FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Progesterone Receptor
Clone PgR 636
Ready-to-Use
(Link)
Kode IR068
Tiltenkt bruk
Til in vitro-diagnostisk bruk.
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Progesterone Receptor, Clone PgR 636, Ready-to-Use, (Link), er beregnet
for bruk innen immunhistokjemi sammen med visualiseringssettet EnVision FLEX+, High pH og Autostainer Linkutstyr til semi-kvantitativ påvisning av human progesteronreseptor i formalinfiksert, parafininnstøpt humant
brystkarsinom. Dette antistoffet merker celler med positivt resultat for progesteronreseptor og er nyttig i
vurderingen av progesteronreseptorstatus i humane brystkarsinomer.
Den kliniske tolkningen av farging eller mangel på farging må suppleres med morfologiske studier ved bruk av
egnede kontroller og skal i sammenheng med pasientens sykdomshistorikk og andre diagnostiske prøver
evalueres av en kvalifisert patolog.
Synonym for antigen
PR
Sammendrag
og forklaring
Rollen til steroide hormonreseptorer i brystkreft er godt kjent (1, 2). Ved fravær av østrogenreseptor (ER) og
progesteronreseptor (PR) forventes det tidlig gjenforekomst og dårlig overlevelse for brystkreftpasienter (3–6).
Tilstedeværelse av ER og PR i tumorer predikerer også potensialet fra tamoksifen og andre endokrin-relaterte
behandlingsmetoder. Målinger av ER og PR kan fastsettes semi-kvantitativt ved hjelp av IHC eller kvantitativt ved
hjelp av DCC eller EIA. Korrelasjon mellom de semi-kvantitative og kvantitative evalueringene av PR har et
område fra 73 til 91 %, avhengig av laboratoriet og antistoffet som brukes (7–9).
Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining (Generelle instruksjoner for immunhistokjemisk
farging) eller deteksjonssysteminstruksjoner for IHC-prosedyrer for: 1) Prosedyreprinsipp, 2) Materialer som er
nødvendige, men som ikke følger med, 3) Oppbevaring, 4) Prøveklargjøring, 5) Fargingsprosedyre,
6) Kvalitetskontroll, 7) Feilsøking, 8) Tolkning av farging, 9) Generelle begrensninger.
Reagens som følger
med
Monoklonalt antistoff fra mus, klart til bruk, følger med i flytende form i buffer som inneholder stabiliserende protein
og 0,015 mol/L NaN3.
Clone: PgR 636 (10)
Isotype: IgG1, kappa
Immunogen
Formalinfiksert, rekombinant uforkortet A-form av human progesteronreseptor (10)
Spesifisitet
Anti-PR, PgR 636 har vist seg å reagere med PR-A- og PR-B-former ved Western-blotting av hele
celleekstrakter og reagerer med både fri og hormonbunden PR (10). Epitopen er kartlagt til aminoterminalt
domene som deles med PR-A og PR-B.
Forholdsregler
1.
Til in vitro-diagnostisk bruk.
2.
For profesjonelle brukere.
3.
Dette produktet inneholder natriumazid (NaN3), et svært giftig kjemikalie i ren form. Selv om det ikke
klassifiseres som farlig ved produktkonsentrasjonene, kan natriumazid reagere med bly- og kopperrør og
danne svært eksplosive ansamlinger av metallazider. Ved avhending må du skylle rikelig med vann for å
forhindre ansamling av metallazid i rørene.
4.
Riktige håndteringsprosedyrer bør brukes med dette produktet, i likhet med alle andre produkter som er
utvunnet fra biologiske kilder.
5.
Bruk egnet personlig verneutstyr for å unngå kontakt med øyne og hud.
6.
Ubrukt løsning skal kasseres i henhold til lokale, nasjonale og europeiske forskrifter.
Oppbevaring
(115569-004)
Lagres ved 2–8 °C. Må ikke brukes etter utløpsdatoe n som er stemplet på flasken. Hvis reagensene oppbevares
under andre forhold enn de som er spesifisert, må forholdene verifiseres av brukeren. Det er ingen tydelige tegn
som indikerer at dette produktet er ustabilt. Derfor bør positive og negative kontroller kjøres samtidig med
pasientprøver. Hvis det observeres uventet farging som ikke kan forklares med variasjoner i laboratorieprosedyrer
og det er mistanke om at det er et problem med antistoffet, må du ta kontakt med Dakos tekniske avdeling.
307141NO_004 s. 1/5
Prøveklargjøring
inkludert materialer
som er nødvendige,
men som ikke følger
med
Parafinsnitt: Antistoffet kan brukes til å merke formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Vevsprøver skal skjæres
i snitt på ca. 4 µm.
Forhåndsbehandling: Det er nødvendig å forhåndsbehandle formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Optimale
resultater oppnås ved å forbehandle vev med HIER ved bruk av fortynnet EnVision FLEX Target Retrieval
Solution, High pH (50x) (kode K8000/K8004). Avparafinisering, rehydrering og epitopavmaskering kan utføres i
Dako PT Link (kode PT100/PT101/PT200). Se bruksanvisningen for PT Link for detaljer. Følgende parametere
skal brukes for PT Link: Forvarmingstemperatur: 65 °C. Temperatur og tid for epitopavmaskering: 97 °C
for 20 (±1) minutter. Avkjøles til 65 °C. Fjern obj ektglasstativet fra PT-tanken, og dypp glassene umiddelbart i en
beholder/tank (f.eks. PT Link Rinse Station (kode PT109)) som inneholder fortynnet, romtemperert EnVision FLEX
Wash Buffer (20x) (kode K8007). Legg objektglassene i Wash Buffer i 1–5 minutter.
Vevssnittene bør ikke tørke ut under forhåndsbehandlingen eller under påfølgende immunhistokjemisk
fargingsprosedyre. Det anbefales å bruke FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020) for bedre adhesjon mellom
vevssnittene og objektglassene. Etter farging må snittene dehydreres, klares og monteres med permanent
monteringsmedium.
Fargingsprosedyre
inkludert materialer
som er nødvendige,
men som ikke følger
med
Visualisering: Det anbefalte visualiseringssystemet er EnVision FLEX+, High pH (Link) (kode K8002).
Program: Fargingstrinnene og inkubasjonstidene er forhåndsprogrammert i Autostainer Link-programvaren. Det
anbefalte anvendelsesvolumet av reagens er 1 x 200 µl eller 2 x 150 µl per objektglass. Se riktig bruksanvisning
for Autostainer Link for detaljerte instruksjoner om å laste objektglass og reagenser. Hvis protokollene ikke er
tilgjengelige på Autostainer Link 48-plattformen som brukes, kan du ta kontakt med Dakos tekniske avdeling. Alle
inkubasjonstrinnene skal utføres ved romtemperatur.
Kontrastfarging: Anbefalt kontrastfarge er EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (kode K8008). Et ikke-vandig,
permanent monteringsmedium anbefales.
Kontroller: Positive og negative kontroller skal kjøres samtidig med samme protokoll som pasientprøvene. Ideelt
sett skal de positive kontrollene omfatte brystkarsinomvev med lav PR-uttrykkelse. Som et alternativ kan godartet
cervix også brukes. Cellene/strukturene skal vise reaksjonsmønstre som beskrevet for dette vevet i delen
Ytelsesegenskaper, i alle positive prøver.
Anbefalt negativ kontrollreagens er FLEX Negative Control, Mouse (Link) (kode IR750).
Tolkning av farging
Cellefargingsmønsteret er nukleært. Hvis cytoplasmisk merking observeres, skal den anses som ikke-spesifikk. Et
positivt resultat er definert som nukleær farging i ≥ 1 % av tumorcellene ved enhver fargingsintensitet. Dette er i
samsvar med ASCO/CAPs anbefalte grense på ≥ 1 % positive tumorceller for positiv vurdering (11).
Produktspesifikk
begrensning
1.
Falske negative resultater kan forårsakes av degradering av antigen i vev over tid. Prøvene skal farges innen
2 måneder etter montering av vev på objektglass ved lagring i romtemperatur (6).
2.
Lymfocytter og stromale celler kan utvise positiv farging med FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human PR Clone
PgR 636-antistoff og skal ikke tolkes eller regnes som PR-farging av tumorceller.
3.
For optimale og reproduserbare resultater krever PR-proteinet målavmaskering når vev fikseres rutinemessig
(nøytralbufret formalin) og parafininnstøpes.
4.
Bruk av Dako Anti-PR, Clone PgR 636 på vev med andre fiksativer enn formalin er ikke validert.
Ytelsesegenskaper
Presisjon: Seriesnitt fra hver av 12 ulike formalinfikserte, parafininnstøpte blokker med brystkarsinom, som
representerte et dynamisk område av PR-uttrykkelse, ble samlet inn for testing. Testingen ble utført som følger:
Presisjon i kjøring: I henhold til standardprotokollen EnVision FLEX+, High pH ble tre snitt fra hver vevsblokk
farget med Anti-PR, Clone PgR 636. Et objektglass fra hvert snitt ble samtidig farget med en negativ
kontrollreagens.
Presisjon mellom kjøringer: Prosedyren ovenfor ble gjentatt på fem forskjellige dager (ikke påfølgende dager). Ett
snitt fra hver vevsblokk ble farget. Et snitt fra hver vevsblokk ble samtidig farget med en negativ kontrollreagens.
Presisjon mellom enheter: Prosedyren ovenfor ble utført på tre ulike Autostainer-enheter av tre ulike brukere.
Totalt tre snitt fra hver vevsblokk ble farget. Et objektglass fra hver vevsblokk ble samtidig farget med en negativ
kontrollreagens.
Presisjonseksperimenter med Anti-PR, Clone PgR 636 ga konsekvente resultater ved testing i kjøring, mellom
kjøringer og mellom enheter. Testbetingelsene var konsekvente gjennom hele studien, og reagensene ble
oppbevart ved 2–8 °C mellom testkjøringer.
Normalt vev: Tabell 1 inneholder et sammendrag av Anti-PR, Clone PgR 636-enhetens immunreaktivitet på det
anbefalte panelet med normalt vev. Alle vev ble formalinfiksert og parafininnstøpt og farget med Anti-PR, Clone
PgR 636 i henhold til instruksjonene i pakningsvedlegget. Cytoplasmisk farging ble observert med Anti-PR, Clone
PgR 636 i flere ulike vevselementer, inkludert epitel, stroma, interstitialceller og inflammasjonsceller. Selv om
cytoplasmisk farging ble observert, regnes det ikke som diagnostisk i henhold til den tiltenkte bruken av dette
antistoffet.
(115569-004)
307141NO_004 s. 2/5
Tabell 1: sammendrag av Anti-PR, Clone PgR 636-enhetens reaktivitet med normalt vev
Vevstype
(antall testet)
Positive vevselementer
Vevstype
(antall testet)
Positive vevselementer
Binyre (3)
1/3 celler i zona glomerulosa
(50 %), nukleære
1/3 celler i zona glomerulosa
(50 %), nukleære
0/3
Nerve, perifer (3)
0/3
Eggstokk (3)
3/3 stromale celler (50–70 %),
nukleære
2/3 langerhanske øyer (50–90 %),
nukleære
3/3 glandulære epitelceller
(1–10 %), nukleære
3/3 hypofyseceller (1–40 %),
nukleære
3/3 stromale celler (30–80 %),
nukleære
3/3 glandulære epitelceller
(< 1–60 %), nukleære
0/3
Benmarg (3)
Bryst (3)
Cerebellum (3)
Cerebrum (3)
Bukspyttkjertel (3)
2/3 glandulære epitelceller
(50–90 %), nukleære
0/3
Skjoldbruskkjertel (3)
Hypofyse (3)
1/3 meningeale celler (100 %),
nukleære
3/3 epitelceller (50–90 %),
nukleære
3/3 stroma, inkludert
inflammasjonsceller (50 %),
nukleære
1/3 lymfeceller/inflammasjonsceller
(10 %), nukleære
Prostata (3)
Milt (3)
Mesoteliale celler (2)
1/3 lymfoid / inflammatoriske celler
(10 %), nukleære
1/3 stromale celler (50 %),
nukleære
3/3 interstitialceller (1–5 %),
nukleære
0/3
2/3 interstitialceller (1–10 %),
nukleære
2/3 inflammasjonsceller (1–10 %),
nukleære
0/2
Muskel, hjerte (3)
3/3 myocytter (30 %), perinukleære
Muskel, skjelett (3)
0/3
Cervix (3)
Kolon (3)
Spiserør (3)
Nyre (3)
Lever (3)
Lunge (3)
Spyttkjertel (3)
Hud (3)
Tynntarm (3)
Mage (3)
3/3 stromale og
inflammasjonsceller (30–50 %),
nukleære
0/3
Thymus (3)
Thyroidea (3)
1/3 interstitialceller (20 %),
nukleære
3/3 interstitialceller (5–80 %),
nukleære
0/3
0/3
Tonsill (3)
0/3
Livmor (2)
2/2 glandulære epitelceller
(100 %), nukleære
2/2 myometriale stromale celler
(100 %), nukleære
Testis (3)
Metodesammenligning: Testene av Monoclonal Mouse Anti-Human PR, Clone PgR 636 ble utført med EnVision
FLEX+ og vurdert i henhold til ASCO/CAP-retningslinjene (≥ 1 % grense) (11). Testene av Anti-PR (Clone 1294)
ble utført med Dako ER/PR pharmDx-settet og vurdert i henhold til Allred-retningslinjene som er beskrevet i
pakningsvedlegget. Dataene fra metodesammenligningen er lagt frem i tabell 2. Med disse respektive
retningslinjene for vurdering var Monoclonal Mouse Anti-Human PR, Clone PgR 636 i overensstemmelse med
PR-antistoffkomponenten i Dako ER/PR pharmDx-settet, med verdier for samlet, positiv og negativ
overensstemmelse på henholdsvis 94,5 %, 95,8 % og 93,1 %. Tabell 3 viser sammenligningen av begge
analysene når de ble vurdert i henhold til ASCO/CAP-retningslinjene.
Tabell 2: overensstemmelse mellom Anti-PR, Clone PgR 636 (ASCO/CAP) og PR-antistoffkomponenten i
ER/PR pharmDx-settet (Allred)
PR-antistoffkomponenten i ER/PR pharmDx-settet
Monoclonal
Mouse AntiHuman PR,
Clone PgR 636
Positiv
Negativ
Totalt
Positiv
115
8
123
Negativ
5
108
113
Totalt
120
116
236
Positiv overensstemmelse i prosent = 95,8 % (95 % CI: 91,1–96,8)
Negativ overensstemmelse i prosent = 93,1 % (95 % CI: 90,5–96,7)
Samlet overensstemmelse i prosent = 94,5 % (95 % CI: 90,8–96,8)
(115569-004)
307141NO_004 s. 3/5
Tabell 3: overensstemmelse mellom Anti-PR, Clone PgR 636 (ASCO/CAP) og PR-antistoffkomponenten i
ER/PR pharmDx-settet (ASCO/CAP)
PR-antistoffkomponenten i ER/PR pharmDx-settet
Monoclonal
Mouse AntiHuman PR,
Clone PgR 636
Positiv
Negativ
Totalt
Positiv
115
8
123
Negativ
1
112
113
Totalt
116
120
236
Positiv overensstemmelse i prosent = 99,1 % (95 % CI: 93,0-98,0)
Negativ overensstemmelse i prosent = 93,3 % (95 % CI: 92,8-98,0)
Samlet overensstemmelse i prosent = 96,2 % (95 % CI: 93,0-98,0)
Reproduserbarhet mellom laboratorier: Reproduserbarhetstestene for Anti-PR, Clone PgR 636 ble utført ved tre
testlaboratorier på fem forskjellige dager (ikke påfølgende dager) og 21 unike brystkreftprøver og vurdert i henhold
til ASCO/CAP-retningslinjene (≥ 1 % grense) for totalt 315 evalueringer. Tabell 4, 5 og 6 inneholder detaljert
informasjon om reproduserbarheten til analysen mellom ulike steder. Beregningene av gjennomsnittlig positiv,
gjennomsnittlig negativ og samlet overensstemmelse i prosent støtter resultatene for høy reproduserbarhet for
PR-analysen (PgR 636) ved bruk til påvisning av PR-status i et klinisk miljø.
Tabell 4: sted 1 kontra sted 2, reproduserbarhet mellom laboratorier for Anti-PR, Clone PgR 636
Sted 1
Positiv
Sted 2
Negativ
Totalt
Positiv
55
0
55
Negativ
4
46
50
Totalt
59
46
105
Gjennomsnittlig positiv overensstemmelse i prosent = 96,5 %
Gjennomsnittlig negativ overensstemmelse i prosent = 95,8 %
Tabell 5: sted 1 kontra sted 3, reproduserbarhet mellom laboratorier for Anti-PR, Clone PgR 636
Sted 1
Positiv
Sted 3
Negativ
Totalt
Positiv
59
1
60
Negativ
0
45
45
Totalt
59
46
105
Gjennomsnittlig positiv overensstemmelse i prosent = 99,2 %
Gjennomsnittlig negativ overensstemmelse i prosent = 98,9 %
Tabell 6: sted 2 kontra sted 3, reproduserbarhet mellom laboratorier for Anti-PR, Clone PgR 636
Sted 2
Positiv
Sted 3
Negativ
Totalt
Positiv
55
5
60
Negativ
0
45
45
Totalt
55
50
105
Gjennomsnittlig positiv overensstemmelse i prosent = 95,7 %
Gjennomsnittlig negativ overensstemmelse i prosent = 94,7 %
(115569-004)
307141NO_004 s. 4/5
Referanser
1.
Henderson C.Breast cancer. In: Harrison’s principles of internal medicine, 12th edition, Wilson JD,
Braunwald E, Isselbacher KJ, Petersdorf RG, Martin JB, Fauci AS, Root RK (eds). McGraw-Hill, Inc. New
York, 1991
2.
Fuqua SAW. Estrogen and progesterone receptors and breast cancer. Diseases of the Breast, Harris et al,
eds. Lippincott-Raven, 1996. p. 261.
3.
McGuire WL, Clark GM. The prognostic role of progesterone receptors in human breast cancer. Sem Oncol
1983;10:2.
4.
Clark GM, McGuire WL, Hubay CA, Pearson OH, Marshall JS. Progesterone receptors as prognostic factor
in stage II breast cancer. N Engl J Med 1983;39:1343.
5.
Ravdin PM, Green S, Dorr TM, McGuire WL, Fabian C, Puch RP, et al. Prognostic significance of
progesterone receptor levels in estrogen receptor-positive patients with metastatic breast cancer treated with
tamoxifen: Results of a prospective southwest oncology group study. JCO 1992;10:1284.
6.
Chevallier B, Heintzmann F, Mosseri V, Dauce JP, Bastit P, Graic Y, Brunelle P, Basuyay JP, Comoz M,
Asselain B. Prognostic value of estrogen and progesterone receptors in operable breast cancer: Results of a
univariate and multivariate analysis. Cancer 1988; 62:2517
7.
Page DL, Jensen RA, Simpson JF. Routinely available indicators of prognosis in breast cancer. Breast Can
Res Treat 1998;51:195.
8.
Allred DC, Harvey JM, Berardo M, Clark GM. Prognostic and predictive factors in breast cancer by
immunohistochemical analysis. Mod Pathol 1998;11:155.
9.
Fitzgibbons PL, Page DL, Weaver D, Thor AD, Allred DC, Clark GM, et al. Prognostic factors in breast
cancer. College of American Pathologists consensus statement. Arch Pathol Lab Med 2000;124:966.
10.
Press M, Spaulding B, Groshen S, Kaminsky D, Hagerty M, Sherman L, et al. Comparison of different
antibodies for detection of progesterone receptor in breast cancer. Steroids 2002; 67:799.
11.
Hammond MEH, Hayes DF, Dowsett M, Allred C, Hagerty KL, Badve S, et al. American Society of Clinical
Oncology/College of American Pathologists Guideline Recommendations for Immunohistochemical Testing
of Estrogen and Progesterone Receptors in Breast Cancer. Arch Pathol Lab Med 2010;134:907-22.
12.
Clinical and Laboratory Standards Institute (formerly NCCLS). Quality assurance for immunocytochemistry;
Approved guideline. CLSI document MM4-A (1-56238-396-5)- CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400.
Wayne, PA 19087-1898 USA 1999.
Utgave 11/15
(115569-004)
307141NO_004 s. 5/5