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D02017_05_Insert_CK-MB_MU
Konelab™ / T Series
CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
THIS PACKAGE INSERT IS APPLICABLE FOR USE
OUTSIDE THE US. ANY REFERENCE TO THE KONELAB
SYSTEMS ALSO REFERS TO THE T SERIES.
INTENDED USE
For the in vitro quantitative determination of the B subunit of the isoenzyme CK-MB of
creatine kinase (ATP: Creatine N-Phosphotransferase (CK), EC 2.7.3.2) activity in human
serum or plasma on Konelab analyzers. All test results must be interpreted with regard to
the clinical context.
SUMMARY (1,2)
Creatine kinase (CK) is a dimer composed of two subunits, M (muscular) and B (brain).
Three different pairs of subunits can exist: BB (or CK-1), MB (or CK-2), and MM (or CK-3).
CK-MB is present to varying degrees, in heart muscle and also in skeletal muscle.
The major CK activity in normal serum is due to CK-MM. CK-BB is usually present in
serum at low concentration. CK-MB is present in low concentration in normal human
serum but is increased as a result of heart injury and rarely skeletal muscle damage.
Storage (4)
The sample can be stored for 2 days at 20…25 °C, for 7 days at 4…8 °C or for 4 weeks at
-20 °C in dark.
TEST PROCEDURE
Refer to the Reference Manual and Application Notes for an automated procedure on your
Konelab analyzer. Any application which has not been validated by Thermo Fisher
Scientific Oy cannot be performance guaranteed and therefore must be evaluated by the
user.
Materials provided
Reagents as described above.
Materials required but not provided
Control as indicated below.
Calibration
The response (dA/min) is converted to result units by a calculation factor.
Quality Control
Use quality control samples at least once a day and after each calibration and every time a
new bottle of reagent is used.
Available controls:
CK-MB Control, code: 981908
CK-MB Control High, code: 981255
The Control intervals and limits must be adapted to the individual laboratory requirements.
The results of the quality control sample should fall within the limits pre-set by the
laboratory.
PRINCIPLE OF THE PROCEDURE
A number of methods are available for the determination of CK-MB activity. This reagent
utilises an immunoinhibition method employing a polyclonal antibody to the CK-M
monomer. It inhibits completely the activity of CK-MM and one-half the activity of CK-MB.
The activity of the non inhibited CK-B monomer is then assayed.
Creatine kinase catalyses the reaction between creatine phosphate and ADP (adenosine5’-diphosphate) with formation of creatine and ATP (adenosine-5’-triphosphate). The latter
compound phosphorylates glucose to G-6-P (glucose-6-phosphate) in the presence of HK
(hexokinase). G-6-P is oxidised to 6-PG (gluconate-6-phosphate) and in the same time an
equimolar amount of NADP (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate) is reduced to
NADPH in a reaction catalysed by G-6P-DH (glucose-6-phosphate dehydrogenase). The
increase in absorbance at 340 nm, resulting from the formation of NADPH, is proportional
to the activity of creatine kinase in the sample. (3)
CALCULATION OF RESULTS
The results are calculated automatically by the Konelab analyzer as follows:
CK
Creatine phosphate + ADP ⎯→ Creatine + ATP
Conversion factor μkat/l = (U/l)/60
HK
Glucose + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
REAGENT INFORMATION
Reagent A: Substrate
Code: 981373
Code: 981776
Reagent B: Buffer
Code: 981373
Code: 981776
for 10 x 10 ml
for 8 x 3 ml
10 x 10 ml
8 x 3 ml
Concentrations
in the reconstituted reagent:
Buffer (Imidazole)
104 mmol/l
Creatine phosphate
31 mmol/l
Adenosine-5’-diphosphate (ADP)
2 mmol/l
Magnesium salt
10 mmol/l
D-glucose
21 mmol/l
Adenosine-5’-monophosphate (AMP)
5 mmol/l
Nicotinamide adenine dinucleotide
phosphate (NADP)
2 mmol/l
10 μmol/l
Di(adenosine-5’)pentaphosphate (AP5A)
N-acetyl-L-cysteine (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Hexokinase (HK)
> 3500 U/l
Glucose-6-phosphate dehydrogenase
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Anti human polyclonal CK-M antibody (from sheep or goat) sufficient to inhibit up to
2000 U/l of CK-MM at 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
Precautions
For in vitro diagnostic use only. Exercise the normal precautions required for handling all
laboratory reagents.
The reagent contains sodium azide as preservative. Do not swallow. Avoid contact with
skin and mucous membranes.
Preparation
Dissolve the contents of Reagent A with the entire contents of Reagent B. Cap vial and
mix.
Note: Check that there are no bubbles in the bottleneck or on the surface of the reagent
when you insert the reagent vials or vessels in the Konelab analyzer.
Storage and Stability
Reagents in unopened vials are stable at 2…8 °C until the expiration date printed on the
label.
Refer to the Application Notes of your Konelab analyzer for the on board stability of
reagents.
If the freshly reconstituted reagent has an absorbance at 340 nm higher than 0.700 when
measured against a blank of water, do not use.
If the reagent shows turbidity, do not use.
SPECIMEN COLLECTION
Sample Type
Use clear, unhemolyzed serum or heparin plasma. Avoid exposure of samples to strong
light.
Precautions
Human samples should be handled and disposed of as if they were potentially infectious.
Activity in U/l = dA/min x Factor
Factor =
where:
TV x 1000
⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
TV= Total reaction volume in ml
SV= Sample volume in ml
6.22= Extinction coefficient of NADPH at 340 nm
P= Cuvette pathlength = 1
Multiply CK-B activity (U/l) by 2 to obtain activity in terms of CK-MB (U/l).
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE (6, 7)
Because of the limited amount of CK-M antibody added in the reagent, samples with high
total CK values should be diluted so that the value of total CK is not over 2000 U/l. High
CK-BB or atypical CK-BB-macro isoenzymes may cause false high CK-MB results.
Interference
Criterion: Recovery within + 10% of initial values.
Conjugated bilirubin: No interference found up to 650 μmol/l (38.0 mg/dl).
Hemolysis: Do not use hemolyzed specimen.
Lipemia: Do not use lipemic specimen.
For other interfering substances, please refer to the reference 5.
EXPECTED VALUES (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
The quoted values should serve as a guide only. It is recommended that each laboratory
verify this range or derives a reference interval for the population that it serves.
MEASURING RANGE
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Extended measuring range after secondary dilution:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Detection limit
7 U/l (0.12 μkat/l)
The detection limit represents the lowest measurable concentration/activity that can be
distinguished from zero. It is calculated as the concentration of zero sample + 3 SD (within
run, n=24).
Imprecision
Within run
Between day
Total
SD
1.6
0.9
3.0
Mean
66 U/l
CV%
2.3
1.3
4.3
SD
3.0
4.1
6.6
Mean
143 U/l
CV%
2.2
3.0
4.7
Mean
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
A precision study was performed using Konelab 30 during 10 days, with the number of
measurements being n = 40.
Method comparison
A comparison between this CK-MB reagent (y) and a commercially available test based on
immunoinhibition of CK-M subunit (x) gave following results:
Linear regression (result unit U/l):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
The results obtained in individual laboratories may differ from the given performance data.
BIBLIOGRAPHY
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
4)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH,
Darmstadt, 1996.
5)
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
EN
Template: D01162_4
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6)
D02017_05_Insert_CK-MB_MU
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
7)
MANUFACTURER
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa
Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
www.thermo.com/konelab
Date of revision (yyyy-mm-dd)
2009-12-02
Changes from previous version
The line beside the text indicates changes.
Sicherheitsmaßnahmen
Nur zur In-vitro-Diagnostik. Befolgen Sie die üblichen Sicherheitsmaßnahmen beim
Umgang mit Laborreagenzien.
Das Reagenz enthält Natriumazid als Konservierungsmittel. Nicht schlucken. Kontakt mit
Haut und Schleimhäuten vermeiden.
Vorbereitung
Inhalt von Reagenz A mit dem vollständigen Inhalt von Reagenz B auflösen. Phiole
verschließen und durchmischen.
Hinweis: Achten Sie darauf, dass sich im Flaschenhals oder an der Reagenzoberfläche
keine Luftblasen befinden, wenn Sie die Reagenzien in das Konelab-Analysengerät
einsetzen.
LAGERUNG UND HALTBARKEIT
Reagenzien in ungeöffneten Gefäßen sind bei 2…8 °C bis zum auf dem Etikett
angegebenen Verfallsdatum haltbar.
Die Haltbarkeit der Reagenzien nach Einsetzen in das Konelab-Analysengerät ist in der
entsprechenden Arbeitsanleitung angegeben.
Reagenz nicht verwenden, wenn es bei 340 nm eine Extinktion von über 0.700 aufweist
(gegen eine Leermessung mit Wasser).
Reagenz ebenfalls nicht verwenden, wenn es Trübungen aufweist.
UNTERSUCHUNGSMATERIAL
Probentyp
Klares, nicht hämolysiertes Serum oder Heparinplasma verwenden. Probenmaterial vor
starkem Lichteinfall schützen.
CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
DIESE PACKUNGSBEILAGE IST FÜR DEN GEBRAUCH
AUSSERHALB DER USA VORGESEHEN. JEDER
VERWEIS AUF KONELAB-SYSTEME BEINHALTET
AUCH DIE T SERIES.
ANWENDUNGSBEREICH
Für den quantitativen In-Vitro-Aktivitätsnachweis der B-Subeinheit des Isoenzyms CK-MB
der Kreatinkinase (ATP: Kreatin-N-Phosphotransferase (CK), EC 2.7.3.2) in Humanserum
oder -plasma mit dem Konelab-Analysengerät. Alle Testergebnisse müssen mit Bezug
zum klinischen Zusammenhang interpretiert werden.
ZUSAMMENFASSUNG (1,2)
Die Kreatinkinase (CK) ist ein Dimer, das aus den zwei Untereinheiten M (Muskeln) und B
(Gehirn) besteht. Drei Kombinationen von Untereinheiten sind möglich: BB (CK-1), MB
(CK-2) oder MM (CK-3). CK-MB liegt in unterschiedlichen Mengen in der Herz- und auch
Skelettmuskulatur vor.
Der Großteil der Kreatinkinase-Aktivität in normalem Serum entfällt auf CK-MM. CK-BB
liegt im Serum normalerweise nur in geringen Konzentrationen vor. CK-MB ist im
normalen Humanserum nur in geringen Mengen vorhanden, bei Herzverletzungen und, in
seltenen Fällen, bei Verletzungen der Skelettmuskulatur, steigt der Spiegel.
TESTPRINZIP
Für die Bestimmung der CK-MB-Aktivität stehen verschiedene Verfahren zur Auswahl.
Dieses Reagenz basiert auf einer Immun-Inhibitionsreaktion, bei der ein polyklonaler
Antikörper gegen das CK-M-Monomer eingesetzt wird. Dieser hemmt die Aktivität von CKMM vollständig, die von CK-MB zur Hälfte. Daraufhin lässt sich die Aktivität des nicht
inhibierten CK-B bestimmen.
Die Kreatinkinase wirkt als Katalysator für die Reaktion zwischen Kreatinphosphat und
ADP (Adenosin-5’-diphosphat), bei der Kreatin und ATP (Adenosin-5’-Triphosphat)
entstehen. In Gegenwart von HK (Hexokinase) phosphoryliert ATP wiederum Glukose zu
G-6-P (Glukose-6-phosphat). G-6-P wird zu 6-PG (Glukonat-6-phosphat) oxidiert,
gleichzeitig wird eine äquimolare Menge NADP (Nikotinamidadenindinukleotidphosphat)
zu NADPH reduziert. Letztere Reaktion wird durch G-6P-DH (Glucose-6-phosphatdehydrogenase) katalysiert. Der Anstieg der Extinktion bei 340 nm infolge der NADPHBildung verläuft proportional zur Aktivität der Kreatinkinase im Probenmaterial. (3)
Aufbewahrung (4)
Die Probe kann 2 Tage lang bei 20…25 °C, 7 Tage lang bei 4…8 °C oder 4 Wochen lang
bei -20 °C im Dunkeln gelagert werden.
TESTDURCHFÜHRUNG
Angaben zur Automatisierung mit dem Konelab-Analysengerät dem Referenzhandbuch
und den Hinweisen zur Anwendung entnehmen. Bei Verwendung von Applikationen, die
nicht durch Thermo Fisher Scientific Oy validiert wurden, kann keine Garantie für die
angegebenen Leistungsdaten übernommen werden. Für die Validierung derartiger
Applikationen ist der Anwender daher selbst verantwortlich.
Lieferumfang
Reagenzien, wie oben beschrieben.
Erforderlich, jedoch nicht im Lieferumfang enthalten
Kontrollen wie nachstehend beschrieben
Kalibrierung
Die Reaktion (dE/min) wird durch einen Berechnungsfaktor in Ergebniseinheiten
umgerechnet.
Qualitätskontrolle
Mindestens einmal täglich sowie nach jeder Kalibrierung und bei jeder Verwendung einer
neuen Flasche Reagenz eine Qualitätskontrolle durchführen.
Lieferbare Kontrollen:
CK-MB Control, Bestellnr: 981908
CK-MB Control High, Bestellnr: 981255
Zeitabstände und Grenzwerte der Kontrollen sind den spezifischen Anforderungen des
Labors entsprechend zu wählen. Die Ergebnisse der Qualitätskontrollen sollten innerhalb
der vom Labor vorgegebenen Grenzwerte liegen.
BERECHNUNG DER ERGEBNISSE
Die Ergebnisse werden vom Konelab-Analysengerät automatisch wie folgt errechnet:
Aktivität in U/l = dE/min x Faktor
Faktor =
wobei:
GV × 1000
⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯
6.22 × PV × OW
GV = Gesamtes Reaktionsvolumen in ml
PV = Probenvolumen in ml
6.22 = Extinktionskoeffizient von NADPH bei 340 nm
OW = Optische Weglänge durch die Küvette = 1
CK
Kreatinphosphat + ADP ⎯→ Kreatin + ATP
Konversionsfaktor μkat/l = (U/l)/60
HK
Glukose + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
Die CK-B-Aktivität (U/l) multipliziert mit 2 ergibt die für CK-MB ausgedrückte Aktivität (U/l).
G-6P-DH
G-6-P + NADP ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
+
REAGENZDATEN
Reagenz A: Substrat
Bestellnr.: 981373
Bestellnr.: 981776
Reagenz B: Puffer
Bestellnr: 981373
Bestellnr: 981776
für 10 × 10 ml
für 8 × 3 ml
10×10 ml
8 × 3 ml
Konzentrationen
im rekonstituierten Reagenz:
Puffer (Imidazol)
104 mmol/l
Kreatinphosphat
31 mmol/l
Adenosin-5’-diphosphat (ADP)
2 mmol/l
Magnesiumsalz
10 mmol/l
D-Glukose
21 mmol/l
Adenosin-5’-monophosphat (AMP)
5 mmol/l
Nikotinamidadenindinukleotidphosphat (NADP)
2 mmol/l
Di(adenosin-5’)pentaphosphat (AP5A)
10 μmol/l
N-acetyl-L-cystein (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Hexokinase (HK)
> 3500 U/l
Glucose-6-phosphat-dehydrogenase
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Polyklonale Anti-Human-CK-M-Antikörper (von Schaf oder Ziege), ausreichend zur
Inhibition von bis zu 2000 U/l CK-MM bei 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
GRENZEN DES VERFAHRENS (6, 7)
Aufgrund der begrenzten Menge CK-M-Antikörper im Reagenz sind Proben mit hohen
Gesamtwerten für Kreatinkinase so zu verdünnen, dass der CK-Gesamtwert nicht über
2000 U/l liegt. Ein hoher CK-BB oder atypische CK-BB-Makroisoenzyme können falsch
hohe CK-MB-Werte ergeben.
Störfaktoren
Kriterium: Rückkehr auf +10 % des Ausgangswerts.
Konjugiertes Bilirubin: Keine Interferenzen bei bis zu 650 μmol/l (38.0 mg/dl).
Hämolyse: Kein hämolysiertes Untersuchungsmaterial verwenden.
Lipämie: Kein lipämisches Untersuchungsmaterial verwenden.
Siehe Literaturhinweis 5 für weitere Substanzen, die Störfaktoren darstellen können.
ERWARTETE WERTE (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Die angegebenen Werte gelten nur als Richtlinie. Es wird empfohlen, dass jedes Labor
diesen Bereich überprüft oder ein Referenzintervall für die betroffene Population ableitet.
MESSBEREICH
22-500 U/l (0.37-8.3 μkat/l)
Erweiterter Messbereich nach automatischer Verdünnung:
22-2500 U/l (0.37-41.7 μkat/l).
LEISTUNGSEIGENSCHAFTEN
Nachweisgrenze
7 U/l (0.12 μkat/l)
Die Nachweisgrenze stellt die unterste messbare Konzentration/Aktivität dar, die von null
unterschieden werden kann. Sie wird als Konzentration der Nullprobe + 3 SD (in der Serie,
n=24) berechnet.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
Konelab™ / T Serie
Sicherheitsmaßnahmen
Proben, die Humanserum enthalten, sind als potenziell infektiös zu betrachten und
dementsprechend zu behandeln und zu entsorgen.
Template: D01162_4
DE
Page 3
D02017_05_Insert_CK-MB_MU
Impräzision
In der Serie
Von Tag zu Tag
Gesamtwert
Mittelwert
66 U/l
%VK
2.3
1.3
4.3
SA
1.6
0.9
3.0
Mittelwert
143 U/l
%VK
2.2
3.0
4.7
SA
3.0
4.1
6.6
Mittelwert
264 U/l
SA
%VK
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Mit dem Konelab 30 wurde eine Präzisionskontrolle über 10 Tage mit n = 40 Messungen
durchgeführt
Vergleich der Methoden
Ein Vergleich zwischen dem vorliegenden CK-MB-Reagenz (y) und einem im Handel
erhältlichen Test, der ebenfalls auf der Immuninhibition der CK-M-Subeinheit basiert (x),
ergab folgende Resultate:
Lineare Regression (Ergebnisse in U/l):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Die Ergebnisse einzelner Laboratorien können von den angegebenen Leistungsdaten
abweichen.
LITERATURHINWEISE
1)
Burtis, C.A. und Ashwood, E. R. (Hrsg.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry,
5. Aufl., W. B. Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (Hrsg.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of
Clinical Laboratory Results, 1. Aufl., TH-Books Verlagsgesellschaft mbH,
Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W. und Waldenström, J., Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum
after Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280,
1979.
4)
Guder W.G., Narayanan S., Wisser H., Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH,
Darmstadt, 1996.
5)
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
6)
Wu, A.H.B. und Bowers, G.N. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
7)
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
HERSTELLER
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa
Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
www.thermo.com/konelab
Datum der Überarbeitung (JJJJ-MM-TT)
2009-12-02
Änderungen gegenüber der vorherigen Fassung
Die Linie neben dem Text weist auf Änderungen hin.
L’augmentation de l’absorbance à 340 nm résultant de la formation de NADPH est
proportionnelle à l’activité de la créatine kinase dans l’échantillon. (3)
CK
Créatine phosphate + ADP ⎯→ Créatine + ATP
HK
Glucose + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
INFORMATIONS SUR LE RÉACTIF
Réactif A : Substrat
Code : 981373
pour 10 x 10 ml
Code : 981776
pour 8 x 3 ml
Réactif B : Tampon
Code : 981373
10 x 10 ml
Code : 981776
8 x 3 ml
Concentrations
dans le réactif reconstitué :
Tampon (imidazole)
104 mmol/l
Créatine phosphate
31 mmol/l
Adénosine-5’-diphosphate (ADP)
2 mmol/l
Sel de magnésium
10 mmol/l
D-glucose
21 mmol/l
Adénosine-5’-monophosphate (AMP)
5 mmol/l
Nicotinamide adénine dinucléotide
phosphate (NADP)
2 mmol/l
10 µmol/l
Di(adénosine-5’)pentaphosphate (AP5A)
N-acétyl-L-cystéine (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Hexokinase (HK)
> 3500 U/l
Glucose-6-phosphate déshydrogénase
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Anticorps polyclonal anti-CK-M humaine (de mouton ou de chèvre)en quantité suffisante
pour inhiber jusqu’à 2000 U/l de CK-MM à 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
Précautions
Usage diagnostique in vitro uniquement. Respecter les précautions habituelles requises
lors de la manipulation de tout réactif de laboratoire.
Ce réactif contient de l’azide de sodium en tant que conservateur. Ne pas avaler. Éviter
tout contact avec la peau et les muqueuses.
Préparation
Dissoudre le contenu du flacon de réactif A avec la totalité du contenu du flacon de réactif
B. Boucher le flacon et mélanger.
Remarque : S’assurer de l’absence de bulles au niveau du goulot du flacon ou à la
surface du réactif lors de la mise en place des flacons ou récipients de réactifs dans
l’analyseur Konelab.
Conservation et stabilité
Les réactifs contenus dans les flacons scellés sont stables à 2…8 °C jusqu’à la date de
péremption figurant sur l’étiquette.
Se référer à la fiche d’application de l’analyseur Konelab en ce qui concerne la stabilité
des réactifs dans l’appareil.
Si le réactif fraîchement reconstitué présente une absorbance à 340 nm supérieure à
0.700 par rapport à un blanc d’eau, ne pas l’utiliser.
Si le réactif est trouble, ne pas l’utiliser.
PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS
Type d’échantillon
Utiliser du sérum clair, non hémolysé ou du plasma hépariné. Éviter l’exposition des
échantillons à la lumière vive.
CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
CETTE NOTICE EST VALABLE POUR UTILISATION EN
DEHORS DES ÉTATS-UNIS. TOUTE RÉFÉRENCE AUX
SYSTÈMES KONELAB FAIT ÉGALEMENT RÉFÉRENCE
À LA GAMME T.
UTILISATION
Pour la détermination quantitative in vitro de la sous-unité B de l’isoenzyme CK-MB de la
créatine kinase (ATP: créatine N-phosphotransférase (CK), EC 2.7.3.2) dans le sérum ou
le plasma humains au moyen des analyseurs Konelab. Tous les résultats obtenus doivent
être interprétés en tenant compte du contexte clinique.
RÉSUMÉ (1,2)
La créatine kinase (CK) est un dimère constitué de deux sous-unités, M (musculaire) et B
(cérébrale). On peut rencontrer trois paires de sous-unités différentes : BB (ou CK-1), MB
(ou CK-2) et MM (ou CK-3). La CK-MB est présente en quantités variables au niveau du
muscle cardiaque, ainsi que dans les muscles squelettiques.
La majeure partie de l’activité de la CK dans le sérum normal est due à la CK-MM. La CKBB est habituellement présente à faible concentration dans le sérum. La CK-MB est
présente à faible concentration dans le sérum humain normal, mais elle augmente suite à
des lésions cardiaques et, plus rarement, à des lésions des muscles squelettiques.
PRINCIPE DE LA PROCÉDURE
Il existe un certain nombre de méthodes pour la détermination de l’activité de la CK-MB.
Ce réactif utilise une méthode d’immuno-inhibition basée sur un anticorps polyclonal dirigé
contre le monomère CK-M. Il inhibe totalement l’activité de la CK-MM et à moitié l’activité
de la CK-MB. On dose ensuite l’activité du monomère CK-B non inhibé.
La créatine kinase catalyse la réaction entre la créatine phosphate et l’ADP (adénosine-5’diphosphate) avec formation de créatine et d’ATP (adénosine-5’-triphosphate). Ce dernier
composé phosphoryle le glucose en G-6-P (glucose-6-phosphate) en présence
d’hexokinase (HK). Le G-6-P est oxydé en 6-PG (gluconate-6-phosphate) et, en même
temps, une quantité équimolaire de NADP (nicotinamide adénine dinucléotide phosphate)
est réduite en NADPH au cours d’une réaction catalysée par la G-6P-DH (glucose-6phosphate déshydrogénase).
Conservation (4)
Les échantillon peuvent être conservés pendant 2 jours à 20…25 °C, pendant 7 jours à
4…8 °C ou pendant 4 mois à -20 °C dans l’obscurité.
PROCÉDURE DE TEST
Se référer au manuel de référence et à la fiche d’application pour une description de la
procédure automatisée sur l’analyseur Konelab. Toute application n’ayant pas été validée
par Thermo Fisher Scientific Oy ne peut pas être garantie en ce qui concerne ses
performances et doit par conséquent être évaluée par l’utilisateur.
Matériel fourni
Réactifs comme décrits ci-dessus.
Matériel requis mais non fourni
Contrôle comme indiqué ci-dessous.
Calibrage
La réponse (dA/min) est convertie en unités de résultat à l’aide d’un facteur de calcul.
Contrôle de qualité
Utiliser les échantillons de contrôle de qualité au moins une fois par jour, après chaque
calibrage et chaque fois que l’on entame un nouveau flacon de réactif.
Contrôles disponibles :
CK-MB Control, code : 981908
CK-MB Control High, code : 981255
Les intervalles et les limites de contrôle doivent être adaptés aux besoins de chaque
laboratoire. Les résultats de l’échantillon de contrôle de qualité doivent se situer dans la
plage de tolérance prédéfinie par le laboratoire.
CALCUL DES RÉSULTATS
Les résultats sont calculés automatiquement par l’analyseur Konelab de la manière
suivante :
Activité en U/l = dA/min x facteur
VT x 1000
Facteur = ——————
6.22 x VE x L
où :
VT = Volume total de réaction en ml
VE = Volume d’échantillon en ml
6.22 = Coefficient d’extinction du NADPH à 340 nm
L = Longueur du trajet de la cuvette = 1
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Konelab™ / Gamme T
Précautions
Les échantillons d’origine humaine doivent être manipulés et éliminés comme des
matériaux potentiellement infectieux.
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FR
Page 4
D02017_05_Insert_CK-MB_MU
Facteur de conversion µkat/l = (U/l)/60
Multiplier l’activité de la CK-B (U/l) par 2 pour obtenir l’activité en termes de CK-MB (U/l).
LIMITES DE LA PROCÉDURE (6, 7)
En raison de la quantité limitée d’anticorps anti-CK-M ajoutés au réactif, les échantillons
ayant des valeurs de la CK totale élevées doivent être dilués de telle sorte que la valeur
de la CK totale ne dépasse pas 2000 U/l Des concentrations élevées de l’isoenzyme CKBB ou de l’isoenzyme atypique CK-BB-macro peuvent engendrer des résultats CK-MB
faussement élevés.
Interférence
Critère : Acceptation se situant dans les limites de ± 10 % des valeurs initiales.
Bilirubine conjuguée : Aucune interférence observée jusqu’à 650 µmol/l (38.0 mg/dl).
Hémolyse : Ne pas utiliser un échantillon hémolysé.
Lipémie : Ne pas utiliser un échantillon lipémique.
Pour les autres substances interférentes, se reporter à la référence 5.
VALEURS ATTENDUES (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Les valeurs citées sont données à titre indicatif uniquement. Il est recommandé que
chaque laboratoire établisse les valeurs physiologiques pour la population qui constitue sa
clientèle.
DOMAINE DE MESURE
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 µkat/l)
Domaine de mesure étendu après dilution secondaire :
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 µkat/l).
CARACTÉRISTIQUES EN MATIÈRE DE PERFORMANCES
Limite de détection
7 U/l (0.12 µkat/l)
La limite de détection représente la plus faible concentration/activité mesurable qu’il est
possible de distinguer de zéro. Elle est calculée comme la concentration d’un échantillon
zéro + 3 ET (répétabilité, n=24).
Imprécision
Répétabilité
Reproductibilité
Total
Moyenne
66 U/l
CV %
2.3
1.3
4.3
ET
1.6
0.9
3.0
Moyenne
143 U/l
CV %
2.2
3.0
4.7
ET
3.0
4.1
6.6
Moyenne
264 U/l
ET
CV %
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
L’étude de précision a eu lieu sur un analyseur Konelab 30 pendant 10 jours, le nombre de
mesures étant de n = 40.
Comparaison de méthodes
Une comparaison entre ce réactif CK-MB (y) et un test commercial basé sur l’immunoinhibition de la sous-unité CK-M (x) a fourni les résultats suivants :
Régression linéaire (unités du résultat : U/l) :
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
FABRICANT
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa
Tél. +358 9 329 100, télécopie +358 9 3291 0300
www.thermo.com/konelab
Date de révision (aaaa-mm-jj)
2009-12-02
Modifications par rapport à la version précédente
Le trait en regard du texte indique les modifications.
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BIBLIOGRAPHIE
1)
Burtis, CA and Ashwood, ER (eds), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, WB Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
4)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B, List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in : Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag
GmbH, Darmstadt, 1996.
5)
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
6)
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
7)
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
Les résultats obtenus dans chaque laboratoire peuvent différer des données de
performances indiquées.
D02017_05_Insert_CK-MB_MU
Konelab™ / Série T
CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
TENTO PŘÍBALOVÁ INFORMACE JE URČENA PRO
POUŽITÍ MIMO ÚZEMÍ USA. KAŽDÁ ZMÍNKA O
SYSTÉMECH KONELAB SE ROVNĚŽ TÝKÁ SÉRIE T.
URČENÉ POUŽITÍ
Pro kvantitativní stanovení aktivity podjednotky B isoenzymu CK-MB kreatinkinázy (ATP:
kreatin-N-fosfotransferáza (CK), EC 2.7.3.2) v lidském séru nebo plazmě in vitro na
analyzátorech Konelab. Všechny výsledky testů musejí být interpretovány s ohledem na
klinický kontext.
SHRNUTÍ (1,2)
Kreatinkináza (CK) je dimer složený ze dvou podjednotek, M (svalové) a B (mozkové).
Mohou existovat tři různé páry podjednotek: BB (neboli CK-1), MB (neboli CK-2) a MM
(neboli CK-3). CK-MB je v různém stupni přítomna v srdečním svalu a rovněž v kosterním
svalstvu.
Hlavní aktivita CK v normálním séru je způsobena CK-MM. Podjednotka CK-BB je obvykle
přítomna v séru v nízkých koncentracích. CK-MB je přítomna v nízkých koncentracích
v normálním lidském séru, avšak v důsledku poškození srdce a ve vzácných případech i
kosterních svalů dochází k jejímu zvýšení.
PRINCIP POSTUPU
Pro stanovení aktivity CK-MB existuje několik metod. Toto reagens používá imunoinhibiční
metodu, která využívá polyklonální protilátku monomeru CK-M. Tato protilátka zcela
inhibuje aktivitu CK-MM a polovinu aktivity CK-MB. Je tedy prováděn kvantitativní rozbor
aktivity neinhibovaného monomeru CK-B.
Kreatinkináza katalyzuje reakci mezi kreatinfosfátem a ADP (adenosin-5’-difosfát), při níž
se vytváří kreatin a ATP (adenosin-5’-trifosfát). Druhá z těchto sloučenin fosforyluje
glukózu na G-6-P (glukózo-6-fosfát) za přítomnosti HK (hexokinázy). G-6-P je oxidována
na 6-PG (glukonát-6-fosfát) a zároveň je ekvimolární množství NADP (nikotinamid adenin
dinukleotid fosfát) redukováno na NADPH v reakci katalyzované G-6P-DH (glukózo-6fosfát dehydrogenáza). Zvýšení absorbance při 340 nm, které je důsledkem vytvoření
NADPH, proporcionálně odpovídá aktivitě kreatinkinázy ve vzorku. (3)
CK
Kreatinfosfát + ADP ⎯⎯ Kreatin + ATP
HK
Glukóza + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
Uchovávání (4)
Vzorek lze uchovávat ve tmě po dobu 2 dnů při teplotě 20…25 °C, po dobu 7 dnů při
teplotě 4…8 °C nebo 4 týdny při teplotě -20 °C.
POSTUP TESTU
Údaje o automatizovaném postupu práce na analyzátoru Konelab naleznete v
Referenčním manuálu a aplikačních poznámkách. Nelze zaručit provedení žádné
aplikace, která nebyla validována společnosti Thermo Fisher Scientific Oy. Taková
aplikace proto musí být hodnocena uživatelem.
Dodané materiály
Reagencia uvedená výše.
Požadované, avšak nedodávané materiály
Kontrolní materiály uvedené dále.
Kalibrace
Reakce (dA/min) je přepočtena pomocí faktoru výpočtu na výsledné jednotky.
Řízení jakosti
Používejte vzorky pro řízení jakosti alespoň jednou denně, po každé kalibraci a vždy, když
použijete novou lahvičku reagens.
Dostupné kontrolní materiály:
CK-MB Control, kód: 981908
CK-MB Control High, kód: 981255
Intervaly a limity kontrolních materiálů musejí být upraveny podle požadavků jednotlivých
laboratoří. Výsledky vzorku pro řízení jakosti by měly vyhovovat limitním hodnotám
přednastaveným laboratoří.
VÝPOČET VÝSLEDKŮ
Výsledky jsou automaticky vypočteny analyzátorem Konelab, a to dále uvedeným
způsobem:
Aktivita v U/l = dA/min x Faktor
TV x 1 000
Faktor = ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
kde:
TV = Celkový reakční objem v ml
SV = Objem vzorku v ml
6.22 = Extinkční koeficient NADPH při 340 nm
P = Optická tloušťka kyvety = 1
Faktor přepočtu μkat/l = (U/l)/60
Vynásobte aktivitu CK-B (U/l) dvěma, získáte tak aktivitu v rámci CK-MB (U/l).
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
OMEZENÍ POSTUPU (6, 7)
Vzhledem k omezenému množství protilátky proti CK-M přidané do reagens, je nutné
vzorky s vysokými celkovými hodnotami CK ředit tak, aby hodnota celkového CK nebyla
vyšší než 2 000 U/l. Vysoké hodnoty CK-BB nebo atypické hodnoty isoenzymů CK-BB
makro mohou způsobit falešně vysoké výsledky CK-MB.
INFORMACE O REGENCIÍCH
Reagens A: Substrát
Kód: 981373
Kód: 981776
Reagens B: Pufr
Kód: 981373
Kód: 981776
Interference
Kritérium: Recovery v rozpětí + 10% počátečních hodnot.
Konjugovaný bilirubin: Až do 650 μmol/l (38.0 mg/dl) nebyla zjištěna interference.
Hemolýza: Nepoužívejte hemolyzovaný vzorek.
Lipémie: Nepoužívejte lipemický vzorek.
Údaje o dalších interferujících látkách naleznete v odkazu č. 5.
pro 10 x 10 ml
pro 8 x 3 ml
10 x 10 ml
8 x 3 ml
Koncentrace
Koncentrace v rekonstituovaném reagens:
Pufr (imidazol)
104 mmol/l
Kreatinfosfát
31 mmol/l
Adenosin-5’-difosfát (ADP)
2 mmol/l
Hořečnatá sůl
10 mmol/l
D-glukóza
21 mmol/l
Adenosin-5’-monofosfát (AMP)
5 mmol/l
Nikotinamid adenin dinukleotid
fosfát (NADP)
2 mmol/l
Di(adenosin-5’)penta-fosfát (AP5A)
10 μmol/l
N-acetyl-L-cystein (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Hexokináza (HK)
> 3500 U/l
Glukózo-6-fosfát dehydrogenáza
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Polyklonální protilátka proti lidské CK-M (z ovcí nebo koz) postačující pro inhibici až 2 000
U/l CK-MM při 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
Zvláštní opatření
Určeno pouze pro diagnostické použití in vitro. Používejte běžná bezpečnostní opatření
vyžadovaná pro manipulaci se všemi laboratorními reagencii.
Reagens obsahuje jako konzervační látku azid sodný. Nepolykejte. Zabraňte kontaktu
s kůží a sliznicemi.
Příprava
Obsah reagens A rozpusťte s celým obsahem reagens B. Lahvičku uzavřete a její obsah
promíchejte.
Poznámka: Překontrolujte, zda při vkládání lahviček nebo nádob s reagencii do
analyzátoru Konelab nejsou v hrdle lahvičky nebo na povrchu reagens bubliny.
Uchovávání a stabilita
Reagencia v neotevřených lahvičkách jsou stabilní při teplotě 2…8 °C, a to do data
ukončení použitelnosti vytištěného na štítku.
Údaje o stabilitě reagencií “on-board“ naleznete v aplikačních poznámkách svého
analyzátoru Konelab.
Pokud je absorbance čerstvě rekonstituovaného reagens při 340 nm vyšší než 0.700, je-li
měření provedeno proti vodě jako blanku, nepoužívejte je.
Jeví-li reagens známky turbidity, nepoužívejte je.
ODBĚR VZORKŮ
Typ vzorků
Používejte čisté, nehemolyzované sérum nebo heparinizovanou plazmu. Zabraňte
expozici vzorků silnému světlu.
Zvláštní opatření
S lidskými vzorky je nutné nakládat a likvidovat je, jako by byly potenciálně infekční.
PŘEDPOKLÁDANÉ HODNOTY (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Uvedené hodnoty by měly sloužit pouze jako vodítko. Doporučuje se, aby každá laboratoř
toto rozpětí ověřila nebo odvodila referenční interval pro populaci, jíž poskytuje služby.
ROZPĚTÍ MĚŘENÍ
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Rozšířené rozpětí měření po sekundárním ředění:
22 - 2 500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
CHARAKTERISTIKY ÚČINNOSTI
Limitní hodnota detekce
7 U/l (0.12 μkat/l)
Limitní hodnota detekce představuje nejnižší měřitelnou koncentraci/aktivitu, kterou lze
odlišit od nulové hodnoty. Vypočítává se jako koncentrace nulového vzorku + 3 SD (v
rámci série, n = 24).
Nepřesnost
V rámci série
Mezi dny
Celkem
Střední hodnota
66 U/l
SD
% CV
1.6
2.3
0.9
1.3
3.0
4.3
Střední hodnota
143 U/l
SD
% CV
3.0
2.2
4.1
3.0
6.6
4.7
Střední hodnota
264 U/l
SD
% CV
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Byla provedena studie přesnosti pomocí analyzátoru Konelab 30, která trvala 10 dní; počet
provedených měření byl n = 40.
Srovnání metod
Srovnání mezi tímto reagens pro stanovení CK-MB (y) a komerčně dostupným testem
založeným na imunoinhibici podjednotky CK-M (x) poskytlo dále uvedené výsledky:
Lineární regrese (jednotky výsledku U/l):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Výsledky získané v jednotlivých laboratořích se mohou od uvedených dat účinnosti lišit.
SEZNAM LITERATURY
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
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Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH,
Darmstadt, 1996.
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
VÝROBCE
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O.Box 100, FI-01621 Vantaa
Tel.: +358 9 329 100, Fax: +358 9 3291 0300
www.thermo.com/konelab
Datum revize (rrrr-mm-dd)
2009-12-02
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Konelab™ / Σειρά T
CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
ΑΥΤΟ ΤΟ ΕΝΘΕΤΟ ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑΣ ΠΡΟΤΙΘΕΤΑΙ ΓΙΑ
ΧΡΗΣΗ ΕΚΤΟΣ ΤΩΝ ΗΠΑ. ΟΠΟΙΑΔΗΠΟΤΕ ΑΝΑΦΟΡΑ
ΣΤΑ ΣΥΣΤΗΜΑΤΑ KONELAB ΑΝΑΦΕΡΕΤΑΙ ΕΠΙΣΗΣ
ΣΤΗ ΕΙΡΑ T.
ΠΡΟΟΡΙΖΌΜΕΝΗ ΧΡΉΣΗ
Για in vitro ποσοτικό προσδιορισμό της δραστικότητας της υπομονάδας B του ισοενζύμου
CK-MB κρεατινικής κινάσης (ATP: Κρεατίνη Ν-φωσφοτρανσφεράση (CK), EC 2.7.3.2) σε
ανθρώπινο ορό ή πλάσμα σε αναλυτές Konelab. Όλα τα αποτελέσματα της εξέτασης
πρέπει να ερμηνεύονται σε σχέση με το κλινικό περιβάλλον.
ΠΕΡΙΛΗΠΤΙΚΑ (1,2)
Η κρεατινική κινάση (CK) είναι ένα διμερές που αποτελείται από δύο υπομονάδες, Μ
(μυϊκή) και Β (εγκεφαλική). Μπορούν να υπάρχουν τρία διαφορετικά ζεύγη υπομονάδων:
BB (ή CK-1), MB (ή CK-2), και MM (ή CK-3). Το CK-MB συναντάται σε διαφορετικούς
βαθμούς, στον καρδιακό μυ και στον σκελετικό μυ.
Η βασική δραστηριότητα του CK σε φυσιολογικό ορό οφείλεται στο ζεύγος CK-MM. Το CKBB είναι συνήθως παρόν σε ορό σε χαμηλή συγκέντρωση. Το CK-MB είναι παρόν σε
χαμηλή συγκέντρωση σε φυσιολογικό ανθρώπινο ορό αλλά αυξάνεται ως αποτέλεσμα
καρδιακού τραυματισμού και σπανίως βλάβης του σκελετικού μυ.
ΑΡΧΗ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ
Υπάρχουν διαθέσιμες διάφορες μέθοδοι για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας CKMB. Το αντιδραστήριο αυτό χρησιμοποιεί την μέθοδο ανοσοαναστολής χρησιμοποιώντας
ένα πολυκλονικό αντίσωμα στο μονομερές CK-M. Αναστέλλει πλήρως τη δραστικότητα του
CK-MM και κατά το ήμισυ τη δραστικότητα του CK-MΒ. Η δραστικότητα του μονομερούς
που δεν έχει υποστεί αναστολή εξετάζεται στη συνέχεια.
Η κρεατινική κινάση δρα ως καταλύτης στην αντίδραση μεταξύ της φωσφοκρεατίνης και
του ADP (διφωσφορική-5’-αδενοσίνη) με τον σχηματισμό κρεατίνης και ΑΤΡ
(τριφωσφορικής-5’-αδενοσίνης). Το τελευταίο συστατικό φωσφορυλιώνει γλυκόζη σε G-6P (φωσφορική-6-γλυκόζη) παρουσία ΗΚ (εξοκινάσης). Το G-6-P οξειδώνεται σε 6-PG
(φωσφορικό-6-γλυκονικό) και ταυτοχρόνως ισομοριακό ποσό NADP (φωσφορική
νικοτιναμίδη αδενίνη δινουκλεοτίδιο) μειώνεται σε NADPH σε μία αντίδραση με καταλύτη
G-6P-DH (φωσφορική-6-γλυκόζη διυδρογενάση). Η αύξηση απορρόφησης στα 340 nm,
που προκύπτει από τον σχηματισμό NADPH, είναι αναλογική προς τη δραστικότητα της
κρεατινικής κινάσης στο δείγμα. (3)
CK
Φωσφοκρεατίνη + ADP ⎯→ Κρεατίνη + ATP
HK
Γλυκόζη + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ
Αντιδραστήριο Α: Υπόστρωμα
Κωδικός: 981373
για 10 x 10 ml
Κωδικός: 981776
για 8 x 3 ml
Αντιδραστήριο Β: Ρυθμιστικό διάλυμα
Κωδικός: 981373
10 x 10 ml
Κωδικός: 981776
8 x 3 ml
Προφυλάξεις
Τα ανθρώπινα δείγματα πρέπει να χρησιμοποιούνται και να απορρίπτονται σαν να ήταν
δυνητικά μολυσματικά.
Αποθήκευση (4)
Το δείγμα μπορεί να αποθηκευτεί για 2 ημέρες στους 20…25 °C, για 7 ημέρες στους
4…8 °C ή για 4 εβδομάδες στους -20 °C στο σκοτάδι.
ΔΙΑΔΙΚΑΣΊΑ ΕΞΈΤΑΣΗΣ
Ανατρέξτε στα φυλλάδια του Εγχειριδίου Αναφοράς και των Σημειώσεων Εφαρμογών για
μια αυτόματη διαδικασία του αναλυτή σας Konelab. Η καλή λειτουργία οποιασδήποτε
εφαρμογής που δεν έχει επικυρωθεί από την Thermo Fisher Scientific Oy, δεν μπορεί να
έχει εγγύηση απόδοσης και επομένως πρέπει να εκτιμηθεί από το χρήστη.
Παρεχόμενα Υλικά
Αντιδραστήρια όπως περιγράφονται παραπάνω.
Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται
Δείγμα ποιοτικού ελέγχου όπως περιγράφεται παρακάτω.
Βαθμονόμηση
Η απόκριση (dA/min) μετατρέπεται σε μονάδες αποτελέσματος από έναν παράγοντα
υπολογισμού.
Ποιοτικός Έλεγχος
Χρησιμοποιήστε δείγματα ποιοτικού ελέγχου τουλάχιστον μία φορά τη μέρα και μετά από
κάθε βαθμονόμηση και κάθε φορά που χρησιμοποιείται νέα φιάλη αντιδραστηρίων.
Διαθέσιμα δείγματα ποιοτικού ελέγχου:
CK-MB Control, κωδικός: 981908
CK-MB Control High, κωδικός: 981255
Τα όρια και τα διαστήματα του μάρτυρα πρέπει να προσαρμόζονται στις συγκεκριμένες
απαιτήσεις κάθε εργαστηρίου. Τα αποτελέσματα του δείγματος ποιοτικού ελέγχου πρέπει
να εμπίπτουν εντός των ορίων που έχει προκαθορίσει το εργαστήριο.
ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ
Τα αποτελέσματα υπολογίζονται αυτομάτως από τον αναλυτή Konelab ως εξής:
Ενεργότητα σε U/l = Παράγων x (dA/min)
TV x 1000
Παράγων = ⎯⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
όπου:
TV= Ολικός όγκος αντίδρασης σε ml
SV= Όγκος δείγματος σε ml
6.22= Συντελεστής εξασθένησης του NADPH στα 340 nm
P= Μήκος διαδρομής κυψελίδας = 1
Παράγων μετατροπής μkat/l = (U/l)/60
Διπλασιάστε τη δραστικότητα CK-B (U/l) για να λάβετε δραστικότητα με όρους CK-ΜB (U/l).
ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ (6, 7)
Λόγω της περιορισμένη ποσότητας αντισώματος CK-M που προστίθεται στο
αντιδραστήριο, δείγματα με υψηλές τιμές CK πρέπει να αραιώνονται ώστε η τιμή
συνολικού CK να μην υπερβαίνει τα 2000 U/l. Υψηλές τιμές CK-BB ή άτυπων μάκρο
ισοενζύμων CK-BB μπορεί να προκαλέσουν εσφαλμένα υψηλά αποτελέσματα CK-MB.
Παρεμβολές
Κριτήριο: Ανάκτηση εντός + 10% των αρχικών τιμών.
Συζευγμένη χολερυθρίνη: Δε βρέθηκε παρεμβολή έως 650 μmol/l (38.0 mg/dl).
Αιμόλυση: Μη χρησιμοποιείτε αιμολυμένα δείγματα.
Λιπαιμία: Μη χρησιμοποιείτε λιπαιμικό δείγμα.
Για άλλες παρεμβαλλόμενες ουσίες, παρακαλούμε να ανατρέξετε στην παραπομπή 5.
Συγκεντρώσεις
στο ανασυσταθέν αντιδραστήριο:
Ρυθμιστικό διάλυμα (ιμιδαζόλιο)
104 mmol/l
Φωσφοκρεατίνη
31 mmol/l
Διφωσφορική-5’-αδενοσίνη (ADP)
2 mmol/l
Άλας μαγνησίου
10 mmol/l
Δ-γλυκόζη
21 mmol/l
Μονοφωσφορική-5’-αδενοσίνη (AΜP)
5 mmol/l
Φωσφορική νικοτιναμίδη αδενίνη δινουκλεοτίδιο
(NADP)
2 mmol/l
Δι(αδενοσίνη-5’)πενταφωσφορική (AP5A)
10 μmol/l
N-ακετυλκυστίνη (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Εξοκινάδη (ΗΚ)
> 3500 U/l
Φωσφορική-6-γλυκόζη διυδρογενάση
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Αντιανθρώπινα πολυκλονικά αντισώματα CK-M (από πρόβατο ή γίδα) επαρκή για
αναστολή έως και 2000 U/l CK-MM στους 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
ΑΝΑΜΕΝΟΜΕΝΕΣ ΑΞΊΕΣ (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Οι προαναφερθείσες τιμές πρέπει να εκλαμβάνονται ως οδηγός μόνον. Συνιστάται το κάθε
εργαστήριο να διεξάγει την επαλήθευση αυτού του εύρους τιμών ή να παράγει ένα
διάστημα αναφοράς για τον πληθυσμό με τον οποίο ασχολείται.
Προφυλάξεις
Για in vitro διαγνωστική χρήση μόνο. Εφαρμόζετε τις κανονικές προφυλάξεις που
απαιτούνται για το χειρισμό όλων των εργαστηριακών αντιδραστηρίων.
Το αντιδραστήριο περιέχει νατραζίδιο ως συντηρητικό. Μην καταπίνετε. Αποφύγετε την
επαφή με το δέρμα και με τους βλεννογόνους.
Ανακρίβεια
Προετοιμασία
Διαλύστε το περιεχόμενο του αντιδραστηρίου Α με όλο το περιεχόμενο του αντιδραστηρίου
Β. Τοποθετήστε το πώμα στο φιαλίδιο και αναμίξτε.
Σημείωση: Ελέγξτε ότι δεν υπάρχουν φυσαλίδες στο λαιμό ή στην επιφάνεια του φιαλιδίου
αντιδραστηρίου όταν εισάγετε τα φιαλίδια ή τα δοχεία αντιδραστηρίων στην αναλυτή
Konelab.
Αποθήκευση και σταθερότητα
Αντιδραστήρια σε φιαλίδια που δεν έχουν ανοιχτεί παραμένουν σταθερά στους 2…8 °C
έως την ημερομηνία λήξης που αναφέρεται στην ετικέτα.
Ανατρέξτε στις Σημειώσεις Εφαρμογών του αναλυτή Konelab για την σταθερότητα των
αντιδραστηρίων όταν αυτά είναι φορτωμένα στο μηχάνημα.
Αν το μόλις ανασυσταθέν αντιδραστήριο έχει απορρόφηση στα 340 nm υψηλότερη από
0.700 όταν μετράται με τυφλό νερού, μην το χρησιμοποιείτε. Αν το αντιδραστήριο
παρουσιάζει θολότητα, μην το χρησιμοποιείτε.
ΔΕΙΓΜΑΤΟΛΗΨΙΑ
Τύπος δείγματος
Χρησιμοποιήστε διαυγή, μη αιμολυόμενο ορό ή πλάσμα ηπαρίνης. Αποφύγετε έκθεση των
δειγμάτων σε δυνατό φως.
ΕΎΡΟΣ ΜΈΤΡΗΣΗΣ
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Εκτεταμένο εύρος μέτρησης μετά από δευτερογενή αραίωση:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
ΧΑΡΑΚΤΗΡΙΣΤΙΚΑ ΕΚΤΕΛΕΣΗΣ
Όριο ανίχνευσης
7 U/l (0.12 μkat/l)
Το όριο ανίχνευσης αντιπροσωπεύει τη χαμηλότερη συγκέντρωση/ενεργότητα που μπορεί
να μετρηθεί και να διακριθεί από το μηδέν. Υπολογίζεται ως η συγκέντρωση του δείγματος
μηδέν + 3 SD (εντός της εκτέλεσης, n=24).
Εντός της εκτέλεσης
Μεταξύ ημερών
Συνολικό
Μέση τιμή
66 U/l
CV%
2.3
1.3
4.3
SD
1.6
0.9
3.0
Μέση τιμή
143 U/l
CV%
2.2
3.0
4.7
SD
3.0
4.1
6.6
Μέση τιμή
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Εκτελέστηκε μελέτη ακριβείας χρησιμοποιώντας τη συσκευή Konelab 30 για 10 ημέρες, με
αριθμό μετρήσεων n = 40.
Σύγκριση μεθόδου
Σύγκριση μεταξύ αυτού του αντιδραστηρίου CK-MB (y) και ενός εμπορικού τεστ που
βασίζεται σε ανοσοαναστολή της υπομονάδας CK-M (x) έδωσε τα παρακάτω
αποτελέσματα:
Γραμμική στατική παρεμβολή (μονάδα αποτελέσματος U/l):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται σε ξεχωριστά εργαστήρια πιθανόν να διαφέρουν από
τα δεδομένα απόδοσης.
ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΊΑ
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
EL
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3)
4)
5)
6)
7)
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Gerhardt, W and Waldenstrom, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH,
Darmstadt, 1996.
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
ΚΑΤΑΣΚΕΥΑΣΤΗΣ
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01620 Vantaa
Τηλ. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
www.thermo.com/konelab
Ημερομηνία αναθεώρησης (εεεε-μμ-ηη)
2009-12-02
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Αλλαγές από την προηγούμενη έκδοση
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D02017_05_Insert_CK-MB_MU
Konelab™ / Serie T
CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
ESTE PROSPECTO ES PARA USO FUERA DE EE. UU.
TODAS LAS REFERENCIAS A LOS SISTEMAS KONELAB
SE REFIEREN TAMBIÉN A LA SERIE T.
USO
Para la determinación cuantitativa in vitro de la actividad de la subunidad B de la isozima
CK-MB de creatina quinasa (ATP: Creatina N-fosfo-transferasa (CK), EC 2.7.3.2) en suero
o plasma humano en analizadores Konelab. Todos los resultados del test deben
interpretarse en función del contexto clínico.
RESUMEN (1,2)
La creatina quinasa (CK) es un compuesto dímero de dos subunidades, M (muscular) y B
(cerebral). Pueden existir tres pares de subunidades distintos: BB (o CK-1), MB (o CK-2),
y MM (o CK-3). CK-MB se presenta en grados diferentes, en la musculatura cardiaca y
también en la musculatura ósea.
La actividad principal de la CK en suero normal se debe a CK-MM. CK-BB se encuentra
por lo general en suero en baja concentración. CK-MB se encuentra en baja
concentración en suero humano normal pero aumenta como resultado de lesión cardiaca
y, en raras ocasiones, como resultado de daños en la musculatura ósea.
PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO
Existen una serie de métodos para determinar la actividad de CK-MB. El reactivo utiliza un
método de inmuno-inhibición que emplea un anticuerpo policlonal para el monómero CKM. De este modo, inhibe completamente la actividad de CK-MM y la mitad de la actividad
de CK-MB. La actividad del monómero CK-B sin inhibir es probada entonces.
La creatina quinasa cataliza la reacción entre el fosfato de creatina y ADP (5'-difosfato de
adenosina) con formación de creatina y ATP (5'-trifosfato de adenosina). El último
compuesto fosforila la glucosa en G-6-P (glucosa-6-fosfato) en presencia de HK
(hexokinasa). G-6-P se oxida a 6-PG (gluconato-6-fosfato) y, al mismo tiempo, una
cantidad equimolar de NADP (fosfato nicotinamida adenina dinucleótido) se reduce a
NADPH en una reacción catalizada por G-6P-DH (glucosa-6-fosfato dehidrogenasa). El
aumento de la absorbencia en 340 nm, producido por la formación de NADPH, es
proporcional a la actividad de la creatina quinasa en la muestra. (3)
CK
Fosfato de creatina + ADP ⎯→ Creatina + ATP
HK
Glucosa + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
INFORMACIÓN SOBRE LOS REACTIVOS
Reactivo A: Substrato
Código: 981373
para 10 x 10 ml
Código: 981776
para 8 x 3 ml
Reactivo B: Solución tampón
Código: 981373
10 x 10 ml
Código: 981776
8 x 3 ml
Concentraciones
en el reactivo reconstituido:
Tampón (Imidazol)
104 mmol/l
Fosfato de creatina
31 mmol/l
5'-difosfato de adenosina (ADP)
2 mmol/l
Sal de magnesio
10 mmol/l
D-glucosa
21 mmol/l
5'-monofosfato de adenosina (AMP)
5 mmol/l
Nicotinamida adenina dinucleótido
fosfato (NADP)
2 mmol/l
10 μmol/l
Di(adenosina-5')pentafosfato (AP5A)
N-acetil-L-cisteína (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Hexoquinasa (HK)
> 3500 U/l
Glucosa-6-fosfato dehidrogenasa
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Anticuerpo CK-M policlonal antihumano (de oveja o cabra) suficiente para inhibir hasta
2000 U/l de CK-MM a 37° C.
NaN3
< 0.1 %
Precauciones
Para uso exclusivo de diagnóstico in vitro. Tome las precauciones habituales necesarias
para el manejo de todos los reactivos de laboratorio.
El reactivo contiene azida sódica como agente de conservación. No lo ingiera. Evite el
contacto con piel y mucosas.
Preparación
Disuelva el contenido del Reactivo A en el contenido total del Reactivo B. Cierre el vial y
mézclelos.
Nota: Compruebe que no haya burbujas en el cuello de la botella ni en la superficie del
reactivo cuando inserte los viales o recipientes en el analizador Konelab.
Almacenamiento y estabilidad
Los reactivos en viales sin abrir son estables a 2…8 °C hasta la fecha de caducidad
impresa en la etiqueta.
Consulte las notas de aplicación de su analizador Konelab para determinar la estabilidad
de los reactivos abiertos y puestos en el analizador.
Si la absorbencia del reactivo reconstituido recién abierto es de 340 nm por encima de
0.700 en la nueva medición con muestra de agua, no lo utilice.
Si el reactivo presenta turbidez, no lo utilice.
RECOGIDA DE MUESTRAS
Tipo de muestra
Utilice suero o plasma de heparina limpio y sin hemolizar. No exponga las muestras a una
luz intensa.
Precauciones
Las muestras de origen humano deben manejarse y desecharse como si se tratase de
material potencialmente infeccioso.
Almacenamiento (4)
La muestra puede almacenarse durante 2 días a 20…25 °C, durante 7 días a 4…8 °C o
durante 4 semanas a -20 °C en la oscuridad.
PROCEDIMIENTO DEL TEST
Consulte el Manual de Referencia y las notas de aplicación para el procedimiento
automático en el analizador Konelab,. No puede garantizarse la fiabilidad de ninguna
aplicación no aprobada por Thermo Fisher Scientific Oy, por lo que deberá evaluarla el
usuario.
Materiales suministrados
Reactivos descritos anteriormente.
Material requerido pero no suministrado
Controles descritos a continuación.
Calibración
La respuesta (dA/min) se convierte en unidades de resultado con un factor de cálculo.
Control de calidad
Utilice muestras de control de calidad al menos una vez al día, después de cada
calibración y siempre que utilice un nuevo frasco de reactivos.
Controles disponibles:
CK-MB Control, código: 981908
CK-MB Control High, código: 981255
Los intervalos y límites de control deben adaptarse a los requisitos del laboratorio
concreto. Los resultados de la muestra de control de calidad deben estar dentro de los
límites establecidos previamente por el laboratorio.
CÁLCULO DE RESULTADOS
El analizador Konelab calcula los resultados automáticamente de la manera siguiente:
Actividad en U/I = dA/mín. x factor
Factor =
donde:
TV x 1000
⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
TV= Volumen total de reacción en ml
SV= Volumen de muestra en ml
6.22= Coeficiente de extinción de NADPH a 340 nm
P= Longitud de recorrido de cubeta = 1
Factor de conversión μkat/l = (U/l)/60
Multiplique la actividad CK-B (U/I) por 2 para obtener la actividad en términos de CK-MB
(U/I).
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO (6, 7)
Dada la cantidad limitada de anticuerpo CK-M añadida al reactivo, las muestras con
valores totales elevados de CK deberán disolverse para que el valor total de CK no
supere 2000 U/I. Las isozimas de CK-BB alto o CK-BB-macro atípico pueden dar
resultados elevados falsos de CK-MB.
Interferencias
Criterio: Recuperación entre + 10% de los valores iniciales.
Bilirrubina compuesta: Sin interferencias encontradas hasta 650 μmol/l (38.0 mg/dl).
Hemólisis: No utilice muestras hemolizadas.
Lipemia: No utilice muestras lipémicas.
Si desea información sobre la interferencia de otras sustancias, consulte la referencia 5.
VALORES PREVISTOS (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Los valores mencionados sirven sólo como guía. Se recomienda que cada laboratorio
verifique este rango o derive un intervalo de referencia para la población a la que atiende.
RANGO DE MEDIDA
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Rango de medida aumentado después de la segunda dilución:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
CARACTERÍSTICAS DEL RESULTADO
Límite de detección
7 U/l (0.12 μkat/l)
El límite de detección representa la concentración / actividad más baja mensurable que
puede distinguirse de cero. Se calcula como la concentración de muestra cero + 3 SD
(intraserie, n=24).
Imprecisión
Intraserie
Interdiario
Total
Media
66 U/l
SD
CV%
1.6
2.3
0.9
1.3
3.0
4.3
Media
143 U/l
SD
CV%
3.0
2.2
4.1
3.0
6.6
4.7
Media
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Se llevó a cabo un estudio de precisión con Konelab 30 durante 10 días, siendo el número
de medidas n = 40.
Comparación de métodos
Una comparación realizada entre este reactivo CK-MB (y) y un test disponible en el
mercado basado en la inmuno-inhibición de la subunidad de CK-M (x) dio los siguientes
resultados:
Regresión lineal (unidad U/I de resultado):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Los resultados obtenidos en cada laboratorio pueden diferir de los datos de los resultados
presentados.
BIBLIOGRAFÍA
1)
Burtis, CA y Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5ª
edición, W B Saunders Company, Filadelfia, 2001, págs. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1ª edición, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Alemania, 1998, pág. 73.
3)
Gerhardt, W y Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), págs. 1274-1280, 1979.
4)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Folleto sobre: Muestras: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag
GmbH, Darmstadt, 1996.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
ES
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5)
6)
7)
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5ª edición, AACC Press,
Washington, D.C., 3-239, 2000.
Wu, AHB y Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), págs. 2017-2021, 1982.
Comité de Enzimas de la Sociedad Escandinava de Qúimica Clínica y Fisiología
Clínica (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit Actvity in
Serum in Suspect Myogardial Infarction. Proyecto Químico Clínico Nórdico
(Nordchem) Helsinki, Finlandia 1981.
FABRICANTE
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa
Telf. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
www.thermo.com/konelab
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ET
KATSEPROTSEDUUR
Teave automaatse katseprotseduuri kasutamise kohta Konelab analüsaatoril on esitatud
juhendis ja tehnilistes märkustes. Thermo Fisher Scientific Oy poolt valideerimata
rakendusviiside sooritusnäitajaid tagada ei saa, seetõttu peab neid hindama lõppkasutaja.
Konelab™ / T seeria
CK-MB
Kaasasolevad materjalid
Eespool kirjeldatud reaktiivid.
10 x 10 ml
8 x 3 ml
PAKENDI INFOLEHT ON KOOSTATUD KASUTAMISEKS
VÄLJASPOOL USA-D. KONELAB SYSTEMSI VIITED
KEHTIVAD ÜHTLASI T SEERIA KOHTA.
SIHTOTSTARVE
Kreatiinkinaasi (ATP: kreatiin N-fosfotransferaasi (CK), EC 2.7.3.2) isoensüümi Balamüksuse aktiivsuse in vitro kvantitatiivseks määraimiseks inimese vereseerumis või plasmas Konelab analüsaatorite abil. Katsetulemuste tõlgendamisel tuleb alati arvesse
võtta kliinilist tausta.
KOKKUVÕTE (1,2)
Kreatiinkinaas (CK) on kahest alamüksusest, M (lihas) ja B (aju) koosned dimeer. Esineda
võib kolme erinevat alamüksuste paari: BB (või CK-1), MB (või CK-2) ja MM (või CK-3).
CK-MB-d esineb erineval määral südamelihases ja ka skeletilihases.
Normaalse seerumi peamine CK aktiivsus tuleneb CK-MM-st. CK-BB kontsentratsioon
seerumis on tavaliselt madal. CK-MB kontsentratsioon normaalses inimseerumis on madal
ning tõuseb südamekahjustuse ja harva ka skeletilihase kahjustuse korral.
MEETODI PÕHIMÕTE
CK-MB aktiivsuse mõõtmiseks on kasutusel mitmeid metoodikaid. Antud reaktiivi puhul
kasutatakse ära immuunsuse inhibitsiooni meetodit, mille käigus lisatakse CK-M
monomeerile polüklonaalne antikeha. See pärsib aktiivsuse CK-MM täielikult ja aktiivsuse
CK-MB poole võrra. Seejärel testitakse inhibeerimta CK-B monomeeri aktiivsust.
Kreatiinkinaas katalüüsib reaktsiooni kreatiinfosfaadi ja ADP (adenosiin-5’-difosfaat) vahel,
reaktsioonis tekivad kreatiin ja ATP (adenosiin-5’-trifosfaat). Viimane fosforüülib glükoosi HK
(heksokinaas) juuresolekul glükoos-6-fosfaadiks (G-6-P). G-6-P oksüdeerub 6-PG-ks (glükonaat6-fosfaat), samal ajal redutseerub ekvimolaarne NADP (nikotiinamiidadeniindinukleotiidfosfaat)
kogus G-6P-DH (glükoos-6-fosfaadi dehüdrogenaas) katalüüsitavas reaktsioonis NADPH-ks.
NADPH tekkest tingitud neelduvuse tõus lainepikkusel 340 nm on võrdeline kreatiinkinaasi
aktiivsusega proovis. (3)
CK
Kreatiinfosfaat + ADP ⎯→ Kreatiin + ATP
HK
Glükoos + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
10 x 10 ml kohta
8 x 3 ml kohta
Ettevalmistamine
Kogu A-reaktiiv lahustatakse kogu B-reaktiivis. Viaal suletakse korgiga ja segatakse.
Märkus: Enne reaktiiviviaalide või -nõude viimist Konelab analüsaatorisse tuleb
kontrollida, et pudelikaelas ega reaktiivi pinnal ei oleks mulle.
Säilitamine ja stabiilsus
Avamata viaalides püsivad reaktiivid temperatuuril 2…8 °C stabiilsena sildile trükitud
aegumistähtajani.
Teave laetud reaktiivide stabiilsuse kohta on esitatud Konelab analüsaatori tehnilistes
märkustes.
Kui värskelt valmis segatud reaktiivi neelduvus lainepikkusel 340 nm mõõdetuna vee
suhtes on suurem kui 0.700, on reaktiiv kasutuskõlbmatu.
Hägune reaktiiv ei sobi kasutamiseks.
PROOVIDE VÕTMINE
Proovi tüüp
Kasutada selget, hemolüüsumata seerumi- või plasmaproove. Proove tuleb hoida tugeva
valguse eest.
käsitsemisel
ja
TULEMUSTE ARVUTAMINE
Tulemused arvutab Konelab analüsaator automaatselt järgmisel viisil:
Aktiivsus (U/l) = dA/min x tegur
TV x 1000
⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
Tegur =
kus:
TV = reageerivate ainete kogumaht (ml)
SV = proovi maht (ml)
6.22 = NADH ekstinktsioonitegur 340 nm juures
P= küveti optiline teepikkus = 1
Teisendustegur μkat/l = (U/l)/60
Korrutad CK-B aktuuvsus (U/l) kahega, et saada CK-MB (U/l) kohane aktiivsus.
PROTSEDUURI KASUTAMIST PIIRAVAD TEGURID (6, 7)
Kuna reaktiivile lisatakse CK-M antikehasid piiratud hulgal, tuleb suure CK
koguväärtusega proove lahjendada nii, et CK koguväärtus ei ületaks 2000 U/l. Kõrge CKBB või ebatüüpiline CK-BB-makro isoensüümide tase võib põhjustada CK-MB valenäidu.
kõrvaldamisel
lugeda
võimalikeks
Säilitamine (4)
Proovi võib temperatuuril 20…25 °C säilitada kuni 2 päeva, temperatuuril 4…8 °C kuni 7
päeva ja pimedas, temperatuuril -20 °C kuni 4 nädalat.
MÕÕTEPIIRKOND
22 -500 U/l (0.37 -8.3 μkat/l)
Pikendatud mõõtepiirkond pärast sekundaarset lahjendust:
22 -2500 U/l (0.37 -41.7 μkat/l).
SOORITUSNÄITAJAD
Avastamispiir
7 U/l (0.12 μkat/l)
Avastamispiir on madalaim mõõdetav kontsentratsioon/aktiivsus, mis on nullist eristatav.
See leitakse kui nullproovi kontsentratsioon + 3 SD (katseseeriasisene, n=24).
Ebatäpsus
Katseseeriasisene
Eri päevad
Summarne
Keskmine
66 U/l
CV%
2.3
1.3
4.3
SD
1.6
0.9
3.0
Keskmine
143 U/l
CV%
2.2
3.0
4.7
SD
3.0
4.1
6.6
Keskmine
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Konelab 30 peal viidi 10 päeva jooksul läbi täpsusuuring, mõõtmiste arv uuringus oli
vähemalt n = 40.
Meetodite võrdlus
Võrdlevas uuringus käesoleva CK-MB reaktiivi (y) ja müügiloleva CK-M immuunsuse
inhibitsioonil põhineva analüüsi (x) vahel saadi järgmised tulemused:
Lineaarne regressioon (tulemuse ühik U/l):
y = 0.96 x -1
r = 0.993
n = 70
Individuaalsetes laborites saadavad tulemused võivad erineda esitatud sooritusnäitajatest.
KIRJANDUS
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
4)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH,
Darmstadt, 1996.
5)
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
Hoiatused
Kasutamiseks ainult in vitro diagnostikas. Kõigi laborireaktiivide käsitsemisel tuleb
rakendada tavapäraseid ettevaatusabinõusid.
Reaktiiv sisaldab säilitusainena naatriumasiidi. Mitte neelata. Vältida kokkupuudet naha ja
limaskestadega.
tuleb
Kvaliteedikontroll
Kvaliteedikontrolliproove kasutatakse vähemalt kord päevas, pärast iga kaliibrimist ja iga
kord, kui kasutatakse uut reaktiivipudelit.
Saadaval on järgmised kontrollproovid:
CK-MB Control, koodiga: 981908
CK-MB Control High, koodiga: 981255
Kontrollide vahemikud ja piirid tuleb kohaldada individuaalsete laborite vajadustele.
Kvaliteedi kontrollproovide abil saadud tulemused peavad jääma labori poolt eelnevalt
kehtestatud piiridesse.
OODATAVAD TULEMUSED (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Toodud väärtused on mõeldud suunitluslikena. Kõigil laboritel on soovitatav seda
vahemikku kontrollida, või tuletada ise etalonvahemik teenindatava populatsiooni seas.
10 x 10 ml
8 x 3 ml
Kontsentratsioonid
valmis segatud reaktiivis:
Puhver (Imidazole)
104 mmol/l
Kreatiinfosfaat
31 mmol/l
Adenosiin-5’-difosfaat (ADP)
2 mmol/l
Magneesiumisool
10 mmol/l
D-glükoos
21 mmol/l
Adenosiin-5’-monifosfaat (AMP)
5 mmol/l
Nikotiinamiidadeniindinukleotiid
fosfaat (NADP)
2 mmol/l
Di(adenosiin-5’)pentafosfaat (AP5A)
10 μmol/l
N-atsetüül-L-süsteiin (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Heksokinaas (HK)
> 3500 U/l
Glükoos-6-fosfaadi dehüdrogenaas
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Mitte-inipäritolu polüklonaalne CK-M antikeha (lammas või kits), millest piisab 2000 U/l
CK-MM inhibeerimiseks temperatuuril 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
Hoiatused
Inimpäritolu proovid
nakkusallikateks.
Kaliibrimine
Vastus (dA/min) teisendatakse ühikuliseks tulemuseks vastava arvutusteguri abil.
Segavad mõjud
Tingimus: Saagis algväärtuse suhtes ± 10%.
Konjugeeritud bilirubiin: Kontsentratsioonini kuni 650 μmol/l (38.0 mg/dl) segavat mõju ei
täheldatud.
Hemolüüs: Hemolüüsunud proove mitte kasutada.
Lipeemia: Lipeemilisi proove mitte kasutada.
Muid segavaid aineid on käsitletud viites 5.
G-6-P-DH
G-6-P + NADP ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
+
TEAVE REAKTIIVIDE KOHTA
A-reaktiiv: substraat
kood: 981373
kood: 981776
B-reaktiiv: Puhver
kood: 981373
kood: 981776
Vajalikud materjalid, mida kaasas pole
Allpool kirjeldatud kontroll.
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981373
981776
Page 12 D02017_05_Insert_CK-MB_MU
6)
7)
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
TOOTJA
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa
Tel. +358 9 329 100, Faks +358 9 3291 0300
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CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
EZ A TÁJÉKOZTATÓ AZ EGYESÜLT ÁLLAMOKON
KÍVÜLI HASZNÁLATRA VONATKOZIK. A KONELAB
RENDSZEREKRE TETT MINDEN UTALÁS A T
SOROZATRA IS VONATKOZIK.
RENDELTETÉS
Emberi szérum, illetve plazma kreatin-kináz (ATP: Kreatin N-foszfotranszferáz (CK), EC
2.7.3.2) CK-MB izoenzim B alegységének in vitro kvantitatív aktivitás-meghatározásához
Konelab analizátorokban. Minden vizsgálati eredményt a klinikai képpel összefüggésben
kell értékelni.
ÖSSZEGZÉS (1,2)
A kreatin-kináz (CK) egy két alegységből - M (“muscle”, izom) és B (“brain”, agy) - álló
dimer. Három különböző alegységpár létezik: BB (vagy CK-1), MB (vagy CK-2), és MM
(vagy CK-3). A CK-MB változó mennyiségben megtalálható a szívizomban és a
vázizomzatban.
A normál szérum fő CK-aktivitását a CK-MM adja. A CK-BB a szérumban általában
alacsony koncentrációban van jelen. A CK-MB a normál emberi szérumban alacsony
koncentrációban található meg, azonban szívkárosodás, valamint ritkán vázizomsérülés
eredményeképpen szintje megemelkedik.
AZ ELJÁRÁS ALAPELVE
Számos módszer létezik a CK-MB aktivitásának meghatározására. E reagens CK-M
monomer ellenes poliklonális antitesteket tartalmaz és az immun-inhibíciós módszert
alkalmazza. Teljesen gátolja a CK-MM, és félig a CK-MB aktivitását. Ezután mérhető a
nem gátolt CK-B monomer aktivitása.
A kreatin kináz a kreatin-foszfát és az ADP (adenozin-5’-difoszfát) közti reakciót katalizálja, mely
során kreatin és ATP (adenozin-5’-trifoszfát) keletkezik. Az utóbbi vegyület foszforilálja a glukózt
G-6-P-tá (glukóz-6-foszfát) HK (hexokináz) jelenlétében. A G-6-P 6-PG-tá (6-foszfoglukonát)
oxidálódik, miközben ekvimoláris mennyiségű NADP (nikotinamid-adenin-dinukleotid-foszfát)
NADPH-vá redukálódik a G-6P-DH (glukóz-6-foszfát dehidrogenáz) által katalizált reakcióban.
A 340 nm-en mért abszorbancia NADPH-képződés következtében létrejött növekedése arányos
a minta kreatin kináz aktivitásával. (3).
Tárolás (4)
A minta sötétben 20...25 °C-on 2 napig, 4…8 °C-on 7 napig, -20 °C-on pedig 4 hétig
tárolható.
A VIZSGÁLATI ELJÁRÁS
Automatizált eljárás kivitelezéséhez olvassa el a Konelab analizátorhoz tartozó Használati
kézikönyvet és Alkalmazási tudnivalókat. Nem garantálható semmilyen olyan alkalmazás
eredménye, amelyet a Thermo Fisher Scientific Oy nem hagyott jóvá, ezért ezeket a
felhasználónak kell értékelnie.
Szolgáltatott anyagok
A fent leírt reagensek.
Szükséges, de nem szolgáltatott anyagok
Az alább leírt kontrollok.
Kalibrálás
A válasz (dA/min) egy számítási tényező segítségével eredményegységekre átszámítva
jelenik meg.
Minőségellenőrzés
Használjon minőségellenőrző mintákat naponta legalább egyszer, minden kalibrálás után,
illetve minden új üveg reagens felnyitásakor.
Rendelkezésre álló kontrollminták:
CK-MB Control, kód: 981908
CK-MB Control High, kód: 981255
Az ellenőrzési intervallumokat és határértékeket az aktuális laboratóriumi
követelményekhez kell igazítani. A minőségellenőrző minta eredményeinek a laboratórium
által előre beállított határértékek közé kell esniük.
AZ EREDMÉNYEK KISZÁMÍTÁSA
Az eredményeket a Konelab analizátor automatikusan kiszámítja a következők szerint:
Aktivitás U/l = dA/min x faktor
Faktor =
ahol:
TV x 1000
⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
TV = teljes reagáló térfogat ml-ben
SV = minta térfogata ml-ben
6.22= a NADPH extinkciós együtthatója 340 nm-en
P= küvetta úthossza = 1
Átváltási faktor μkat/l = (U/l)/60
CK
Kreatin-foszfát + ADP ⎯→ Kreatin + ATP
A CK-MB (U/l) aktivitásának meghatározásához kettővel meg kell szorozni a CK-B
aktivitást (U/l).
HK
Glukóz + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
AZ ELJÁRÁS KORLÁTAI (6,7)
A reagensben lévő CK-M antitest korlátozott mennyisége miatt a magas össz-CK értékkel
bíró mintákat fel kell hígítani, hogy az össz-CK értéke 2000 U/l alatt legyen. Magas CK-BB
aktivitás, illetve atípusos CK-BB makro izoenzimek tévesen magas CK-MB eredményeket
okozhatnak.
REAGENSEK ADATAI
A reagens: Szubsztrát
Kód: 981373
Kód: 981776
B reagens: Puffer
Kód: 981373
Kód: 981776
Interferencia
Kritérium: Az értékek a kezdeti értékek ±10%-án belül maradnak.
Konjugált bilirubin: Nem észleltek interferenciát 650 μmol/l (38.0 mg/dl) értékig.
Hemolízis: Ne használjon hemolizált mintát.
Lipaemia: Ne használjon lipémiás mintát.
Egyéb interferenciát okozó anyagok tekintetében lásd az 5. referenciát.
10 x 10 ml-hez
8 x 3 ml-hez
10 x 10 ml
8 x 3 ml
Koncentrációk
az előkészített reagensben:
Puffer (imidazol)
104 mmol/l
Kreatin-foszfát
31 mmol/l
Adenozin-5’-difoszfát (ADP)
2 mmol/l
Magnéziumsó
10 mmol/l
D-glukóz
21 mmol/l
Adenozin-5’-monofoszfát (AMP)
5 mmol/l
Nikotinamid-adenin-dinukleotid
-foszfát (NADP)
2 mmol/l
Di-(adenozin-5’)-pentafoszfát (AP5A)
10 μmol/l
N-acetil-L-cisztein (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Hexokináz (HK)
> 3500 U/l
Glukóz-6-foszfát dehidrogenáz
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
37 °C hőmérsékleten 2000 U/l CK-MM gátlásához elegendő anti-humán poliklonális CK-M
antitest (birkából vagy kecskéből).
NaN3
< 0.1 %
VÁRHATÓ ÉRTÉKEK (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
A feltüntetett értékek kizárólag tájékoztató jellegűek. Minden laboratórium esetében
ajánlott a normál tartomány megerősítése, illetve a kiszolgált populációra jellemző
referenciaintervallum kialakítása.
MÉRÉSI TARTOMÁNY
22 -500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Kiterjesztett mérési tartomány másodlagos hígítás után:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l)
TELJESÍTMÉNY JELLEMZŐK
Detektálási határérték
7 U/l (0.12 μkat/l)
A detektálási határérték az a legkisebb mérhető koncentráció/aktivitás, amely még
megkülönböztethető a nullától. Kiszámítása a következő: nulla minta koncentrációja + 3
SD (mérés közben n=24).
Pontatlanság
Óvintézkedések
Kizárólag in vitro diagnosztikus használatra. Tartsa be a laboratóriumi reagensek
kezelésére vonatkozó szokásos előírásokat.
A reagens tartósítószerként nátrium-azidot tartalmaz. Ne nyelje le. Kerülje érintkezését a
bőrrel és a nyálkahártyákkal.
Előkészítés
Oldja fel az A reagens tartalmát a B reagens teljes tartalmával. Zárja le az üveget és
keverje össze.
Megjegyzés: Ellenőrizze, hogy nincs-e buborék az üveg nyakánál vagy a reagens
felszínén, amikor reagenst tartalmazó üvegeket, illetve edényeket tesz a Konelab
analizátorba.
Tárolás és stabilitás
Felbontatlan üvegben tárolt reagensek 2...8 °C között a címkén feltüntetett lejárati
időpontig stabilak.
A reagensek elemzőkészüléken belüli stabilitásához olvassa el a Konelab analizátorhoz
tartozó Alkalmazási tudnivalókat.
Amennyiben a frissen elkészített reagens 340 nm-en mért abszorbanciája vízzel szemben
mérve magasabb, mint 0.700, ne használja.
Amennyiben a reagens zavaros, ne használja.
MINTAVÉTEL
A minta típusa
Tiszta, hemolizálatlan szérumot vagy heparinos plazmát használjon. Tartsa távol a
mintákat erős fénytől.
Óvintézkedések
Az emberi mintákat úgy kell kezelni és kidobni, mintha azok fertőzőek lennének.
Mérés közben
Napok közt
Teljes
Középérték
66 U/l
CV%
2.3
1.3
4.3
SD
1.6
0.9
3.0
Középérték
143 U/l
CV%
2.2
3.0
4.7
SD
3.0
4.1
6.6
Középérték
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Pontossági mérést végeztek Konelab 30 használatával 10 napon keresztül, 40-es
mérésszámmal (n = 40).
Módszerösszehasonlítás
E CK-MB reagens (y) és egy forgalomban lévő, a CK-M alegység immun-inhibícióján alapuló
teszt (x) összehasonlítása során a következő eredmények születtek:
Lineáris regresszió (eredmény egység U/l):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Az egyes laboratóriumokban nyert értékek különbözhetnek a megadott teljesítmény
adatoktól.
BIBLIOGRÁFIA
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
Konelab™ / T sorozat
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HU
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4)
5)
6)
7)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH,
Darmstadt, 1996.
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
GYÁRTÓ
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Clinical Diagnostics Finland
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Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
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CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
IL PRESENTE INSERTO NELL’IMBALLO PUO’ ESSERE
APPLICATO AL DI FUORI DEGLI STATI UNITI. EVENTUALI
RIFERIMENTI A KONELAB SYSTEMS SI RIFERISCONO
ANCHE ALLA SERIE T.
USO CONSIGLIATO
Per la determinazione quantitativa in vitro della subunità B dell'isoenzima CK-MB della
creatinchinasi attività (ATP: Creatina N-Fosfotransferasi (CK), EC 2.7.3.2) nel siero o nel
plasma umani con gli analizzatori Konelab. I risultati del test devono essere sempre
interpretati in riferimento al contesto clinico specifico.
SOMMARIO (1,2)
La creatinchinasi (CK) è un enzima dimerico composto da due subunità: M (muscolare) e
B (cerebrale). Possono esistere tre diverse coppie di subunità: BB (o CK-1), MB (o CK-2)
e MM (o CK-3). La CK-MB è presente in proporzioni variabili nel muscolo cardiaco e
anche nei muscoli scheletrici.
La maggiore CK attività nel siero in condizioni di normalità è dovuta alla CK-MM. La CKBB di solito è presente nel siero in basse concentrazioni. La CK-MB è presente in basse
concentrazioni nel siero umano in condizioni di normalità, ma viene aumentata come
risultato di una lesione a livello cardiaco e, raramente, di un danno a livello del muscolo
scheletrico.
PRINCIPIO DELLA PROCEDURA
Sono disponibili numerosi metodi per determinare la CK-MB attività. Questo reagente
utilizza un metodo di immunoinibizione, il quale fa uso di un anticorpo policlonale per il
monomero della CK-M. Esso inibisce completamente l’attività della CK-MM e metà
dell’attività della CK-MB. A questo punto viene valutata l’attività del monomero CK-B non
inibito.
La creatinchinasi catalizza la reazione fra il creatinfosfato e l’ADP (adenosina-5’-difosfato)
con la formazione di creatina e ATP (adenosina-5’-trifosfato). L’ultimo composto fosforila il
glucosio in G-6-P (glucosio 6-fosfato) in presenza di HK (esochinasi). Il G-6-P viene
ossidato in 6-PG (6-fosfo gluconato) e allo stesso tempo una quantità equimolare di NADP
(nicotinammide adenin-dinucleotide fosfato) viene ridotta in NADPH nel corso di una
reazione catalizzata dal G-6P-DH (glucosio 6-fosfatodeidrogenasi). L'aumento
nell’assorbenza a 340 nm, risultante dalla formazione del NADPH, è proporzionale
all’attività della creatinchinasi nel campione. (3)
CK
Creatinfosfato + ADP ⎯→ Creatina + ATP
HK
Glucosio + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
INFORMAZIONI SUI REAGENTI
Reagente A: Substrato
Codice: 981373
per 10 x 10 ml
Codice: 981776
per 8 x 3 ml
Reagente B: Tampone
Codice: 981373
10 x 10 ml
Codice: 981776
8 x 3 ml
Concentrazioni
nel reagente ricostituito:
Tampone (Imidazolo)
104 mmol/l
Creatinfosfato
31 mmol/l
Adenosina-5’-difosfato (ADP)
2 mmol/l
Sale di magnesio
10 mmol/l
D-glucosio/destrosio
21 mmol/l
Adenosina-5’-monofosfato (AMP)
5 mmol/l
Nicotinammide adenin-dinucleotide
fosfato (NADP)
2 mmol/l
Di(adenosina-5’)pentafosfato (AP5A)
10 μmol/l
N-acetil-L-cisteina (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Esochinasi (HK)
> 3500 U/l
Glucosio 6-fosfatodeidrogenasi
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
L'anticorpo policlonale anti-CK-M umana (derivato dalle pecore o dalle capre) è sufficiente
per inibire fino a 2000 U/l di CK-MM a 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
Precauzioni
Solo per uso diagnostico in vitro. Rispettare le normali precauzioni previste per l’utilizzo di
tutti i reagenti di laboratorio.
Il reagente contiene sodio azide come conservante. Non ingerire. Evitare il contatto con la
cute e le membrane mucose.
Preparazione
Disciogliere il contenuto del Reagente A con l’intero contenuto del Reagente B. Chiudere
la fiala e miscelare.
Nota: controllare che non siano presenti bolle sul collo del flacone o sulla superficie del
reagente quando si inseriscono flaconi o recipienti nell'analizzatore Konelab.
Conservazione e stabilità
I reagenti in fiale intatte sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta, se
conservati a una temperatura di 2…8 °C.
Per la stabilità dei reagenti sullo strumento, fare riferimento alle note applicative
dell'analizzatore Konelab in uso.
Se a 340 nm il reagente appena ricostituito ha un’assorbenza superiore a 0,700, quando
misurato contro una provetta di acqua, non utilizzarlo.
Se il reagente è torbido, non utilizzarlo.
RACCOLTA DEL CAMPIONE
Tipo di campione
Utilizzare siero o plasma-eparina limpidi e non emolizzati. Non esporre i campioni a una
forte luce.
Precauzioni
I campioni umani devono essere maneggiati e smaltiti come campioni potenzialmente
infetti.
Conservazione (4)
I campioni possono essere conservati per 2 giorni a 20…25 °C, per 7 giorni a 4…8 °C
oppure per 4 settimane a -20 °C al buio.
PROCEDURA ANALITICA
Per le procedure automatiche consultare il manuale d’uso e le note applicative
dell'analizzatore Konelab. Tutte le applicazioni non esplicitamente approvate da Thermo
Fisher Scientific Oy non possono essere garantite in termini di prestazioni e dovranno
pertanto essere valutate dall'utilizzatore.
Materiali inclusi nel kit
I reagenti sopra descritti.
Materiali necessari ma non inclusi nel kit
I controlli indicati di seguito.
Calibrazione
La risposta (dA/min) è convertita nelle unità di misura del risultato per mezzo di un fattore
di calcolo.
Controllo di qualità
Utilizzare i campioni del controllo di qualità almeno una volta al giorno, dopo ogni
calibrazione e ogni volta che si utilizza un nuovo flacone di reagente.
Controlli disponibili:
CK-MB Control, codice: 981908
CK-MB Control High, codice: 981255
Gli intervalli e i limiti del Control vanno adattati alle esigenze del singolo laboratorio. I
risultati dei campioni del controllo di qualità devono rientrare nei limiti di variabilità stabiliti
a priori dal laboratorio.
CALCOLO DEI RISULTATI
I risultati vengono calcolati automaticamente dall’analizzatore Konelab come segue:
Attività in U/l = dA/min x Fattore
TV x 1000
Fattore = ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
dove:
TV= Volume di reazione totale in ml
SV= Volume del campione in ml
6.22= Coefficiente di estinzione del NADPH a 340 nm
P= Lunghezza della cuvetta = 1
Fattore di conversione μkat/l = (U/l)/60
Per ottenere l’attività in termini di CK-MB (U/l), moltiplicare la CK-B attività (U/l) per 2.
LIMITI DELLA PROCEDURA (6, 7)
A causa della quantità limitata di anticorpi CK-M aggiunta al reagente, i campioni con alti
valori totali di CK andrebbero diluiti, in modo tale che il valore totale di CK non superi le
2000 U/l. Alti livelli di isoenzimi CK-BB o di isoenzimi macro-CK-BB atipici possono
determinare risultati CK-MB erroneamente alti.
Interferenze
Criterio: Recupero entro + 10% del valore iniziale.
Bilirubina coniugata: Non sono state rilevate interferenze fino a 650 μmol/l (38.0 mg/dl).
Emolisi: Non usare campioni emolizzati.
Lipemia: Non usare campioni lipoidei.
Per le altre sostanze interferenti, fare riferimento alla Bibliografia 5.
VALORI PREVISTI (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
I valori citati dovranno servire esclusivamente come riferimento. Si raccomanda a ogni
laboratorio di verificare l'applicabilità di questo intervallo alla propria popolazione di
pazienti e, se necessario, di determinare appositi intervalli di riferimento.
INTERVALLO DI MISURAZIONE
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Intervallo di misurazione ampliato dopo la seconda diluizione:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI
Limite di rilevamento
7 U/l (0.12 μkat/l)
Il limite di rilevamento rappresenta la concentrazione/attività più bassa che può essere
distinta da zero. È calcolato come la concentrazione misurata nel campione zero + 3 SD
(entro la serie, n=24).
Imprecisione
Entro la serie
Entro il giorno
Totale
DS
1.6
0.9
3.0
Media
66 U/l
CV%
2.3
1.3
4.3
DS
3.0
4.1
6.6
Media
143 U/l
CV%
2.2
3.0
4.7
Media
264 U/l
DS
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Uno studio di precisione è stato condotto usando l’analizzatore Konelab 30 nell’arco di 10
giorni e con un numero di misurazioni pari a 40.
Metodo di confronto
Un confronto fra questo reagente CK-MB (y) e un test disponibile in commercio, basato
sulla immunoinibizione della subunità della CK-M (x), ha dato i seguenti risultati:
Regressione lineare (unità di misura del risultato espressa in U/l):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
I risultati ottenuti nei singoli laboratori possono differire dai dati sulla performance riportati.
BIBLIOGRAFIA
1)
Burtis, CA e Ashwood, E R (curatori), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry,
quinta edizione, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (curatore), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of
Clinical Laboratory Results, prima edizione, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH,
Francoforte sul Meno, Germania, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W e Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
Konelab™ / Serie T
Template: D01162_4
IT
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4)
5)
6)
7)
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Fascicolo in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag
GmbH, Darmstadt, 1996.
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, quinta edizione, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
Wu, AHB e Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibition and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myocardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Project (Nordchem) Helsinki, Finlandia 1981.
PRODUTTORE
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa
Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
www.thermo.com/konelab
Data della revisione (aaaa-mm-gg)
2009-12-02
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CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
ŠIOS PAKUOTĖS INFORMACINIS LAPELIS TINKAMAS
NAUDOTI UŽ JAV RIBŲ. BET KOKIA NUORODA Į
KONELAB SYSTEMS APIMA IR T PRODUKTŲ SERIJĄ.
PASKIRTIS
Skirtas in vitro kiekybiniam kreatino kinazės izofermento CK-MB B subvieneto (ATP:
kreatinas N-fosfotransferazė (CK), EC 2.7.3.2) aktyvumo nustatymui žmogaus serume
arba plazmoje, naudojant Konelab analizatorius. Visi tyrimų rezultatai turi būti
interpretuojami atsižvelgiant į klinikinį kontekstą.
SANTRAUKA (1,2)
Kreatino kinazė (CK) - tai dimeras, sudarytas iš dviejų subvienetų, M (raumenų) ir B
(smegenų). Gali būti trys subvienetų poros: BB (arba CK-1), MB (arba CK-2) ir MM (arba
CK-3). Įvairūs CK-MB kiekiai randami širdies ir skeleto raumenyse.
Normaliame serume CK aktyvumą sukelia CK-MM. CK-BB koncentracija serume
dažniausiai yra žema. CK-MB koncentracija normaliame žmogaus serume - žema, bet dėl
širdies ligos ar skeleto raumenų pažeidimo ji padidėja.
PROCEDŪROS PRINCIPAS
Yra nemažai metodų CK-MB aktyvumui nustatyti. Šis reagentas naudoja imunoinhibicijos
metodą polikloniniam antikūniui prie CK-M monomero pritraukti. Visiškai nuslopinamas
CK-MM aktyvumas ir pusė CK-MB aktyvumo. Tiriamas nenuslopinto CK-B monomero
aktyvumas.
Kreatino kinazė katalizuoja kreatino fosfato ir ADP (adenozin-5’-difosfatas) reakciją,
sudarydama kreatiną ir ATP (adenozin-5’-trifosfatą). Pastarasis junginys fosforilinina
gliukozę į G-6-P (gliukozės-6-fosfatas) esant HK (heksokinazė). G-6-P oksiduojama į 6-PG
(gliukonato-6-fosfatas) ir tuo pat metu, toks pat NADP (nikotinamidadenindinukleotido
fosfatas) kiekis redukuojamas į NADPH reakcijoje, kurią katalizuoja G-6P-DH (gliukozė-6fosfato dehidrogenazė). Dėl susidariusio NADPH padidėjusi absorbcijos geba, esant 340
nm yra proporcinga kreatino kinazės aktyvumui mėginyje. (3)
CK
Kreatino fosfatas + ADP ⎯→ kreatinas + ATP
HK
Gliukozė + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
+
INFORMACIJA APIE REAGENTUS
A reagentas: Substratas
Kodas: 981373
skirtas 10 x 10 ml
Kodas: 981776
skirtas 8 x 3 ml
B reagentas: Buferis
Kodas: 981373
10 x 10 ml
Kodas: 981776
8 x 3 ml
Koncentracijos
atstatytuose reagentuose:
Buferis (Imidazolas)
104 mmol/l
Kreatino fosfatas
31 mmol/l
Adenozin-5’-difosfatas (ADP)
2 mmol/l
Magnio druska
10 mmol/l
D-gliukozė
21 mmol/l
Adenozin-5’-monofosfatas (AMP)
5 mmol/l
Nikotinamidadenindinukleotido
fosfatas (NADP)
2 mmol/l
Di(adenozin-5’)pentafosfatas (AP5A)
10 μmol/l
N-acetil-L-cisteinas (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Heksokinazė (HK)
> 3500 U/l
Gliukozė-6-fosfato dehidrogenazė
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Antižmogiškas polikloninis antikūnis CK-M (iš avių ar ožkų) gali inhibuoti iki 2000 U/l CKMM prie 37 °C
NaN3
< 0.1 %
Atsargumo priemonės
Tik in vitro diagnostiniam naudojimui. Laikykitės įprastų atsargumo priemonių, kurios
būtinos dirbant su laboratorijos reagentais.
Reagento sudėtyje yra natrio azidas, kaip konservantas. Negalima ryti. Saugokite, kad
nepatektų ant odos ir gleivinės.
Paruošimas
Ištirpinkite A reagento turinį visame B reagento turinyje. Uždarykite buteliuką ir
sumaišykite.
Pastaba: Įstatydami reagento buteliukus ar indus į Konelab analizatorių, patikrinkite ar prie
buteliuko kaklelio arba reagento paviršiuje nėra burbuliukų.
Saugojimas ir pastovumas
Reagentai uždarytuose buteliukuose yra pastovūs prie 2…8 °C iki galiojimo datos,
užrašytos ant etiketės.
Konelab analizatoriaus, Pastabose apie pritaikymą, skaitykite apie prietaise patalpintų
reagentų pastovumą.
Jei naujai atstatyto reagento absorbcijos geba prie 340 nm yra aukštesnė nei 0.700,
matuojant pagal vandens ruošinį, nenaudokite jo.
Jei reagentas susidrumstęs, nenaudokite jo.
MĖGINIŲ SURINKIMAS
Mėginio rūšis
Naudokite skaidrų, nehemolizuotą serumą arba heparino plazmą. Saugokite mėginius nuo
stiprios šviesos.
Atsargumo priemonės
Su žmonių mėginiais reikia dirbti ir juos šalinti taip, lyg jie būtų potencialiai užkrečiami.
Saugojimas (4)
Mėginį galima laikyti 2 dienas, esant 20…25 °C temperatūrai, 7 dienas, esant 4…8 °C
arba 4 savaites, tamsoje, esant -20 °C temperatūrai.
TYRIMO TVARKA
Apie automatizuotą procedūrą naudojant Konelab analizatorių skaitykite Nuorodų vadove
ir Pastabose apie Pritaikymą. Jei prietaisas naudojamas procedūroms, kurių nepatvirtino
Thermo Fisher Scientific Oy, negalima garantuoti tų procedūrų sėkmės ir tokį pritaikymą
turi įvertinti vartotojas.
Skiriamos medžiagos
Anksčiau aprašyti reagentai.
Būtinos, bet neskiriamos medžiagos
Toliau aprašytos kontrolinės medžiagos.
Kalibravimas
Atsakas (dA/min.) paverčiamas rezultato vienetais, pritaikant skaičiavimo koeficientą.
Kokybės valdymas
Naudokite kokybės valdymo mėginius bent kartą per dieną ir po kiekvieno kalibravimo, taip
pat kiekvieną kartą, kai naudojate naują reagento buteliuką.
Kontrolinės medžiagos:
CK-MB Control, kodas: 981908
CK-MB Control High, kodas: 981255
Kontrolės intervalai ir apribojimai turi būti pritaikyti individualios laboratorijos poreikiams.
Kokybės kontrolės mėginių rezultatai turi įeiti į laboratorijos nustatytų verčių intervalą.
REZULTATŲ APSKAIČIAVIMAS
Konelab analizatorius automatiškai apskaičiuoja rezultatus, tokiu būdu:
Aktyvumas išreikštas U/l = dA/min. x koeficientas
TV x 1000
Koeficientas = ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
kai:
TV= Bendras reakcijos tūris ml
SV= Mėginio tūris ml
6.22 = NADPH ekstinkcijos koeficientas prie 340 nm
P= Kiuvetės trajektorijos ilgis = 1
Konversijos koeficientas μkat/l = (U/l)/60
Padauginę CK-B aktyvumą (U/I) iš 2, gausite CK-MB (U/I) aktyvumą.
PROCEDŪROS RIBOTUMAI (6, 7)
Dėl riboto CK-M antikūnio kiekio pridėto į reagentą mėginius, kurių bendros CK vertės
didelės, reikia atskiesti, kad CK vertė neviršytų 2000 U/l. Aukštas CK-BB arba netipiniai
CK-BB makroizofermentai gali įtakoti dirbtinai aukštus CK-MB rezultatus.
Interferencija
Kriterijus: Pradinių verčių atstatymas + 10% ribose.
Konjuguotasis bilirubinas: Iki 650 μmol/l (38.0 mg/dl) interferencija nepastebėta.
Hemolizė: Nenaudokite hemolizuotų mėginių.
Lipemija: Nenaudokite lipemizuotų mėginių.
Daugiau apie interferencijos medžiagas skaitykite 5 nuorodoje.
NUMATOMOS VERTĖS (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Šios vertės turi būti naudojamos tik kaip orientyras. Rekomenduojama, kad kiekviena
laboratorija patikrintų šį diapazoną arba išvestų atskaitos intervalą populiacijai, kuriai ji
tarnauja.
MATAVIMO SRITIS
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Praplėsta matavimo sritis antrą kartą atskiedus:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
EKSPLOATACIJOS CHARAKTERISTIKOS
Aptikimo ribos
7 U/l (0.12 μkat/l)
Aptikimo riba žymi žemiausią išmatuojamą koncentraciją/ aktyvumą, kurį galima atskirti
nuo nulio. Ji apskaičiuojama kaip nulinio mėginio koncentracija + 3 SD (serijoje, n=24).
Netikslumas
Serijoje
Kas dieną
Viso
Vidurkis
66 U/l
CV%
2.3
1.3
4.3
SD
1.6
0.9
3.0
Vidurkis
143 U/l
CV%
2.2
3.0
4.7
SD
3.0
4.1
6.6
Vidurkis
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Tikslumo studija atlikta 10 dienų naudojant Konelab 30, matavimų skaičius n= 40.
Metodų palyginimas
CK-MB reagento (y) ir komerciškai prieinamo tyrimo, grindžiamo CK-M subvieneto (x)
imunoinhibicija palyginimo rezultatai:
Linijinė regresija (rezultatų vienetas U/I):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Individualiose laboratorijose gauti rezultatai gali skirtis nuo pateiktų duomenų.
BIBLIOGRAFIJA
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
4)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH,
Darmstadt, 1996.
5)
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
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Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
Konelab™ / T Series
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The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
GAMINTOJAS
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa
Tel. +358 9 329 100, Faksas +358 9 3291 0300
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Peržiūros data (mmmm-mm-dd)
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CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
ŠIS IEPAKOJUMA PIELIKUMS IR PIELIETOJAMS ĀRPUS
ASV. JEBKURA ATSAUKSME UZ KONELAB SISTĒMU
ATSAUCAS ARĪ UZ T SĒRIJU.
PAREDZĒTĀ LIETOŠANA
In vitro kvantitatīvai kreatīna fosfokināzes izoenzīma KFK-MB B subvienības (ATF:
kreatīna N-fosfotransferāze (KFK), EC 2.7.3.2) aktivitātes noteikšanai cilvēka serumā vai
plazmā ar Konelab analizatoriem. Visi testa rezultāti ir jāinterpretē, vadoties pēc klīniskā
konteksta.
KOPSAVILKUMS (1,2)
Kreatīna fosfokināze (KFK) ir dimērs, kas sastāv no divām apakšvienībām - M (muskuļu)
un B (smadzeņu). Var veidoties trīs dažādi apakšvienību pāri. BB (vai KFK-1), MB (vai
KFK-2) un MM (vai KFK-3). KFK-MB mainīgos daudzumos atrodas sirds muskuļa šūnās
un arī skeleta muskulatūrā.
Parasti seruma lielāko KFK aktivitāti veido KFK-MM. KFK-BB parasti serumā sastopams
zemās koncentrācijās. KFK-MB parasti cilvēka serumā ir zemās koncentrācijās, bet tas
paaugstinās sirds bojājuma gadījumā un reti - skeleta muskuļu bojājuma gadījumā.
PROCEDŪRAS PRINCIPS
Ir pieejamas vairākas metodes KFK-MB aktivitātes noteikšanai. Šis reaģents pielieto
imunoinhibīcijas metodi, izmantojot poliklonālus antigēnus pret KFK-M monomēru. Tas
pilnībā inhibē KFK-MM aktivitāti un pusi no KFK-MB aktivitātes. Pēc tam tiek analizēta
neinhibētā KFK-B monomēra aktivitāte.
Kreatīna fosfokināze katalizē reakciju starp kreatīna fosfātu un ADF (adenozīn-5’difosfātu), kuras rezultātā veidojas kreatīns un ATF (adenozīn-5’-trifosfāts). ATF fosforilizē
glikozi par G-6-P (glikozes-6-fosfāts) HK (heksokināzes) klātbūtnē. G-6-P oksidējas par 6PG (glikonāta-6-fosfāts), un tajā pašā laikā tāds pats molu skaits NADP (nikotīnamīda
adenīna dinukleotīda fosfāta) tiek reducēts par NADPH reakcijā, kuru katalizē G-6P-DH
(glikozes-6-fosfāta dehidrogenāze). Absorbcijas palielinājums pie 340 nm, kas rodas no
NADPH izveidošanās, ir proporcionāls kreatīna fosfokināzes aktivitātei paraugā. (3)
KFK
Kreatīna fosfāts + ADF ⎯→ Kreatīns + ATF
HK
Glikoze + ATF ⎯→ G-6-P + ADF
G-6-P-DH
G-6-P + NADF+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADFH + H+
INFORMĀCIJA PAR REAĢENTU
Reaģents A: Substrāts
Kods: 981373
izmantošanai ar 10 x 10 ml
Kods: 981776
izmantošanai ar 8 x 3 ml
Reaģents B: Buferšķīdums
Kods: 981373
10 x 10 ml
Kods: 981776
8 x 3 ml
Koncentrācijas
atšķaidītā reaģentā:
Buferšķīdums (imidazols)
104 mmol/l
Kreatīna fosfāts
31 mmol/l
Adenozīna-5’-difosfāts (ADF)
2 mmol/l
Magnija sāls
10 mmol/l
D-glikoze
21 mmol/l
Adenozīna-5’-monofosfāts (AMF)
5 mmol/l
Nikotīnamīda adenīna dinukleotīda
fosfāts (NADF)
2 mmol/l
Di(adenozīn-5’)pentafosfāts (AP5A)
10 μmol/l
N-acetil-L-cisteīns (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Heksokināze (HK)
> 3500 U/l
Glikozes-6-fosfāta dehidrogenāze
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Antihumānais poliklonālais KFK-M antigēns (auna vai kazas), kas spēj inhibēt ne vairāk
par 2000 U/l KFK-MM 37 °C temperatūrā.
NaN3
< 0.1 %
Piesardzības pasākumi
Tikai in vitro diagnostikai. Ievērojiet parastos piesardzības pasākumus par apiešanos ar
visiem laboratorijas reaģentiem.
Reaģents satur nātrija azīdu kā konservantu. Nenorīt. Izvairieties no kontakta ar ādu un
gļotādām.
Sagatavošana
Izšķīdiniet reaģentu A visā reaģenta B tilpumā. Noslēdziet pudelīti ar vāciņu un sajauciet.
Piezīme: Ievietojot reaģenta pudelītes vai traukus Konelab analizatorā, pārliecinieties, ka
pudelītes kakliņā vai uz reaģenta virsmas nav gaisa burbuļu.
Uzglabāšana un stabilitāte
Reaģenti neatvērtās pudelītēs ir stabili 2…8 °C temperatūrā līdz derīguma termiņa
beigām; derīguma termiņš ir uzdrukāts uz etiķetes.
Lai iegūtu informāciju par ievietoto reaģentu stabilitāti, sk. Konelab analizatora
“Pielietojuma piezīmes”.
Neizmantot, ja svaigi atšķaidīta reaģenta absorbcija pie 340 nm, mērot pret ūdeni, ir
augstāka par 0.700.
Neizmantojiet, ja reaģents ir duļķains.
PARAUGU IEGŪŠANA
Parauga veids
Izmantojiet dzidru, nehemolizētu serumu vai heparīna plazmu. Nepakļaujiet paraugus
spēcīgas gaismas ietekmei.
Piesardzības pasākumi
Ar no cilvēkiem iegūtajiem paraugiem jārīkojas un no tiem jāatbrīvojas tā, it kā tie būtu
iespējami infekciozi.
Uzglabāšana (4)
Paraugu var uzglabāt 2 dienas 20…25 °C temperatūrā, 7 dienas 4…8 °C temperatūrā vai
4 nedēļas -20 °C temperatūrā; paraugs jāuzglabā tumsā.
TESTA PROCEDŪRA
Sk. “Uzziņu rokasgrāmatu” un “Pielietojuma piezīmes”, lai iegūtu informāciju par Konelab
analizatora automātisko procedūru. Jebkāds pielietojums, kuru nav apstiprinājis Thermo
Fisher Scientific Oy, nevar sniegt garantētu rezultātu, tādēļ tas jāizvērtē pašam lietotājam.
Piegādātie materiāli
Iepriekš aprakstītie reaģenti.
Nepieciešamie materiāli, kas netiek piegādāti
Kontroles, kā aprakstīts tālāk.
Kalibrācija
Atbilde (dA/min) tiek konvertēta rezultāta vienībās, izmantojot aprēķinu faktoru.
Kvalitātes kontrole
Izmantojiet kvalitātes kontroles paraugus vismaz reizi dienā un pēc katras kalibrācijas, kā
arī ikreiz, kad tiek izmantota jauna reaģenta pudele.
Pieejamās kontroles:
CK-MB Control, kods: 981908
CK-MB Control High, kods: 981255
Kontroles intervāli un robežlielumi ir jāpiemēro individuālajām laboratorijas prasībām.
Kvalitātes kontroles paraugu rezultātiem jābūt laboratorijas noteikto vērtību robežās.
REZULTĀTU APRĒĶINĀŠANA
Konelab analizators rezultātus automātiski aprēķina šādi:
Aktivitāte U/l = dA/min x faktors
TV x 1000
Faktors = ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
kur:
TV= kopējais reakcijas tilpums ml
SV= parauga tilpums ml
6.22= NADFH zuduma koeficents pie 340 nm
P= kuvetes ceļš = 1
Konversijas faktors μkat/L = (U/l)/60
Lai iegūtu KFK-MB aktivitāti (U/l), sareiziniet KFK-B aktivitāti (U/l) ar 2.
PROCEDŪRAS IEROBEŽOJUMI (6,7)
Tā kā reaģentam pievienotā KFK-M antigēna daudzums ir ierobežots, paraugi ar augstām
kopējā KFK vērtībām ir jāatšķaida tā, lai kopējā KFK vērtība nepārsniegtu 2000 U/l. Augsta
KFK-BB koncentrācija vai atipiski KFK-BB makro izoenzīmi var radīt kļūdaini augstus KFKMB rezultātus.
Mijiedarbība
Kritērijs: Atjaunošana + 10% robežās no sākotnējām vērtībām.
Saistītais bilirubīns: Līdz 650 μmol/l (38.0 mg/dl) interference nav novērota.
Hemolīze: Neizmantot hemolizētu paraugu.
Lipēmija: Neizmantot lipēmisku paraugu.
Informācijai par citām interferējošām vielām, lūdzu, sk. 5. atsauci.
VĒLAMĀS VĒRTĪBAS (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Minētās vērtības ir tikai ar rekomendējošu nozīmi. Ieteicams, lai katra laboratorija
apstiprinātu šo diapazonu vai izstrādātu referentos lielumus populācijai, kuru tā apkalpo.
MĒRĪŠANAS DIAPAZONS
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Paplašinātais mērīšanas diapazons pēc otrreizējas atšķaidīšanas:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
VEIKTSPĒJAS RAKSTUROJUMS
Uztveršanas robeža
7 U/l (0.12 μkat/l)
Uztveršanas robeža ir zemākā izmērāmā koncentrācija/aktivitāte, ko var atšķirt no nulles.
Tā tiek aprēķināta kā nulles parauga koncentrācija + 3 SD (darbības laikā, n=24).
Neprecizitāte
Darbības laikā
Ar dienas starpību
Kopā
Vidējais
66 U/l
CV%
2.3
1.3
4.3
SD
1.6
0.9
3.0
Vidējais
143 U/l
CV%
2.2
3.0
4.7
SD
3.0
4.1
6.6
Vidējais
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Precizitātes izpēte tika veikta 10 dienu laikā, izmantojot Konelab 30; mērījumu skaits
n = 40.
Metodes salīdzinājums
Šī KFK-MB reaģenta (y) salīdzinājums ar citiem komerciāli pieejamiem testiem, kuru darbība
balstīta uz KFK-M apakšvienības imunoinhibīciju (x), sniedza šādus rezultātus:
Lineārā regresija (rezultāta vienība U/l):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Rezultāti, kas iegūti atšķirīgās laboratorijās, var atšķirties no dotajiem veiktspējas datiem.
BIBLIOGRĀFIJA
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
4)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH,
Darmstadt, 1996.
5)
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
6)
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
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Konelab™ / T Sērijas
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7)
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
RAŽOTĀJS
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Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O.Box 100, FI-01621 Vantaa
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PL
POMIAR
Należy odnieść się do instrukcji i aplikacji dla zautomatyzowanej procedury na
analizatorze Konelab. Aplikacja, która nie została autoryzowana przez Thermo Fisher
Scientific Oy nie może być gwarancją i musi zostać oceniona przez użytkownika.
Konelab™ / Seria T
CK-MB
Dostarczone materiały
Odczynniki wymienione powyżej.
10 x 10 ml
8 x 3 ml
NINIEJSZA ULOTKA OPAKOWANIA PRZEZNACZONA
JEST DO STOSOWANIA POZA GRANICAMI USA.
WSZELKIE ODNIESIENIA DO SYSTEMÓW KONELAB
ODNOSZĄ SIĘ RÓWNIEŻ DO SERII T.
ZASTOSOWANIE
Do ilościowego oznaczania in vitro aktywności podjednostki B izoenzymu CK-MB kinazy
kreatynowej (ATP: Kreatyna N-Fosfotransferaza (CK), EC 2.7.3.2) w ludzkiej surowicy lub
osoczu na analizatorach Konelab. Interpretacji wyników należy dokonać w kontekście
klinicznym.
WPROWADZENIE (1,2)
Kinaza kreatynowa (CK) jest złożona z dwóch podjednostek M (muscular) i B (brain).
Podjednostki mogą tworzyć trzy różne pary BB (lub CK-1), MB (lub CK-2) i MM (lub CK-3).
CK-MB jest obecny zarówno w mięśniu sercowym i mięśniach szkieletowych.
Główna aktywność CK w normalnej surowicy spowodowana jest izoenzymem CK-MM.
CK-BB jest obecny w surowicy w niskim stężeniu. CK-MB w surowicy jest obecny w niskim
stężeniu, wzrasta w zawale serca i rzadko w urazach mięśni szkieletowych.
ZASADA METODY
Aktywność CK-MB możemy oznaczać różnymi metodami. Odczynnik wykorzystuje metodę
immunoinhibicji, w której wykorzystuje się przeciwciała monoklonalne dla monomeru CKM. Zostaje zahamowana całkowita aktywność CK-MM i częściowe zahamowanie
aktywności izoenzymu CK-MB. Oznaczamy aktywność nie zahamowanego monomeru
CK-B.
Kinaza kreatynowa katalizuje reakcję między fosforanem kreatyny i ADP (adenozyno-5’dwufosforan) z utworzeniem kreatyny i ATP (adenozyno-5’-trójfosforan). Następuje
złożona fosforylacja glukozy do fosforanu G-6-P (6-fosfoglukoza) w obecności HK
(heksokinazy). G-6-P jest utleniana do 6-PG (6-fosfoglukonian) i w tym samym czasie ilość
jonów NADP (fosforan dinukleotydu nikotynamidoadeninowego) jest zredukowana do
NADPH w reakcji katalizowanej G-6P-DH (dehydrogenaza 6-fosfoglukozy). Wzrost
absorbancji przy 340nmn jest wynikiem utworzenia NADPH i jest proporcjonalny do ilości
kinazy kreatynowej w próbce. (3)
CK
Fosforan kreatyny + ADP ⎯→ Kreatyna + ATP
Kalibracja
Wynik otrzymujemy w jednostkach mnożąc odczyt (dA/min) przez współczynnik
kalkulacyjny.
Kontrola jakości
Kontrola jakości powinna być wykonywana co najmniej raz dziennie oraz po każdej
kalibracji i przy zmianie butelki z odczynnikiem.
Dostępne kontrole:
CK-MB Control, numer 981908
CK-MB Control High, numer 981255
Przedziały i limity kontroli muszą być dostosowane do indywidualnych wymagań
laboratorium. Wyniki kontroli jakości powinny odpowiadać wartościom ustanowionym
wstępnie przez laboratorium.
OBLICZANIE WYNIKÓW
Wyniki obliczane są automatycznie przez analizator Konelab używając wzoru:
Aktywność w U/l = dA/min x faktor
TV x 1000
Faktor = ⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
gdzie:
TV= Objętość mieszaniny reakcyjnej w ml
SV= Objętość próbki w ml
6.22= Współczynnik ekstynkcji NADPH przy 340 nm
P= Światło kuwety = 1
Współczynnik przeliczeniowy μkat/l = (U/l)/60
Aktywność CK-B (U/l) pomnóż przez 2 aby otrzymać CK-MB (U/l).
OGRANICZENIA PROCEDURY (6, 7)
Z powodu ograniczonej ilości przeciwciał CK-M w odczynniku, próbki z wysokimi
wartościami CK powinny zostać rozcieńczone, aby wartość całkowitego CK nie była
wyższa niż 2000 U/l. Wysokie CK-BB albo atypowe makro izoenzymy CK-BB mogą
spowodować fałszywie wysoki wynik CK-MB.
Interferencje
Kryterium: Zakres ± 10% wartości początkowych.
Bilirubina związana: Nie ma wpływu aż do 650 μmol/l (38.0 mg/dl).
Hemoliza: Nie używaj próbek zhemolizowanych.
Lipemia: Nie używaj próbek lipemicznych.
Dla innych interferujących substancji, odnieś się do pozycji 5.
HK
ATP + Glukoza ⎯→ ADP + G-6-P
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
INFORMACJA O ODCZYNNIKU
Odczynnik A: Substrat
Numer: 981373
po 10 x 10 ml
Numer: 981776
po 8 x 3 ml
Odczynnik B: Bufor
Numer: 981373
10 x 10 ml
Numer: 981776
8 x 3 ml
WARTOŚCI OCZEKIWANE (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Powyższe dane są jedynie wartościami orientacyjnymi. Każde laboratorium powinno
ustalić swoje własne zakresy dla danej populacji.
ZAKRES POMIARU
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Rozszerzony zakres pomiaru po rozcieńczeniu:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
104 mmol/l
31 mmol/l
2 mmol/l
10 mmol/l
21 mmol/l
5 mmol/l
2 mmol/l
10 μmol/l
21 mmol/l
2 mmol/l
> 3500 U/l
> 2000 U/l
ludzkiemu CK-M, aby zahamować aż
< 0.1 %
Środki ostrożności
Wyłącznie do diagnostyki in vitro.
Zachować środki ostrożności wymagane dla odczynników laboratoryjnych.
Odczynnik zawiera azydek sodu jako konserwant. Nie połykać. Unikać kontaktu ze skórą i
błonami śluzowymi.
Przygotowanie
Rozpuść zawartość odczynnika A z całą zawartością odczynnika B. Zamknij i zamieszaj.
Uwaga: Sprawdź przed wstawieniem naczynia z odczynnikiem do analizatora Konelab,
czy w fiolce i na powierzchni odczynnika nie znajdują się pęcherzyki powietrza.
Przechowywanie i stabilność
Zamknięte odczynniki są trwałe w temperaturze 2...8 °C aż do daty ważności podanej na
opakowaniu.
Trwałość odczynników w analizatorze podana jest w aplikacji analizatora Konelab.
Nie używaj odczynnika, w którym absorbancja przy 340nm wobec wody jest wyższa niż
0.700.
Nie używać mętnego odczynnika.
POBRANIE I PRZYGOTOWANIE PRÓBKI
Rodzaj próbki
Jasna, niezhemolizowana surowica lub osocze pobrane na heparynę. Unikaj wystawiania
próbek na działanie świtała.
Środki ostrożności
Próbki badane powinny być traktowane jako potencjalnie zakaźne.
Przechowywanie (4)
Próbki mogą być przechowywane przez 2 dni w 20…25 °C, przez 7 dni w 4…8 °C lub 4
tygodnie w -20 °C bez dostępu światła.
CHARAKTERYSTYKA PRACY
Granica wykrywalności
7 U/l (0.12 μkat/l)
Granica wykrywalności to najniższe wymierne stężenie/aktywność, które może zostać
odróżnione od zera. Obliczane jest jako stężenie próbki zerowej + 3 SD (wewnątrz serii,
n =24).
Nieprecyzyjność
Wewnątrz oznaczenia
Pomiędzy oznaczeniami
Całkowita
Średnia
66 U/l
SD
CV%
1.6
2.3
0.9
1.3
3.0
4.3
Średnia
143 U/l
SD
CV%
3.0
2.2
4.1
3.0
6.6
4.7
Średnia
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Precyzja została wykonana używając Konelab 30 przez 10 dni z ilością pomiarów n = 40.
Metoda porównawcza
Porównanie pomiędzy tym odczynnikiem CK-MB (y) i powszechnie dostępnej metodzie
opartej na immunoinhibicji podjednostki CK-M (x) dało następujące wyniki:
Regresja liniowa (wyniki w jednostkach U/l):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Rezultaty w indywidualnych laboratoriach mogą różnić się dla podanych precyzji oraz
danych dla metod porównawczych.
PIŚMIENNICTWO
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
4)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH,
Darmstadt, 1996.
5)
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
6)
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
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Stężenia
w rozpuszczonym odczynniku:
Bufor (Imidazolu)
Fosforan kreatyny
Adenozyno-5’-difosforan (ADP)
Sól magnezowa
D-glukoza
Adenozyno -5’-monofosforan (AMP)
Fosforan dinukleotydu
nikotynamidoadeninowego (NADP)
Pentafosforan diadenozyny (AP5A)
N-acetylo-L-cysteina (NAC)
EDTA
Heksokinaza (HK)
Dehydrogeanaza-6-fosforglukozy (G-6-P-DH)
Przeciwciała poliklonalne (owcy albo kozła) przeciw
do 2000 U/l CK-MM w 37 °C.
NaN3
Materiały wymagane, nie należące do zestawu
Kontrole wskazane poniżej.
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981373
981776
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7)
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
PRODUCENT
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa
Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
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CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
ESTE FOLHETO INFORMATIVO É APLICÁVEL PARA
USO FORA DOS E.U.A. QUALQUER REFERÊNCIA
AOS SISTEMAS KONELAB TAMBÉM SE REFERE À
SÉRIE T.
USO A QUE SE DESTINA
Para a determinação quantitativa in vitro da actividade da subunidade B da isoenzima CKMB da creatina cinase (ATP: Creatina N-fosfotransferase (CK), EC 2.7.3.2) em soro ou
plasma humanos nos analisadores Konelab. Todos os resultados deverão ser
interpretados dentro do contexto clínico.
RESUMO (1,2)
A Creatina Cinase (CK) é um dímero constituído por duas subunidades, M (músculo) e B
(cérebro). Podem existir três pares diferentes de subunidades: BB (ou CK-1), MB (ou CK2), e MM (ou CK-3). A CK-MB está presente em vários graus, no músculo cardíaco e
também no músculo esquelético.
A principal actividade da CK no soro normal deve-se a CK-MM. CK-BB está habitualmente
presente no soro em baixas concentrações. CK-MB está presente em baixas
concentrações no soro humano normal, mas os seus níveis aumentam em consequência
de lesão cardíaca e, raramente, de lesão do músculo esquelético.
PRINCÍPIOS DO PROCEDIMENTO
Encontram-se disponíveis vários métodos para a determinação da actividade da CK-MB.
Este reagente utiliza um método de imuno-inibição que utiliza um anticorpo policlonal
contra o monómero CK-M. Este inibe por completo a actividade da CK-MM e metade da
actividade da CK-MB. A actividade do monómero CK-B, não inibida, é então analisada.
A creatina cinase catalisa a reacção entre fosfato de creatina e PAD (adenosina-5'difosfato), com formação de creatina e ATP (adenosina-5'-trifosfato). O último composto
fosforila a glicose em G-6-P (glicose-6-fosfato) na presença de HK (hexocinase). G-6-P é
oxidada em 6-PG (gluconato-6-fosfato) e, simultaneamente, uma quantidade equimolar de
NADP (nicotinamida adenina dinucleótifo fosfato) é reduzida em NADPH numa reacção
catalisada por G-6P-DH (desidrogenase da glicose-6-fosfato). O aumento da absorvância
a 340 nm, resultante da formação de NADPH, é proporcional à actividade de creatina
cinase na amostra. (3)
CK
Fosfato de creatina + ADP ⎯→ Creatina + ATP
HK
Glicose + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
INFORMAÇÕES DOS REAGENTES
Reagente A: Substrato
Cód: 981373
para 10 x 10 ml
Cód: 981776
para 8 x 3 ml
Reagente B: Tampão
Cód: 981373
10 x 10 ml
Cód: 981776
8 x 3 ml
Concentrações
no reagente reconstituído:
Tampão (Imidazole)
104 mmol/l
Fosfato de Creatina
31 mmol/l
Adenosina-5'-difosfato (ADP)
2 mmol/l
Sal de magnésio
10 mmol/l
D-glicose
21 mmol/l
Adenosina-5'-monofosfato (AMP)
5 mmol/l
Nicotinamida adenina dinucleótido
fosfato (NADP)
2 mmol/l
Di(adenosina-5 ') pentafosfato (AP5A)
10 μmol/l
N-acetil-L-cisteína (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Hexocinase (HK)
> 3500 U/l
Desidrogenase da glicose-6-fosfato
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Anticorpo policlonal CK-M anti-humano (de ovelha ou cabra) suficiente para inibir um
máximo de 2000 U/l de CK-MM a 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
Precauções
Exclusivamente para diagnóstico in vitro. Tome as precauções normais exigidas para
manipulação de todos os reagentes de laboratório.
O reagente contém azida sódica como conservante. Não ingira. Evite o contacto com a
pele e membranas mucosas.
Preparação
Dissolva o conteúdo do Reagente A com a totalidade do conteúdo do reagente B. Tape o
frasco e misture.
Nota: Verifique que não existem bolhas no gargalo do frasco nem na superfície do
reagente quando introduzir os frascos ou recipientes de reagente no analisador Konelab.
Armazenamento e Estabilidade
Os reagentes em frascos fechados permanecem estáveis a 2...8 °C até ao final da data
de validade impressa no rótulo.
Consulte as Notas da Aplicação do seu analisador Konelab quanto à estabilidade dos
reagentes no analisador.
Se o reagente fresco reconstituído apresentar uma absorvância a 340 nm superior a
0.700 quando medido contra um branco de água, não utilize.
Se o reagente apresentar turvação, não utilize.
COLHEITA DE AMOSTRAS
Tipo de Amostra
Utilize soro transparente, não hemolisado, ou plasma em heparina. Evite a exposição das
amostras a luz forte.
Precauções
As amostras humanas devem ser manipuladas e eliminadas como se fossem
potencialmente infecciosas.
Armazenamento (4)
A amostra pode ser armazenada durante 2 dias a 20…25 °C, durante 7 dias a 4…8 °C ou
durante 4 semanas a -20 °C no escuro.
PROCEDIMENTO DE TESTE
Consulte o Manual de Referência e as Notas da Aplicação para um procedimento
automatizado no seu analisador Konelab. Não é possível garantir o desempenho de
qualquer aplicação que não tenha sido validada pela Thermo Fisher Scientific Oy, pelo
que deve ser avaliada pelo utilizador.
Material fornecido
Reagentes conforme descrito acima.
Material necessário mas não fornecido
Controlo, conforme indicado em baixo.
Calibração
A resposta (dA/min) é convertida em unidades de resultados por um factor de cálculo.
Controlo de Qualidade
Utilize amostras de controlo de qualidade pelo menos uma vez por dia e depois de cada
calibração e sempre que utilizar uma novo frasco de reagente.
Controlos disponíveis:
CK-MB Control, código: 981908
CK-MB Control High, código: 981255
Os intervalos e limites de controlo devem ser adaptados aos requisitos individuais do
laboratório. Os resultados da amostra de controlo de qualidade devem cair dentro dos
limites predefinidos pelo laboratório.
CÁLCULO DOS RESULTADOS
Os resultados são calculados automaticamente pelo analisador Konelab, da seguinte
forma:
Actividade em U/l = dA/min x Factor
Factor =
TV x 1000
⎯⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
onde:
TV = Volume total de reacção em ml
SV = volume da amostra em ml
6.22 = Coeficiente de extinção do NADPH a 340 nm
P = Comprimento do trajecto da cuvete = 1
Factor de conversão µkat/l = (U/l)/60
Multiplique a actividade de CK-B (U/l) por 2 para obter a actividade em termos de CKMB (U/l).
LIMITAÇÕES DO PROCEDIMENTO (6, 7)
Dada a quantidade limitada de anticorpo CK-M adicionada no reagente, amostras com
valores de CK total elevados devem ser diluídas, de forma a que o valor de CK total não
seja superior a 2000 U/l. CK-BB elevado ou isoenzimas CK-BB-macro atípicas podem dar
origem a resultados de CK-MB falsamente elevados.
Interferência
Critério: Recuperação dentro de + 10% dos valores iniciais.
Bilirrubina conjugada: Não foi encontrada qualquer interferência até 650 µmol/l
(38.0 mg/dl).
Hemólise: Não utilize amostras hemolisadas.
Lipemia: Não utilize amostras lipémicas.
Para outras substâncias interferentes, por favor consulte a referência 5.
VALORES ESPERADOS (7)
<25 U/l (<0.42 µkat/l)
Os valores referidos deverão servir apenas como orientação. Recomenda-se que cada
laboratório confirme este intervalo, ou que derive um intervalo de referência para a
população a que atende.
INTERVALO DE MEDIÇÃO
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Intervalo de medição estendido após diluição secundária:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
CARACTERÍSTICAS DE DESEMPENHO
Limite de detecção
7 U/l (0.12 μkat/l)
O limite de detecção representa a concentração/actividade mais baixa mensurável que
pode ser distinguida de zero. É calculado como a concentração da amostra zero + 3 DP
(intra-execução, n=24).
Imprecisão
Intra-execução
Entre Dias
Total
Média
66 U/l
DS
CV%
1.6
2.3
0.9
1.3
3.0
4.3
Média
143 U/l
DS
CV%
3.0
2.2
4.1
3.0
6.6
4.7
Média
264 U/l
DS
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Foi efectuado um estudo de precisão utilizando o Konelab 30 durante 10 dias, com um
número de medições de n = 40.
Comparação de métodos
Uma comparação entre este reagente CK-MB (y) e um teste disponível no mercado
baseado na imuno-inibição da subunidade CK-M (x) produziu os seguintes resultados:
Regressão linear (unidade dos resultados U/l):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Os resultados obtidos nos laboratórios individuais podem diferir dos dados de
desempenho apresentados.
BIBLIOGRAFIA
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
Konelab™ / Série T
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PT
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4)
5)
6)
7)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Amostras: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag
GmbH, Darmstadt, 1996.
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
FABRICANTE
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
Ratastie 2, P.O. Box 100, FI-01621 Vantaa
Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
www.thermo.com/konelab
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CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
ACEST PROSPECT INTRODUS ÎN PACHET ESTE
APLICABIL PENTRU FOLOSIREA ÎN AFARA S.U.A. ORICE
REFERINŢĂ LA KONELAB SYSTEMS SE REFERĂ ŞI LA
SERIA T.
UTILIZAREA PREVÃZUTÃ
Pentru determinarea cantitativã in vitro a activitãþii subunitãþii B a izoenzimei CK-MB a
creatin-kinazei (ATP: creatin N-fosfotransferaza (CK), EC 2.7.3.2) din serul sau plasma
umane, cu dispozitivele de analizã Konelab. Toate rezultatele trebuie interpretate în
context clinic.
SUMAR (1,2)
Creatin-kinaza (CK) este un dimer compus din douã subunitãþi, M (muscularã) şi B
(cerebralã). Pot exista trei perechi diferite de subunitãþi: BB (sau CK-1), MB (sau CK-2) şi
MM (sau CK-3). CK-MB este prezentã în diferite grade în muşchiul cardiac şi , de
asemenea, în muşchii scheletici.
Activitatea cea mai mare a CK în serul normal se datoreazã CK-MM. CK-BB este prezentã
de obicei în ser în concentraþii reduse. CK-MB este prezentã în concentraþii reduse în
serul uman normal, dar acestea cresc ca urmare a unor leziuni cardiace şi , rareori, ca
urmare a unor leziuni ale muşchilor scheletici.
PRINCIPIUL DETERMINÃRII
Sunt disponibile mai multe metode pentru a determina activitatea CK-MB. Acest reactiv
foloseşte metoda imunoinhibiþiei, folosind un anticorp policlonal pentru monomerul CK-M.
Acesta inhibã complet activitatea CK-MM şi , pe jumãtate, activitatea CK-MB. Dupã aceea
este analizatã activitatea monomerului CK-B.
Creatin-kinaza catalizeazã reacþia dintre creatin-fosfat şi ADP (adenozin-5’-difosfat) cu
formare de creatinã şi ATP (adenozin-5’-trifosfat). Ultimul compus fosforileazã glucoza la
G-6-P (glucozo-6-fosfat) în prezenþa HK (hexokinazei). G-6-P este oxidat la 6-PG
(gluconat-6-fosfat) şi , totodatã, o cantitate echimolarã de NADP (nicotinamid-adenindinucleotid fosfat) e redusã la NADPH printr-o reacþie catalizatã de G-6P-DH (glucozo-6fosfat dehidrogenazã). Creşterea absorbanþei la 340 nm, care rezultã din formarea de
NADPH, este proporþionalã cu activitatea creatin-kinazei din probã. (3)
CK
Creatin-fosfat + ADP ⎯→ Creatinã + ATP
HK
Glucozã + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
INFORMAÞII PRIVIND REACTIVII
Reactiv A: Substrat
Cod: 981373
Cod: 981776
Reactiv B: Tampon
Cod: 981373
Cod: 981776
pentru 10 x 10 ml
pentru 8 x 3 ml
10 x 10 ml
8 x 3 ml
Concentraþii
în reactivul reconstituit:
Tampon (Imidazol)
104 mmol/l
Creatin-fosfat
31 mmol/l
Adenozin-5’-difosfat (ADP)
2 mmol/l
Sare de magneziu
10 mmol/l
D-glucozã
21 mmol/l
Adenozin-5’-monofosfat (AMP)
5 mmol/l
Nicotinamid-adenin-dinucleotid
fosfat (NADP)
2 mmol/l
10 μmol/l
Di(adenozin-5’)pentafosfat (AP3353340A)
N-acetil-L-cisteinã (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Hexokinazã (HK)
> 3500 U/l
Glucozo-6-fosfat dehidrogenazã
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Anticorp policlonal antiuman CK-M (de oaie sau de caprã) suficient pentru a inhiba pânã la
2000 U/l de CK-MM la 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
Precauþii
Numai pentru diagnostic in vitro. Adoptaþi mãsurile normale de precauþie necesare pentru
mânuirea reactivilor de laborator.
Reactivul conþine azidã de sodiu drept conservant. Nu înghiþiþi. Evitaþi contactul cu
pielea şi membranele mucoasei.
Pregãtirea
Dizolvaþi conþinutul Reactivului A cu întreg conþinutul Reactivului B. Închideþi flaconul şi
omogenizaþi.
Notã: Verificaþi sã nu existe bule în gâtul flaconului sau la suprafaþa reactivului când
introduceþi fiolele sau recipientele cu reactiv în dispozitivul de analizã Konelab.
Depozitarea şi stabilitatea
Reactivii din fiolele nedeschise sunt stabili la 2…8 °C pânã la data de expirare tipãritã pe
etichetã.
Consultaþi Notele de Aplicare ale dispozitivului dv. de analizã Konelab pentru stabilitatea
reactivilor în cazul respectiv.
Dacã reactivul proaspãt reconstituit are o absorbanþã la 340 nm mai mare de 0.700 când
e comparat cu o probã oarbã de apã, nu-l folosiþi.
Dacã reactivul este tulbure, nu-l folosiþi.
RECOLTAREA PROBELOR
Tipul de probe
Folosiþi ser sau plasmã heparinizatã limpezi, nehemolizate. Evitaþi expunerea probelor la
luminã puternicã.
Precauþii
Probele umane trebuie mânuite şi aruncate ca şi cum ar fi potenþial infecþioase.
Depozitarea (4)
Proba poate fi depozitatã timp de 2 zile la 20…25 °C, timp de 7 zile la 4…8 °C sau timp de
4 sãptãmâni la -20 °C, la întuneric.
PROCEDURA DE ANALIZARE
Consultaþi Manualul de Referinþã şi Notele de Aplicare pentru procedura automatã cu
dispozitivul dv. de analizã Konelab. Toate aplicaþiile care nu au fost validate de Thermo
Fisher Scientific Oy nu garanteazã performanþa şi , prin urmare, trebuie evaluate de cãtre
utilizator.
Materiale furnizate
Reactivii mai sus-menþionaþi.
Materiale necesare, dar care nu sunt furnizate
Martorii indicaþi mai jos.
Calibrarea
Rezultatul (dA/min) e convertit ca sã se obþinã unitãþi, cu ajutorul unui factor de calcul.
Controlul de calitate
Folosiþi probe pentru controlul de calitate cel puþin o datã pe zi şi dupã fiecare calibrare
şi de fiecare datã când se foloseşte un flacon nou de reactiv.
Martori disponibili:
CK-MB Control, cod: 981908
CK-MB Control High, cod: 981255
Intervalele şi
limitele Martorului trebuie adaptate la necesitãþile individuale ale
laboratorului. Rezultatele probei pentru controlul de calitate trebuie sã se încadreze în
limitele stabilite de laborator.
CALCULAREA REZULTATELOR
Rezultatele sunt calculate automat de dispozitivul de analizã Konelab dupã cum urmeazã:
Activitatea în U/l = dA/min x Factor
Factor =
unde:
TV x 1000
⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
TV= Volumul total de reacþie în ml
SV = Volumul probei în ml
6.22 = Coeficientul de extincþie al NADPH la 340 nm
P = Lungimea eprubetei cu secþiune pãtratã = 1
Factor de conversie μkat/l = (U/l)/60
Înmulþiþi activitatea CK-B (U/l) cu 2 pentru a obþine activitatea pentru CK-MB (U/l).
LIMITELE PROCEDURII (6, 7)
Din cauza cantitãþii limitate de anticorp CK-M adãugat în reactiv, probele cu valori totale
ridicate ale CK trebuie diluate, astfel încât valoarea CK totale sã nu fie mai mare de 2000
U/l. Izoenzimele CK-BB ridicate sau macro-CK-BB atipice pot produce rezultate ridicate
false pentru CK-MB.
Interferenþe
Criteriu: Recuperare în interval + 10% din valorile iniþiale.
Bilirubinã conjugatã: Nu s-au gãsit interferenþe pânã la 650 μmol/l (38.0 mg/dl).
Hemolizã: Nu folosiþi probe hemolizate.
Lipemie: Nu folosiþi probe lipemice.
Pentru alte substanþe care pot interfera, vã rugãm sã consultaþi referinþa 5.
VALORI ESTIMATE (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Valorile menþionate au doar caracter indicativ. Se recomandã ca fiecare laborator sã
verifice acest interval sau sã elaboreze un interval de referinþã pentru populaþia pe care o
deserveºte.
INTERVAL DE MÃSURARE
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Interval extins de mãsurare dupã a doua diluþie:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
CARACTERISTICILE PERFORMANÞEI
Limitã de detecþie
7 U/l (0.12 μkat/l)
Limita de detecþie reprezintã cea mai micã concentraþie/activitate mãsurabilã care poate
fi distinsã de zero. Este calculatã ca fiind concentraþia probei zero + 3 SD (în cadrul
aceleiaş analize, n=24).
Imprecizie
În cadrul aceleiaş analize
Între zile
Total
SD
1.6
0.9
3.0
Medie
66 U/l
CV%
2.3
1.3
4.3
Medie
143 U/l
SD
CV%
3.0
2.2
4.1
3.0
6.6
4.7
Medie
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Un studiu asupra preciziei a fost efectuat folosind Konelab 30 într-un interval de 10 zile, cu
numãrul mãsurãtorilor n = 40.
Comparaþia metodelor
O comparaþie între acest reactiv CK-MB (y) şi un test disponibil din comerþ bazat pe
imunoinhibiþia subunitãþii CK-M (x) a dat urmãtoarele rezultate:
Regresia liniarã (unitate pentru rezultate U/l):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Rezultatele obþinute în laboratoarele individuale pot diferi de datele referitoare la
performanþã menþionate.
BIBLIOGRAFIE
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
4)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. 2431GIT Verlag
GmbH, Darmstadt, 1996.
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Konelab™ / T Series
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RO
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5)
6)
7)
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Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
PRODUCÃTOR
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
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CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
TENTO PRÍBALOVÝ LETÁK JE URČENÝ PRE KRAJINY
MIMO USA. AKÁKOĽVEK ZMIENKA SYSTÉMOV
KONELAB SA VZŤAHUJE AJ NA SÉRIU T.
POUŽITIE
Kvantitatívne in vitro stanovenie B podjednotky izoenzýmu CK-MB aktivity kreatín kinázy
(ATP: kreatín N-fosfotransferáza (CK), EC 2.7.3.2) v ľudskom sére, alebo plazme v
Konelab analyzátoroch. Všetky výsledky testov musia byť interpretované s ohľadom na
klinický kontext.
ZHRNUTIE (1,2)
Kreatín kináza (CK) je dimér zložený z dvoch podjednotiek, M (svalová) a B (mozgová).
Existujú tri rôzne páry podjednotiek: BB (alebo CK-1), MB (alebo CK-2), a MM (alebo CK3). CK-MB je prítomné do rôznej miery v srdcovom svale a taktiež v kostrovom svale.
Najväčšia CK aktivita v normálnom sére je kvôli CK-MM. CK-BB je obvykle prítomná
v sére v nízkych koncentráciách. CK-MB je prítomná v nízkych koncentráciách
v normálnom ľudskom sére, ale zvýšená v dôsledku poškodenia srdca a zriedkavejšie
kostrového svalu.
PRINCÍP METÓDY
Na určenie aktivity CK-MB je dostupných viacero metód. Toto činidlo využíva metódu
imunoinhibície pomocou polyklonálnej protilátky proti CK-M monoméru. Úplne inhibuje
aktivitu CK-MM a polovicu aktivity CK-MB. Potom sa testuje aktivita neinhibovaného CK-B
monoméru.
Kreatín kináza katalyzuje reakciu medzi kreatín fosfátom a ADP (adenozín-5-difosfát) a
tvorí sa kreatín a ATP (adenozín-5-trifosfát). Posledná zlúčenina fosforyluje glukózu na G6-P (glukóza-6-fosfát) za prítomnosti HK (hexokinázy). G-6-P sa oxiduje na 6-PG
(glukonát-6-fosfát) a súčasne sa equimolárne množstvo NADP (nikotínamid adenín
dinukleotid fosfát) redukuje na NADPH v reakcii katalyzovanej G-6P-DH (glukóza-6-fosfát
dehydrogenázou). Zvýšenie absorbancie pri 340 nm, ktoré je výsledkom vzniku NADPH je
proporčné k aktivite kreatín kinázy vo vzorke. (3)
CK
Kreatín fosfát + ADP ⎯→ Kreatín + ATP
HK
Glukóza + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
INFORMÁCIE O ČINIDLÁCH
Činidlo A: Substrát
Kód: 981373
na 10 x 10 ml
Kód: 981776
na 8 x 3 ml
Činidlo B: Pufer
Kód: 981373
10 x 10 ml
Kód: 981776
8 x 3 ml
Koncentrácie
v rekonštituovanom činidle:
Pufer (Imidazol)
104mmol/l
Kreatín fosfát
31 mmol/l
Adenozín-5’-difosfát (ADP)
2 mmol/l
Magnéziová soľ
10 mmol/l
D-glukóza
21 mmol/l
Adenozín-5’-monofosfát (AMP)
5 mmol/l
Nikotínamid adenín dinukleotid
fosfát (NADP)
2 mmol/l
Di(adenozín-5’)penta-fosfát (AP5A)
10 μmol/l
N-acetyl-L-cysteín (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Hexokináza (HK)
> 3500 U/l
Glukóza-6-fosfát dehydrogenáza
(G-6-P-DH)
> 2000 U/l
Anti ľudská polyklonálna CK-M protilátka (ovčia alebo kozia) dostatočná na inhibíciu do
2000 U/l CK-MM pri 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
Varovanie
Len na in vitro diagnostiku. Dodržujte normálne bezpečnostné opatrenia, ktoré sú
nevyhnutné pri manipulácii so všetkými laboratórnymi činidlami.
Činidlo obsahuje azid sodný ako konzervačnú látku. Neprehĺtajte/nepožívajte.
Zabráňte styku s pokožkou a sliznicami.
Príprava
Rozrieďte obsah činidla A s celým obsahom činidla B. Zatvorte nádobku a premiešajte.
Poznámka: Pred vložením nádobiek do analyzátora Konelab skontrolujte, či sa v hrdle
nádobky, alebo na povrchu činidla nenachádzajú bubliny.
Uskladnenie a trvanlivosť
Činidlá v neotvorených nádobkách sú stabilné pri 2…8 °C až do dátumu exspirácie
vytlačeného na štítku.
Informácie o stabilite činidiel nájdete v Používateľskej príručke vášho analyzátora Konelab.
Ak má čerstvé činidlo absorbanciu pri 340 nm vyššiu ako 0.700 pri meraní oproti vzorke
vody, tak ho nepoužívajte.
Ak má čerstvé činidlo zakalenie, tak ho nepoužívajte.
ODBER VZORIEK
Typ vzorky
Použite čisté nehemolyzované sérum, alebo heparinizovanú plazmu. Nevystavujte vzorky
silnému svetlu.
Varovanie
Manipulujte a znehodnocujte ľudské vzorky ako potenciálne infekčný materiál.
Uskladnenie (4)
Vzorka sa môže uskladňovať 2 dni pri teplote 20...25 °C, 7 dní pri 4...8 °C, alebo 4 týždne
pri -20 °C v tme.
TESTOVACÍ POSTUP
Automatický postup použitia analyzátora Konelab nájdete v manuáli a Používateľskej
príručke. Meranie postupom, ktorý nie je validizovaný firmou Thermo Fisher Scientific Oy
nie je garantované a musí byť vyhodnotené užívateľom.
Poskytnuté materiály
Činidlá popísané vyššie.
Materiály potrebné, ale neposkytované
Kontroly uvedené nižšie.
Kalibrácia
Výsledok (dA/min) sa konvertuje na výsledné jednotky pomocou prepočtového koeficientu.
Kontrola kvality
Používajte vzorky na kontrolu kvality aspoň raz denne a vždy, keď použijete novú fľašku
s činidlom.
Dostupné kontroly:
CK-MB Control, kód: 981908
CK-MB Control High, kód: 981255
Intervaly a rozmedzia kontrolných hodnôt sa musia prispôsobiť individuálnym
požiadavkám laboratória. Výsledné hodnoty kontrolných vzoriek by mali byť v rozmedzí
referenčných hodnôt laboratória.
VÝPOČTY VÝSLEDKOV
Výsledky sa vypočítajú automaticky Konelab analyzátorom:
Aktivita v U/l = dA/min x faktor
TV x 1000
⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
Faktor =
kde:
TV = celkový reagujúci objem v ml
SV = Objem vzorky v ml
6.22= Extinkčný koeficient NADPH pri 340 nm
P= Veľkosť kyvety = 1
Konverzný faktor μkat/l = (U/l)/60
Vynásobte CK-B aktivitu (U/l) dvomi a získate aktivitu CK-MB (U/l).
OBMEDZENIA METODIKY (6,7)
Pretože do činidla je pridané obmedzené množstvo CK-MB protilátky, vzorky s vysokými
celkovými hodnotami CK by sa mali zriediť, aby celková hodnota CK nepresahovala 2000
U/l. Vysoké CK-BB alebo atypické CK-BB makro izoenzýmy môžu spôsobiť falošne
vysoké výsledky CK-MB.
Interferencie
Kritérium: Návrat k východziemu stavu + 10% počiatočných hodnôt.
Konjugovaný bilirubín: Bez interferencie do 650 μmol/l (38.0 mg/dl)
Hemolýza: Nepoužívajte hemolyzované vzorky.
Lipémia: Nepoužívajte lipemické vzorky.
Ďalšie interferujúce substancie nájdete v Bibliografii č.5.
OČAKÁVANÉ HODNOTY (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Tieto hodnoty slúžia len ako smernica. Odporúča sa, aby si každé laboratórium
prispôsobilo rozsah referenčných hodnôt na konkrétnu populáciu.
MERACÍ ROZSAH
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Rozšírený merací rozsah po sekundárnom rozriedení:
22 - 2500 U/l (0.37 - 41.7 μkat/l).
PREVÁDZKOVÉ CHARAKTERISTIKY
Hranica citlivosti detekcie
7 U/l (0.12 μkat/l)
Hranica citlivosti detekcie reprezentuje najnižšiu merateľnú koncentráciu/aktivitu, ktorá sa
dá odlíšiť od nuly. Vypočíta sa ako koncentrácia nulovej vzorky + 3 SD (počas procesu,
n=24).
Nepresnosti
Počas procesu
Medzi jednotlivými
dňami
Celkovo
Priemer
66 U/l
CV%
2.3
1.3
SD
1.6
0.9
3.0
4.3
Priemer
143 U/l
CV%
2.2
3.0
SD
3.0
4.1
6.6
4.7
Priemer
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
Vykonala sa štúdia presnosti s prístrojom Konelab 30 počas 10 dní, s počtom meraní
n = 40.
Porovnanie metódy
Porovnanie medzi CK-MB činidlom (y) a komerčne dostupným testom založenom na
imunoinhibícii CK-M podjednotky (x) malo nasledujúce výsledky:
Lineárna regresia (výsledok v jednotkách U/I):
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Výsledky získané v jednotlivých laboratóriách sa môžu líšiť od daných prevádzkových dát.
BIBLIOGRAFIA
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; (ed.), Clinical Laboratory
Diagnostics; Use and Assessment of Clinical Laboratory Results, 1st edition, THBooks Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main, Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
4)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables; Preanalytical variables. Brochure in: Samples: From Patient to the
Laboratory. GIT Verlag GmbH, Darmstadt, 1996.
5)
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
6)
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
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7)
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
VÝROBCA
Thermo Fisher Scientific Oy
Clinical Diagnostics Finland
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Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
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CK-MB
981373
981776
10 x 10 ml
8 x 3 ml
DENNA BIPACKSEDEL GÄLLER UTOM USA.
EVENTUELLA HÄNVISNINGAR TILL KONELAB SYSTEMS
AVSER ÄVEN T SERIEN.
AVSEDD ANVÄNDNING
För in vitro-kvantitativ bestämning av B-underenheten i isoenzymet CK-MB av kreatinkinas
(ATP: Creatine N-Phosphotransferase (CK), EC 2.7.3.2) aktivitet i humant serum eller
plasma på Konelab-analysatorer. Alla testresultat måste tolkas med hänsyn till det kliniska
sammanhanget.
SAMMANFATTNING (1,2)
Kreatinkinas (CK) är en dimer sammansatt av två underenheter, M (muskulär) och B
(hjärna). Tre olika par av underenheter kan förekomma: BB (eller CK-1), MB (eller CK-2)
och MM (eller CK-3). CK-MB finns i varierande grader i hjärtmuskeln och även i
skelettmuskulatur.
Den större CK-aktiviteten i normalt serum beror på CK-MM. CK-BB finns vanligen i serum
vid låg koncentration. CK-MB finns vid koncentration i normalt humant serum men ökar
som resultat av hjärtskada och sällan skelettmuskulaturskada.
PRINCIP FÖR PROCEDUREN
Det finns ett antal metoder tillgängliga för bestämning av CK-MB-aktivitet. Detta reagens
använder en immuninhiberingsmetod med hjälp av en polyklonal antikropp till CK-Mmonomer. Det inhiberar CK-MM-aktiviteten fullständigt och hälften av CK-MB-aktiviteten.
Den icke inhiberade CK-B monomerens aktivitet analyseras sedan.
Kreatinkinas katalyserar reaktionen mellan kreatinfosfat och ADP (adenosin-5’-difosfat)
med bildande av kreatin och ATP (adenosin-5’-trifosfat). Den senare föreningen
fosforylerar glukos till G-6-P (glukos-6-fosfat) i närvaro av HK (hexokinas). G-6-P oxideras
till 6-PG (glukonat-6-fosfat) och samtidigt reduceras en ekvimolär mängd NADP
(nikotinamid-adenindinukleotidfosfat) till NADPH i en reaktion som katalyseras av G-6PDH (glukos-6-fosfatdehydrogenas). Ökningen i absorbans vid 340 nm som resulterar från
bildandet av NADPH är proportionell mot kreatinkinasets aktivitet i provet. (3)
CK
Kreatinfosfat + ADP ⎯→ Kreatin + ATP
HK
Glukos + ATP ⎯→ G-6-P + ADP
G-6-P-DH
G-6-P + NADP+ ⎯⎯⎯⎯→ 6-PG + NADPH + H+
REAGENSINNEHÅLL
Reagens A: Substrat
Artikelnr.: 981373
Artikelnr.: 981776
Reagens B:. Buffert
Artikelnr.: 981373
Artikelnr.: 981776
för 10 x 10 ml
för 8 x 3 ml
10 x 10 ml
8 x 3 ml
Koncentrationer
i det rekonstituerade reagenset:
Buffert (Imidazol)
104 mmol/l
Kreatinfosfat
31 mmol/l
Adenosin-5’-difosfat (ADP)
2 mmol/l
Magnesiumsalt
10 mmol/l
D-glukos
21 mmol/l
Adenosin-5’-monofosfat (AMP)
5 mmol/l
Nikotinamid-adenin dinukleotid
fosfat (NADP)
2 mmol/l
Di(adenosin-5’)pentafosfat (AP5A)
10 μmol/l
N-acetyl-L-cystein (NAC)
21 mmol/l
EDTA
2 mmol/l
Hexokinas (HK)
> 3500 U/l
Glukos-6-fosfatdehydrogenas
G-6-P-DH
> 2000 U/l
Antihuman polyklonal CK-M-antikropp (från får eller get) tillräcklig för att inhibera upp till
2000 U/l av CK-MM vid 37 °C.
NaN3
< 0.1 %
Försiktighetsåtgärder
Endast för in vitro-diagnostik. Vidta normala försiktighetsåtgärder som vid all hantering av
laboratoriereagenser.
Reagenset innehåller natriumazid som konserveringsmedel. Får ej sväljas. Undvik kontakt
med hud och slemhinnor.
Beredning
Lös upp innehållet i Reagent A med hela innehållet i Reagent B. Sätt på vialens lock och
blanda.
Obs: Kontrollera att det ej finns bubblor i flaskhalsen eller på ytan av reagenset då
behållarna placeras i Konelab-analysatorn.
Förvaring och hållbarhet
Reagenser i oöppnade vialer är stabila vid 2...8 °C fram till det utgångsdatum som är tryckt
på etiketten.
Se Application Notes för aktuell Konelab-analysator för information om reagensernas
hållbarhet i instrumentet.
Om det nyligen rekonstituerade reagenset har en absorbans högre än 0,700 vid 340 nm
när den mäts mot en blank med vatten skall du inte använda det.
Om reagenset är grumligt skall du inte heller använda det.
PROVTAGNING
Provtyp
Använd klart, icke hemolyserat serum eller heparinplasma. Utsätt inte proven för starkt
ljus.
Försiktighetsåtgärder
Humana prover ska behandlas som potentiellt smittförande, både vid hantering och
kassering.
Förvaring (4)
Provet kan förvaras i 2 dagar vid 20…25 °C, i 7 dagar vid 4…8 °C eller i 4 veckor vid
-20 °C, i mörker.
TESTUTFÖRANDE
Se referenshandboken och Application Notes för automatiskt utförande på aktuell
Konelab-analysator. Varje applikation som ej har validerats av Thermo Fisher Scientific Oy
kan ej garanteras vad gäller prestanda och måste därför utvärderas av användaren.
Bifogat material
Reagenser enligt ovan.
Erforderligt material som ej medföljer
Kontroller enligt nedan.
Kalibrering
Svaret (dA/min) omvandlas till resultatenheter med en omräkningsfaktor.
Kvalitetskontroll
Använd kvalitetskontrollprover minst en gång om dagen och efter varje kalibrering samt
varje gång en ny flaska med reagens används.
Tillgängliga kontroller:
CK-MB Control, artikelnr: 981908
CK-MB Control High, artikelnr: 981255
Kontrollintervaller och -gränser måste anpassas efter det enskilda laboratoriets krav.
Resultaten från kvalitetskontrollprovet bör ligga inom de av laboratoriet fastställda
gränserna.
BERÄKNING AV RESULTAT
Resultaten beräknas automatiskt av Konelab-analysatorn enligt följande:
Aktivitet i U/l = dA/min x Faktor
Faktor =
där:
TV x 1000
⎯⎯⎯⎯⎯6.22 x SV x P
TV = Total reaktionsvolym i ml
SV = Provvolym i ml
6.22=Extinktionskoefficient för NADPH vid 340 nm
P = Kyvettlängd = 1
Omvandlingsfaktor μkat/l = (U/l)/60
Multiplicera CK-B-aktiviteten (U/l) med 2 för att få aktiviteten i CK-MB (U/l).
PROCEDURENS BEGRÄNSNINGAR (6, 7)
På grund av den begränsade mängd CK-M antikropp som tillsätts i reagenset, bör prover
med höga totala CK-värden spädas så att värden för total CK inte överstiger 2000 U/l. Hög
CK-BB eller atypiska CK-BB-makroisoenzymer kan orsaka falskt höga CK-MB-resultat.
Interferens
Kriterium: Utbyte inom +10 % av initialvärdena.
Konjugerat bilirubin: Ingen interferens har konstaterats upp till 650 μmol/l (38.0 mg/dl).
Hemolys: Använd ej hemolyserade prover.
Lipemi: Använd ej lipemiska prover.
För andra interfererande ämnen, se referens 5.
FÖRVÄNTADE VÄRDEN (7)
< 25 U/l (< 0.42 µkat/l)
Angivna värden är endast avsedda som vägledning. Vi rekommenderar att varje
laboratorium verifierar detta område eller fastställer ett referensintervall för populationen
som gäller.
MÄTOMRÅDE
22 - 500 U/l (0.37 - 8.3 μkat/l)
Utökat mätområde efter sekundär spädning:
22 -2500 U/l (0.37 -41.7 μkat/l)
RESULTATKARAKTERISTIKA
Detektionsgräns
7 U/l (0.12 µkat/l)
Detektionsgränsen representerar lägsta mätbara koncentration/aktivitet som kan skiljas
från noll. Den beräknas som koncentrationen av nollprov + 3 SD (standardavvikelser)
(inom serien, n=24).
Imprecision
Inom serie
Mellandags
Totalt
SD
1.6
0.9
3.0
Medel
66 U/l
CV%
2.3
1.3
4.3
SD
3.0
4.1
6.6
Medel
143 U/l
CV%
2.2
3.0
4.7
Medel
264 U/l
SD
CV%
4.9
1.9
13.0
5.0
14.0
5.4
En precisionsstudie genomfördes med användning av Konelab 30 under 10 dagar där
antalet mätningar var n = 40.
Metodjämförelse
En jämförelse mellan detta CK-MB-reagens (y) och ett i handeln tillgängligt test baserat på
immuninhibering av CK-M-underenheten (x) gav följande resultat:
Linjär regression (resultatenhet U/l)
y = 0.96 x - 1
r = 0.993
n = 70
Resultaten som erhålls vid varje enskilt laboratorium kan skilja sig från angivna data för
prestanda.
REFERENSER
1)
Burtis, CA and Ashwood, E R (ed.), Tietz Fundamentals of Clinical Chemistry, 5th
edition, W B Saunders Company, Philadelphia, 2001, pp. 357-358.
2)
Thomas, L. (ed.), Clinical Laboratory Diagnostics; Use and Assessment of Clinical
Laboratory Results, 1st edition, TH-Books Verlagsgesellschaft mbH, Frankfurt/Main,
Germany, 1998, p. 73.
3)
Gerhardt, W and Waldenström, J, Creatine Kinase B-Subunit Activity in Serum after
Immunoinhibition of M-Subunit Activity, Clin. Chem. 25(7), pp. 1274-1280, 1979.
4)
Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. List of Analytes; Preanalytical
variables. Brochure in: Samples: From Patient to the Laboratory. GIT Verlag GmbH,
Darmstadt, 1996.
5)
Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, Fifth Edition, AACC
Press, Washington, D.C., 3-239, 2000.
© 2009 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved.
Konelab™ / T serien
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6)
7)
Wu, AHB and Bowers, GN. Evaluation and comparison of Immunoinhibitoin and
Immunoprecipitation Methods for Differentiating MB from BB and Macro Forms of
Creatinine Kinase Isoenzymes in Patients and Healthy Individuals, Clin. Chem.
28(10), pp. 2017-2021, 1982.
The Committee on Enzymes of the Scandinavian Society for Clinical Chemistry and
Clinical Physiology (SCE). Creatine Kinase (EC 2.7.3.2) Creatine Kinase B-Subunit
Activity in Serum in Suspect Myogardial Infarction. The Nordic Clinical Chemistry
Porject (Nordchem) Helsinki, Finland 1981.
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Tel. +358 9 329 100, Fax +358 9 3291 0300
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