Alfa-1-mikroglobulin
Beckman Coulter AU-system
Applikationsnotering
Riktlinje för bestämning av
alfa-1-mikroglobulin (protein HC) i urin
på Beckman Coulter AU-system
Allmän information
Följande alfa-1-mikroglobulinapplikation har etablerats på AU480 och är tillämplig på AU400-, AU600-, AU640-,
AU2700-, AU5400- och AU680-system med användning av samma instrumentinställningar.
Avsedd användning
Applikationsnoteringen är avsedd för kvantitativ bestämning av alfa-1-mikroglobulin i humant urinprovmaterial med
turbidimetri på Beckman Coulter AU-system (1, 2).
Mätintervall
Cirka 2,5–100,0 mg/L beroende på den specifika kalibratorsatsen.
Referensintervall
0–7 mg/L (3). Det rekommenderas att referensintervallet bestäms för den lokala populationen.
Instrumentinställningar
Instrumentprogrammering utförs enligt ”Instrumentinställningar” på sidan 3.
Reagenser
Antikropp
Reaktionsbuffert
Spädningsmedel
Kalibrator
Kontroller
Prover
Humanurin.
Stabila i 10 dagar vid 2–8 ºC.
Frysning av proverna före analys rekommenderas inte.
Kalibrator
Dako Human Urine Protein Calibrator, kod X0975, späds manuellt med användning av följande spädningsserier.
Prestandadata för Beckman Coulter AU480
Kod
Q0495
S2007
S2005
X0975
X0976
X0977
Standard
nr (i)
Std. (1)
Std. (2)
Std. (3)
Std. (4)
Std. (5)
Std. (6)
Namn
Dako Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Microglobulin
Dako Turbidimetry/Nephelometry Reaction Buffer 1
Dako Turbidimetry/Nephelometry Dilution Buffer 1
Dako Human Urine Protein Calibrator
Dako Human Urine Protein Low Control
Dako Human Urine Protein High Control
X0975
µL
[
[
[
[
[
[
10
20
50
100
280
350
NaCl
µL
]
]
]
]
]
]
[
[
[
[
[
[
390
380
310
200
140
0
]
]
]
]
]
]
f(i)
Konc.
faktor
C(i)
Koncentration
f(1)
f(2)
f(3)
f(4)
f(5)
f(6)
0,0250
0,0500
0,1389
0,3333
0,6667
1,0000
[0,0250 x C(kal)
[0,0500 x C(kal)
[0,1389 x C(kal)
[0,3333 x C(kal)
[0,6667 x C(kal)
[1,0000 x C(kal)
]
]
]
]
]
]
Koncentrationen av alfa-1-mikroglobulin i standarderna (C(i)) (mg/L) beräknas från alfa-1-mikroglobulinkoncentrationen (C(kal)) (mg/L) som anges för den specifika kalibratorsatsen (X0975) och den relativa
koncentrationsfaktorn (f(i)) genom multiplicering, dvs. C(i) = f(i) x C(kal) . Se specifikationsbladet för exakt C(kal)-värde
för aktuell sats.
Reaktionsbuffert (R1)
Reaktionsbufferten är bruksfärdig. Stabilitet på instrumentet är 30 dagar.
Antikropp (R2)
Antikroppen är bruksfärdig.
Om antikroppen i sällsynta fall verkar något grumlig rekommenderas filtrering genom ett 0,22 µm membranfilter.
Stabilitet vid 2–8 °C: se specifikationsblad och utgångsdatumet på etiketten.
Stabilitet på instrumentet är 30 dagar.
Kapacitet: 1 mL antikropp är ekvivalent med ungefär 18 kyvettavläsningar av standarder eller prover. Dödvolymen
för reagensflaskan ska läggas till när nödvändig reagensmängd beräknas.
Kalibreringsstabilitet
Det rekommenderas att omkalibrering utförs var 30:e dag, när reagenssatser ändras, när antikroppen filtreras eller
när kvalitetskontrollresultat ligger utanför det intervall som fastställts för det enskilda laboratoriet.
Felsökning
Om prestandan är oacceptabel, försök att kalibrera om. Kontrollera reagenser och förfarande. Om problemet
kvarstår ska du kontakta instrumenttillverkaren eller Dakos tekniska service.
(122565-001)
D09604SE_001_Q0495.01/PHC/2012.06 s. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Alfa-1-mikroglobulin
Beckman Coulter AU-system
Prestandadata
Sensitivitet
Ett OD-värde på cirka 0,25 på Beckman Coulter AU480 motsvarar en alfa-1-mikroglobulinkoncentration på
cirka 100 mg/L.
Detektionsgräns
Den uppskattade detektionsgränsen är 0,72 mg/L.
Precision
Precisionen uppskattades med användning av två kontroller och två urinprover genom ANOVA-analys
av 3 körningar vardera med en ny kalibrering och 6 bestämningar i varje körning.
A1M
Medelvärde
(mg/L)
Prover
Standardavvikelse
(mg/L)
Inom
körningar
Mellan
körningar
Totalt
Totalt CV (%)
n
Urine Low Control,
kod X0976
16,4
0,20
0,80
0,83
5,0
18
Urine High Control,
kod X0977
81,9
0,46
3,11
3,14
3,8
18
Lågt humanurinprov
11,2
0,22
0,47
0,52
4,6
18
Högt humanurinprov
48,5
0,31
1,76
1,79
3,7
18
Noggrannhet
Ett utbyte av alfa-1-mikroglobulin på 85–115 % kan förväntas för Dako Urine Protein Low Control, kod X0976, och
Dako Urine Protein High Control, kod X0977.
Linjäritet
Analysen är linjär inom intervallet 2,5–100 mg/L.
Säkerhetsintervall
Inget antigenöverskott finns för alfa-1-mikroglobulinkoncentrationer upp till 1 194 mg/L.
Interferens
Ingen korsreaktion med kända proteiner har observerats.
Ingen interferens påträffas vid koncentrationer upp till 5 g/L kreatinin, 50 g/L urinämne, 100 g/L glukos, 25 mmol/L
kalcium och 20 g/L albumin.
Prover innehållande hemoglobin och/eller bilirubin kan ge ett för högt värde av alfa-1-mikroglobulin i den lägre
delen av mätintervallet.
Metodjämförelse
Bestämningar av alfa-1-mikroglobulin enligt denna applikationsnotering jämfördes med andra kommersiellt
tillgängliga turbidimetriska analyser. Data kan erhållas på begäran.
Referenser
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination
of human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab
Med 2001; 39:1098-1109.
2. Olympus AU manual(s).
3. Tencer J, Thysell H, Grubb A. Analysis of proteinuria: reference limits for urine excretion of albumin, protein
HC, Immunoglobulin G, κ- and λ-immunoreactivity, orosomucoid and α1-antitrypsin. Scan J Clin Lab Invest
1996; 56:691-700.
(122565-001)
D09604SE_001_Q0495.01/PHC/2012.06 s. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Alfa-1-mikroglobulin
Beckman Coulter AU-system
Instrumentinställningar
Specific test parameters
Sample vol.
Pre-Diluent Rate
Rgt. Volume R1(R1-1)
R2(R2-1)
15.0 µL
1
∇
180 µL
50
µL
Common Rgt. Type
None
Wavelength
Pri 410 ∇nm
Method
END ∇
Reaction Slope
+
∇
Measuring Point 1 First
10
Measuring Point 2 First
Liniearity Limit
%
lag time Check
∇
Dilution
0
µl
Dilution
0
µl
Dilution
Name
Sec
Last
Last
20
None
OD limit
Min OD
-0.1000
Reagent OD limit
First
Low -0.1000
Last
Low -0.1000
Max OD
2.5000
High
High
2.5000
2.5000
High
B
B
100
0
0
µl
∇nm
27
Dynamic range Low
Correlation Factor A
Factor for Maker A
2.50
1
1
On-board stability
LIH Influence Check
Lipemia
Icterus
Hemolysis
30
Day
∇
∇
∇
∇
2
∇
0
Hour
+
∇
Yes
∇
Lot/Lot
∇
Calibration specific
Calibration Type:
6AB
<Calibration Parameters>
Calibrator
Point 1
*
∇
Point 2
*
∇
Point 3
*
∇
Point 4
*
∇
Point 5
*
∇
Point 6
*
∇
Point 7
∇
Point 8
∇
Point 9
∇
Point 10
∇
∇
Formula:
OD
Conc
**
**
**
**
**
**
Spädningsmedel – kod S2005
∇
Counts:
Low
High
-0.1000
2.5000
-0.1000
2.5000
-0.1000
2.5000
-0.1000
2.5000
-0.1000
2.5000
-0.1000
2.5000
Slope Check
Allowance Range Check
ο Reagent Blank
ο Calibration
Advanced Calibration
Operation
Interval (RB/ACAL)
<Point Cal. For
No. of Correction Points
Master Curve>
Calibrator
OD
Point-1
∇
Point-2
∇
MB Type Factor:
SPLINE
∇
Conc
Use Master Curve
OD Range
Low
High
1-Point Calibration Point
R1 – kod S2007
None
∇
∇
ο Lot Calibration
Stability
Rgt Blank
Calibration
30
30
0
0
Hour
Hour
ο with Conc-0
R2 – kod Q0495.
[*]
Definieras av kunden.
[**]
Koncentration av de 6 standarder som erhålls genom spädning av Dako Human Urine Protein Calibrator, kod X0975.
(122565-001)
Day
Day
D09604SE_001_Q0495.01/PHC/2012.06 s. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17