FICHE TECHNIQUE COMMENT REALISER UNE CCM ? PRINCIPE La chromatographie est une technique qui permet de séparer les constituants d’un mélange. La séparation se fait entre 2 phases: - une phase mobile liquide constituée par un solvant apolaire (c’est-à-dire non chargée) - une phase stationnaire solide formée par un gel de silice polaire (c’est-à-dire chargée). Ce gel est déposé en couche mince sur un support Les constituants du mélange seront séparés en fonction de leur interaction avec la phase stationnaire (phénomène d’adsorption). OPERATIONS PRELIMINAIRES  Activer la chromatoplaque 30 min à 100°C (déshydratation de la plaque et libération des groupements polaires du gel)  Saturer la cuve en vapeur de solvant pendant 20 min sous la hotte (pour avoir une composition homogène dans la cuve et éviter les effets de bord) PROCEDURE OPERATOIRE  Orienter la plaque en grattant le gel de silice dans un coin en haut  Tracer très légèrement la ligne de dépôt à 1,5 cm du bas de la plaque avec un crayon et une règle propre A 1,5 cm B X C D  Faire des repères légendés et équidistants au crayon, en plaçant l’essai au centre de la ligne NB : espacement entre les dépôts = largeur de la chromatoplaque / (nb de dépôts +1)  Déposer les étalons et le mélange à analyser avec un capillaire en verre ou un cure dent (3 dépôts superposés, taille inférieure à 3 mm)  Sécher chaque dépôt avec un thermoventilateur afin d’éviter la diffusion des taches  Introduire la chromatoplaque verticalement dans la cuve NB : S’assurer avant que le niveau de du solvant est inférieur à la ligne de dépôt Laisser migrer jusqu’à ce que le solvant arrive à environ 1 cm du haut de la chromatoplaque.  Sortir la chromatoplaque de la cuve et tracer immédiatement la ligne de front de migration au crayon à main levée  Sécher la chromatoplaque à l’étuve pendant quelques minutes  Plonger la chromatoplaque dans le révélateur puis la replacer dans l’étuve jusqu’à apparition des spots EXPLOITATION - - Entourer les spots proprement et marquer d’un point leur centre Calculer le rapport frontal (Rf) = Distance parcourue par le soluté (d) / Distance parcourue par le solvant (D) Comparer le(s) Rf du mélange à analyser avec les Rf des étalons (comparer également les couleurs)