UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA ESCUELA DE FORMACION DE PROFESORES DE ENSEÑANZA MEDIA-EFPEMCURSO: BIOLOGÍA I PLAN DIARIO PRÁCTICA No. 4 EXTRACCIÓN DE ADN I. INTRODUCCIÓN: Al principio se creía que las enzimas, eran la sustancia fundamental que determinada la herencia, debido a la estrecha relación establecida entre los genes y las enzimas. Sin embargo en 1944 el bacteriólogo canadiense Oswald Theodore Avery demostró que el ácido desoxirribonucleico –ADN- era el que desempeñaba esa función. Por aquel entonces se sabía que el ADN estaba compuesto por un grupo fosfato, un azúcar conocido como desoxirribosa y una de cuatro bases que contienen nitrógeno. En 1953, el genetista estadounidense James Dewey Watson y el británico Francis Harry Compton Crick aunaron sus conocimientos químicos y trabajaron juntos en la estructura del ADN. Esta información proporciono de inmediato los medios necesarios para comprender cómo se copia la información hereditaria en el ADN, que forma las bases de la herencia y la síntesis de proteínas. Cuando un científico necesita una fuente de ADN, esta debe ser extraída de las células que están siendo estudiadas, a través de tres etapas básicas: Lisis de la membrana plasmática, lisis de la envoltura nuclear y la separación del ADN del resto del material celular. Como las fibras de ADN son muy delgadas (mucho más delgadas que las hebras individuales de la tela de araña), la única manera en que se puede observar el ADN es teniendo una gran cantidad de él. II. OBJETIVOS:   Identificar la presencia de ADN en alimentos y en el organismo humano. Observar la estructura fibrilar del ADN. III. MATERIAL Y EQUIPO:  Saliva  Media libra de fresas*  1 Bolsa Ziploc*  Alcohol al 90%  Jabón liquido para trastos o manos*  Sal*  Bicarbonato de sodio*  1 bolsa de Hielo*  1 vaso plástico *  Palillos de dientes*  Gasa*  Vaso de precipitado  Vidrio de reloj *Material aportado por cada grupo de estudiantes IV. PROCEDIMIENTO:  Preparar una solución con los siguientes ingredientes y mantener en un baño de hielo triturado:  120 mL de agua.  1.5 g de cloruro de sodio  5 g de bicarbonato de sodio  5 mL de detergente líquido Enfriar en otro recipiente el alcohol a utilizar.  A. EXTRACCIÓN DE ADN EN FRESAS: 1. Coloque 3-4 fresas sin hojas dentro de una bolsa plástica (ziploc). Utilice su puño para triturar suavemente las fresas durante un minuto. Esto comenzara el rompimiento de las células (maceración). 2. Agregue 10 ml de la solución preparada al inicio, a la bolsa con fresas. 3. Presione la bolsa para remover el aire dentro de ella y ciérrela. Continúe triturando las fresas durante un minuto (Tratar de no generar demasiada espuma). Esto continuara con el degradamiento de las células y el núcleo. 4. Coloque un trozo de gasa sobre el vaso de precipitado y filtre el extracto de fresas. Una vez que el vaso tenga suficiente liquido (un dedo de altura es suficiente) termine la filtración. 5. Agregue suavemente la mitad del alcohol frio por las paredes del vaso al extracto celular. La capa debe quedar por arriba del extracto celular, de manera que se formen dos distintas capas. Observe el material formado en la interfase de las capas. 6. Con ayuda del palillo, extraiga el material de la interfase, deposítelo en un vidrio de reloj, obsérvelo y descríbalo en la hoja de resultados. B. EXTRACCIÓN DE ADN EN SALIVA 1. Poner un poco de agua en un vaso desechable y enjuagarse la boca enérgicamente durante al menos medio minuto. Es conveniente enjuagarse la boca varias veces antes de hacer el experimento para eliminar los posibles restos de comida que puedan interferir en el resultado. Con el movimiento del agua en la boca se desprenden algunas células de las mejillas. Escupa el agua en el vaso nuevamente. 2. 3. 4. 5. 6. Agregue 10 ml de la solución preparada al inicio, al vaso con el agua del enjuague. Deje actuar durante unos 10 minutos, removiendo de vez en cuando suavemente para disolver estos componentes evitando la formación de espuma. Así se descompondrán los varios cientos de células de las mejillas existentes y se soltará el ADN del núcleo. Incorpore con cuidado la otra mitad del alcohol frio en el vaso. El alcohol se debe de echar de forma que vaya resbalando por las paredes del vaso Observe el punto en que se juntan las dos capas. Quizás vea cómo se forman hilos de ADN, como filamentos nubosos que se estiran hacia la capa superior (alcohol). El ADN no es soluble en etanol, por lo que cuando el alcohol se encuentra con la solución de ADN empieza a precipitar Se observa que aparece una hilera de burbujas más pequeñas que las de champán, unidas por un hilillo casi imperceptible, esponjoso, blanquecino. ¡Ahí está el ADN! Con ayuda de un palillo, extraiga el material de la interfase, deposítelo en un vidrio de reloj, obsérvelo y descríbalo en la hoja de resultados. V. CUESTIONARIO A. Explique y esquematice las diferencias y similitudes entre las estructuras del ADN y el ARN. B. Investigue otras técnicas que se utilizan para la extracción del ADN. C. Explique y esquematice el proceso de replicación del ADN. VI. BIBLIOGRAFÍA Audesirk, Teresa & Gerald Audesirk, Biología La vida en la Tierra. Pearson Educación, México, 2008. Ville, Claude, Biología. Editorial Interamericana Mac-Graw Hill, México 1992 UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA ESCUELA DE FORMACION DE PROFESORES DE ENSEÑANZA MEDIA-EFPEMCÁTEDRA DE BIOLOGÍA CURSO: BIOLOGÍA I NOMBRE: _____________________________________________________________________CARNET: ________________________ EXTRACCIÓN DE ADN HOJA DE RESULTADOS C. EXTRACCIÓN DE ADN EN FRESAS: DIBUJO MUESTRA EXTRAÍDA DESCRIPCIÓN D. EXTRACCIÓN DE ADN EN SALIVA: DIBUJO MUESTRA EXTRAÍDA DESCRIPCIÓN ANÁLISIS: Leer los siguientes planteamientos, investigar y responder analizando los resultados obtenidos en la práctica: 1. ¿Qué función tiene el detergente en la solución buffer? __________________________________________________ __________________________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________________________ 2. ¿Qué similitudes o diferencias se encuentran en las dos muestras?___________________________________________ __________________________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________________________ 3. Los científicos investigadores que están tratando de determinar la causa de desordenes genéticos intentan practicar la extracción de ADN de tejidos humanos diferentes a la saliva. Cree usted que el método utilizado, ¿seria similar o diferente al método utilizado en esta práctica? Explique su respuesta. ____________________________________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________