MultiMix™
Triple-Colour Reagent
Anti-Human MPO/FITC
Anti-Human CD79cy/RPE
Anti-Human CD3/APC
Kodnummer TC667
Avsedd användning
För in vitro diagnostik.
TC667 är avsedd för användning i flödescytometri. Reagensen är avsedd för identifiering av myeloperoxidas
(MPO) i granulocyter och i monocyter, CD79cy-positiva B-celler och CD3-positiva T-celler. MPO är ett
lysomalt enzym närvarande i neutrofila granulocyter och vid låga nivåer i monocyter. Expression av CD79 är till
stor del begränsad till celler av B-härkomst. CD3 är en pan T-cellantigen och en markör för normala och
neoplastiska T-celler. TC667 är användbar för identifieringen av intracellulärt MPO, CD79 och CD3.
Undersökning av ytexpression av CD79 och CD3 bör utföras separat. Tolkning av resultaten måste göras av
kvalificerad specialist inom ramen för patientens anamnes och andra diagnostiska tester.
Medföljande reagens
TC667 innefattar följande tre matchande fluorescerande antikroppar:
Monoclonal Mouse Anti-Human Myeloperoxidase, Clone MPO-7, konjugerat med fluoresceinisotiocyanatisomer
1 (FITC).
Monoclonal Mouse Anti-Human CD79cy, Clone HM57, konjugerad med R-fykoerytrin (RPE).
Monoclonal Mouse Anti-Human CD3, .Clone UCHT1, konjugerad med allofykocyanin (APC).
De tre konjugaterna i TC667 har framställts från renade, monoklonala musantikroppar av isotyp IgG1, kappa.
TC667 levereras i flytande form i buffert innehållande 1 % bovint serumalbumin (BSA) och 15 mmol/L NaN 3,
pH 7,2. Varje flaska innehåller 50 tester (20 µL konjugat för upp till 106 leukocyter från normalt, humant perifert
blod).
Specificitet
I flödescytometri märker anti-myeloperoxidas, MPO-7, starkt cytoplasman hos neutrofila granulocyter i perifert
blod. Monocyter är svagt positiva medan lymfocyter är icke-reaktiva. I benmärg märks celler av
granulocythärkomst. Anti-myeloperoxidas, MPO-7, märker även den humana promyelocytcellinjen HL-60,
medan andra myeloida och lymfoida cellinjer är konsekvent icke-reaktiva (1).
Anti-CD79cy, HM57, klustrades som anti-CD79 vid Fifth International Workshop on Human Leucocyte
Differentiation Antigens (Den femte internationella workshopen och konferensen om humana
leukocytdifferentieringsantigener) (2).
Anti-CD3, UCHT1 innefattades i First and Third International Workshops and Conferences on Human
Leucocyte Differentiation Antigens (Den första och tredje internationella workshopen och konferensen om
humana leukocytdifferentieringsantigener), och undersökningar på olika laboratorier bekräftade dess reaktivitet
med CD3 (3). Anti-CD3, UCHT1 reagerar med -kedjan hos CD3 (4).
Försiktighetsåtgärder
1. För professionella användare.
2. Denna produkt innehåller natriumazid (NaN3), en kemikalie som är mycket giftig i ren form.
I produktkoncentrationer kan natriumazid, trots att det inte klassificeras som farligt, reagera med bly- och
kopparrör och bilda högexplosiva metallazider. Skölj med stora mängder vatten vid kassering så att inte
metallazider ackumuleras i avloppet.
3. Liksom med alla produkter som kommer från biologiska källor måste korrekta procedurer användas vid
hanteringen.
Förvaring
Förvara i mörker vid 2–8 °C. Får ej användas efter det utgångsdatum som finns tryckt på flaskan. Användaren
måste validera alla förvaringsförhållanden som avviker från vad som specificerats. Det finns inga tydliga tecken
som indikerar instabilitet hos denna produkt. Därför bör positiva och negativa kontroller testas samtidigt med
patientprover. Kontakta Dako Technical Services om oväntad färgning observeras, som inte kan förklaras med
variationer i laboratorieprocedurerna och om det misstänks vara något problem med antikroppen.
Färgningsprocedur
1.
Överför 50 µL (upp till 106 celler) antikoagulerat (EDTA) helblod, benmärg eller mononukleära celler till ett
12 mm x 75 mm provrör av polystyren.
2.
Tillsätt 100 µL Dako IntraStain, Reagent A (Fixation), kodnummer K2311. Blanda försiktigt med en
vortexmixer för att tillförsäkra att cellerna är i suspension.
3.
Inkubera vid rumstemperatur i 15 minuter.
4.
Tillsätt 2 mL PBS (kodnummer S3024) och blanda försiktigt med en vortexmixer.
5.
Centrifugera vid 300 x g i 5 minuter och aspirera supernatanten men lämna kvar ca 50 µL vätska.
6.
Blanda noggrant med en vortexmixer för att tillförsäkra att cellerna är i suspension och tillsätt 100 µL
Dako IntraStain, Reagens B (permeabilisering), kodnummer K2311.
7.
Tillsätt 20 µL TC667 och blanda försiktigt med en vortexmixer för att tillförsäkra att cellerna är i
suspension. 20 µL är endast en riktlinje; den optimala volymen bör bestämmas av varje enskilt
laboratorium.
(110679-003)
TC667/SE/TJA/23.08.04 s. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
8.
Den rekommenderade negativa kontrollen för TC667 är Dako kodnummer: X0978, en FITC-, RPE- och
APC-konjugerad reagens av samma isotyp som TC667. Tillsätt 20 µL X0978 till provet och blanda
försiktigt med en vortexmixer. 20 µL är endast en riktlinje; den optimala volymen bör bestämmas av varje
enskilt laboratorium.
9.
Inkubera i 15 minuter vid rumstemperatur i mörker.
10.
Upprepa steg 4 och 5.
11.
Återsuspendera pelleten i en lämplig vätska för flödescytometri, t.ex. 0,3 mL PBS (kodnummer S3024).
12.
Analysera på en flödescytometer. Om proverna inte analyseras omedelbart, kan de förvaras i mörker vid
2–8 C i upp till 8 timmar.
Optimala förhållanden kan variera beroende på prov och beredningsmetod och bör bestämmas av varje enskilt
laboratorium. Det rekommenderas att man inkluderar ett lämpligt positivt och negativt kontrollprov i varje
körning för reagens- och beredningskontroll. Observera att fluorokromkonjugater är ljuskänsliga och prover bör
skyddas från ljus under färgningsproceduren och till analysen skall utföras.
Onormalt antal celler, som uttrycker målantigener, eller avvikande expressionsnivåer av antigener, kan
förväntas vid vissa sjukdomstillstånd. Detta kan resultera i ett förändrat färgningsmönster. Det är viktigt att
förstå det normala expressionsmönstret för antigener och deras förhållande till expression av andra relevanta
antigener, för att utföra lämplig analys.
Flerfärgade reagenser föredras framför enkelfärgade reagenser för den omfattande analysen av neoplastiska
leukemi- eller lymfomceller. Den korrekta användningen av färgersättning är speciellt viktigt vid flerfärgsanalys.
Kombinationen av FITC, RPE och APC är speciellt lätta att arbeta med eftersom den spektrala överlappningen
i emissionsspektrat hos dessa fluorokromer är minimal.
Referenser
1.
Nakase K, Sartor M, Bradstock K. Detection of myeloperoxidase by flow cytometry in acute leukemia.
Cytometry 1998;34:198-202.
2.
Engel P, Wagner N, Tedder TF. B23. CD79 workshop report. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W,
Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New
York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. Volume 1. p. 667-70.
3.
McMichael AJ, Gotch FM. T-cell antigens: new and previously defined clusters. In: McMichael AJ,
Beverley PCL, Cobbold S, Crumpton MJ, Gilks W, Gotch FM, et al., editors. Leucocyte typing III. White
cell differentiation antigens. Proceedings of the 3rd International Workshop and Conference; 1986 Sept
21-26; Oxford, England. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1987. p. 31-62.
4.
Tunnacliffe A, Olsson C, Traunecker A, Krissansen GW, Karjalainen K, de la Hera A. T3.2. The majority of
CD3 epitopes are conferred by the epsilon chain. In: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber EP, Schmidt
RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 4th
International Workshop and Conference; 1989 Feb 21-25; Vienna, Austria. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1989. p. 295-6.
Förklaring av symboler
(110679-003)
Katalognummer
Temperaturbegränsning
Använd före
In vitro diagnostisk medicinsk
apparat
Får ej förvaras i direkt solljus
(se avsnittet om Förvaring)
Tillverkare
Läs bruksanvisningen
Batchkod
TC667/SE/TJA/23.08.04 s. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17