Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70 Clone 2F3.2 Kod M7303 Avsedd användning För in vitro-diagnostik. Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70, Clone 2F3.2, är avsedd för användning i immunhistokemi. Antikroppen är till hjälp vid identifieringen av ZAP-70 i en underuppsättning av kroniska lymfocytiska leukemier (1, 2). Den kliniska tolkningen av all färgning eller frånvaro av färgning måste kompletteras med morfologiska studier med användning av lämpliga kontroller och skall utvärderas av en kvalificerad patolog inom ramen för patientens kliniska anamnes och andra diagnostiska tester. Licens för begränsad användning Denna produkt är endast för in vitro-diagnostik. Produkten innefattar teknologi som beskrivs i följande patentansökningar: Amerikansk patentansökan nr 10/309,548 och kanadensisk patentansökan nr 2,413,475. Sammanfattning och förklaring ZAP-70 (ζ-associerat protein på 70 kDa) är ett tyrosinkinas i Syk-familjen som spelar en avgörande roll för att utlösa signaleringskaskaden som svar på T-cellreceptorstimulering (1). Det uttrycks huvudsakligen i T-celler och naturliga mördar- (NK) celler (1–6), men är även detekterbart i mastceller och basofiler (2). ZAP-70 uttrycks även i normala pro-/pre-B-celler, men inte i normala mogna B-celler (4). ZAP-70 uttrycks i B-celler i en underuppsättning av kroniska lymfocytiska leukemier (CLL), som är nära besläktade med en omuterad konfiguration av den tunga kedjan i generna (1–3, 5, 6) i immunoglobulinets variabla region (IgVH). Den exakta funktionella signifikansen av ZAP-70 i denna underuppsättning av CLL B-celler är okänd. Vissa data indikerar att expression av ZAP-70 i CLL medger effektivare IgM-signalering i CLL B-celler, som skulle kunna förklara sjukdomsprogressionen (5). Vissa andra B-cellneoplasmer (1, 6) och T-cellneoplasmer uttrycker också ZAP-70 (6). Se Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning från Dako eller detektionssystemets instruktioner om IHCprocedurer för: (1) Procedurprincip, (2) Material som behövs men inte medföljer, (3) Förvaring, (4) Provberedning, (5) Färgningsprocedur, (6) Kvalitetskontroll, (7) Felsökning, (8) Tolkning av färgningen, (9) Allmänna begränsningar. Medföljande reagens Monoklonal musantikropp, levererad i flytande form som supernatant från cellodling (innehållande fetalt bovinserum), som dialyserats mot 0,05 mol/L Tris/HCl, pH 7,2 och som innehåller 0,015 mol/L natriumazid. Klon: 2F3.2. Isotyp: IgG2a, kappa. Koncentration av mus-IgG mg/L: Se etikett på flaskan. Immunogen Rekombinant ZAP-70-protein innefattande rester 1–254 och omfattande SH2-domänerna hos humant ZAP-70 (7). Specificitet I Western blotting av hela cellysater av mononukleära celler i normalt perifert blod, märker antikroppen ett band motsvarande ZAP-70 (2). I Western blotting av hela cellysater av CD19-positiva renade leukemiceller från patienter med Ig-omuterat och Ig-muterat CLL, märker antikroppen ett band motsvarande ZAP-70 i Ig-omuterade CLL-prover, medan inget band observeras i de Ig-muterade CLL-proverna (2). I Western blotting av cellysater av Jurkat-celler (T-lymfoblastisk cellinje), märker antikroppen ett band på 70 kDa protein (6). I Western blotting av cellysater av A431-celler (karcinomcellinje) observeras inget band (6). Försiktighetsåtgärder 1. För yrkesmässigt bruk. 2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte metallazider ansamlas i avloppet. 3. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering. 4. Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögonen och huden. 5. Oanvänd lösning måste kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter. Förvaring Förvaras vid 2–8 °C. Får inte användas efter det utgångsdatum som anges på flaskan. Användaren måste validera alla förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som tyder på instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller analyseras samtidigt med patientproverna. Kontakta Dako Teknisk Support om du observerar en oväntad färgning som inte kan förklaras med variationer i laboratorieprocedurerna och om du misstänker att det är något problem med antikroppen. Provberedning inklusive material som behövs men inte medföljer Paraffinsnitt: Antikroppen kan användas för märkning av paraffininbäddade vävnadssnitt som fixerats i formalin, inklusive vävnader som avkalkats i 85% myrsyra. Förbehandling av avparaffinerade vävnadssnitt med värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) krävs. Optimala resultat erhålls genom att förbehandla vävnaderna med HIER med användning av Dako Target Retrieval Solution, pH 9 (kod S2368/S2367). HIER: 15 minuter vid kokpunkten. Förvärm målåtervinningslösningen innan objektglasen nedsänkts i denna. Efter värmebehandling får kärlet med buffert och objektglas svalna i 20 minuter vid rumstemperatur. Skölj snitten varsamt med buffert eller avjoniserat vatten. Låt inte vävnadssnitten torka under behandlingen eller under den påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen rekommenderas användning av Dako Silanized Slides, kod S3003. Frysta snitt och cellutstryk: Antikroppen kan användas för märkning av acetonfixerade frysta snitt. (114716-001) M7303/SE/MNI/10.10.06 s. 1/2 Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Färgningsprocedur inklusive material som behövs men inte medföljer Spädning: Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70 (Code M7303), kan användas vid ett spädningsintervall mellan 1:25–1:50, när det appliceras på förbehandlade, formalinfixerade, paraffininbäddade snitt med användning av en 30 minuters inkubation i rumstemperatur. Vi rekommenderar att antikroppen späds i Dako Antibody Diluent (kod S0809). Detta är endast riktlinjer. Optimala förhållanden kan variera beroende på prov- och beredningsmetod och bör bestämmas av varje enskilt laboratorium. Det rekommenderade negativa kontrollreagenset är Dako Negative Control, Mouse IgG2a (kod X0943), spätt till samma mus-IgG-koncentration som den primära antikroppen. Om inte stabiliteten hos den spädda antikroppen och negativa kontrollen har fastställts i den egentliga färgningsproceduren, rekommenderas att dessa reagenser späds omedelbart före användning. Positiva och negativa kontroller bör köras samtidigt med patientprover. Visualisering: Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse (kod K4061), Dako EnVision™+ System/HRP, Rabbit/Mouse (kod K4065), Dako Real™ EnVision™ Detection Kit, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse (kod K5007), Dako EnVision™+ System/HRP, Mouse (kod K4004/K4005) rekommenderas. Följ de anvisningar som medföljer valt/valda visualiseringssystem. Automatisering: Antikroppen är väl lämpad för immunhistokemisk färgning med användning av automatiserade plattformar, t.ex. Dako Autostainer. Tolkning av färgningen Celler märkta av antikroppen visar både cytoplasmisk och nukleär färgning. Prestandaegenskaper Normala vävnader: Antikroppen märker T-celler i lymfvävnader såsom tonsill och tarmassocierad lymfvävnad, såväl som i andra testade vävnader, inklusive kolon, njure, lever, pankreas och prostata. Förutom T-celler märker antikroppen tydligt den epiteliala cellcytoplasman hos distala tubuli och uppsamlingsgångar i njure. Ibland märker antikroppen cytoplasmiska vesiklar i proximala tubuli i njure. Cytoplasman hos nervceller märks ibland i cerebellum och i de perifera nervcellerna i kolon. Cytoplasmiska vesiklar märks ibland också i hepatocyter och epitelialceller i gallgångar i lever samt i pankreatiska ö-celler och gångar. Onormala vävnader: I B-cellneoplasmer märkte antikroppen neoplastiska B-celler i 34/52 CLL, 9/29 Burkitts lymfom, 2/7 lymfoblastiska lymfom, 3/36 mantelcellymfom, 1/23 marginalzonslymfom och 1/45 diffusa storcelliga B-cellymfom. Inga B-celler märktes i 19 fall av follikulära lymfom och 14 fall av Hodgkins lymfom (1). I en annan studie märkte antikroppen neoplastiska B-celler i en underuppsättning av CLLs i både benmärgsbiopsier, aspiratsektioner och paraffincellpelletar i perifera mononukleära blodkroppar (2). I en studie av olika hematopoetiska maligna neoplasmer märkte antikroppen de neoplastiska T-cellerna i 45/62 T-cellmaligna neoplasmer men 0/41 av akut myelogen leukemi. Endast i 2/136 Hodgkins lymfom märkte antikroppen Hodgkins-celler. Av de B-cellmaligna neoplasmerna märkte antikroppen neoplastiska B-celler i 12/26 småcelliga lymfocytiska lymfom, 4/76 diffusa storcelliga B-cellymfom, 1/6 mantelcellymfom, 7/24 akuta lymfoblastiska leukemier/lymfoblastiska lymfom i B-celler. Antikroppen märkte inte neoplastiska B-celler i 22 fall av marginalzonslymfom, 40 fall av follikulära lymfom, 6 fall av Burkitts lymfom och inte heller 5 fall av lymfoplasmacytiska lymfom (6). I alla nämnda studier märkte antikroppen normala T-celler (1, 2, 6). Referenser 1. Carreras J, Villamor N, Colomo L, Moreno C, Cajal S, Crespo M, et al. Immunohistochemical analysis of ZAP70 expression in B-cell lymphoid neoplasms. J Pathol 2005;205;507-13. 2. Wiestner A, Rosenwald A, Barry TS, Wright G, Davis RE, Henrickson SE, et al. ZAP-70 expression identifies a chronic lymphocytic leukemia subtype with unmutated immunoglobulin genes, inferior clinical outcome, and distinct gene expression profile. Blood 2003;101:4944-51. 3. Keating MJ, Chiorazzi N, Messmer B, Damle RN, Allen SL, Rai KR, et al. Biology and Treatment of chronic lymphocytic leukemia [review]. Hematology 2003:153-75. 4. Crespo M, Villamor N, Giné E, Muntañola A, Colomer D, Marafioti T, et al. ZAP-70 expression in normal pro/pre B cells, mature B cells, and in B cell acute lymphoblastic leukemia. Clin. Cancer Res. 2006;12:726-34. 5. Chen L, Apgar J, Huynh L, Dicker F, Giago-McGahan T, Rassenti L, et al. ZAP-70 directly enhances IgM signaling in chronic lymphocytic leukemia. Blood 2005;105:2036-41. 6. Sup SJ, Domiati-Saad R, Kelley TW, Steinle R, Zhao X, Hsi ED. ZAP-70 expression in B-cell hematologic malignancy is not limited to CLL/SLL. Am J Clin Pathol 2004;122:582-7. 7. Iwashima M, Irving BA, van Oers NSC, Chan AC, Weiss A. Sequential interactions of the TCR with two distinct cytoplasmic tyrosine kinases. Science 1994;263:1136-9. Förklaring av symboler (114716-001) Katalognummer Temperaturbegränsning In vitro diagnostisk medicinsk apparat Batchkod Läs instruktionerna för användning Använd före Tillverkare M7303/SE/MNI/10.10.06 s. 2/2 Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
© Copyright 2024