FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Helicobacter Pylori
Ready-to-Use
(Link)
Kode IR523
Tiltenkt bruk
Til in vitro-diagnostisk bruk.
FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Helicobacter Pylori, Ready-to-Use, (Link), er beregnet for bruk i immunhistokjemi sammen med Autostainer Linkinstrumenter. Dette antistoffet er nyttig for å identifisere infeksjoner med H. pylori i magekatarr og magekreft (1–4). Den kliniske tolkningen av
farging eller mangel på farging må suppleres med morfologiske studier ved bruk av egnede kontroller og skal i sammenheng med pasientens
sykdomshistorikk og andre diagnostiske prøver evalueres av en kvalifisert patolog.
Sammendrag
og forklaring
H. pylori (tidligere kalt Campylobacter pylori) er en spiralformet mikroaerofil, gram-negativ stav med flageller med unipolar skjede. Det
forekommer i slimhinnen i gastrisk epitel. De fleste koloniserende bakteriene lever fritt i den gastriske slimhinnen, men en mindre del (~1 %) er
festet til gastriske epitelceller (5). Selv om H. pylori trolig er eksklusivt ekstracellulær, viser noen studier at en minimal fraksjon av bakterien
kan komme inn i epitele celler (2, 5). H. pylori forårsaker en av de vanligste patogene infeksjonene, som forekommer i ca. halvparten av alle
mennesker, med høyere forekomst av infeksjon i utviklingsland enn i industrilandene. Kolonisering skjer vanligvis tidlig i livet og er livslang,
med mindre det behandles med antibiotika. I et undersett av individer fører infeksjonen til alvorlige mage- og tolvfingertarmsykdommer så som
magesår eller gastrisk adenokarsinom (5). Det er tegn som tyder på en assosiasjon mellom H. pylori og kronisk atrofisk gastritt så vel som
magekreft fremgår av økologiske, kasuskontroll- og prospektive studier. I 1994 klassifisertte International Agency for Research on Cancer H.
pylori som kreftfremkallende hos mennesker (5, 6).
Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining (Generelle instruksjoner for immunhistokjemisk farging) eller
deteksjonssysteminstruksjoner for IHC-prosedyrer for: 1) Prosedyreprinsipp, 2) Materialer som er nødvendige, men som ikke følger med,
3) Oppbevaring, 4) Prøveklargjøring, 5) Fargingsprosedyre, 6) Kvalitetskontroll, 7) Feilsøking, 8) Tolkning av farging, 9) Generelle
begrensninger.
Reagens som følger med
Polyklonalt antistoff, klart til bruk, fra kanin levert i flytende form i buffer som inneholder stabiliserende protein og 0,1 mol/l NaCl, 0,015 mol/l
NaN3.
Immunogen
Antigenet for immunisering ble klargjort av varmebehandlede celler fra H. pylori-strengen, CH-20426 (1, 2).
Spesifisitet
Antistoffet merker varmestabile, somatiske antigener av hele H. pylori-organismen. Spor av kontaminerende antistoffer er fjernet ved
solidfaseabsorbering med humane plasmaproteiner.
I krysset immunelektroforese med bruk av 12,5 µl konsentrert antistoff per cm2 gel-område mot 2 µl humant plasma, vises ingen presipitat.
Farging: Coomassie Brilliant Blue.
Forholdsregler
1. For profesjonelle brukere.
2. Dette produktet inneholder natriumazid (NaN3), et svært giftig kjemikalie i ren form. Selv om det ikke klassifiseres som farlig ved
produktkonsentrasjonene, kan natriumazid reagere med bly- og kopperrør og danne svært eksplosive ansamlinger av metallazider. Ved
avhending må du skylle rikelig med vann for å forhindre ansamling av metallazid i rørene.
3. Riktige håndteringsprosedyrer bør brukes med dette produktet, i likhet med alle andre produkter som er utvunnet fra biologiske kilder.
4. Bruk egnet personlig verneutstyr for å unngå kontakt med øyne og hud.
5. Ubrukt løsning skal kasseres i henhold til lokale, nasjonale og europeiske forskrifter.
Oppbevaring
Lagres ved 2–8 °C. Skal ikke brukes etter utløpsdat oen som er stemplet på flasken. Hvis reagensene oppbevares under andre forhold enn de
som er spesifisert, må forholdene verifiseres av brukeren. Det er ingen tydelige tegn som indikerer at dette produktet er ustabilt. Derfor bør
positive og negative kontroller kjøres samtidig med pasientprøver. Hvis det observeres uventet farging som ikke kan forklares med variasjoner
i laboratorieprosedyrer og det er mistanke om at det er et problem med antistoffet, må du ta kontakt med Dakos tekniske avdeling.
Prøveklargjøring
inkludert materialer som
er nødvendige, men som
ikke følger med
Antistoffet kan brukes til å merke formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Vevsprøver skal skjæres i snitt på ca. 4 µm.
Forhåndsbehandling med varmeindusert epitopavmaskering (HIER) er påkrevet ved bruk av Dako PT Link (kode PT100/PT101). For detaljer,
se bruksanvisningen for PT Link. Optimale resultater oppnås ved å forbehandle vev med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (kode K8000/K8004).
Parafininnstøpte
vevssnitt:
Forhåndsbehandling
av
formalinfikserte,
parafininnstøpte
vevssnitt
anbefales
med
3-i-1
prøveklargjøringsprosedyren for Dako PT Link. Følg forhåndsbehandlingsprosedyren som står i pakningsvedlegget for EnVision FLEX Target
Retrieval Solution, High pH (50x) (kode K8000/K8004). Merknad: Etter fargingen må snittene dehydreres, klarnes og monteres med permanent
monteringsmedium.
Avparafiniserte snitt: Forhåndsbehandling av avparafiniserte formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt er anbefalt ved hjelp av Dako PT Link
samt at samme prosedyre som beskrevet for parafininnstøpte vevssnitt, følges. Etter farging skal objektglassene monteres med vandig eller
permanent monteringsmedium.
Vevssnittene bør ikke tørke ut under behandlingen eller under påfølgende immunhistokjemisk fargingsprosedyre. Det anbefales å bruke FLEX
IHC Microscope Slides (kode K8020) for bedre adhesjon av vevssnittene til objektglassene.
Fargingsprosedyre
inkludert materialer som
er nødvendige, men som
ikke følger med
Det anbefalte visualiseringssystemet er EnVision FLEX, High pH (Link) (kode K8000). Fargingstrinnene og inkubasjonstidene er
forhåndsprogrammert i Autostainer Link-programvaren. Det anbefalte anvendelsesvolumet av reagens er 1 x 200 µl eller 2 x 150 µl per
objektglass. Se riktig bruksanvisning for Autostainer Link for detaljerte instruksjoner om å laste objektglass og reagenser. Hvis protokollene
ikke er tilgjengelige på Autostainer-plattformen som brukes, må du ta kontakt med Dakos tekniske avdeling. Alle inkubasjonstrinnene skal
utføres ved romtemperatur.
Optimale forhold kan variere avhengig av prøven og klargjøringsmetode, og skal bestemmes av hvert enkelt laboratorium. Hvis den
evaluerende patologen ønsker en annen fargingsintensitet, går det an å justere inkubasjonstider og valg av EnVision FLEX/EnVision
FLEX+-visualiseringssystem. Du kan kontakte en Dako-applikasjonsspesialist / ekspert innen teknisk service for informasjon om å
programmere protokollen på nytt. Sjekk at den justerte protokollens ytelse fortsatt er gyldig ved å kontrollere at fargingsmønsteret er identisk
med fargingsmønsteret som er beskrevet under "Ytelsesegenskaper".
Kontrastfarging i hematoksylin anbefales med EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (kode K8008). Ikke-vandig, permanent monteringsmedium
anbefales.
Positive og negative kontroller skal alltid kjøres samtidig med samme protokoll som pasientprøvene. Det positive kontrollvevet skal inkludere
H. Pylori-infisert gastrisk slimhinne og cellene/strukturene skal vise reaksjonsmønstre som beskrevet for dette vevet, i delen
Ytelsesegenskaper i alle positive prøver. Anbefalt negativ kontrollreagens er FLEX Negative Control, Mouse, (Link) (kode IR750).
(118230-003)
Dako Denmark A/S
13 17
IR523/NO/SSM/2013.06 s.1/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Danmark | Tlf. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR-nr. 33 21
Tolkning av farging
H. pylori-infisert gastrisk epitel viser apikal farging av cellemembranene.
Merk deg følgende viktig informasjon om dette produktet:
Det kan dannes DAB-presipitater i vevet under IHC-fargeprosedyren, som i noen tilfeller kan ligne Helicobacter Pylori-farging. Det er derfor
svært viktig at det alltid brukes normalt vev som er kjent for å være negativt for Helicobacter Pylori for å identifisere uventede DAB-presipitater.
Hvis det oppstår farging i det negative kontrollvevet, skal resultatene til pasientprøvene anses som ugyldige.
Normalt vev: H. pylori-infisert gastrisk epitel merket av antistoffet viser apikal farging av cellemembranene og farging i gastrisk lumen over
epitel. I en studie av 40 gastriske biopsier var sensitiviteten for H. pylori 83,8 ± 11,1 % og spesifisiteten var 90,0 ± 0,0 % (4).
Ytelsesegenskaper
Abnormalt vev: I 52 pasienter med primær gastrisk lymfom ble det funnet en signifikant høyere tetthet av H. pylori i corpus mucosa av
pasienter med storcellelymfom (n=35) sammenlignet med pasienter med småcellelymfom (n=17) (3). Snitt av 19 Barretts spiserør-assosierte
adenokarsinomer var negative for forekomst av H. pylori. (7)
Referanser
1.
Anderson LP, Holck S, Povlsen CO. Campylobacter pylori detected by indirect immunohistochemical technique. Ampis 1988;96:559-64.
2.
Anderson LP, Holck S. Possible evidence of invasiveness of Helicobacter (Campylobacter) pylori. Eur J Clin Microbiol Infect Dis
1990;9:135-8.
3.
Jonkers D, Gisbertz I, de Bruine A, Bot F, Arends JW, Stobberingh E, et al. Helicobacter pylori and non- Helicobacter pylori bacterial flora
in gastric mucosal and tumor specimens of patients with primary gastric lymphoma. Eur J Clin Invest 1997;27:885-92.
4.
Jonkers D, Stobberingh E, de Bruine A, Arends JW, Stockbrügger R. Evaluation of Immunohistochemistry for the detection of
Helicobacter pylori in gastric mucosal biopsies. J Infect 1997;35:149-54.
5.
Björkholm B, Falk P, Engstrand L, Nyrén O. Helicobacter pylori: resurrection of the cancer link. J Intern Med 2003;253:102-19.
6.
Kelly JR, Duggan JM. Gastric cancer epidemiology and the risk factors. J Clin Epidemiol 2003;56:1-9.
7.
Quddus MR, Henley JD, Sulaiman RA, Palumbo TC, Gnepp DR. Helicobacter pylori infection and adenocarcinoma arising in Barrett’s
esophagus. Hum Pathol 1997;28:1007-9
Symbolfork la ring
Ka ta lo gnu mm er
Tempe raturbe gren sing
Bruk in nen
Me disi nsk utstyr til in vi tro -di agn ostikk
Inne hol der no k til <n> tester
Prod usen t
Se b ruksa nvisn inge n
Partiko de
(118230-003)
Dako Denmark A/S
13 17
IR523/NO/SSM/2013.06 s.2/2
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Danmark | Tlf. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR-nr. 33 21