølge krav 1, hvor R2 er 4-(4-metylpiperazin-1-yl)anilinyl.
3.
Forbindelse ifølge krav 2, hvor R1 er (C3-C8)sykloalkyl.
4.
Forbindelse ifølge krav 3, hvor R1 er syklopentyl eller sykloheksyl.
5.
Forbindelse ifølge krav 1, hvor R2 er
NO/EP2600719
37
5
6.
Forbindelse ifølge krav 5, hvor R1 er syklopentyl.
7.
Forbindelse ifølge krav 6, hvor hver forekomst av R3 er metoksy.
8.
Forbindelse ifølge krav 7, hvor R4 er hydrogen eller metoksy.
9.
Forbindelse ifølge krav 1, hvor R2 er 4-morfolinoanilinyl.
10.
Forbindelse ifølge krav 9, hvor R1 er syklopentyl.
11.
Forbindelse ifølge krav 1, hvor forbindelsen velges fra gruppen bestående av 8-
10
syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,315
d]pyrimidin-6-karbonitril; 8-sykloheksyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1-yl)fenyl)amino)-7-okso7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril; 8-syklopentyl-2-((3,5dimetoksyfenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril; 8syklopentyl-7-okso-2-((3,4,5-trimetoksyfenyl)amino)-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin6-karbonitril; 8-syklopentyl-2-((4-morfolinofenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-
20
d]pyrimidin-6-karbonitril; og salter derav.
12.
Forbindelse ifølge krav 11, hvor forbindelsen er 8-syklopentyl-2-((4-(4-metylpiperazin-1yl)fenyl)amino)-7-okso-7,8-dihydropyrido[2,3-d]pyrimidin-6-karbonitril eller et salt derav.
25
13.
Farmasøytisk sammensetning som omfatter en farmasøytisk akseptabel bærer og en
forbindelse ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 12, eller et farmasøytisk
akseptabelt salt derav.
14.
30
Forbindelse eller farmasøytisk akseptabelt salt derav ifølge et hvilket som helst av
kravene 1 til 12, eller farmasøytisk sammensetning ifølge krav 13, til anvendelse i
medisin.
NO/EP2600719
38
15.
Forbindelse eller farmasøytisk akseptabelt salt derav ifølge et hvilket som helst av
kravene 1 til 12, eller farmasøytisk sammensetning ifølge krav 13, til behandling av en
cellulær proliferativ sykdom.
5
16.
Forbindelse eller farmasøytisk akseptabelt salt derav, eller farmasøytisk
sammensetning, ifølge krav 15, hvor den cellulære proliferative sykdom velges fra
gruppen bestående av kreft, hemangiomatose hos nyfødte, sekundær progressiv
multippel sklerose, aterosklerose, kronisk progressiv myelodegenerativ sykdom,
nevrofibromatose, ganglionevromatose, keloiddannelse, Pagets sykdom, fibrocystisk
10
brystsykdom, uterine fibroider, Peyronies sykdom, Dupuytrens sykdom, restenose,
benign proliferativ brystsykdom, benign prostatahyperplasi, X-bundet lymfocellulær
proliferativ sykdom, lymfocellulær proliferativ sykdom etter transplantasjon,
makuladegenerasjon, retinopatier, proliferativ vitreoretinopati og ikke-kankrøse
lymfocellulære proliferative sykdommer.
15
17.
Forbindelse eller farmasøytisk akseptabelt salt derav, eller farmasøytisk
sammensetning, ifølge krav 16, hvor kreften velges fra gruppen bestående av
eggstokkreft; livmorhalskreft; brystkreft; prostatakreft; testikkelkreft, lungekreft,
nyrekreft; kolorektal kreft; hudkreft; hjernekreft; leukemi, herunder akutt myeloid
20
leukemi, kronisk myeloid leukemi, akutt lymfoid leukemi og kronisk lymfoid leukemi.
18.
Forbindelse eller farmasøytisk akseptabelt salt derav ifølge et hvilket som helst av
kravene 1 til 12, eller farmasøytisk sammensetning ifølge krav 13, til å indusere
apoptose i kreftceller hos et individ som er rammet av kreft.
25
19.
Forbindelse eller farmasøytisk akseptabelt salt derav ifølge et hvilket som helst av
kravene 1 til 12, eller farmasøytisk sammensetning ifølge krav 13, til inhibisjon av
kinaseaktivitet hos et pattedyr.
30
20.
Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse ifølge krav 1, idet nevnte
fremgangsmåte omfatter å behandle en forbindelse ifølge formel II
Formel II
NO/EP2600719
39
med et amin valgt fra gruppen bestående av 4-(4-metylpiperazin-1-yl)anilin, 4morfolinoanilin, og
hvor
R1 er (C1-C6)alkyl eller (C3-C8)sykloalkyl;
5
R3 er uavhengig ved hver forekomst (C1-C6)alkoksy; og
R4 er H eller (C1-C6)alkoksy,
og oppnåelse av en forbindelse ifølge krav 1 eller et salt derav.
10
21.
Fremgangsmåte ifølge krav 20, hvor forbindelsen ifølge formel II fremstilles ved å
bringe en forbindelse ifølge formel III
Formel III
til å reagere med en oksidant.
15
22.
Fremgangsmåte ifølge krav 21, hvor forbindelsen ifølge formel III fremstilles ved å
bringe en forbindelse ifølge formel IV
Formel IV
til å reagere med 2-cyaneddiksyre i nærvær av benzylamin og eddiksyre.
20
23.
Fremgangsmåte ifølge krav 22, hvor forbindelsen ifølge formel IV fremstilles ved
NO/EP2600719
40
selektivt å oksidere en forbindelse ifølge formel V
Formel V.
5
24.
Fremgangsmåte ifølge krav 23, hvor forbindelsen ifølge formel V fremstilles ved
redusere en forbindelse ifølge formel VI
Formel VI.
10
25.
Fremgangsmåte ifølge krav 24, hvor forbindelsen ifølge formel VI fremstilles ved å
bringe en forbindelse ifølge formel VII
Formel VII
til å reagere med et amin som har formelen NH2R1.
MURG * 128702
NO/EP2600719
MEDIANVOLUM (mm3)
1/1
DAGER
Fig. 1