FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Ki-67 Antigen
Clone MIB-1
Ready-to-Use
(Link)
Kode IR626
Tiltenkt bruk
Til in vitro-diagnostisk bruk.
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Ki-67 Antigen, klon MIB-1, Ready-to-Use (Link), er beregnet til bruk i
immunhistokjemi sammen med Autostainer Link-instrumenter. Dette antistoffet er nyttig for påvisning av
Ki-67-antigen i normale og neoplastiske celler, for eksempel bløtvevssarkom (1), prostatisk adenokarsinom (2) og
brystkarsinom (3). Differensial påvisning får hjelp av resultatene fra et panel med antistoffer. Den kliniske tolkningen av
farging eller mangel på farging, må komplementeres av morfologiske studier med bruk av egnede kontroller og skal i
sammenheng med pasientens sykehistorie og andre diagnostiske prøver evalueres av en kvalifisert patolog.
Sammendrag
og forklaring
Ki-67-antigenet er et nukleært protein som er karakterisert av måten det reagerer med monoklonalt antistoff fra
Ki-67-klonen (4). To isoformer av 345 og 395-kDa er funnet (5). Ki-67-antigenet er spesielt påvist i alle aktive
cellesyklusfaser (G1, S, G2 og M-faser), men er fraværende i hvilende celler (G0-fase) (4). I interfasen kan antigenet
bare påvises inne i nukleusen, men i mitosis er det meste av proteinet forflyttet til overflaten på kromosomene.
Antigenet brytes raskt ned når cellen går over i den ikke-proliferative tilstanden (6), og det virker som at Ki-67 ikke kan
påvises under DNA-reparasjonsprosessene (7).
Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining eller deteksjonssysteminstruksjoner for
IHC-prosedyrer for: 1) Prosedyreprinsipp, 2) Materialer som er nødvendige, men som ikke følger med,
3) Oppbevaring, 4) Prøveklargjøring, 5) Fargingsprosedyre, 6) Kvalitetskontroll, 7) Feilsøking, 8) Tolkning av farging,
9) Generelle begrensninger.
Reagens som
følger med
Monoklonalt antistoff av mus klart til bruk, følger med i flytende form i buffer som inneholder stabiliserende protein og
0,015 mol/L natriumazid.
Klon: MIB-1 (8). Isotype: IgG1, kappa.
Immunogen
Humant rekombinant peptid som tilsvarer et 1002 bp Ki-67 cDNA-fragment (8).
Spesifisitet
I Western blotting av lysater av flere myelomcellelinjer, IM-9, MIB-1 antistoffmerkebånd av 345 og 395 kDa, identiske
med båndene som markeres av det opprinnelige Ki-67-antistoffet. Western blotting og konkurrerende
bindingseksperimenter demonstrerte dessuten tydelig at MIB-1, nettopp som det opprinnelige Ki-67-antistoffet,
reagerer med en epitop som er kodet av et gjentatt 66 bp-element i Ki-67-genet.
I immunhistokjemi resulterte MIB-1 og Ki-67-antistoffene i identiske fargemønstre på frosne serielle tonsillarseksjoner (8).
MIB-1-antistoffet gjenkjenner native Ki-67-antigen og rekombinante fragmenter av Ki-67-molekyet (8).
Forholdsregler
1. For profesjonelle brukere.
2. Dette produktet inneholder natriumazid (NaN3), en svært giftig kjemikalie i ren form. Selv om det ikke klassifiseres
som farlig ved produktkonsentrasjonene, kan natriumazid reagere med bly- og kopperrør og danne metallazider
som bygger seg og som er svært eksplosive. Ved avhending, skyll med rikelig med vann for å forhindre ansamling
av metallazid i rørene.
3. Riktig håndteringsprosedyrer bør brukes i likhet med alle andre produkter derivert fra biologiske kilder.
4. Bruk egnet personlig verneutstyr for å unngå kontakt med øyne og hud.
5. Ubrukt løsning skal avhendes i henhold til lokale og statlige forskrifter.
Oppbevaring
(117680-005)
Dako Denmark A/S
Oppbevar ved 2–8 °C. Må ikke brukes etter utløpsdat oen som er stemplet på flasken. Hvis reagensene oppbevares
under andre forhold enn de som er spesifisert, må forholdene verifiseres av brukeren. Det er ingen tydelige tegn som
indikerer at dette produktet er ustabilt. Derfor bør positive og negative kontroller kjøres samtidig med pasientprøver.
Hvis det observeres uventet farging som ikke kan forklares med variasjoner i laboratorieprosedyrer og det er
mistanke om at det er et problem med antistoffet, ta kontakt med Dakos tekniske avdeling.
IR626/NO/KIA/2011.09.20 p. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Prøveklargjøring
inkludert materialer
som er nødvendige,
men som ikke
følger med
Antistoffet kan brukes til å merke formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Vevsprøver skal skjæres i snitt på ca. 4 µm.
Forbehandling med varmeindusert epitophenting (HIER) er nødvendig med bruk av Dako PT Link (kode
PT100/PT101). For detaljer, se bruksanvisningen for PT Link. Optimale resultater oppnås ved å forbehandle vev
med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (kode K8005).
Parafininnstøpte snitt: Forbehandling av formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt er anbefalt ved bruk av 3-i-1
prøveprepareringsprosedyre for Dako PT Link. Følg forbehandlingsprosedyren som står i pakningsvedlegget for
EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (Link) (kode K8005). Merk: Etter farging må snittene
dehydreres, klares og monteres med permanent monteringsmedium.
Avparafiniserte snitt: Forbehandling av avparafiniserte formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt er anbefalt ved
hjelp av Dako PT Link og følge samme prosedyre som beskrevet for parafininnstøpte snitt. Etter farging skal
objektglassene monteres ved hjelp av vannholdig eller permanent monteringsmedium.
Vevssnittene bør ikke tørke ut under behandlingen eller under påfølgende immunohistokjemisk fargingsprosedyre.
Det anbefales å bruke FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020) for bedre adhesjon av vevssnittene til
objektglassene.
Fargingsprosedyre
inkludert materialer
som er nødvendige,
men som ikke
følger med
Det anbefalte visualiseringssystemet er EnVision FLEX, High pH (Link) (kode K8000), skift ut High pH Target
Retrieval Solution fra dette settet med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low pH (50x) (kode K8005).
Fargingstrinnene og inkubasjonstidene er forhåndsprogrammert i Autostainer Link-programvaren. Det anbefalte
reagenspåføringsvolumet er 1 x 200 µL eller 2 x 150 µL per objektglass. Se riktig bruksanvisning for Autostainer Link
for detaljerte instruksjoner om å laste objektglass og reagenser. Hvis protokollene ikke er tilgjengelige på
Autostainer-plattformen som brukes, ta kontakt med Dakos tekniske avdeling. Alle inkubasjonstrinnene skal utføres
ved romtemperatur.
Optimale forhold kan variere avhengig av prøven og klargjøringsmetoder og skal bestemmes av
laboratorium. Hvis den evaluerende patologen skulle ønske en forskjellig fargingsintensitet, kan
inkuberingstidene og valget av EnVision FLEX/EnVision FLEX+ visualiseringssystem.
applikasjonsspesialist/teknisk servicespesialist kan kontaktes for informasjon. Sjekk at den justerte
ytelse fortsatt er gyldig ved å kontrollere at fargingsmønsteret er identisk med fargingsmønsteret som
under "Utførelseskarakteristika".
hvert enkelt
man justere
En Dako
protokollens
er beskrevet
Kontrastfarging i hematoksylin anbefales med EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (kode K8008). Ikke-vandig,
permanent monteringsmedium anbefales.
Positive og negative kontroller skal kjøres samtidig med samme protokoll som pasientprøvene. Det positive
kontrollvevet skal inkludere tonsill, og cellene/strukturene skal vise reaksjonsmønstre som beskrevet for dette vevet i
“Utførelseskarakteristika" i alle positive prøver. Anbefalt negativ kontrollreagens er FLEX Negative Control,
Mouse (Link) (kode IR750).
Tolkning av farging
Celler merket med antistoff viser et nukleært fargemønster, med unntak av mitotiske celler, hvor kromosomene og
cytoplasmaet merkes.
Utførelseskarakteristika
Normalt vev: Mukosale halsceller og dype kryptceller i tynntarmen og kolon, samt kimsenterceller i Payers lapper
reagerer positivt med antistoffet. Overflate-epitelceller og andre slimhinneceller, f.eks. Paneths celler og celler av
submukøst bindevev, er negative. Muskelceller er også negative, med unntak av noen få positive celler i glatt
muskulatur. Nyre, lever, bukspyttkjertel og hjerne er negative. Nyre, lever, bukspyttkjertel og hjerne er negative (9).
Tilfeldig merking av vevskomponenter i karvegger og bukspyttkjertelstroma kan observeres i immuncytokjemi. I
tonsill viser kimcelle-B-celler i den mørke sonen moderat til sterk fargingsreaksjon, mens kimcelle-B-celler i den lyse
sonen viser svak til moderat fargingsreaksjon.
Abnormalt vev: I en studie av 123 bløtdelssarkomer, ble Ki-67 påvist med det høyeste uttrykket i ondartede fibrøse
histiocytomer og det laveste i liposarkomer med MIB-1-antistoffet. Antistoffet merket også Ki-67-antigen i 221
prostatakarsinomer (2) og 919 brystkarsinomer (3). Membran/cytoplasmisk farging ble rapportert i en studie av 322
invasive duktale brystkarsinomer og membrant/cytoplastisk Ki-67 ble funnet assosiert med tumorer av 3. grad,
ER-negativitet og HER2-amplifikasjon (10).
(117680-005)
Dako Denmark A/S
IR626/NO/KIA/2011.09.20 p. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Referanser
1.
Huuhtanen RL, Blomqvist CP, Wiklund TA, Böhling TO, Virolainen MJ, Tukiainen EJ, et al. Comparison of the
Ki-67 score and S-phase fraction as prognostic variables in soft-tissue sarcoma. Br J Cancer 1999; 79:945–51.
2.
Borre M, Bentzen SM, Nerstrøm B, Overgaard J. Tumor cell proliferation and survival in patients with prostate
cancer followed expectantly. J Urol 1998; 159:1609–14.
3.
Seshadri R, Leong AS-Y, McCaul K, Firgaira FA, Setlur V, Horsfall DJ. Relationship between p53 gene
abnormalities and other tumour characteristics in breast-cancer prognosis [published erratum appears in Int J
Cancer 1996;69:354]. Int J Cancer 1996; 69:135–41.
4.
Gerdes J, Lemke H, Baisch H, Wacker H-H, Schwab U, Stein H. Cell cycle analysis of a cell proliferationassociated human nuclear antigen defined by the monoclonal antibody Ki-67. J Immunol 1984;133:1710–5.
5.
Gerdes J, Li L, Schlueter C, Duchrow M, Wohlenberg C, Gerlach C, et al. Immunobiochemical and molecular
biologic characterization of the cell proliferation-associated nuclear antigen that is defined by monoclonal
antibody Ki-67. Am J Pathol 1991; 138:867–73.
6.
Scholzen T, Gerdes J. The Ki-67 protein: from the known and the unknown [review]. J Cell Physiol 2000;
182:311–22.
7.
Key G, Kubbutat MH, Gerdes J. Assessment of cell proliferation by means of an enzyme-linked immunosorbent
assay based on the detection of the Ki-67 protein. J Immunol Methods 1994; 177:113–7.
8.
Key G, Becker MHG, Baron B, Duchrow M, Schlüter C, Flad H-D, et al. New Ki-67-equivalent murine
monoclonal antibodies (MIB 1–3) generated against bacterially expressed parts of the Ki-67 cDNA containing
three 62 base pair repetitive elements encoding for the Ki-67 epitope. Lab Invest 1993; 68:629–36.
9.
Cattoretti G, Becker MHG, Key G, Duchrow M, Schlüter C, Galle J, et al. Monoclonal antibodies against
recombinant parts of the Ki-67 antigen (MIB 1 and MIB 3) detect proliferating cells in microwave-processed
formalin-fixed paraffin sections. J Pathol 1992; 168:357–63.
10. Faratian D, Munro A, Twelves C,Bartlett JMS. Membranous and cytoplasmic staining of Ki67 is associated with
HER2 and ER status in invasive breast carcinoma.Histopathology 2009:54:254-257.
S y m b o lfo rk la ring
K a ta lo gn u m m e r
T e m p e ra tu rb e g re n snin g
B ru ke s fø r
In vitro -dia g n o stisk m e d isin sk
u tstyr
In n e h old er n o k til <N > te ster
P ro d u se n t
S e b ru ksa n visnin ge r
P a rtikod e
(117680-005)
Dako Denmark A/S
IR626/NO/KIA/2011.09.20 p. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17