1. No category

EnVision™ FLEX+, Mouse, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Kode K8012
5. udgave
Sættet indeholder reagenser til 400–600 analyser. Til Dako Autostainer/Autostainer Plus.
Valgfri reagenser:
Kode
Produktnavn
Analyser
K8004
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
200-430
K8005
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x)
200-430
K8006
EnVision™ FLEX Antibody Diluent
400-600
K8007
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x)
K8018
EnVision™ FLEX Hematoxylin,
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
400-600
K8019
EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER),
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
120-190
K8022
EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER),
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
120-190
Andre muligheder
K8020
(114793-006)
FLEX IHC Microscope Slides
500
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 1/11
Indhold
Side
Tilsigtet anvendelse ...................................................................................................................... 3
Resumé og forklaring.................................................................................................................... 3
Reagenser.................................................................................................................................... 4
A. Medfølgende materialer ....................................................................................................... 4
B. Nødvendige materialer, der ikke medfølger ......................................................................... 5
C. Valgfri reagenser ................................................................................................................. 5
Forholdsregler .............................................................................................................................. 6
Opbevaring................................................................................................................................... 6
Klargøring af reagens ................................................................................................................... 7
Indsamling og klargøring af prøver ............................................................................................... 7
Procedure..................................................................................................................................... 8
A. Forbehandlingsprocedure .................................................................................................... 8
B. Farvningsprocedure ............................................................................................................. 9
Kvalitetskontrol ........................................................................................................................... 10
Fortolkning af resultater .............................................................................................................. 10
Begrænsninger ........................................................................................................................... 10
Symbolforklaring......................................................................................................................... 11
(114793-006)
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 2/11
Tilsigtet anvendelse
Anvendes til in vitro diagnostik.
Dako EnVision™ FLEX+ detektionssystem er beregnet til brug ved immunhistokemi sammen med Dako
Autostainer/Autostainer Plus-instrumenter. Systemet detekterer primære murine og kanin-antistoffer,
og reaktionen visualiseres med EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen. Hvis det bruges sammen med
EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) eller EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER) (kode 8019), kan der
opnås signalforstærkning af henholdsvis primære murine antistoffer eller primære kanin-antistoffer.
EnVision™ FLEX+ reagenser er beregnet til brug på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit.
Resumé og forklaring
Dako EnVision™ FLEX+ detektionssystem er designet til at være et fleksibelt system, der giver optimal
farvning på Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrumenter ved anvendelse af protokollen, der
anbefales i denne indlægsseddel. Som en retningslinje, når EnVision™ FLEX+ Mouse (kode K8012)
bruges, øges signalforstærkningen 4–5 gange, og når EnVision™ FLEX+ Rabbit (kode K8019, valgfri
reagens) bruges, øges signalforstærkningen 2–3 gange.
Inden farvning skal formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit underkastes afparaffinering og hydrering,
efterfulgt af varmeinduceret epitop-retrieval (HIER) med anvendelse af den target retrieval-metode, som er
angivet i indlægssedlen til det primære antistof. Læs også afsnittet Procedure med henblik på 3-i-1
klargøring af præparater. Kode K8012 indeholder EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x). Som et alternativ anbefales EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (kode
K8004) eller EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (kode K8005). Visse primære
antistoffer kræver enzymatisk forbehandling af vævet i stedet for HIER for at opnå en optimal farvning.
Endogen peroxidase skal blokeres med EnVision™ FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (DM821), som
følger med sættet. På grund af en effektiv vaskeprocedure og stabiliserende proteiner i Dako-reagenserne
er yderligere blokeringstrin med henblik på at reducere uspecifik baggrundsfarvning ikke påkrævet.
Det anbefales at bruge EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (DM831), som følger med sættet eller kan
købes som valgfri reagens (kode K8007).
Sættet indeholder ikke primære antistoffer. Vi anbefaler brug af Dako FLEX Ready-to-Use Primary
Antibodies eller Dako Concentrated Primary Antibodies. EnVision™ FLEX Antibody Diluent (K8006)
anbefales til fortynding af Dako Concentrated Primary Antibodies.
EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) (DM824), der følger med sættet eller kan købes som valgfri reagens
(kode K8022), kan erstattes med EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER) (kode K8019), når der anvendes
primære kaninantistoffer. EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) og EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER)
kan anvendes til en valgfri signalforstærkning af henholdsvis primære murine antistoffer og primære
kanin-antistoffer. Som en retningslinje: EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) giver en signalforstærkning
på 4–5 gange, og EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER) giver en signalforstærkning på 2–3 gange.
Dako EnVision™ FLEX /HRP Detection Reagent (DM802) i sættet består af en dextranbase, som er
koblet til et stort antal peroxidasemolekyler (HRP) og sekundære antistofmolekyler. Der anvendes en
unik kemi til koblingsreaktionen, som tillader binding af op til 100 HRP molekyler og op til 20
antistofmolekyler pr. base.
Substratsystemet i sættet består af to komponenter: EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen (DM827), en
koncentreret diaminobenzidin-opløsning (DAB), og EnVision™ FLEX Substrate Buffer (DM823), der
indeholder hydrogenperoxid. Inden anvendelse skal EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen fortyndes i
EnVision™ FLEX Substrate Buffer. Substratsystemet danner et tydeligt brunt slutprodukt på stedet for
målantigenet.
EnVision™ FLEX Hematoxylin (kode K8018) anbefales til kontrastfarvning. Reagenset giver en klar,
blå kernefarvning.
De farvede vævssnit kan monteres med vandbaseret eller organisk opløsningsmiddelbaseret
monteringsmedie.
(114793-006)
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 3/11
Reagenser
A. Medfølgende materialer
DM821
EnVision™ FLEX Peroxidase-Blocking Reagent
10 x 13 mL, brugsklar
fosfatbuffer, der indeholder hydrogenperoxid, 15 mmol/L NaN3 og vaskemiddel.
DM822
EnVision™ FLEX/HRP
10 x 13 mL, brugsklar
dextran koblet med peroxidasemolekyler og sekundære gedeantistofmolekyler
mod kanin- og murine immunglobuliner. I bufferopløsning, der indeholder
stabiliserende protein og konserveringsmiddel.
DM827
EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen
3 x 3 mL
3,3'-diaminobenzidin-tetrahydrochlorid i organisk opløsningsmiddel.
Farven på dette reagens kan variere fra stærk violet til farveløs, uden at det
har nogen indflydelse på sættets ydeevne.
DM823
EnVision™ FLEX Substrate Buffer
20 x 13 mL
bufferopløsning, indeholdende hydrogenperoxid og konserveringsmiddel.
DM828
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
9 x 30 mL, 50x koncentreret
tris/EDTA buffer, pH 9
DM831
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x)
4 x 1 L, 20x koncentreret
tris-bufferet saltvandsopløsning, indeholdende Tween 20, pH 7,6 (±0,1).
DM824
EnVision™ FLEX+, Mouse (LINKER)
10 x 13 mL, brugsklar
bufferopløsning indeholdende stabiliserende protein og antimikrobielt stof.
(114793-006)
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 4/11
B. Nødvendige materialer, der ikke medfølger
Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument
Dako PT Link
Dako Proteinase K, Ready-to-Use (om nødvendigt)
Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller korrekt fortyndede, koncentrerede, primære kanineller murine antistoffer fra Dako
Dako FLEX Ready-to-Use Rabbit eller Mouse Universal Negative Control eller egnet negativ
kontrolreagens til det primære antistof
Dako-instrumentredskaber
Objektglas, f.eks. FLEX IHC Microscope Slides
Generelle laboratoriereagenser til fjernelse af paraffin på paraffinindstøbte vævssnit
Monteringsmedie (vandigt eller organisk opløsningsmiddelbaseret) og dækglas
C. Valgfri reagenser
K8004
DM828
K8005
DM829
K8006
DM830
K8007
DM831
K8018
DM826
K8019
DM825
K8022
DM824
(114793-006)
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
3 x 30 mL, 50x koncentreret
tris/EDTA buffer, pH 9
EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x)
3 x 30 mL, 50x koncentreret
citratbuffer, pH 6,1
EnVision™ FLEX Antibody Diluent
120 mL, brugsklar
tris-buffer, pH 7,2, indeholdende 15 mmol/L NaN3 og protein.
EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x)
1 L, 20x koncentreret
tris-bufferet saltvandsopløsning, indeholdende Tween 20, pH 7,6 (±0,1).
EnVision™ FLEX Hematoxylin
10 x 13 mL, brugsklar
vandig hæmatoxylinopløsning.
EnVision™ FLEX+ Rabbit (LINKER)
3 x 13 mL, brugsklar
bufferopløsning indeholdende stabiliserende protein og antimikrobielt stof.
EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER)
3 x 13 mL, brugsklar
bufferopløsning indeholdende stabiliserende protein og antimikrobielt stof.
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 5/11
Forholdsregler
1.
2.
Må kun anvendes af uddannet personale.
EnVision™ FLEX /HRP, EnVision™ FLEX+ Mouse (LINKER) og EnVision™ FLEX+ Rabbit
(LINKER) indeholder materiale af animalsk oprindelse, og det kan ikke udelukkes, at der er spor af
humant materiale på grund af fremstillingsmetoderne. Som med alle produkter afledt fra biologiske
kilder bør der iagttages korrekte håndteringsprocedurer.
3. EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen og EnVision™ FLEX Substrate Working Solution må ikke
udsættes for stærkt lys under proceduren.
4. Til EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) og EnVision™ FLEX Target
Retrieval Solution, Low pH (50x) findes der sikkerhedsdatablade, som kan rekvireres af
professionelle brugere.
5. Til EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) findes der et sikkerhedsdatablad, som kan rekvireres af
professionelle brugere.
6. Til EnVision™ FLEX Peroxidase-Blocking Reagent findes der et sikkerhedsdatablad, som kan
rekvireres af professionelle brugere.
7. EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen indeholder 1–5 % 3,3’-diaminobenzidin-tetrahydrochlorid og
er mærket:
Farlig.
R40 Begrænset bevis for kræftfremkaldende effekt.
R43 Kan give overfølsomhed ved kontakt med huden.
R68 Mulig risiko for varig skade på helbredet.
S35 Materialet og dets beholder skal bortskaffes på en sikker måde.
S36/37 Brug særligt arbejdstøj og egnede beskyttelseshandsker.
Som hovedregel gælder det, at personer under 18 år ikke må arbejde med dette produkt.
Brugerne skal omhyggeligt vejledes i korrekt arbejdsprocedure, produktets farlige egenskaber og
de nødvendige sikkerhedsforanstaltninger (efter EU’s direktiv 94/33/EF). Se yderligere oplysninger
i sikkerhedsdatabladet (MSDS).
USA: 3,3’-diaminobenzidin (DAB) er muligvis farlig ved indånding, hudkontakt og ved indtagelse.
Materialet er irriterende for øjne og hud. Hvis der opstår kontakt med huden, skal det påvirkede
område skylles med sæbe og vand.
BEMÆRK: Selvom diaminobenzidin strukturelt er relateret til benzidin, er der ikke tegn på,
at diaminobenzidin er kræftfremkaldende. Se lokale og nationale bestemmelser vedrørende
bortskaffelse.
8. EnVision™ FLEX Antibody Diluent (kode K8016) indeholder natriumazid (NaN3), et kemikalie, der
er yderst giftigt i ren form. Selvom koncentrationen i produktet ikke er klassificeret som farlig, kan
natriumazid reagere med bly og kobber og danne meget eksplosive ophobninger af metalazider.
Efter bortskaffelse skylles med rigelige mængder vand for at hindre ophobning af metalazid i afløb.
9. Brug egnet personligt beskyttelsesudstyr for at undgå kontakt med øjne og hud.
10. Ubrugt opløsning skal bortskaffes i henhold til lokale, nationale og EU-bestemmelser.
Opbevaring
Opbevar EnVision™ FLEX og EnVision™ FLEX+ reagenser ved 2–8 °C.
Opbevar EnVision™ FLEX Hematoxylin (kode K8018) ved stuetemperatur. Må ikke anvendes efter den
udløbsdato, der er trykt på flaskerne. Hvis reagenserne opbevares under andre betingelser end de
specificerede, skal betingelserne verificeres af brugeren. Den klargjorte Substrate Working Solution
skal opbevares i mørke ved 2–8 °C og anvendes inden for 5 dage. Kontakt Dakos tekniske
serviceafdeling, hvis der observeres uventet farvning, som ikke kan forklares med variationer
i laboratorieprocedurer, og der er mistanke om et problem med produktet.
(114793-006)
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 6/11
Klargøring af reagens
A.1 EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (DM828, kode K8004)
Fortynd en passende mængde EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) i forholdet
1:50 med destilleret eller deioniseret vand til den planlagte farvning. Hvis Dako PT Link bruges til
forbehandling, kan fortyndingen ske ved at tømme indholdet af flasken med Target Retrieval Solution
(50x) over i Dako PT Link-karret og tilsætte destilleret eller deioniseret vand til den afmærkede linje
(fyldelinjen). Ubrugt, fortyndet opløsning kan opbevares ved 2–8 °C i en måned. Kassér opløsningen, hvis
den er uklar. Når den fortyndede opløsning anvendes i PT Link til en 3-i-1 præparatklargøringsprocedure,
kan den anvendes 3 gange inden for en 5 dages periode, hvis den opbevares ved stuetemperatur.
A.2 EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (DM829, kode K8005)
Fortynd en passende mængde EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) i forholdet
1:50 med destilleret eller deioniseret vand til den planlagte farvning. Ubrugt, fortyndet opløsning kan
opbevares ved 2–8 °C i en måned. Hvis Dako PT Link bruges til forbehandling, kan fortyndingen ske ved
at tømme indholdet af flasken med Target Retrieval Solution (50x) over i Dako PT Link-karret og tilsætte
destilleret eller deioniseret vand til den afmærkede linje (fyldelinjen). Kassér opløsningen, hvis den er
uklar. Når den fortyndede opløsning anvendes i PT Link til en 3-i-1 præparatklargøringsprocedure, kan
den anvendes 3 gange inden for en 5 dages periode, hvis den opbevares ved stuetemperatur.
A.3 EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) (DM831, kode K8007)
Fortynd en passende mængde EnVision™ FLEX Wash Buffer (20x) i forholdet 1:20 med destilleret
eller deioniseret vand til den planlagte farvning. Fortynd ved at tilsætte den koncentrerede vaskebuffer
til en på forhånd afmålt mængde destilleret eller deioniseret vand for at minimere skumdannelse.
Omrør forsigtigt, indtil den fortyndede opløsning fremstår homogen. Ubrugt, fortyndet opløsning kan
opbevares ved 2–8 °C i en måned. Kassér opløsningen, hvis den er uklar. Når den fortyndede
opløsning anvendes i PT Link til en 3-i-1 præparatklargøringsprocedure, kan den anvendes 3 gange
inden for en 5 dages periode, hvis den opbevares ved stuetemperatur.
A.4 EnVision™ FLEX Substrate Working Solution
EnVision™ FLEX Substrate Working Solution, der indeholder DAB, klargøres ved at blande det
grundigt med 1 dråbe EnVision™ FLEX DAB+ Chromogen (DM827) pr. 1 mL EnVision™ FLEX
Substrate Buffer (DM823). EnVision™ FLEX Substrate Working Solution skal anvendes inden for
5 dage (opbevares mørkt ved 2–8 °C).
Indsamling og klargøring af prøver
Prøverne kan være formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit.
Fikseringstiderne afhænger af det anvendte fiksativ og vævstype/-tykkelse. For eksempel skal
vævsblokke med en tykkelse på 3–4 mm fikseres i neutral bufferet formalin i 18–24 timer.
Den optimale tykkelse for paraffinindstøbte snit er ca. 4 µm.
Præparaterne skal monteres på objektglas, f.eks. FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020). Snittene
skal monteres på objektglassene så fladt og med så få folder som muligt. For mange folder vil påvirke
farvningsresultaterne.
BEMÆRK: Objektglassene skal have en bredde, der passer til Dako Autostainer/Autostainer Plusinstrumenterne. Se brugervejledningen til de enkelte Dako-instrumenter vedr. en definition af brugbare
objektglas.
Paraffinsnit skal monteres fra et forvarmet vandbad med destilleret eller deioniseret vand. Vandbadet
må ikke indeholde additiver (f.eks. gelatine, poly-L-lysin osv.). Snittene skal tørres ved opvarmning,
generelt ved en temperatur, der ikke overstiger 60 °C i op til 60 minutter. Det er vigtigt at fjerne vandet
under snittene inden ovntørringen for at sikre, at snittene hæfter godt på objektglassene.
(114793-006)
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 7/11
Procedure
Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrumenter anvender teknikker, der er baseret på forskellige
principper, for at opnå et optimalt farvningsresultat. Inden der køres protokoller på et Dako
Autostainer/Autostainer Plus-instrument til immunfarvning, skal brugervejledningen til det anvendte
Dako-instrument læses grundigt igennem.
For at sikre sig reproducerbar epitop-retrieval anbefales det, at objektglasholderen altid fyldes helt op
med objektglas. Dermed sikres den samme opvarmning af snittene i hver kørsel.
A. Forbehandlingsprocedure
Anbefalet 3-i-1 præparatklargøringsprocedure ved hjælp af PT Link:
Afparaffinering, rehydrering og varmeinduceret epitop-retrieval (HIER) kan udføres på
formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit ved hjælp af 3-i-1 proceduren:
1. Klargør en arbejdsopløsning ved at fortynde den koncentrerede EnVision FLEX Target Retrieval
Solution (50x) i forholdet 1:50 med destilleret eller deioniseret vand.
2. Fyld PT Link-karrene op med en tilstrækkelig mængde (1,5 L) arbejdsopløsning til at dække
vævssnittene.
3. Indstil PT Link til at forvarme opløsningen til 65 °C.
4. Nedsænk de monterede, formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit i den forvarmede
EnVision FLEX Target Retrieval Solution (arbejdsopløsning) i PT Link-karrene og inkuber i
20–40 minutter ved 97 °C. Den optimale inkubationst id skal fastsættes af brugeren.
5. Lad snittene afkøle i PT Link til 65 °C.
6. Fjern hvert Autostainer-glasstativ med objektglas fra PT Link-karret og dyp straks objektglassene i
et glas/kar (f.eks. PT Link Rinse Station, kode PT109) med fortyndet EnVision FLEX Wash Buffer
(20x) ved stuetemperatur.
7. Lad objektglassene stå i 1–5 minutter ved stuetemperatur i den fortyndede EnVision FLEX Wash
Buffer (20x).
8. Anbring objektglassene på et Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument og gå videre med
farvning. Snittene må ikke tørre ud under behandlingen eller under den immunhistokemiske
farvningsprocedure.
9. Efter farvningen anbefales det at udføre dehydrering, rensning og permanent montering.
BEMÆRK: Når den fortyndede target retrieval-opløsning og den fortyndede vaskebuffer anvendes
i PT Link til 3-i-1 præparatklargøringsproceduren, kan de anvendes 3 gange inden for en 5 dages
periode, hvis de opbevares ved stuetemperatur.
HIER procedure ved hjælp af PT Link:
Efter afparaffinering og hydrering til buffer (vand) skal vævssnittene underkastes varmeinduceret
epitop-retrieval (HIER):
1. Klargør en arbejdsopløsning ved at fortynde den koncentrerede EnVision FLEX Target Retrieval
Solution (50x) i forholdet 1:50 med destilleret eller deioniseret vand.
2. Fyld PT Link-karrene op med en tilstrækkelig mængde (1,5 L) arbejdsopløsning til at dække
vævssnittene.
3. Indstil PT Link til at forvarme opløsningen til 65 °C.
4. Vævssnittene, der er monteret på objektglassene, skal afparaffineres og rehydreres manuelt.
For bedre vævsadhæsion anbefales det at anvende belagte eller silaniserede objektglas.
5. Nedsænk vævssnittene, som har stuetemperatur, i den forvarmede EnVision™ FLEX Target
Retrieval Solution (arbejdsopløsning) og inkuber i 20–40 minutter ved 97 °C. Den optimale
inkubationstid skal fastsættes af brugeren.
(114793-006)
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 8/11
6.
7.
Lad snittene afkøle i PT Link til 65 °C.
Fjern hvert glasstativ med objektglas fra PT Link-karret og dyp straks objektglassene i et glas/kar
(f.eks. PT Link Rinse Station, kode PT109) med fortyndet EnVision FLEX Wash Buffer (20x) ved
stuetemperatur.
8. Lad objektglassene stå i 1–5 minutter ved stuetemperatur i den fortyndede EnVision FLEX Wash
Buffer (20x).
9. Anbring objektglassene på et Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument og gå videre med
farvning. Snittene må ikke tørre ud under behandlingen eller under den immunhistokemiske
farvningsprocedure.
10. Efter farvningen skal objektglassene monteres ved hjælp af et vandigt eller permanent
monteringsmedie.
BEMÆRK: Når den fortyndede target retrieval-opløsning og den fortyndede vaskebuffer anvendes
i PT Link til HIER-proceduren, kan de anvendes 3 gange inden for en 5 dages periode, hvis de
opbevares ved stuetemperatur.
HIER-procedure med Coplin-skåle:
Efter afparaffinering og hydrering til buffer (vand) skal vævssnittene underkastes varmeinduceret
epitop-retrieval (HIER):
1. Anbring farvningsskålene, der indeholder fortyndet EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution
(50x), i vandbad.
2. Opvarm vandbad og skålene fyldt med EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution (arbejdsopløsning)
til 95–99 °C. Sæt låg på skålene for at stabilisere temperaturen og undgå fordampning.
3.
Dyp snittene, der har stuetemperatur, i den forvarmede EnVision FLEX Epitope Retrieval
Solution (arbejdsopløsning) i farvningsskålene.
4. Opvarm igen vandbadet og EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution til 95–99 °C. Inkuber i
20 (±1) minutter ved 95–99 °C.
5. Tag hele skålen med objektglassene op af vandbadet. Lad objektglassene køle af i EnVision™
FLEX Target Retrieval Solution i 20 (±1) minutter ved stuetemperatur.
6. Dekanter EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution og skyl snittene med fortyndet EnVision™
FLEX Wash Buffer (20x) i 1–5 minutter ved stuetemperatur.
7. Placer stativet med de skyllede snit i et Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrument. Begynd
straks den forudprogrammerede farvning.
BEMÆRK: Når den fortyndede target retrieval-opløsning og den fortyndede vaskebuffer anvendes
i Coplin-skåle til HIER-proceduren, kan de kun anvendes 1 gang (engangsbrug).
Nogle få epitoper tåler ikke HIER, og nogle kræver enzymatisk forbehandling. Se indlægssedlen til
hvert enkelt Dako primært antistof.
Snittene må ikke tørre ud under behandlingen eller under den efterfølgende immunhistokemiske
farvningsprocedure. Det tilrådes at anvende FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020), så
vævssnittene hænger bedre fast på objektglassene.
B. Farvningsprocedure
Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies kan anvendes sammen med Dako EnVision™ FLEX+
detektionssystem på formalinfikserede, paraffinindstøbte snit.
Indlægssedlen i det koncentrerede primære antistof indeholder en fortyndingsvejledning til Dako
koncentrerede, primære antistoffer.
De koncentrerede, primære antistoffer skal fortyndes i EnVision™ FLEX Antibody Diluent (DM830,
kode K8006).
Farvningstrinnene og inkubationstiderne er forprogrammerede i softwaren til Dako
Autostainer/Autostainer Plus-instrumenter, under anvendelse af følgende protokoller:
Skabelonsprotokol: FLEX_200 (200 µL doseringsmængde) eller FLEX_300 (300 µL
doseringsmængde)
(114793-006)
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 9/11
Autoprogrammer til farvningskørsler:
FLEX (FLEX-protokol)
FLEX_Mo (FLEX+ Mouse (LINKER)-protokol)
FLEX_Rb (FLEX+ Rabbit (LINKER)-protokol)
Trinnet Auxiliary skal indstilles til “rinse buffer” ved farvningskørsler med ≤10 objektglas. Ved
farvningskørsler med ≥10 objektglas skal trinnet Auxiliary indstilles til “none”. Dette sikrer
sammenlignelige vasketider.
Alle inkubationstrin skal udføres ved stuetemperatur. Se brugervejledningen for det pågældende
instrument for yderligere oplysninger. Hvis protokollerne ikke er tilgængelige på det anvendte Dako
Autostainer/Autostainer Plus-instrument, kontaktes Dakos tekniske serviceafdeling. De optimale
inkubationstider for det primære antistof og EnVision™ FLEX/HRP er afhængige af det anvendte
primære antistof. Se indlægssedlen til hvert enkelt Dako primært antistof. Brugeren skal kontrollere den
anvendte protokol.
Prøverne skal monteres, når farvningsproceduren er fuldført. Monteringsmedier, som f.eks. Dako
Glycergel™ Mounting Medium, kode C0563, eller Faramount Aqueous Mounting Medium, kode S3025,
anbefales til vandbaseret montering.
Kvalitetskontrol
Hver farvekørsel skal omfatte et kendt positivt kontrolpræparat for at sikre en korrekt ydeevne af alle de
anvendte reagenser. Hvis det positive kontrolpræparat ikke udviser en positiv farvning, skal
mærkningen af prøvepræparaterne betragtes som ugyldige.
Der skal anvendes et negativt kontrolreagens sammen med hvert præparat for at identificere en
eventuel uspecifik farvning. Hvis uspecifik farvning ikke kan adskilles tydeligt fra den specifikke
farvning, skal mærkningen af prøvepræparatet betragtes som ugyldig.
Fortolkning af resultater
Den diaminobenzidin-indeholdende substratarbejdsopløsning danner en brun farve på stedet for
målantigenet, som genkendes af det primære antistof. Den brune farve skal kunne ses på det positive
kontrolpræparat på det forventede sted for målantigenet. Hvis der er uspecifik farvning, vil dette kunne
ses som en ret diffus, brun farvning på de objektglas, der er behandlet med det negative
kontrolreagens. Kernerne farves blå med hæmatoxylin-kontrastfarven.
Begrænsninger
1.
2.
Kun til automatiseret anvendelse på Dako Autostainer-instrumenter. Ved udførelse af manuelle
farvninger skal den optimale procedure bestemmes og verificeres af brugeren, medmindre andet er
angivet i indlægssedlen til det pågældende Dako primære antistof.
Kun til anvendelse på formalinfikserede, paraffinindstøbte vævssnit. Ved brug af frosne snit eller
celleudstrygninger skal den optimale procedure bestemmes og verificeres af brugeren, medmindre
andet er angivet i indlægssedlen til det pågældende Dako primære antistof. Ændringer af
proceduren kan påvirke antallet af analyser, som kan udføres med sættet.
(114793-006)
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 10/11
Symbolforklaring
Kat alognummer
Temperaturbegrænsning
Anvendes s enest
Medic ins k udstyr t il in vitro
diagnostik
Indeholder t il <n> analyser
Producent
Se brugsanv is ningen
Lotnummer
Farlig
Dako EnVision™ systemerne er omfattet af det amerikanske patent 5,543,332 og det europæiske patent 594,772.
Produceret af:
Dako Denmark A/S
Produktionsvej 42
DK-2600 Glostrup
Denmark
Tlf. +45 44 85 95 00
Fax +45 44 85 95 95
(114793-006)
K8012/DK/NAN/2011.03.25 p. 11/11