1. No category

Dako REAL™ EnVision™ Detection System, Peroxidase/DAB+,
Rabbit/Mouse
Kode K5007
3. udgave
Til brug sammen med automatiske Dako instrumenter til immunfarvning.
Sættet indeholder reagenser til 500 analyser.
(105995-004)
K5007/DA/HGW/20.12.05 p. 1/7
Indhold
Side
DANSK
Tilsigtet anvendelse ...................................................................................................................... 3
Resumé og forklaring.................................................................................................................... 3
Reagenser .................................................................................................................................... 4
A. Medfølgende materialer ....................................................................................................... 4
B. Nødvendige materialer, der ikke medfølger ......................................................................... 4
Forholdsregler............................................................................................................................... 4
Opbevaring ................................................................................................................................... 5
Klargøring af reagens ................................................................................................................... 5
Indsamling og klargøring af prøver ............................................................................................... 5
Procedure ..................................................................................................................................... 6
Kvalitetskontrol ............................................................................................................................. 7
Fortolkning af resultater ................................................................................................................ 7
Symbolforklaring ........................................................................................................................... 7
(105995-004)
K5007/DA/HGW/20.12.05 p. 2/7
DANSK
Tilsigtet anvendelse
Anvendes til in vitro diagnostik.
Dako REAL™ EnVision™ Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse, er beregnet til
anvendelse ved immunhistokemi sammen med automatiske Dako instrumenter til immunfarvning.
Sættet anvendes i en totrins procedure. Det første trin er inkubation af vævet med et optimalt
fortyndet, primært, kanin- eller murint antistof, og andet trin er inkubation med sættets reagens
Dako REAL™ EnVision™/HRP, Rabbit/Mouse (ENV). Reagenset er en peroxidase-konjugeret
polymer, som også bærer antistoffer mod kanin- og murine immunglobuliner. Reaktionen
visualiseres med Dako REAL™ DAB+ Chromogen, som også følger med sættet. For at sikre en
korrekt farvning tilrådes det at bruge sættet sammen med andre anbefalede reagenser – angivet i
afsnittet “Nødvendige materialer, der ikke medfølger”.
Resumé og forklaring
Dako REAL™ EnVision™ Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse, er udviklet med
henblik på at frembringe en optimal farvning på automatiske Dako instrumenter til immunfarvning
ved anvendelse af de skabeloner/protokoller, der anbefales i denne indlægsseddel.
Inden farvningen skal nogle rutinemæssigt fikserede, paraffinindstøbte vævssnit udsættes for
varmeinduceret epitop-retrieval (HIER) med anvendelse af den target retrieval-opløsning, som er
angivet i indlægssedlen til det primære antistof. Visse primære antistoffer kræver enzymforbehandling af vævet i stedet for HIER for at opnå en optimal farvning. Bemærk venligst, at Dako
REAL™ Proteinase K, kode S2019, er udviklet til anvendelse i kombination med HIER for at gøre
det nemmere at behandle objektglaspartier.
Endogen peroxidase skal blokeres med Dako REAL™ Peroxidase-Blocking Solution, kode S2023,
eller Dako Dual Endogenous Enzyme Block, kode S2003.
På grund af en effektiv vaskeprocedure og stabiliserende proteiner i Dako reagenserne er
yderligere blokeringstrin med henblik på at reducere uspecifik baggrundsfarvning ikke påkrævet.
Det tilrådes at anvende en Dako vaskebuffer, som er specifik for hvert enkelt Dako instrument.
Sættet indeholder ikke primære antistoffer. Vi anbefaler brug af Dako N-Series Ready-to-Use
Primary Antibodies eller Dako koncentrerede, primære antistoffer.
Dako REAL™ EnVision™/HRP, Rabbit/Mouse (ENV) detektionsreagenset i sættet består af en
dextranbase, som er koblet til et stort antal peroxidase (HRP) molekyler og sekundære
antistofmolekyler. Der anvendes en unik kemi til koblingsreaktionen, hvilket tillader binding af op til
100 HRP molekyler og op til 20 antistofmolekyler pr. base. Det sekundære antistof, der er koblet til
dextranbasen, er fremstillet i geder. Det reagerer lige meget med kanin- og murine
immunglobuliner, og derfor er det kun nødvendigt med et detektionsreagens for primære kanineller murine antistoffer. ENV detektionsreagenset leveres brugsklart i dråbeflasker og skal hældes i
egnede instrumentbeholdere inden anvendelse.
Substratsystemet består af to komponenter: DAB+ Chromogen, en koncentreret diaminobenzidinopløsning (DAB), og Substrate Buffer, indeholdende hydrogenperoxid. Inden anvendelse skal DAB+
Chromogen fortyndes i Substrate Buffer. Substratsystemet danner et tydeligt brunt slutprodukt på
stedet for målantigenet.
Dako REAL™ Hematoxylin, kode S2020, eller Hematoxylin for the Dako Autostainer, kode S3301,
anbefales til kontrastfarvning, idet disse produkter danner en klar blå kernefarvning.
De farvede vævssnit kan monteres med vandbaseret eller organisk opløsningsmiddelbaseret
monteringsmedium.
(105995-004)
K5007/DA/HGW/20.12.05 p. 3/7
Reagenser
A. Medfølgende materialer
Flaske A
Dako REAL™ EnVision™/HRP, Rabbit/Mouse (ENV)
100 mL, brugsklar
Dextran koblet med peroxidasemolekyler og sekundære
gedemolekyler mod kanin- og murine immunglobuliner.
I bufferopløsning, der indeholder stabiliserende protein og
konserveringsmiddel.
Flaske B
Dako REAL™ Substrate Buffer
250 mL
Bufferet opløsning, indeholdende hydrogenperoxid og
konserveringsmiddel.
Flaske C
Dako REAL™ DAB+ Chromogen
5 mL, 50x koncentreret
3,3'-diaminobenzidin-tetrahydrochlorid i organisk opløsningsmiddel.
Farven på dette reagens kan variere fra stærk violet til farveløs,
uden at det har nogen indflydelse på sættets ydeevne.
B. Nødvendige materialer, der ikke medfølger
Automatiske Dako instrumenter til immunfarvning
Dako vaskebuffer, som er specifik for det enkelte Dako instrument
Dako REAL™ Peroxidase-Blocking Solution, kode S2023, eller Dual Endogenous Enzyme Block,
kode S2003
Dako REAL™ Proteinase K, kode S2019, fortyndet i REAL™ Proteinase K Diluent, kode S2032,
eller Proteinase K (Ready-to-Use), kode S3020 (om nødvendigt)
N-Series Ready-to-Use Primary Antibodies eller korrekt fortyndede, koncentrerede, primære kanineller murine antistoffer fra Dako
Dako REAL™ Antibody Diluent, kode S2022 (til fortynding af koncentrerede antistoffer)
Dako REAL™ Hematoxylin, kode S2020 eller Hematoxylin for the Dako Autostainer, kode S3301
Target retrieval-opløsning. Se indlægssedlen til det primære antistof
N-Series Ready-to-Use Rabbit or Mouse Universal Negative Control eller egnet negativ
kontrolreagens til det primære antistof
Dako REAL™ Incubation Container, kode S2030 (valgfri)
Dako REAL™ Slide Holder, kode S2029 (valgfri)
Dako instrumentredskaber
Objektglas
Generelle laboratoriereagenser til fjernelse af voks på paraffinindstøbte vævssnit
Monteringsmedium (vand- eller organisk opløsningsmiddelbaseret) og dækglas
Forholdsregler
1.
2.
Må kun anvendes af uddannet personale.
Flaske A, Dako REAL™ EnVision™/HRP, Rabbit/Mouse (ENV), indeholder materiale af
animalsk oprindelse, og det kan ikke udelukkes, at der er spor af humant materiale på grund af
fremstillingsmetoderne. Som med alle produkter afledt ud fra biologiske kilder bør der iagttages
korrekte håndteringsprocedurer.
(105995-004)
K5007/DA/HGW/20.12.05 p. 4/7
3.
4.
5.
6.
Flaske C, Dako REAL™ DAB+ Chromogen og substratarbejdsopløsningen (CHROM) må ikke
udsættes for kraftigt lys.
Flaske C, Dako REAL™ DAB+ Chromogen indeholder 1–5% 3,3’-diaminobenzidintetrahydrochlorid og er mærket:
Farlig.
R40 Mulighed for kræftfremkaldende effekt.
R43 Kan give overfølsomhed ved hudkontakt.
R68 Risiko for varig skade på helbredet.
S35 Materialet og emballagen skal bortskaffes på sikker vis.
S36/37 Brug egnet beskyttelsestøj og -handsker.
Som hovedregel gælder det, at personer under 18 år ikke må arbejde med dette produkt.
Brugerne skal omhyggeligt vejledes i korrekt arbejdsprocedure, produktets farlige egenskaber
og de nødvendige sikkerhedsforanstaltninger. Se yderligere oplysninger i sikkerhedsdatabladet
(MSDS).
Brug egnet personligt beskyttelsesudstyr for at undgå kontakt med øjne og hud.
Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokal og national lovgivning.
Opbevaring
Opbevares ved 2–8 °C. Må ikke anvendes efter udløbsdatoen, som er trykt på sættet. Sættets
komponenter må ikke skiftes ud med komponenter fra andre partier. Hvis reagenserne opbevares
under andre betingelser end de specificerede, skal betingelserne verificeres af brugeren. Den
klargjorte substratarbejdsopløsning (CHROM) skal opbevares ved 2–8 °C og anvendes inden for
5 dage. Kontakt vores tekniske service, hvis der observeres uventet farvning, som ikke kan forklares
med variationer i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et problem med produktet.
Klargøring af reagens
Substratarbejdsopløsning (CHROM)
Substratarbejdsopløsningen, der indeholder DAB, (CHROM) klargøres ved at blande 20 µL Dako
REAL™ DAB+ Chromogen (flaske C) grundigt med 1 mL Dako REAL™ substratbuffer (flaske B).
Klargør kun den mængde, der kræves til det antal objektglas, som skal farves. CHROM skal
anvendes inden for 5 dage (opbevares mørkt ved 2–8 °C).
Se vejledningen, der medfølger de enkelte reagenser, vedrørende klargøring af reagenser, der ikke
er indeholdt i sættet.
Indsamling og klargøring af prøver
Rutinemæssigt fikserede, paraffinindstøbte vævssnit og frysesnit kan anvendes.
Der kan anvendes flere forskellige fiksativer til bevaring af præparaterne. Præparaterne må ikke
fikseres i neutral bufferet formalin i mere end 24 timer og helst i kortere tid.
Den optimale tykkelse for paraffinindstøbte snit er ca. 4 µm.
Den optimale tykkelse for frysesnit er 4–6 µm.
Præparaterne skal monteres på objektglas. Snittene skal monteres på objektglassene så fladt og
med så få folder som muligt. For mange folder vil påvirke farvningsresultaterne.
BEMÆRK: Objektglassene skal have en bredde, der passer til Dako instrumentet. Se
brugervejledningen til de enkelte Dako instrumenter vedr. en definition af brugbare objektglas.
Paraffinsnit skal monteres fra et forvarmet vandbad med destilleret eller deioniseret vand.
Vandbadet må ikke indeholde additiver (f.eks. gelatine, poly-L-lysin osv.). Snittene skal tørres inden
opvarmning, generelt ved en temperatur, der ikke overstiger 60 °C, i mindst 60 minutter (f.eks.
natten over). Det er vigtigt at fjerne vandet under snittene inden ovntørringen for at sikre, at snittene
hæfter godt på objektglassene.
(105995-004)
K5007/DA/HGW/20.12.05 p. 5/7
Procedure
Automatiske Dako instrumenter til immunfarvning anvender teknikker, der er baseret på forskellige
principper, for at opnå et optimalt farvningsresultat. Inden der køres protokoller på det automatiske
Dako instrument til immunfarvning, skal brugervejledningen til det anvendte Dako instrument
læses grundigt igennem.
Efter afparaffinering og hydrering til buffer (vand) skal de fleste vævssnit gennemgå HIER. Det
tilrådes at standardisere HIER for at sikre reproducerbar epitop-retrieval. For at standardisere
behandlingen tilrådes det at fylde objektglasholderen helt med objektglas, også selvom der kun er
væv på ét objektglas; dette sikrer den samme opvarmning af snit i hver kørsel. Efter epitop-retrieval
skal objektglassene forblive i bufferen i mindst 20 minutter ved stuetemperatur. Det automatiske
Dako instrument til immunfarvning kan klargøres til farvningen under denne afkøling.
Nogle få epitoper tåler ikke HIER. Se indlægssedlen til hvert enkelt Dako primært antistof.
Inkubation med primært antistof
Dako N-Series Ready-to-Use Primary Antibodies kan anvendes sammen med Dako REAL™
EnVision™ Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse på formalinfikserede,
paraffinindstøbte snit.
Indlægssedlen i det koncentrerede, primære antistof indeholder en fortyndingsvejledning til Dako
koncentrerede, primære antistoffer og en vejledning til anvendelse af proteinase K forbehandling i
forbindelse med Dako REAL™ EnVision™ Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse,
anvendt på formalinfikserede, paraffinindstøbte snit.
De koncentrerede, primære antistoffer skal fortyndes i Dako REAL™ Antibody Diluent, kode S2022.
Objektglassene indsættes i et Dako instrument og farves ved anvendelse af den dertil beregnede
skabelon/protokol for Dako REAL™ EnVision™Detection System, Peroxidase/DAB+ Rabbit/Mouse,
kode K5007. Hvis skabelonen/protokollen ikke findes på dit Dako instrument, bedes du kontakte
vores tekniske serviceafdeling.
Inden Dako REAL™ EnVision™Detection System, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse, første gang
anvendes på Dako Autostainer, skal de reagenser og tider, som er angivet i tabel 1, føjes til
instrumentets reagensliste.
Tabel 1. Nødvendige tilføjelser til reagenslisten og optimale inkubationstider
Reagens
Kode
Dako REAL™ Peroxidase-Blocking Solution
eller
Dual Endogenous Enzyme Block
Dako REAL™ Proteinase K Solution
eller
Dako Proteinase K
Primære antistoffer
S2023
Forslag til
forkortelse
HP Block
S2003
S 2019 + S 2032
DEEB
Pro K
Dako REAL™ EnVision™ Detection System
(EnVision)
K5007
Dako REAL™ EnVision™ Detection System
(DAB)
K5007
Dako REAL™ Hematoxylin
eller
Dako Hematoxylin for the Dako Autostainer
Blueing Buffer (= Autostainer buffer)
S2020
S3301
S3006
S2030
Individuel
Skabelontrin
Inkubationstid
End. Enz. Block
5 minutter
Forbehandling
under antistof
10 minutter
Antistof
10*–25 minutter
K5007ENV
Mærket polymer
15*–30 minutter
K5007DAB
Substrat
3 minutter
(2 gange)
-
Ekstra
1–2 minutter
-
Ekstra
1–5 minutter
5 minutter
-
* N-Series Ready-to-Use Primary Antibodies
Ved andre Dako instrumenter er reagensnavnene og inkubationstiderne indsat i
skabelonerne/protokollerne.
(105995-004)
K5007/DA/HGW/20.12.05 p. 6/7
Kvalitetskontrol
Hver farvekørsel skal omfatte et kendt positivt kontrolpræparat for at sikre en korrekt ydeevne af
alle de anvendte reagenser. Hvis det positive kontrolpræparat ikke udviser en positiv farvning, skal
mærkningen af prøvepræparaterne betragtes som ugyldige.
Der skal anvendes et negativt kontrolreagens sammen med hvert præparat for at identificere en
eventuel uspecifik farvning. Hvis uspecifik farvning ikke kan adskilles tydeligt fra den specifikke
farvning, skal mærkningen af prøvepræparatet betragtes som ugyldig.
Negative Control for N-Series Rabbit Primary Antibodies, kode N1699, eller Negative Control for
N-Series Mouse Primary Antibodies, kode N1698, anbefales som negativ kontrolreagens.
Fortolkning af resultater
Substratarbejdsopløsningen, der indeholder diaminobenzidin, danner en brun farve på stedet for
målantigenet, som genkendes af det primære antistof. Den brune farve skal kunne ses på det
positive kontrolpræparat på det forventede sted for målantigenet. Hvis der er uspecifik farvning, vil
dette kunne ses som en diffus, brun farvning på de objektglas, der er behandlet med det negative
kontrolreagens. Kernerne farves blå med hæmatoxylin-kontrastfarven.
Symbolforklaring
Katalognummer
Temperaturbegrænsning
Anvendes senest
Medicinsk udstyr til in vitro
diagnostik
Indeholder til <n> analyser
Producent
Se brugsanvisningen
Lotnummer
Farlig
DAKO EnVision™ systemerne er omfattet af det amerikanske patent 5,543,332 og det europæiske patent 594,772.
Produceret af:
Dako Denmark A/S
Produktionsvej 42
DK-2600 Glostrup
Danmark
Tlf. +45 44 85 95 00
Fax +45 44 85 95 95
(105995-004)
K5007/DA/HGW/20.12.05 p. 7/7