Monoclonal Mouse
Anti-Human ZAP-70
Clone 2F3.2
Kod M7303
Avsedd användning
För in vitro-diagnostik.
Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70, Clone 2F3.2, är avsedd för användning i immunhistokemi. Antikroppen är
till hjälp vid identifieringen av ZAP-70 i en underuppsättning av kroniska lymfocytiska leukemier (1, 2). Den kliniska
tolkningen av all färgning eller frånvaro av färgning måste kompletteras med morfologiska studier med användning
av lämpliga kontroller och skall utvärderas av en kvalificerad patolog inom ramen för patientens kliniska anamnes
och andra diagnostiska tester.
Licens för begränsad
användning
Denna produkt är endast för in vitro-diagnostik. Produkten innefattar teknologi som beskrivs i följande
patentansökningar: Amerikansk patentansökan nr 10/309,548 och kanadensisk patentansökan nr 2,413,475.
Sammanfattning
och förklaring
ZAP-70 (ζ-associerat protein på 70 kDa) är ett tyrosinkinas i Syk-familjen som spelar en avgörande roll för att utlösa
signaleringskaskaden som svar på T-cellreceptorstimulering (1). Det uttrycks huvudsakligen i T-celler och naturliga
mördar- (NK) celler (1–6), men är även detekterbart i mastceller och basofiler (2). ZAP-70 uttrycks även i normala
pro-/pre-B-celler, men inte i normala mogna B-celler (4).
ZAP-70 uttrycks i B-celler i en underuppsättning av kroniska lymfocytiska leukemier (CLL), som är nära besläktade
med en omuterad konfiguration av den tunga kedjan i generna (1–3, 5, 6) i immunoglobulinets variabla region (IgVH).
Den exakta funktionella signifikansen av ZAP-70 i denna underuppsättning av CLL B-celler är okänd. Vissa data
indikerar att expression av ZAP-70 i CLL medger effektivare IgM-signalering i CLL B-celler, som skulle kunna
förklara sjukdomsprogressionen (5). Vissa andra B-cellneoplasmer (1, 6) och T-cellneoplasmer uttrycker också
ZAP-70 (6).
Se Allmänna instruktioner för immunhistokemisk färgning från Dako eller detektionssystemets instruktioner om IHCprocedurer för: (1) Procedurprincip, (2) Material som behövs men inte medföljer, (3) Förvaring, (4) Provberedning,
(5) Färgningsprocedur, (6) Kvalitetskontroll, (7) Felsökning, (8) Tolkning av färgningen, (9) Allmänna begränsningar.
Medföljande reagens
Monoklonal musantikropp, levererad i flytande form som supernatant från cellodling (innehållande fetalt bovinserum),
som dialyserats mot 0,05 mol/L Tris/HCl, pH 7,2 och som innehåller 0,015 mol/L natriumazid.
Klon: 2F3.2. Isotyp: IgG2a, kappa.
Koncentration av mus-IgG mg/L: Se etikett på flaskan.
Immunogen
Rekombinant ZAP-70-protein innefattande rester 1–254 och omfattande SH2-domänerna hos humant ZAP-70 (7).
Specificitet
I Western blotting av hela cellysater av mononukleära celler i normalt perifert blod, märker antikroppen ett band
motsvarande ZAP-70 (2). I Western blotting av hela cellysater av CD19-positiva renade leukemiceller från patienter
med Ig-omuterat och Ig-muterat CLL, märker antikroppen ett band motsvarande ZAP-70 i Ig-omuterade CLL-prover,
medan inget band observeras i de Ig-muterade CLL-proverna (2). I Western blotting av cellysater av Jurkat-celler
(T-lymfoblastisk cellinje), märker antikroppen ett band på 70 kDa protein (6). I Western blotting av cellysater av
A431-celler (karcinomcellinje) observeras inget band (6).
Försiktighetsåtgärder
1. För yrkesmässigt bruk.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form. I produktkoncentrationer
kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och kopparrör och bilda högexplosiva
metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte metallazider ansamlas i avloppet.
3. I likhet med alla produkter av biologiskt ursprung krävs en korrekt hantering.
4. Använd lämplig personlig skyddsutrustning för att undvika kontakt med ögonen och huden.
5. Oanvänd lösning måste kasseras i enlighet med lokala och statliga föreskrifter.
Förvaring
Förvaras vid 2–8 °C. Får inte användas efter det utgångsdatum som anges på flaskan. Användaren måste validera
alla förvaringsförhållanden som avviker från de som specificerats. Det finns inga tydliga tecken som tyder på
instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller analyseras samtidigt med patientproverna.
Kontakta Dako Teknisk Support om du observerar en oväntad färgning som inte kan förklaras med variationer i
laboratorieprocedurerna och om du misstänker att det är något problem med antikroppen.
Provberedning
inklusive material
som behövs men inte
medföljer
Paraffinsnitt:
Antikroppen kan användas för märkning av paraffininbäddade vävnadssnitt som fixerats i formalin, inklusive
vävnader som avkalkats i 85% myrsyra.
Förbehandling av avparaffinerade vävnadssnitt med värmeinducerad epitopåtervinning (HIER) krävs. Optimala
resultat erhålls genom att förbehandla vävnaderna med HIER med användning av Dako Target Retrieval Solution,
pH 9 (kod S2368/S2367).
HIER: 15 minuter vid kokpunkten. Förvärm målåtervinningslösningen innan objektglasen nedsänkts i denna.
Efter värmebehandling får kärlet med buffert och objektglas svalna i 20 minuter vid rumstemperatur. Skölj snitten
varsamt med buffert eller avjoniserat vatten. Låt inte vävnadssnitten torka under behandlingen eller under den
påföljande immunhistokemiska färgningsproceduren. För bättre vidhäftning av vävnadssnitten till objektglasen
rekommenderas användning av Dako Silanized Slides, kod S3003.
Frysta snitt och cellutstryk:
Antikroppen kan användas för märkning av acetonfixerade frysta snitt.
(114716-001)
M7303/SE/MNI/10.10.06 s. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Färgningsprocedur
inklusive material
som behövs men inte
medföljer
Spädning: Monoclonal Mouse Anti-Human ZAP-70 (Code M7303), kan användas vid ett spädningsintervall mellan
1:25–1:50, när det appliceras på förbehandlade, formalinfixerade, paraffininbäddade snitt med användning av en
30 minuters inkubation i rumstemperatur. Vi rekommenderar att antikroppen späds i Dako Antibody Diluent (kod
S0809). Detta är endast riktlinjer. Optimala förhållanden kan variera beroende på prov- och beredningsmetod och
bör bestämmas av varje enskilt laboratorium. Det rekommenderade negativa kontrollreagenset är Dako Negative
Control, Mouse IgG2a (kod X0943), spätt till samma mus-IgG-koncentration som den primära antikroppen. Om inte
stabiliteten hos den spädda antikroppen och negativa kontrollen har fastställts i den egentliga färgningsproceduren,
rekommenderas att dessa reagenser späds omedelbart före användning. Positiva och negativa kontroller bör köras
samtidigt med patientprover.
Visualisering: Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse (kod K4061), Dako EnVision™+
System/HRP, Rabbit/Mouse (kod K4065), Dako Real™ EnVision™ Detection Kit, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse
(kod K5007), Dako EnVision™+ System/HRP, Mouse (kod K4004/K4005) rekommenderas. Följ de anvisningar som
medföljer valt/valda visualiseringssystem.
Automatisering: Antikroppen är väl lämpad för immunhistokemisk färgning med användning av automatiserade
plattformar, t.ex. Dako Autostainer.
Tolkning av
färgningen
Celler märkta av antikroppen visar både cytoplasmisk och nukleär färgning.
Prestandaegenskaper
Normala vävnader: Antikroppen märker T-celler i lymfvävnader såsom tonsill och tarmassocierad lymfvävnad, såväl
som i andra testade vävnader, inklusive kolon, njure, lever, pankreas och prostata.
Förutom T-celler märker antikroppen tydligt den epiteliala cellcytoplasman hos distala tubuli och uppsamlingsgångar
i njure. Ibland märker antikroppen cytoplasmiska vesiklar i proximala tubuli i njure. Cytoplasman hos nervceller
märks ibland i cerebellum och i de perifera nervcellerna i kolon. Cytoplasmiska vesiklar märks ibland också i
hepatocyter och epitelialceller i gallgångar i lever samt i pankreatiska ö-celler och gångar.
Onormala vävnader: I B-cellneoplasmer märkte antikroppen neoplastiska B-celler i 34/52 CLL, 9/29 Burkitts lymfom,
2/7 lymfoblastiska lymfom, 3/36 mantelcellymfom, 1/23 marginalzonslymfom och 1/45 diffusa storcelliga
B-cellymfom. Inga B-celler märktes i 19 fall av follikulära lymfom och 14 fall av Hodgkins lymfom (1). I en annan
studie märkte antikroppen neoplastiska B-celler i en underuppsättning av CLLs i både benmärgsbiopsier,
aspiratsektioner och paraffincellpelletar i perifera mononukleära blodkroppar (2). I en studie av olika hematopoetiska
maligna neoplasmer märkte antikroppen de neoplastiska T-cellerna i 45/62 T-cellmaligna neoplasmer men 0/41 av
akut myelogen leukemi. Endast i 2/136 Hodgkins lymfom märkte antikroppen Hodgkins-celler. Av de B-cellmaligna
neoplasmerna märkte antikroppen neoplastiska B-celler i 12/26 småcelliga lymfocytiska lymfom, 4/76 diffusa
storcelliga B-cellymfom, 1/6 mantelcellymfom, 7/24 akuta lymfoblastiska leukemier/lymfoblastiska lymfom i B-celler.
Antikroppen märkte inte neoplastiska B-celler i 22 fall av marginalzonslymfom, 40 fall av follikulära lymfom, 6 fall av
Burkitts lymfom och inte heller 5 fall av lymfoplasmacytiska lymfom (6). I alla nämnda studier märkte antikroppen
normala T-celler (1, 2, 6).
Referenser
1.
Carreras J, Villamor N, Colomo L, Moreno C, Cajal S, Crespo M, et al. Immunohistochemical analysis of ZAP70
expression in B-cell lymphoid neoplasms. J Pathol 2005;205;507-13.
2.
Wiestner A, Rosenwald A, Barry TS, Wright G, Davis RE, Henrickson SE, et al. ZAP-70 expression identifies a
chronic lymphocytic leukemia subtype with unmutated immunoglobulin genes, inferior clinical outcome, and
distinct gene expression profile. Blood 2003;101:4944-51.
3.
Keating MJ, Chiorazzi N, Messmer B, Damle RN, Allen SL, Rai KR, et al. Biology and Treatment of chronic
lymphocytic leukemia [review]. Hematology 2003:153-75.
4.
Crespo M, Villamor N, Giné E, Muntañola A, Colomer D, Marafioti T, et al. ZAP-70 expression in normal pro/pre
B cells, mature B cells, and in B cell acute lymphoblastic leukemia. Clin. Cancer Res. 2006;12:726-34.
5.
Chen L, Apgar J, Huynh L, Dicker F, Giago-McGahan T, Rassenti L, et al. ZAP-70 directly enhances IgM
signaling in chronic lymphocytic leukemia. Blood 2005;105:2036-41.
6.
Sup SJ, Domiati-Saad R, Kelley TW, Steinle R, Zhao X, Hsi ED. ZAP-70 expression in B-cell hematologic
malignancy is not limited to CLL/SLL. Am J Clin Pathol 2004;122:582-7.
7.
Iwashima M, Irving BA, van Oers NSC, Chan AC, Weiss A. Sequential interactions of the TCR with two distinct
cytoplasmic tyrosine kinases. Science 1994;263:1136-9.
Förklaring av symboler
(114716-001)
Katalognummer
Temperaturbegränsning
In vitro diagnostisk medicinsk
apparat
Batchkod
Läs instruktionerna för
användning
Använd före
Tillverkare
M7303/SE/MNI/10.10.06 s. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17