פוליםכרידים במעטפות מ י ק ר ו א ו ר ג נ י ז מ י ם ,שבודדו ממקוי מים ח ב ו ר לשם ד ו ק ם ו ר ק ב ל ת ת ו א ר ל פ י ל ו ס ו פ י ה מאת צבי נבו הרגש ל מ ו ע צ ה נ י ס ן ה מ ד ע י ת תש כ"ס של מ כ ו ן ו י צ מ ן ל מ ד ע , א פ ר י ל ר ח ו ב ו ת 1969 פוליםכרידים במעטפות מ י ק ר ו א ו ר ג נ י ז מ י ם ,שבודדו ממקרי מים חבור לשם דוקסור קבלת תואר לפילוסופיה מאת צבי נבו הוגש למועצה ניסן ה מ ד ע י ת של תש כ " ם מכון ויצםן למדע, רחובות אפריל 1969 עבודה לביוכימיה שרון נתן דלף ודייר לביוכימיה רחובות. ז ו נעשתה במחלקה פר1פ' ב ה ד ר כ ת ם של , מהמחלקה ל ב י ו פ י ס י ק ה פ י ס ג י ל מהמחלקה ו י י צ מ ן למדע, -מכון ת ו ד ת י נ ת ו נ ה לפרופ־" נתן על הדרכתו המסורה ועזרתו בכל שלבי ה ע ב ו ד ה . שרון המתמדת כץ נ ת ו נ מ ת ו ד ת י ל ד ״ ר ו ל ף פ י ס צ ׳ ל על ה נ ח י ו ת י ו ה נ א מ נ ו ת בחלקה ה ר א ש ו ן של ה ע ב ו ד ה ,ו ע ל ה ת ע נ י נ ו ת ו ו ע ד ו ד ו הרב. לתודה ר א ו י י ם עמיתי במחלקות ו ה ב י ו פ י ם י ק ה ,על הביוכימיה בשלבי העבודה ה ש ו נ י ם . ל ה ו ד ו ת גם ברצוני ו ת ה ״ ל ש מ י מ נ ו חלק עזרתם לחברות מקורות נ י כ ר ממחקר ז ה . לנאוה ולהורי היקרים תוכן הענינים עמוד 1 מ ב ו א חלק א; פוליסברידים במעטפות חיידקים פרק א!י סקירת ספרות פוליסכרידים בתאי החיידקים מבנים ושכבות במעטפות החיידקים פוליסכויויס קפסולריים מחיידקים המצטברים בקרקעות _ב_ :חסרים ,מכשור ושיטות פרק ג :נסיונות ותוצאותיהם א :אבחון פוליסכרידים בקטריליים כגורמי הסתיימה ,בעמודות חול דרכן הועברו קולחין סינתטיים ב :ברוד ואפיון הפוליסכריד הקפםולרי םפלוובקםריום הגדרת החיידק בעל ההפרשה המןקואידית .1 גורמים המשפיעים על יצירה ופרוק של 2״ הפוליםכריד הקפסולרי שיטות הבדוד והנקוי של הפוליםכריד .3 הקפםולרי בדיקת ההומוגניות של התכשיר המנוקה .4 של הפוליסכריד ההרכב הכימי של הפוליםכריד המעספתי 5״ םפלוובקםריום המבנה של הפוליפכויד המעםפתי .6 מפלוובקטריום מקום הפוליסכריד במעטפת הפלוובקסריום .7 בעזרת מחקרים אימונולוגיים ג :ביודגרדציה של פוליסכרידים 2 4 12 14 22 30 30 35 39 46 58 62 64 פרק ד :דיון פוליםכרידים כגורמי סתימה של נקבוביות הקרקע ,בקרקעות המשמשות למנון מים גורמים המשפיעים על היצירה והפרוק של הפוליסכויד הקפסולרי מפלוובקסריום 74 77 הע נ י נ ים תוכן 2 - עמו ד של ההרכב ו ה מ ב נ ה מפלוובקסריום ה ב י ו ד ג ר ד צ י ה של במעטפות מפלוובקסריום 78 82 חלק ב: פרק סקירת ספרות ה: ה ר כ ב ה ש כ ב ו ת ב מ ע ט פ ו ת ה ת א י ם של ומבנן ד ג ר ד צ י ה א נ ז י מ ט י ת של פ ו ל י ס כ ר י ד י ם מ מ ע ס פ ו ת אצות מ ט ר ד י ם ב ג ו פ י מ י ם ,ה נ ג ר מ י ם ע יי י פ ו ל י - סכרידים ם ם ר ו ק ם ו ר ל י י ם מאצות 91 פרק ו: ושיסות 95 פרק תוצאות ז: הכנת הדפנות מאצות ה פ י ר י ד י נ י ו ם ה ה ר כ ב ו ה ת כ ו נ ו ת של ד פ נ ו ת ה פ י ר י ד י נ י ו ם מבנה ה פ ו ל י ג ל ו ק ן מ ד פ נ ו ת ה פ י ר י ד י נ י ו ם א נ ז י מ ס י ת של ה פ ו ל י ג ל ו ק ן דגרדציה פרק פוליסברידים הפוליסכריד הפוליסכריד הקפסולרי האצות 84 האצות ח: חמרים, יי יז תקציר מכשור 86 90 100 103 109 119 120 127 רשימת ספרות תקציר באנגלית 131 I מבוא כללי הצעדים מרכבות, כוללים המידע שנתעוררו מי כלל לשכבה תופעת הסתימה מי זה באזור מים, מהצטבר ו ת ' א צ ות גורמים משותפים חיידקים במאגרים. מהוים המחקר את הכרת את ה מ ט ר ה ה מ י ם של בדבר, המזכרות המרכזית בעבודה א. פוליסכרידים ב. פוליםכרידים במעטפות א צ ו ת . השליליות המזכרות מעשיות, בעיות המעשרים דרך נסתםות החול דיונות נקבוביות הקרקע. המוביל במישרין מוליך הארצי. מים. הגורמים המוגשת לעבירות, טעמים אלו. למסקנה ,כי באספקת המאגרים ובעקיפין סובלים פוליסכרידים פוליםכרידים ממעטפות להצטברותם, בזה. בהתאם לכך ממעטפות האצות ודרך מהויסי* המצטברים פרוקם פוצלו האנזימסי, כווני חיידקים. קטעים במקוי גשלמותה. ה מ ק ו ר ו ת הם: הקולחין הקולחין במקורות אלו, במעטפות שובצו מתוך בישראל. ב נ ק ב ו ב י ו ת החול ,ו פ ו ל י ס כ ר י ד י ם זו בכל החדרת החדרת הגורמת פוליםכרידים המערכת הצטברות ההחדרה. לשניים: חלק עוצבו עם בשכבת ה פ ל י א ו פ ל י ס ס ו ק ן , תהליך בקו הנוגעת שמשימותיה כולל א י כ ו ת המים לבעיות המצטברים בעבודה תהליך ההעשרה פשוטים. ל א ו ר ם את קונבנציונליים החוף, וקזאריותיהן, בספרות זו, המצויים המשובצים ומורידה עיון ממקורות תוך חלקיים לסכמםולנתח בעבודה כדי להכרת לתהליכים נתן מ ו נ ע ת את המשך המאגרים וריחות, המערכות נהגנו מטוהרים, נושאת במחקר הבודדים, בהספקת מ י ם תהום בקולחין ב. פרוק בתהליכים לפי א. הראשונים ביוכימי מערכות ותופעות סבעיות העוסקים המים, בהכרת ובתהליכי האורגניזמים המפתח האחראים הביוכימיים לתופעות המוליכים לתופעות אלה״ מובאות כנציגים למחקרים בלמוד ופרוק ההנמקות אנזיםטי של נסתמנה גם העבודה אנזימטי ל ב ח י ר ת החי׳יידק j המעבדתיים נושאים JFlavob'acterium sp.ו ה א צ ה ; אלו בשני נתקלנו פוליסכרידים אפשרות בפוליםכרידים כווני בבעיות _ בסיסיות גורמים ו ז א ת על — — — ^ — — — - — המחקר. סטרוקטורליים להבהרת אלה, — Peridinium westit הקשורות ביצירה, בםיקרואורגניזםים. המקנים עמידות יתר ההרכב והמבנה הכימי בסיס אפיון במהלך פרוק בפני והפיםיקלי שלהם. בעקבות עד להשלכה על להצביע טורליים חלק א פרק אי" T האופי מעשית התרכזות אצות במקוי - סקירת ספרות קשר אחד במעטפות בתאי בשכבות ד ו מ ה של ח־&רים בלבד הצטברות או העלמות הקוים העשויים פוליסגרידים סטרוק וכן אחד גבה קשרים קימת בשטחי בשכבות החיידק ח י צ ו נ י ו ת של תאי ),1 במעק.פות )הופופוליסכריריק(, •*ומבנה מ ר כ ב י ם עם מסועף, החיןיוניים, ),1 בעלי־חייס מצוי• מולקולריים שונים בעקר הפנים ה ב ו נ ו ת את מ ע ט פ ת ברקמות פוליםכרידים סוכר לפוליםרים )הטר ו פ ו ל י ם כ ר י ד י ם ( , השונות הבינתאי של המכילים מתרכזים פוליםכרידיים בחמר ומגוון חיידקים החיידקים סטרוקטורליים םפוליסכרידים ממצאיה, םודגשים בהסתייגות והפ)רחק מים. - רחב הטהור המווסתים פוליסכרידים וצמחים, טווח י ש י ר ה של המנגנונים פוליםכרידים כאלמנטים המעבדתי של מרבית שלבי העבודה, הרב פטריות, .(2 החיידקים הקשור מרכיבים דרך .(2 בסוג ),3 ,(4 ובספום םוכריים פוליםכרידים רבים הקשורים ל פ פ מ י ד י ם ח ל ג ו נ ים קוולנסית או f שומנים וליפופוליסכרידים הקשורים לחלבון(. במעטפות החיידקים ם ר מ ז ת על םכרידים אלה לא רבים, רק לכימאי בעיקר ולבקטריולוג, הרפואה בתחומי חשובות של נוכחות מקר ו מ ו ל י ק ו ל ו ת אלו החיידקים על מלמדים היחוד השכבות השונות מעטפות החיידקים והפיםיקלי, כמו במעטפות, ).(1 בתפקוד ה א ק ס ו ב י ו ל ו ג י ים משיירי א ל א אף היחוד סוכרים רק לא למקויד נןעםפות המתרחשים ענין ולרופא על וכשרם ההתענינות, ביון בין שטחי לבין מחקרים ה ב ו נ ו ת את ה ב ו נ ו ת את בהרכב, במבנה ) ,(13-11וכן הפנימ מחקרים תכונות החיידקים. המונומריות החיידקים בפוליסכרידים האימונולוגי, במקרומוליקולות הפולי- ).(7-5 תלות במעטפות ב י ח י ד ו ת המבנה גרם ה ב י ו ל ו ג י של ),1 לאימונולוג ) ,(10-8הצביעו גוניות, (1.6-14 תפקידם ) ל ו ק ל י ז צ י ה ( של וחשיבותם. ה א ל י מ ו ת שלהם עשויות והרב עצם א ל א אף והחסון מידת )גליקופפטידים, ההתרכזות גליקופרוסאינים הכימי בתהליכים וחםרים החיצוניים * או אורגנזמ0ם פגי״ים, מהחוץ, bacteriocins צבעים כספיחת ההתקדמות נתאפשרה ומבנה תודות בעזרת השונים של ותהליכי הרבה לפתוח שהושגה המעטפות, ומיקרוסקופיה נוגדנים בהרכב המעטפות, ושמוש של הח י י ד ק י ם . קוניוגציה בשנים שיטות ספציפיים מעטפות, ספציפיים - ,(mating נוגדנים, ותהלי.כים בלתי ספציפיים וקטיונים. כ י מ י י ם של אנליטיות, בתהליכים )אינטראקציה עם בקםריו- האחרונות חדישדת: ש י ט ו ת הפרדה )מיקרוסקופ שחוברו שמוש בחסדים שיטות בהכרת לבדוד, באנזימים אנס^ביוסיים נקוי כר ו מ ס ו ג רפ י ו ת , אלקטרוני(, לחומר ה מ ע ט פ ו ת של מיקום פלואורוסצנטי, מנוקים בעלי בפניצילין החיידקים, ו ק ב י ע ת הרכב םכניקות אנטיגנים ע ב ו ד ו ת עם פעילות הפוגעים מיקרו- במעטפות מוטנסים סינתטית בםינתזת וליסית דופן התא 4מבנים ושכבות נהוג קרום או לכלול בםעםפת הבסיסית החיידק. ;־! הבנויות מהמבנים מבנים (3 שאלה מרכזית בחקר בחיידקים ^ H. h a l o b i u m התארגנות ממבנה פשוט ביותר radiodurans חוקרים הגדול כתגובת רבים לתפקוד המוטל )פשטות במבנה( חיוביים בצברי ח י י ד ק י ם של ובראשם החיידק. התאמה של התא כחייץ ה פ ר י מ י ט י ב י של ברובו על ההנחה לסביבה. המגן עזרה ה מ מ ב ר נ ה של החיידקים היסודות בידוד יעילה ),17 (18 ^ ביותר בגרם בין מעטפות שליליים, רק להפרדת מחלקת ה - הקליטה הפרוסופלסט(. ה־ המרכב' • .Bacillaceae ההתארגנות השכבות ),22 ,(23 חמרים ( K a l c k a r לסביבת ב מ ע ט פ ו ת בא הקניית ו ה ה פ ר ש ה של מעבר Micrococcus עצוב ה ס ב י ב ה לתא (15 הארגון ברמת שרבוי המעטפות הוא בין בעוד השוני הובחנה החיידקים. Lampropdia מ י ח ס י ם את ומתווך הונחו ה , ( M y c o p l a s m a(21-19- ) (19של תפקיד בשכבות Halobacterium salinarum הבסיסית היא, בוםות ו ה ן של ), (,a מ ת י ח ס ת לסיידת ה א ח י ד ו ת hyalina ,(Salton(19 כדופן הטפוםים. לגישת יותר ובמעטפות והמזוו?ית לימוד הנמוכה ה־ לרוב זו בחיידקי למרכב ליפופרוםאי נ י. למיניהן. שיטת האנדוספורות לתא, קבוצות הלופילייםיכ- וכן ה מ ב ע י ת של סטרוקסורלי עת הקרום (1 הציטופלסמתי externa l - m u l t i p l e - t r d t k החיידקים, פותחה חומר ממוקופפסיד במבנה. בפרזיטים בגרם נלמד מעטפות בעיקרו layer16 הקפסולות המופיעות החפישים, , הבנויה ה ס פ צ י פ י י ם ה ן של אלה המעטפות. עשוי הפלסטיות כוללים בראשית זה הצפופה, גם את שנות ה ח י י ד ק את ה ש כ ב ו ת ה ב א ו ת : קרום השכבות ובמקרומוליקולות רמת החיידקים הפרוםופלסם. השכבה (2 במעטפות - וייצוב בנוסף )תפקיד טוען שהמבנים / - בריאקציות המגיבים מתבטאת מכאן, באספקטים שפשטות ״סוציאליים" המבנה 5 אקסובי ו לו ג י ו ת קשורה - הנם לגבי מותרות של התנהגות התאים בסביבה חיצונית התואמת התא וחיוניותם כפרס, באינטראקציות דרישות את הסביבה. עם של היציבות הפרוטופלסט. תוצאות מחקרים ימי ומלתה(, מעידים תאי רבים על במעטפות קיום החיידקים מוקפים בשכבה פפטידוגליקן(. שכבה נוקשה לעצוב בין צורת תכולת התא הגליקופפטיד ) (osmotic fragility מבנים ספציפיים בנגוד בין לדמיון קבוצות חיידקים שונים המבנה הבסיסי בכל בסיסית הבנויה מגליקופפטיד זו ומיצבת ),(25 מביוםופים מקנה את במעטפות את התא החוזק כיחידה חיידקים מעטפות המכני החיידקים ),13 עמידותם ).(24 )מזקופפסיד מטבולית. לבין )יבשתי, אחראית ,(23 נמצא םתאם בשבירה או גבוה אוםמוסית ).(23 הרב ,ב מ ב נ ה הבסיסי והשוני עם החיידקים, גדל של החיידקים, המרחק גדול שונה המבנה הפיייליוגנטי. הספציפי הבדלים " 1י בולטים בתאור קיימים סכמסי החיידקים בין של שתי המקרומולקולות נתן להבחין: ,(26 לדוגמא: ),3 ,19 ה־־ Micrococcus קבוצות וה- א( או ל ח ל ב ו נ י aי ה נ פ ו צ ו •••rt׳ ב - הנם יוצאי את תמצות הגרם המבנים חיוביים, הנפוצים ^ . Corynebacterium ה- הדופן הגרם פוליסכריזדים ^. Staphylococcus שבין מבני החיידקים הבונות הגרם טיכואיות Streptococci חיוביים העשויים בקבוצות חלבונים ) פשוטים חיוביים,בהם של פשוטים ,Streptococci הנפוצים הנלוות ^. Staphylococcus פוגשים מעטפות מפולימרים ה- ( t e i c h o i c acids ו ב- והגרם הספציפיים שליליים. בקבוצות לפול.יסכרידים ה Mycobacteria - בגליקוליפידים ואף בפפטידו-גליקוליפידים. בקוםפלקסים סכרידים, של והמבנים התגלו המבנה מוצעים בעוד פוספט קשרי לב מבני הקפסולות הקפסולות הסרופולימרים ,, a n t h r a c i s מצטיינות א. של ב. די־־אסטר ה ת ר כ ז ו ת הפרק בו בשכבות מוקדשת הקשרים שני בסקירה בתמרים זו בין המבנים. )בעבודות פנימיות והספציפי החיוביים מקרומוליקולות כליפופולי- ),7 בחיידקי המבנה הבסיסי חמרים מהמבנים א י מ ו נ ו ל ו ג י ו ת( .(11 קשרי גרם שליליים ),1 מימן ),(29 ).(30 לקפםולות בחיידקים, כל זאת קפםולריים. למיניהן ,11 ),3 בנויה מורכבות .(12 הקפסולה ריריים, )נהוג לרוב קיימים יוצאים מן הכלל מ פ ו ל י פ פ ט י ד של חמצה המאורגנים לסווג םפוליםכרידים, לצורה בצורות זו את הבאות המבנים הומופולימרים, או כ ב מ ק ר ה של ה Bacillus - ס-גלוסמית. הקפסולות ),11 :(12 הספציפיים כ־ ם-אנםיגן הליליים(. ג. שכבה ד. חמרים ,(28 ) נ ר ת י ק י ם -ק ו פס י ו ת ( כתמרים קפסולה בין בגרם של שליליים, ).(27 החיידקים הבסיסי הנסיוני מיקרוקפסולה הגרם כמבוי המבנה מיוחדת האנטומי ה פ נ י ם של מצוי, בין הכוללים האחר ו נ ו ת .משמשי ם ומקומם בשטחי הבסיסי כמקשרים תשומת בשל מחקר ופוםפוליפידים בשנים הספציפיים, הספציפיים ה ס פ צ י פ י י ם של חלבון-פוליסכריד-ליפיד, ליפופרוסאינים כנושאי בעוד ב( במבנים הגרם נבחין קומפקטית. ד י בק י ת ) המפרשים הקפסולות . (loose diffused layer,slime אל מ ח ו ץ לתא לשכבות האחרות ) . ( g u m s , e x t r a c e l l u l a r substances במעטפת שנויה במחלוקת ),11 מ ד ת הקשר .(12 אשר לקפםולות כחסרות יםופלסמסי המופיעות קשר אף בחתכים ) 50-100 לתא. אך הנבחנים בין לתא החיידק מיוחדים־ הפעילויות תכונות החמרים רבים אסםרימ סולפטיים אמינו־-מוכר התנהגות כבופר מאידך לשמש מצטיינים לאתר ויותר. את נהוג האחרונה, האחרונות פרוטופלססים ובאי הוכיחו בתמיסת עד המעברים היה ח י ו נ י ו ת של סוכרוז, הקרום בין המיקרוקפםולה לציין אף את קיים אי המהות כהבדל הראשונה הדופן חיוניות ה מ מ ל א י ם את כ ל ותפקידם פניהם השלילית ופוםפםיים. חפשי, מעטפות ).(33 מכאן כמחליפי יונים הפולימרים מהיר של נתרמת לא כמו מנוכחות נתקלים שאין התנהגותן המעטפות סלקטיביים. מחד, של ש י י ר י ם של המכילים פטריות המיום קבלה ש י י ר י ם של פוליאלקסרוליסיות לחומרים ה ג ב ו ה של מ ה י ר ה של אורוניות ).(32 מערכות אערםיות חמצות ה ה י ד ר ו פ י ל י ו ת היא הפנים. ואי פוליםכרידים בפוליסכרידים במקרה של מספר תואמת בשטחי מים החיצוניים מצויים הטעונים העוברים, תכונה אלא נוספת ה פ ו ל י מ ר י ם משמש מים אחרי יבוש ).(12 הפולימרים בע״ח & 24)0 בשנים התאים הפסד כה כי קשי השלם(. אמין פו לי-אנ י ו נ י ות לאי אולם הטעינה עם האלקטרוני, ב ח י ו נ י ו ת של ה ח י י ד ק י ם שבשטח שלילית בהם ל- הקפסולריים ).(31 עשויות להגיע )קבלת של התא נ מ צ א קשר הדוק, ( ,שכבת ה ג ל י ק ו פ פ ט י ד ) &253־־0כ,(2 והדופן ),(12 , extracellular substancesנ ה ו ג המקרים במיקרוסקופ העשויות הקפסולה slime במרבית K והקפםולות בתנאים כ- וכ- לראותן ביצירת נוגדנים בשטחי הפניםכאנםיגנים ספציפיים, וביצירת טובים, ליזינים גורמים לתגובה בריאקציה ברקמות המשלימה ) של . (complement reaction ההרנע; ה מ ב נ ה אחד בפני ומקום מהתפקידים פגוציטוזיס תפקידים בתפקידי למיניהן. ,(35 תלכוד הקנית הקפםולריים החמרים ובקטריופגיים מיוחסים תאים לנצל זו ).(34 ה ח ש ו ב י ם של ),12 כמו׳ כן זו האנטיגנים נוספים סכוך, תכונה מאפשרת טכניקה ללמוד מפורט לחמרים בודדים נוקשות הוא ועצוב הקנית ).(36 הקפסולרייםן לצבר עמידות ),(12 .בולמי ובמגינים )(37 צ ו ר ת התא זעזועים, קרינות בפני ת פ ק י ד שיחם בלעדית לגליקופפטיד. מאז מקפת על ספרם של פוליםכרידים בקבוצות הסקירה חיידקים של של על של החיידקים ),2 מרבית יתכן )(8 על פ ו ל י ס כ ר י ד י ם של הסטרפטוקוקים חדשים בחיידקים ,13 ).(4 ),(26 נכתבו מקצועית או זו ספרים בעולם אחרת.. פנוימיקיקים, ה א נ ד ו ט ק ם י נ י ם של שנתגלו ),(39 ס ק י ר ו ת על פוליבכרידים הצומח ומאמרים הגרם והחי כלל על לדוגמא: ה ס ק י ר ו ת על שליליים ),(4 ),(38 הביוסינתזה במעטפות החסרים .(19 חמציים, ה נ פ ו צ י ם הם גלוקורונית מסוימות, או חתך מזוית הפוליסכרידים הטרופולימרים סוכר במעטפות פוליםכרידים פוליםכרידים ו Barker-שהופיע החיידקים, *\1-10וחבריו פוליסכרידים הסקירה Stacey ב1960- העוסק )(3 בסקירה הקפםולריים המרכבי,ם משניים שבודדו עד בשנים ארבעה שיירי ה -ם -ג ל ו ק ר ז ,דיי!ם־׳גלקטוז ,ה *-D,-מנוד-, בעקבות וחלק םהמוגדרים מאחר ועבודתנו הקשיים בודהא הגדולים כהםר ו פ ו ל י ס כ ר י ד י ם הם זו עוסקת בפוליסכריד האחרונות, סוכר הנם שונים. ה ־ cn-Lנו ז , והחמצה ה ה ו מ ו ג נ י ו ת של ש י י ר י ה-ס- פוליםכרידי ת ע ר ו ב ת לול .ה ו מ ו פ ו ל י ם כ ד י ד י ם . חפצי, נציין את ה ע ב ו ד ו ת החדשות וי העוסקות.בפוליםרים דומים מחי י ר ק ים .ש ו נ י ם. להלן בסבלה רשימת החיידקים \ - 9מםעםפותיהם שם הופקו לאחרונה ה ס ו כ ר י ם ה מ ר כ י ב י ם את ה פ ו ל י ם כ ר י ד ש נ ו ד ד ממעטפת ה ח י י ד ק החיידק Pseudomonas ^ a e r u g i n o s a I פוליםכרידים חמציים. I II X a n t h o m o n a s campestris Azotobacter vinelandii Azotobacter chroococcum Azotobacter indicum Azotobacter agilis Rhizobium m e l i l o t i Chromobacterlum violaceum A l c a l i g e n e s f a e c a l is Escherichia c o l i Klebsiella pneumoniae A e r o b a c t e r aerogenes S e r r a t i a marcesens A r t h r o b a c t e r viscosus ח מ צ ה מ נ ו ר ת י ^ חמצה ג ו ל ו ר ו נ י ת , גלקטוז ,סנוז ,רםנוז, גלוקוז, חמצה ג ל ק ס ו ר ו נ י ת . ג ל ו ק ו ז ,חמצה ג ל ו ק ו ר ו נ י ת , מנוז, חפצה פ י ר ו ב י ת . חמצה ג ל ק ם ו ר ו נ י ת ,ג ל ו ק ו ז ,ר מ נ ו ז , חמצה מ נ ו ר ו נ י ת . ג ל ק ט ו ז ,חמצה ג ל ו ק ו ר ו נ י ת , גלוקוז, מנו ז. א ל ד ו ה פ ס ו ז ,חמצה א ו ר ו נ י ת . גלוקוז, ר ם נ ו ז ,חמצה ס י א ל י ת . גלקטוז, ג ל ו ק ו ז ,חפצה ג ל ו ק ו ר ו נ י ת ,ג ל ק ט ו ז , פנו ז. רמנוז, גלקטוז ,קםילוז ,ארבינוז, פוקוז, חמצה ג ל ק ס ו ר ו נ י ת . ג ל ו ק ו ז ,חמצה ם ו ק צ י נ י ת . ג ל ו ק ו ז ,פ ו ק ו ז ,חמצה גלקסוז, גלוקורונית. מנוז ,גלקסוז ,פוקוז ,רמנוז, גלוקוז, חמצה א ו ר ו נ י ת . ג ל ו ק ו ז ,חמצה ג ל ו ק ו ר ו נ י ת ,מ נ ו ז ,ר מ נ ו ז , חמצה י י ס נ ו ר ו נ י ת . הפטוז ,גלקסוז ,מ נ ו ז ,רמנוז, גלוקוז, ג ל ק ס ו ־ ז א מ י ץ ,חמ*־ה גלוקוזאמין, גלוקורונית. ג ל ו ק ו ז ,חמצה מ נ ו ר ו נ י ת . גלקסוז, ה ח י י ד ק ( S p h a e r o t i l u s natans (51 חיידק זה בודד ממים חיידק זה מרכב מפוקוז, המצויים במים המשמשים לטהור עשירים מים(, המקור בספרו ת מזוהמים הם העשירים גלקסוז בחמר נודע והמצה אורגני בעלי בהפרשה בחומר אורגני״ גלוקורונית. )בטפולי הפרשות ח ז ק ה של מוקואידיות )(41 )(42 )(43 )(44 (45). )(46 (47). )(48 )(49 )(50 פוליסכרידים. ה פ ו ל י ס כ ר י ד של רבים ש פ נ י ך או )(40 מהחיידקים במסנני חזקות. חול שיטות פוליסכרידים להפקת ־טכניקות ממעספות חמרים בעלי שכבת בין פיסיקליות, החיידקים. הגליקופפטיד השיטות הרצוי, נערך או אולטרא סוני(, טפולי הקפאה והפשרה ),(52 של )סוני או או גליקול, לקבלת ופלח אתילן לרכוז החומר סכרידים, בנגוד תכשירים נקי סלקטיבי, ע ו ל י ם של כאולטרה דיאמין דרושים אתנול, והפרדות צנטריפוגה לחלבונים, הומוגניים, התאמת ה ש י ט ה זמן המצוי שלבים גרעיניות, שומנים אם ההיפך, ואפר, עמודות. הפוליםכרידי ואלקטרופו־רזד. ., בדרך כלל הגודל ל ה פ ק ת החמר נוספים השקעת כאן המקום פולידיספרםים, המולקולרי. בה על-ידי האחרים, וכקוספלקםים השלב באמצעים הממצים ),(53 והטמפרטורה החומרים וםפולים סוי- הכוללים: כ ד ו פ ס ו ג ר פ י ו ת על מבחינת פורםאמיד אמצעי כלליות, בין החמצה צ י ט י ל -פ יד יד י נ י ו ם -כ ל ו ר יד התכשיר הנם .(31 בסיסיות, שונים. כל תמיסות עמוד טםרא-אצטט, הממצה, או ביניהם )3 ח מ צ י ו ת או ח ל ב ו נ י ם ' ,חמצות באופן בריוס מסוימת ודטרגנטים פוליסכריד שאריות , 9 תמיסות פנול תשומת״לב פוליםכרידים, פוליסכרידים חמים(, האשלגן, ברכוזים למצוי את אפ י ו ן .ה ה ו מ ו ג נ י ו ת של המקובלים קבלת נוסו לקבוצת אתילן הפוליסכריד סוכרים כולל רבות )קרים להרחקת השקעןת פ ר ו ט ו פ ל ס ם י ם ,נעזרו החוקרים באותן ט כ נ י ק ו ת . הפיםיקליות המיצוי. השקעת ה ט פ ח ו ת ה בקטר י ו פ ג י י ם , נציין: דורשת טפולים או או כחשיפת שבירה כלורואצטית, אצטט לליזוזים ספציפיות הנתרן והשגת אנטיגנים מכנית סרמיים. נציין, ספציפית ספציפיים, מתונה תמיסות מים כמוקדי כבדוד לקלוף במערבל לויברציה או השוני ואנזימפיות במטרות פותחו השכבות או אחר יותר חיידקים כימיות למרות פעילות 10 ממעטפות - האחרון הפיסיקליים לציין תכונה שהפולי- המקשה על ־ דגרדציה באנזימים בטכניקה הגורמים לפרוק אינדוקסיביים ).(54 על העשרה ),(55 בהם מצעי של בלעדיים, ואנרגיה פוליסכרידיים פוליסכרידים קפסולריים ממעטפות אלה״ חיידקים ההצלחה ת ו א ר ה כבר נוספות חיידקים הפםוידומונפ בודדו המפרק 1934 מפרק על ),(59 פרוק ושנויים שפורקו ע״י לתת-יחידות חיידקים -vShilo מקרקע אנטיגניים א נ ט י ג ן של - Vi Arthrobacter ) ה מ א פ י נ י ם את ).(60 הובחנו ע״י זעירים הפועלים כאקטופרזיםים נתגלו פולימריזציה של קפסולות, r בגרם נמצאו a חיוביים. כפועלים החיידק קבוצות חיידקים, חיידקי ה ק ב ו צ ה ( של אנזימים לפרוק פוליסכרידים אנזימים ש ב י ר ו ת של r ספציפיים הסלמונלה ע״י כמקור םובסטרטים פנוימוקוקים. ממעטפות אקסוצלולריים Coulobacter כי פוליסכרידים ש ל מ י ם של הובחנה אנזימים נמצא מ(61- ע" י )64־.(66 בפרוק שבודדו על לרוב, קשורה מ ה ם ע ט פ ו ת משמשים א נ ז י מ ט י של )^'(56כאשר ~63( B r u f fי()62 דומה וממי־-ים מיצרים נודעים אנזימים אלו ממעספות פוליסכרידים בפוליסכרידים חיידקי בדוד פ ו ל י ס כ ר י ד י ם של במפרקי קרקע דרך חיידקים )פוליםכר ידזות( הפוליסכרידים נמצאו Bacillus sphaericoseה מ פ ר ק את ה - תאים כן הראשונה בשנת מקפסולות פוליםכרידים חיידקים Rhodopseudomonas palustris נמסר 11 א נ ז י מ מ י ת של הסר ו פ ו ל י ס כ ר י ד י ם האנזימים פחמן ־ לדוגמא: מעיים ),(58 מ- ),(57 כמו כן Myxobacter םטרפסוקוקים ליפופוליסכרידי ם . ( S t r e p t o m y c e s griseus כגורמי t S אנזימים ליזיס ( בחיידקים . הגורמים פעולה לדה- במערכות חי ידקים״יבקםרי ופג־׳׳ים - פוליסברידים פוליסכרידים עשויות להמצא החיידקים. את סוג ממצב הקרקע בה מרבית א״ ולכן בלתי בין )הסטרוקטורה(. נ מ נ ה את בין שיירים ניאלי. שיירי של מתיל החומר פ ו ל י א ו רוני ד י ם מקרקעות הבחינו פוקוז, )(44־ חמצה קרקע החמצן חלק בין לפעילות המכתיב בעיקר מושפע קרקע א. מנקבוביות רוויה, נע החמר הגורם בקרקעות: מוגדרת מצב כקרקע מיקרואירו- האורגני. בעיקר אך 5 נתן כמות, ל מ נ ו ת את גודל המורמים מוצרי קיימים הנודעים ,(69 ה ק ר ק ע ו ת ־־ המרכיבים ה פ ר ש ה של גלקטוז, גלוקורונית, חמצה ),(67 בעמידותם הרקבובית, הקרקע התלכידים י צ י ב של חיידקי פוליסכרידים, ה ם ו כ ר י י ם של מנוז, מבנה וצורת לתלכוד )הפוליאורונידים( ה י צ י ב של בגלוקוז, רטיבות הקרקע החשובים פרוק ),68 בין מתח האורור מוגדרת לפי אורוניות האורגני הנו ר ט י ב ו ת בה ובטיב פוריות החומרים הכםוזות החמצן ב. ומשטר ה פ ו ל י ם כ ר י ד י ם ,שהם תמצות שהנם בקרקעות. קריםיים קרקעות חקלאית( ה ק ו ב ע י ם את הסטרוקטורה מצבי בהשסר בכמות מ ה פ ו ל י ס כ ר י ד י ם הם ק ל י המכילים רמנוז, ישירה )קרקע מתח אארובים. במים השפעה ר ב ה השולםים. בשני המצוין? מלאות רוייה בקרקע.י )אגרגטים( בנפרד בקרקעות אקולוגיים, והתהליכים והתנאים כתלות הגורמים תנאים בעלי האקולוגיים, כקרקע הנקבוביות קרקע הקרקע נדון אויר לאנארובי, רבים הגורמים מוגדרת מכילות פילי ב ת ח ו ם ר ח ב של המיקרואורגניזמים רוויה המצסברים מיקרוביאליים הנם מבין הרטיבות בלתי 12 ק פ ס ו ל ר י י ם מהייוקיס ־ מכיל ארבינוז, גלקםורונית, אלו המכילים פרוק מיקרו- מ8-26$- הפוליםכרידים קםילוז, הקרקע. בעיקר וכאלו בפני חלקיקי המופקים ריבוז, וגלוקוזאמין ),44 למעשה כל חיידקי (74-70״ ארטרובקטר, הקרקע, פלוובקטריום, אזוטובקסר, ריזוביום, ו א ג ר ו ב ק ט ד י ו ם תורמים כרומו בקטר י ו ם, בהפרשותיהם ל ת ל כ ו ד הקרקע. ב. קרקע רוויה קרקע רוויה הקרקע כמו 9ני גשמים או מי העליון החדרה במקרה של ש ד ו ת ה ח ל ח ו ל המשמשים ביוב, ממושכת, ל ש כ ב ת מי יוחסה התהום. להשפעתם התלכוד ),(73 הסתימה ההחדרה. לפעילות מיקרואורגניזמים ו מ ו ב ל ע ו ת גז ברזל םולפידי, בלתי מסים. של גורמים אלה בקרקזן . ( 6 7 ) . בקרקע בלתי רוויה, מוקואידיים, ל ה ח ד ר ת מים, בשדות החלחול נתגלו עם עלית משך כאחראים׳ לסתימה נציין, מחיידקים הן מ ת ק ב ל ת ר ק במקרים ק י צ ו נ י י ם בה קיים עומד מים מעל של פ ר ו פ י ל הקרקע, שהוצעו חמרים במים כנראה מסתמנים אין הסתימה בין .(76 הוכחות י ש י ר ו ת . והן המתפתחים מ נ ו כ ח ו ת שתי ם יקר ו ביאלי י ם. התופעות, הסתימה והן ה תלכו ד ,מושפעות מתנאי האורור וחמרי המזון בקרקע כמוסיף פ ו ל י ם כ ר י ד י ם בכלל, ערכו ש ל חמר אורגני סכרידים םםביליים פרוקו. ביחסי .חנקן פחות גבוה טמון בפרט, פחמן של פחמן לחנקן ) ביחס שבין נמוכים אור?נידים מוספים ,לקרקע ואיכותם ניתן המצוי 100 )10 ),67 (C/N = לחנקן בחומר .(77 ע״י ופולי- במרכיביו, ובקצב המתפרק, על כמות מוצרי שנוי יחס פחמן ה פ ו ל י ט כ ר י ד י ם שבה המצויים האורגני בקרקע. ל ע ו מ ת חסרים בעלי = .(C/Nנסורת מסרת השפעה בשל קצב ה ת פ ר ק ו ת ה האיטי. איפא ל ו ו ס ת את כמות הפחמן הגורמים פוליסכרידים בקרקע רוויה, בתהליכים זהים פוליםכרידים ס ת י מ ו ת בחלק שהתפתחה תוך חיידקים או ברם, הן ),75 ביןמי ),67 .(74 לחנקן יחם החיידק בקרקע, ־ גם בגידול של גדול תרבויות פחמן, כגפרית, מסכום חזקה בדומה נוספים של לחוסר על 14 מכתיב גבוה יחם פוליםכרידים. חנקן הפעילות יצירה יתירה מי-תהום שטחי הלמוד הבאים: או שפכים מטוהרים );(82-80 שדות סל הגבלה המיקרוביאלית העשרת שטפונות s יצירה תכתיב פרסים במעבדה ),(78 - של ,C/N של יסודות אחרים פוליסכרידים ).(79 בקרקעות ע״יי עודפי אורז כלומר עודף מוצפות מים מתקבלים עליונים, המצויים )(83 מי בהצפה י והמקבלים במים זבול כאמצעי במתח ירידה ה־ . קבוצות החמצן מתח עוזרת החדרת תוך פרק - בי" ו ה (87 - חלק המים פוליסכרידים , או )(88 חמר י ם , ,COj בין החיידקים. גדול )נוהג קיים מהפוליםכרידים העשרת המערכת עוזרות הן. אף ושימות כימיקלים סוכרים חמצות קזאין - מ־ אמי נ ו ־־־ מוצר . Pfanstiehl L a b o r a t o r i e s - תוצרת של ה- ה- שדות שהצטברו באורגניזמים C a l b i o c h e m , Los-Angeles N u t r i t i o n a l Biochemical Co, החיידקים חלה פטריות המשתלט-ות , Z o o g l e a ramigera במקרים לגבי הללו דכוי ),(86 קבוצות ביניהן: .(Streptomyces fil|r המערכות סולפידים , Flavobacterium aquatile הקרקעות מכשור בכל ).(85 הופעת פוליסכרידים ה- יבוש להעלמות ב־ המפרישות N o c a r d i a sp. ע״י עליה לנקוי פיטופטוגנית ו ע ל י ת ־ במספר B a c i l l u s cere us ה- בפטריה החמצן, ואקטינומיצסים מתבלטות מתמיד; לחימה מסנני• חול מים שטחי );(84 בננות המוצפים , A l c a l i q e n e s f a e c a l is רבים חלחול בהן. בעלי טכניקת העלאת ומסנני טכניקות אנזימים חול( אורור מפרקי ־ 15 אדגיובנםסלם פרוינד דכמסראץ-כחול - ספרמין - פנול - ריאגנט פרוטאמין - לרדוכס הספדקם מתוצרת מחברת .. L "רפא" מחברת א נ ל י ט י של ) סולפט פוטנציאל , (clupeinsulfat מתוצרת מחברת , P h a r m a c i a , Uppsala ( G l u c o s t a t reagent Martin A l l e n (89 O N DEAE לליטר NaHCQ0.09 G -200 מחליפי גם, G -50 ה י ו נ י ם .םטפוס בנוני( , Dowex אנליטי -ceilulose תו צרת,'MalUnckrodt נרכשו מ - אוקסידז גלוקוז .Worthington ־ עמי" .(7 י ם מ g אדמה, המיוחד לספירת כלל לספירת מצע 3 פטריות סטנדרטי . - pH גרם הוכנו נוזלי -לפי ל.(6.8- MgCINaCI 0.026 פחמן( סינתטיים גרם החול, בספרו את NaCI,0 , 0 1ג ר ם הכילו 2 , של הכיל לליטר 0 S Na1.1,ג ר ם KBr ־ ,f-LO2.CaCL גרם 2 םי-ים 2 ההוראות K.HPO,0 . 1ג ר ם 0H0 .7 4 בדוגמות ) ס י נ ת ט י חסר :1 גרם 0.1, M , המיקרואורגניזמים גרם 3 . 9 ,גרם , בנוני, שבדיה. ו RNase - ™.^);FeCl^lh^Oיר רם אינדוקטורים )צבעים( מזון: ומצע K ^), (Na^POg .Fluka, Switzerland ) S e p h a d e x )(25־ A אגר תמצית S קלב ו ן ) פוכםין מ ח בר ת קרקעי לחים סטרפטומיצין .B.D.H. Laboratory Chemical Division ה 3B<P -״ A m b e r l i t e Mר י א ג נ ס הבאים ירושלים ,או םולפט .מ- .Calbiochem .Mallinckrodt Chemical W o r k r B i o - R a d Laboratorie ) . Eastman O r g a n i c C h e m i c a l s . K o c h - L i g h t L a b o r a t o r i e s , England Indian Inkה י ו ו - . Pharmacia U p p s a l a , Sweden מחברת סטרפטומיצין . B a c t o - a d j u v a n t , c o m p l e t e F r e u n d , D i f c o Laboratories^ D e t r o i t - מחברת בטא-מרקפסואתנ ול - 4 גרם מים: , CaCI 2 . HgBOg האגד במצעים חיידקים היה בעלי מרחובות, מתוצרת פעילות . D i f c o Laboratories,Michigan ר ג ר ס י ב י ת של ו ד ו ג מ א ו ת מים מהים כמקורות פ ו ל י ס כ ר י ד י ם שמשו בחוף התיכון קרקע לנדוד חמרה-חול אשקלון. מכשור החדרת הקולחין מערכת נסיונות החדרה ליזימטרים( מים קבוע וגובה הושג ההידראולי חוף ההדוק. 4 מ כ נ י ת של החול המשקל קודם להכנסת מעבר כדלהלן: מהנסויים התערובת במלוי לכוד הקולחין היה למלוי הגרדינט בפיזוםטו׳יים מדיונות 93$ גם חול ( b u l k density הגיע ל1.6- החול, החול. סמי שבאזור ב ד י ק ת . ( S c h o l l e n b e r g e r (90 העמודות הוחדרו ו7$- מאמץ חול דק, מכסימלי ג ר ם /ס ם ' אחר 3 דרכן ברז מי במשך האורגניים. עורבבו דרך הוספו גם 50 מ ג י בר ז ל ־ ־ ם ו ל פ י ד י העברנו למלוי הקזאין, נלקח עומד ה י ה 30 שנבדק בחול, בשיטה הברזל לפני )פרמאמטרים, ).(67 החול כפי העמודות לפי סמי נעשה הסינתסיים הםמ' סולפידי ,0.35 אורגני האחת חמשת ס מ י מתחת נ ו כ ח ו ת של מעמודות החומרים גובה ל5- ברז כ ־ 0 . 0 3 $חמר הנפחי ) להרחקת מצוף. עמודות החול הצביעה בעמודות סמי נקבע על בצעו זכוכית ו ב א ו ר ך של 45 בהחדרת פ י ).(91 אויר בדיקות הושמו נוספים שהכיל העמודה. הוא ימים, שייטות לאורך אחיד, פ נ י מ י של 5 המתנקזים החול הכיל מקטעים למלוי המים בעמודת אשקלון, ללא ) ב ע ז ר ת מתקן מוצא מפוזרים אנליזה ( p e r c o l a t i o n tests בעלות קוטר צנור שהיו הסינתטיים 100 עמודות גרם חול ב2- קזאין. גרם ו כ ס ו ת ש ו ה של גפרית. העמודה. בשיטה ה ע ל י ו נ י ם של והגפרית החול בוצעו בשקית עשויה בשתי מספוג בחלק את השניה פלסטי, - שמוקמה במים עמודות. ות החול מים HgCI ה ש ת מ ש ן \ במי. ,25° C ההידראולית בתקופה קטע של הקבועים מ של לאורך נמדדו בכל חול. גרם אחד חול חול קל שמשה נקבעה בהתאם שנמהל תכולת ג0.25$ העמודות נבדקה מדידת השפעת נפח משקל( דרסי ע״י מדידת המים בסדרה עומד ההידראולית עולה שמש המיקרואורגניזמים נערכו אדמה ).(89 אגר על תמצית הפוליםכרידים המוליכות המים הפועל ההידראולי מהעמודות לבדיקת הן על דוגמא והפוליאורו נידים: הרכב מצע מרטין של גרם של היו בתמיסה מחצית הורחקו צנםריפוגציה ע״י סבוכים לדקה בדיקות פיסיקליות אולטרא צנסריפוגה; צנטריפוגה של )ם.ד(. מרבית הקלגון, בעוד מתונה ב- 10 דקות. במשך מדידות Spincoמ ו ד ל . (phase photo optics 2 החול , (L00P(,Na surface-active agent״ השעה דוגמאות דוגמת של בתמיסת בכל בפיזומטרים 6 כ- העובר?ם ההידראולי ה מ ד י ד ו.ת .נ ל ק ח ו של בטמפרטורה והגרדיאנט מהולים הוחדרו הספרטורה. )או בארבע ל ל י ס ר ב כ ל הופעלה ).(91 בצוע במקביל מגי הגרדיאנט לאחר של והן סמ״ק מערכת בהם נקבע יומיים. . 5 המוליכות אנליזות לבדיקת החדירות בתנאים סטריליים, ע״י לחוק החול, פטריות, םוג רגילים. העמודה. יום של קולחין הוחדר 0 לנםיונות העמודות או לספירת של ץ מעמודת המיקרופלורה. ל ח לבדיקת ברז ו שעתיים, )בנפרד( )(89 בקרת ברכוז 2 הנםיונות קבועה פני בנםיונ,ות שהכילו של שמעל החול. 17 כל - של , E הנםיונות הפוליםכרידים גו«וי החול תוך מוצו מופיעים Servall בעלת הורצו םדימנטציה אופטיקה במהירות טלטול כמשקע. 3,000 קבועי 3 6 )מהירות( של של שלידן ) 5 6,100 בצעו נאולסרא־ Schlieren םבובים לדקה ( - בספרטורה של ן-פוספם C 2 0 - 2 2 °ל צ ו ר ך - 18 המדידות M 7,0.05-p H הומס.הפוליסכריד ( )היבש. 0.07$,0.2$,ברכוזיםש ל ו0.3$-״ מדידות בעל כפול בנסיונות להנחיות מקדמי מחיצה אלו. תמיסה סינתטית חשובי במאמרו אלקטרופורזת הדיפוסיה של שכמץ הגבול עברה הושמה הטפול תמיסת ה מ ו ל ק ו ל ר י של שו נ י ם מדידות ים של אוסטולד" בבופר הפוליסכריד ספקטרופוסומסריות: או 48 להרצה , i°C - משקל חברת או נעשו 20 ב ס פ ק טר ו פ ו ט ו מ ט ר סבוכים של , Klett מ ע ק ב י ם אחר ^1688 לקביעת בצעו בהתאם ,0.05 כנגד שעות אותו באלקםרופורזה תנועת גבול M 7 הבופר. חפשית התמיסה ( , לאחר ב moving-boundary - צולמה •בזםנים י בוצעו שונות: הפוליסכריד ורונל א ק ו י ל י ב ר צ י ה של תמיסת ספקסר ו פ ו ט ו מ ט ר רחב ב ר כ ו ז של 0.4$ שמשה הנע electrophoresis apparatus, Spinco Model Hב - 0 הפוליסכריד עם ).(92 ב ר כ ו ז ש ל )pH-0.3$פ ו ל י ס כ ר י ד ד י א ל י ז ה לשם בוצעו ).(92 המשקל אף הן באותה צנסריפוגה תא 50 נפחי F ספציפי אופטיים Radlett .Bauch & Lomb S p e c t r o n i c מדידות בספקטרום •Cary צמיגות או - בםפקטר ופ ו ט ומסד Zeiss מודל , PMQII תמיסות 2839 ) ( V המכילות 100 - השתמשנו נ מ ד ד ו בתא של 1 מ ט פ ו ס A -143 . סמ״ק פוליםכרידים F מתוצרת בפיקנומטר בפולרימטר נעשו בויסקו- Fisher . מ ת ו צ ר ת. ( F i s h e r(92 אוטומטי Bendix ־ בדיקות Umbreit שיסות הפרדה במשך פורזה נייר: חמצה וברוחב כ25- הכילו אצטית:םים נייר משתנה, דקות. את והמצות כשהחומר ות בטמפרטורה סמנים הוצאו מהנייר )(95 6 כמג־* נ הנייר H נידות אחד י םנון לסמי מתוצרת בעוד על שפותחו במים, הצובע סוכרים p )סהי׳כ . כ3000- .Savant סבול וסמן לסמ־*. צירי בהתאם ויבוש ״ -ב ו ם נ ו ל -ח-בוטנול : בשיטה פ ר י פ ר ט י ב י ת על עבור נעשה קצוות וולט( מיכלי בבופר זהוי האלקטרו- פירידין: סוכרים, מם׳ 3 לאחר הנייר בתנאים ההפרדה נגזרו למתואר אםינו יובשו פסים, להלן. הנ״ל, שהכילו החמרים המתאימים בליופיליזר. ע״י אתנול חמור : וסמן מים(, : מים מים נתונים נעשה וטמן )כמתואר על והחמום )(94 מערכות ידי כ15- או דקות בעזרת המםיסים ביחסים פזר. עליונה(. מם. בקטע טבילת נפחיים ),4:1:4 ).(1:1:4 ניירות מס3 . ח נ ק ת כסף דיפרנציאלי. היחסים חסצת-חמץ ה י ו ר ד ת על אםיניים ה מ כ י ל 5$ באופן השונות. : ח נערכה באצטון, מחזרים בכרוססוגרפיות A הפתוח )0.5$ סוכרים - מ היו וסמן 1 להלן. נערכה ש וולט 6.5 כמתואר המופרד, הנייר ולמטרה הנייר(. בנינהידרין קםילן, הנייר C מצוי הזרם נירות מם. ב א ו ר ך של הנייר ואפיון, אתור לרוחב ע״י כרומטוגדפית פורזת נעשה על כ60- כשה- פריפרטיבית מהחםר כרומטוגרפית זהוי נפח( .60-70° ודוגמא וספק האינרסי אמיניות מושם גבוה המכשיר )9:0.04:1 בפס נערכה ב מ פ ל מתח של הנוזל אלקטרופורזה של במתח יחסי סוכרים נערכו ההנחיות ).(93 אלקטרופורזת של לפי ב ס פ ר ם של לסוברים אלקסרופורזת 50 19 במיקרןרםפירומטר-ורבורג וחבריו סמי ־ על 1 לשם אלקטרו- הניירות ב80°0־. 70 אנילין פטלם ה ב א ו ת שמש.ו ) ( v/v״ - 20C - פ י ר י ד י ץ D־ E י ־ ח מ צ ת -ח מ ץ ח -ב ו ס נ ו ל G ר ו ו י »־ 1״ ה פ ר ד ו ת C H : א צ ט ט : נ ד י ד ת ש ל ש י ט ו ת ע מ ו ד ו ת ע ל x n ה ס ו כ ר י ם ג פ ר ת י ת ה ק ר ב ז ו ל ע ״ י - U | G n -ב ו ט נ ו ל )(2:1:2 נ ת ו נ י ם ב י ח ס : - J 2״ ב ו ס נ ו ץ פ נ ו ל ל נ ד י ד ת )(1:1 )(88$ ^ ג ל ו ק ו ז : ).(2:7 מ י ם Q ר מ נ ו ז , R ב ה ת א ם ־ נ ע ר כ ו e l ב ש י ט ת ! w e l l (103 ה ן l ע ל a ב ש י ט ת א ו ר צ י נ ו ל ה מ צ ו י י ם ה ן ס פ ד ק ס ( H 50־ G 200-1 G ־ , . ב ה ם . ס ו כ ר מ ח ז ר א ל ה ה ח ו מ צ ה . (Elson-Morgan(104 h ב ת ע ר ב ת ב כ ר ו מ ט ו ג ר פ י ת ע ״ י ש מ ש א ף ה נ י י ר ה ן ו ה ן ב ד ו ג מ א ו ת ל פ ו ג י ו נ ס ו ן ה ג ל ו ק ו ר ו נ י ת ק ב י ע ת ה ח מ צ ו ת 1 ה י ח ס י ם ב ש י ט ת ה א ו ר ו נ י ו ת ה מ ו ל ר י י ם פ ט ל ס . ב י ן ש י ט ה נ ת ה ל ק ב י ע ו ת א מ י נ ו ) , /ו ד ו ו מ ח ו ץ D ( H u g h e s - J e a n l o z (107 ב א נ י ל י ן נ ע ר כ ו ), (102 כ ס ט נ ד ר ט . ב י ן פ נ ו ל - י S o m o g y i - N e l s o n (100 פ ר ק s ו צ ב י ע ה ה ח ו ל ג ל ו ק ו ז ה ה ב ח נ ו ת ב ש י ט ת ב ר י א ג נ ט כ ס ט נ ד ר ט , c י. ( H o f f m a n(106 ב ו צ ע ה ב ו צ ע ו ש פ ו ת ח ה ב ש י ט ו ת ש מ ש ה ה א נ ט ר ו ן )(97 ה פ ו ל י א ו ר ו נ י ד י ם ה פ ר י צ י א נ י ד בזול(e ל פ ב ש י ט ת ק ב י ע ו ת ק ב י ע ו ת ( H a l l ה פ ו ל י א ו ר ו נ י ד י ם נ ק ב ע ו נ ק ב ע ו ).(98 ).(99 ו ה ן ה פ ר ד ה H ב ט ר ו ו י א נ ל י ט י ו ת כ ל ל (101 N F מ י ם ׳ , R ־ ו נ ו ן ב מ י ם . ע מ ו ד ו ת 8 ט ת - : ה ח מ ר י ם ו ג ל ו ק ו ז א מ י ן ס ו כ ר י ם מ י ם ).(1:4 פ י ר י ד י ן ה פ ר ד ו ת )(1:4:1 2 ח ־ ב ו ט נ ו ל ע ל ח מ צ ה ח -ב ו ס נ ו ל : , R מ י ם : ב מ י ם . ע ר כ י R ח -ב ו ס נ ו ל א ת נ ו ל א ת י ל J : : ).(3:6:4 ס ו כ ר י ם נ ע ש ו ה מ ו נ ו ס כ ר י ד י ם ה כ ו ל ל ת ר י א ק צ י ו ת צבע הכסוזות חמצה ,6,3-1 ר י א ג נ ם ה ג ל ו ק ו מטס חמצון הפריודם יחסי ב- בפריודס נעשה - אמיניות גלוקוז הגלוקוז בעזרת נקבע אוקסידז mp260או נקבעו ( - במכשיר ספציפי תצרכת כמות (111 החלבון . ( L o w r y Beckman-Spinco automatic amino acid analizer במשך .105° שעות ב - אימו נ ו ל ו ג יות ארנבות באלכוהול, חוסנו הוזרקה אליה כ מ ו ת של 2 בשרירים. בהדרגה. מוריד בעזרת התערובות פיסיולוגית, או . m\x , 2 0 • a - N H C I שיטות ובאופן כ ש ה מ ע ק ב אחר ב א ו ר ך ג ל של 2 2 3 בשיטת ריאקציות כמותית הציססאין- ).(109 נעשה ל פ י ( G u t h r i e (110 בספקםרופוםומטר בןוח 2 8 0ל - חמצות , דדאוכםי כ-6-דזאוכםי-הכגוזזות, הכםוזות ,בוצעו ג פ ו ת נ י ת ל פ י. ( D f s c h e(108 בעזרת הבליעה לסוברים וי ספציפיים פנטוזות, השפה של להזרקה ה כ י ל ו 1 0מגי" חמר י ב ש חיידקים לסמייק ב ת מ י ס ת מלח ה ו ס פ ו נ פ ח א ח ד של פר ו י נ ד -א ד ג ' ו ב נ מ ש ל ם . םמ״ק במקרים דמומים א מ ו ל ס י ה של פ ו ל י ס כ ר י ד א ו של תערבת רבים שבועיים האוזן. בהזרקות תוך התפתחו במקום נאספו.-,החל מבחן עוריות ההזרקה משבועיים פרציפיטין איכותי לכל במקומות בעור מיום סומתים ארנבת מרובים, מורמות שהחלימו ההזרקה. ה ד מ ו ם נעשה נעשה ל פ י, ( K a b a t(113 < ע״י הוספת נסיוב־נגו כמות כמויות ) א נ ט י ם ר ו ם ( ,או ק ב ו ע ה של תמיסת פלח סולםלו ע ו ל ו ת של אנטיגן כמויות למבחנות ע ו ל ו ת של אנטיגן. הנפח ה ס ו פ י של כ ל פיסיולוגית. לאחר הושהו והושמו ללילה טלטול בחדר ק ו ר , לאחר מ כ ן המכילות כמות נםיוב-נגד המבחנות לםבחנות הושוה ע ״ י המבחנות ל 6 0 - נ ק ב ע אם קבועה מופיע * י יו של המ3ילות י הוספת דקות ב,37°0- משקע. בדיקה - 22 - איכותית נוספת בוצעה בשיטת האימו נ ו דיפוסיה לפי אוכטרלוני )(114־ הדיפוסיה נערכה באגד ) (1.5$המומס ב 0.5$-נתרן כלורידי ומרטיולט ברכוז של .0.0004M פרק גיי-נסיונות ותוצאותיהם א. אבחון פוליםכרידים בקסריליים כגורמי הסתימה בעמודות חול -דרכז ד .ו ע בר_ו ק ו לח * ן ס י נ תס י י ם .1 החדרת קולחין סינתטיים דרך עמודות חול מי ברז המכילים קזאין ,ברזל כלורידי וגפרית שמשו כקולחין סינתטיים להחדרה דרך עמודות חול. הקזאין נבחר בשל היותו חמר אורגני המתפרק בנקל ע״י מיקרואורגניזמים ,בו יחם הפחמן לחנקן 6ל , 1 -תכונות המאמינות את הקולחין הטבעיים שנקבעו הוספו במעבדת"מקורות" .הברזל והגפרית כיסודות הדרושים ליצירת הסולפידים ,שהם מהסימנים המאמינים קרקעות בהם מוחדרים קולחין. עמודות חול לקולחין סינתטיים, במדידת שעור המוליכות ההידראולית של כשהקזאין מעורבב בחמשת הסם' העליונים של החול ,ובהפעלה ממושכת של 10ימים ויותר ,הסתמנה ירידה בכשר ההחדרה של העמודות -ירידה שמקורה בסתימה. כמרכיב יחידי במים המוחדרים ,גורם לסתימה המה ירה והחמורה ביותר ,מבין תערובות הקולחין הםינתםיים שנסו. H מגי של בתמונה מסי* 1נתן להבחין שקזאין 2 בעמודות בהן הועברו מים המכילים לליטר ללא חמר אורגני לא נתגלה כל שנוי במוליכות ההידראולית עם הזמן ,על כן הסקנו שלא חלה כל סתימה. בעמודות בהן הועברו הקולחין מכילי ברזל ,גפרית או שניהם בנוסף לקזאין ,התאחרה הסתימה להופיע ע י ה יום ~ השלישי מתחילת ההחדרה ,ושעור הסתימה היה נמוך - 23 - תמונה מם' 1 השפעת קולחין סינתטיים המוחדרים דרך עמידות חול, בין על שעור החלחול של עמודות אלו ,בהחדרה ממושכת. ז בלבד ,קזאין וברזל סוגי הקולחין היו שהכילו ק ) ,(Feקזאין ונפדית ) , ( Sאו קזאין ברזל וגפרית. ז א י Ooyt * מוליכות הידראולית בזמן הבדיקה ) ,(Ptביחס למוליכות ההידראולית ההתחלתית ,בזמן אפס )•.(Pi מזה של עמודות בטבלה לאורך ימס. עמודת בה השכבה החול 1 .2 אבחון מהות א. השפעת סולפיד אפשריים, כימית. במים, הגז ונוצר סולפיד לפני העמודה עמודות חול בהן כלורידי, הסתימה הוחדרו נהפל בצורה גורמי -על העברנו הזמן מים תחמוצות כמו מכילי כץ כל לא קזאין ה ם ס י י ע י ם ' ל ה ת פ ת ח ו ת שכבת ע"י קזאין בלבד. בסבלה חדה.. סולפידי, בעמודות הברזל הסתומה מסי 1 - מסוכמות ומקומה. הברזל תמיסה ה ם פ ו ח ו ת על העמודה. הובחנה וגפרית, תחילה לא או סתימה בדרך כל h^S הקורץ החול גפרית מס. 5 הקרובות ירידה ב ס ת י מ ה של )טבלה למים ר ו ו י ה של בשכבות קזאין סולפידי החול גרגירי נתגלתה החרפה חדירותן מגורמי בעמודות החול השחור, ברזל חול,על בנפרד הקולואיד עמודות בצבעו השחירה למים. יצירת דרך המצטיין הפיזומטרים המפוזרים הסתימה את השפעת ידי במים. את מ ק ו ם השכבה ברזל הבוחן הברזל ח ו ל אלה ללמוד ולאתר סולפיד פ ע ל עם ועם של יחיד מדידות ברזל אלה המומס הקזאין ק ו ל ו א י ד ל י ה נ וצר וזאת בנסויים נתן כמרכיב ה ה ו פ ע ה של שכבת החומרים נםיון 24 תוצאותיהן ההידראולי ה ה ס ת כ ל ו י ו ת על נערך אחרים שמהן הגרדיאנט כמו בהן מובאות החול, כן הוחדר ־ בחדירות עמודות וברזל ,(1 לעמת - מם־ סבלה :1 הפיזופטרים קריאות קולחין ציון נוכחות אי או בעמודות בי ו ם החול השליש י נ ו כ ח ו ת של בהן םנו מי בר ז מי ברז מכילי קזאין מי ברז מ כ י ל י קזאין+ברזל ** שכבת ההחדרה. ברזל הידראולי בעמקים גרדיאנט החול מפני 2 - 4י סיגו 4 - 2 2ס ם ׳ 2 2 - 2 4ם ם ' םולפידי . ע ו מ ק השכבה ע ו מ ק השכבה ה ס ת ו מ ה "bmבה מ ו פ י ע סולפיד מפני החול 0-2 ה ב ר ז ל בסמי החול הפני 0.37 0.34 0.35 1.50 1.00 0.42 0.50 0-2 0.90 0.65 0.40 0.45 0-2 מי ברז מ כ י ל י ק זא י ץ +ג פ ר י ת 0 מי ברז מ כ י ל י ק זא י ן +בד ז ל + גפר י ת 0 0 0 הפיזומטרים מתיחםות מדידות בפני-הביניים חול-מים. לעומד *תוצאות מפול ה ר א ש ו נ י ת לא הוחדרו מתחילת שונים* המדידה הטפול סינתטיים, 25 - מי ברז מ כ י ל י נלקחו מדידות 0.80 0.64 להבדלי עומד 4-22 0.25 0.15 המים 4-22 בין הנקודה 8-10 8-10 הנמדדת, במערכת קזאין +ברזל הושגו בנםיון נפרד. פ י ז ו ם ם ר י י ם ב ט פ ו ל זה בשל ת ק ל ו ת ט כ נ י ו ת . - פ ו ל י ס ב ר י ד י ם מ יקר ו ב לאלי ים ב. אחר בחפוש הפוליסגרידים ההידראולית החדרת המים של פני כשהקזאיץ הסתימה עמודות אלו. סינתטיים בו החול, עורבב המכסימלית חוזרים הסתימה המכסימלית R עצמם של 0.71 בעמודות החול ההידראולית בין עמודות החול של קלגון מן שנקבעו = R בהן של חמשת הסתומות למשך 4 8 ) ל מ ש ך ביחס של שעות• ( בתחום את הקשר כדי דיאליזה לאחר TCA יבשנו 0 1 את : הנסיונות באשר לחשב להתפתחות מקדמי את כפוליסכרידים קלגוץ. או מקדם המצטברים מכילי קזאין, לבין = Rנמצא עבור הקשר ההידראולית לסתימה, בהן את הצמיגה 4 מציני התפתחה התמיסה 1 אין מסי המוליכות לבדוק לתמיסה במועד ,1 התפתחות הפוליסכרידים המוליכות מעמודות - בתמונה בתמיסת 0.91 הגורמים )(w/v־ מכן כלל של לבין העליונים עשןנו בין מתאם חמרים מצוי סינתסיים החול, החומרים 1:5 לאחר שהושמה בעמוד זהה ניתן המוליכות של השוני יומיים־־שלשה הצטברות הגבלת תוצאות שבטכניקה תכולת נסיוץ המסוכם את את עם פלסטית מהתוצאות האנםרון מקדם החול הנסיון של לבין קולחין בדוגמאות בשקית גם לקשור מסוכמות להסביר מה בבחינת אלו. 2 מבצוע העלמותה. בשיטת הסנטימטרים )(0.25$ העמודות מזוקקים כדי אם הוחדרו לזהות זה נסיון בעמודות מם. עשוי הסתימה נתקבל עמודות פוליאורףנידים אלו״ בין נעשה הוסף העלמותה, ומהירות )קורלציה פוליאורווינידים מתאם במדויק ( בטבלה השונה כי סתימה המצטברים שוני ומועד כוומוי הקזאין טכניקה בחול. על המתאם w/v חמרי 26 אפשרייס, המיקרוביאליים קולחין על סתימה - 2 את שכבת סתימה, החומר בעזרת שהקלגון שנתקבלה נגד בליופיליזר. שעות של בחדר מיצה מים החומר קור, לאחר - טבלה :2 מס. הצטברות דרכן ה ב ד י ק ה סוג פוליםכרידים מחדרים העולות 27 על קולחין 15 ופו ל יאור ו נ ידי ם לאורך סינתטיים, בעמודות תקופות חול, החדרה יום*. כלל ה פ ו ל י ס כ ר י ד י ם ב מ ג ' ל ג ר ם ח ו ל לח קזאין+גפרית קזאין הקולחיץ - בפג׳ פוליאורונידים ל ג ר ם ח ו ל לח קזאין+גפרית קזאין קזאיץ קזאין+ גפר ית Pt/P1 זמן מתחילת ימים ההחדרה,, 0.97 0.98 7.0 10.0 0. 37 0. 31 1.01 0.93 4 12.5 13.5 1.00 1.04 0.53 0.57 7 14.5 15.0 1. 38 1.81 0.11 0.08 9 15.8 12.0 2.73 2.21 0.16 0.16 11 13.8 17.5 2.78 0.08 0.09 15 7.0 13.0 3.15 0.06 0.08 *הקזאין הונח בשקית פלסטית בעמוד * * מ ו ל י כ ו ת ה י ד ר א ו ל י ת בזמן הבדיקה ב ז מ ן א פ ס . (1 )P ההתחלתית, מכן עברה שהיה כ ע ש י ר י ת מהמשקל חיידקים לאחר התפיסה הורחק, דיאליזה של צנסדיפוגציה שעל ) ־( Pi של 5000 ס.ד. ה י ב ש ־ של פוצוי עברה רחצה נפח שעות כנגד מים עם פני ביחס הקלגון והתמימה 24 המים 3. 33 עברה החול. למוליכות במשך והיה זהה התמיסה 10 מורכב של אתר ליבוש ההידראולית דקות, ברובו להרחקת המשקע מתאי ה.TCA- בליופילזר. - החמר שנתקבל האנטרון. בתמיסת דוגמאות הקלגוץ ההידראולית בקרת שלא מעמודה חול יבש לעמידת שלפני .3 לשעור של 55$ בעלות שמיצתה מכן נבדקה חדירות גבוהה דוגמת 48 הידראולית בלתי מופרעת, מהמוליכות במצוי לירידת ה- המוליכות מים ההוספה. , TCA שמצו המוליכות לעמודות השוה ח ו ל של חמשת הסמ־״ שעות לפני שנקבע והן מזוקקים גרמה הוספה מידית לירידה ה ו ס פ ה של 1 גרם המתמצה בו, מהחמר ההידראולית העליונים ל ־ 5 0 $מהשעור ההוספה. המיקרואורגניזמים הכרת בדיקת האחראים המיקרואורגניזמים התפתחה סתימה, כתוצאה מהחדרת נערכה להפרשת ח מ ר י בדגימות קולחין בתנאים סטריליים מתאימים לספירה כ ל ל י ת של חיידקים ואקטינומיצשים מרםין בטבלה מס. המפרישים הספירות קולחיץ לספירת .3 המרים פטריות. בטבלה מ ל מ ד ו ת על סינתטי ים. שנויים בין - כלל , או על גדולות במיקרופלורה מעמודות שנלקחו החול ת מ צ י ת אדמה פלטות לבין בהן נמהלו - ה מ כ י ל ו ת את המיקרוביאליות החיידקים, עם הפו ל י ס כ ר י ד י ים דגימות אגר הספירות שמושבותיהם חדים החול, פ ל ט ו ת של ת ו צ א ו ת של הבדלנו מוקואידיים על הסתימה מינתטיים. ונזרעו מצע לאחר בשיטת העמודות, נגד שמתקבל גורמים שהן ד י א ל י ז ה של מוליכות מהמשקע חול, ונמצא כפי ה ע ל י ו נ י ם של המקוריות, תסיסת ק ל ג ו ן ועברה פוליםכריד, הסמ' לעמודות ע מ ו ד ו ת אלה בעלת הן ה ח ו ל מחמשת הוחזרו נסתמו. במוליכות חמר של סתומה, לעמודת נמצא סכיל 28 כ60$- ־ מסוכמות החיידקים ומבריקות. ע ל י ת משך תוצאות ה ה ח ד ר ה של - מס:3 . טבלה מ ע ק ב אחר ע ל י ת .משך ה ה ח ד ר ה של המספרים ימים מהתחלת החדרת ה ק ו לח י ן 29 השנויים ח בקרת* XlO י 5 בסבלה ד י קולחין סינתטיים xlO - באוכלוםיה הםיקרוביאלית ק ו ל ח י ן ס י נתטי ים מחושבים ק לגרם חול ם י בעמודות xio חול. לח. פטריות קולחין בקרת X 10 בעלי מושבות מוקואידיות 5 בקולחין 5 עם אקסינומיצםים בקרת ק ו ל ח י ץ X 10 4 3 0.03 7.6 1.0 0.2 20.0 0.2 30.0 1 0.1 6.0 2.3 0.7 1.8 0.1 6.0 3 10. 0 3.0 2.7 0.6 1.2 10.0 1.6 5 18. 0 3.3 3.1 0.9 1.0 2.5 0.5 8 15 .0 100.Q 90.0 0.5 0.3 2.6 0.7 *כבקרת שמשו **הדגימות עמודות נלקחו 8 חול שעות ב י ן מפר י ש י החמר הוחדרו מתחילת החדרת המוקואידי על ב מ ו ש ב ו ת ר ג ו לריי ו ת ~'שג ו ן היה להבח י ץ אלו ה ו ו כ ־־־80$ אחת מהן הועברה אדמה״ במטרה כ נק י ה ע ל סמך המושבות. דרכן בי ן שש להג יע המושבות פעמים צלחות אגר הפרשתן גבי נקיה. קבלנו מיקרוסקופיות תר ב ו ת זו נלקחה י י ם, בלמוד הפוליםכריד תמצית-אדמה , נטה לצבע נבחר ו צ ל ח ו ת פסר י להגדרה במחקרים ה ם ע ב ד ת הקולחין. המוקואידיות. על לתרבות הסתכלויות מי ברז. עשר מושבות מ ו ש ב ו ת שכל ה מ כ י ל ו ת א ג ר תמצ י ת תרבות חיידקים, בםורפולוגית בקסריאלית, ורוד. נתן ושמשה הקפסולרי של התאים יותר שהובחנה ובצורת מאוחר ח י י ד ק זה . - ב ״ למוד .1 הגדרת ואפיון החיידק הבדיקות ו- )עד ( p התרבות. נערכו וצר ו נ ־ סביב החיידק. להבחין שלילי רק תנועה, אגר, מכילי גלוקוז מרבית ורוד שחרור קרקעי בקצב איטי. לסוג ה- או סך ב- התכונות ,Flavobacterium ביורשים בנסויי - המשפיעים ^ ד ו ל של ע ו ל י ם של ללא על במצע דור מתג הזדקנות צבענו צנסריפוגציה, בנו גרם החיידק הדרישות באתנול. מתמוסס. הן על המעשר גילטין מפרק מצביעות התאמה לעבר מלאה ופרוק בהתססת משפחת לאחד ב1%- שעות. בעלת על פיגמנט סוכרים כשרו מוצקים אין ליצירת ג־״ל( ^Achromobacteriaceae- המינים. לכן יצוין י הפוליסםריד כ-7 פוליסכרידים, מצעים חזקה, )המאבד התזונתיות סוכרים, נזלי מוקואידית בפוקםין קומפקטית בתקופה ,ה ל ו גר י ת מ י ת ' ל ־ ־ 9 ה ח י י ד ק •פלו ו בקטר י ו ם גלוקוז, איטי ארוך נתן טוזח ר ח ב ש ל סטנדרטי הפרשה שנמשכו ע״י גדולו F l a v o b a c t e r i u m sp. ע_£יצירה עם כמעט3ת פקולטטיבי. קצב החיידק . pH המתקצר אקםסרצל ולד י י ם . זה נזליים. במצע',אך הכל כ פ ל ו ו בקטר י ו ם חץידק זמן החיידק מצויה התאים א,נארובי ושומנים. חושב ירידה הקפסולה ..(•2 או להלן. הנו פ ו ל י ס כ ר י ד י ת עבה ,אותה מ מ נ ו הורחקו לגדל יוצר מתמוסס , ב ס פ ר י ם ש ל ( B e r g e y (115 לעתיםגלי, פוליסכרידים במצעים המזון גזים ברכוזים נזלי ונתן )או שאינו צעירות, אארובי סוכרוז( המצויות מתוארות בקפסולה חמצות-אמינו והן ההנחיות ) ת מ ו נ ה מסי במצע ספציפיות, חלבונים, נית.ן מפלוובקמריום המוקואידית ותוצאותיהן ב ע ק ב ו ת של חסר בלתי לפי 30 הקפ&ולרי ההפרשה בתרבויות החיידק Indian Ink 2־ בעל , (Skerman(116 10 שמו הפוליסבריד - במצע ימים הקפסולרי. סטנדרטי א. השפעת ר כ ו ז הנלוקוז נוזלי ב ט מ פ ר ט ו ר ה של c25° המעשר ובאורור תמונה וובקטריום: ־ גביעה מסי* 2 בפוקםין B ־ צביעה A ב )I n k -x2500 ) l x ( I n d i a n 0 ־ 0 5 ( ״ מלא, של שרכוז נמצא פלוובקסריום. להבחין המתמצים באופן גרם העלתה את מכסימלית אף היא ב. במצע, תאים של בהמשך פחמן,חנקן נ ס י ו נ ו ת בהם על היחס מס. גלוקוז המשקלי הקפסולרי ,4 בה )הומופולימר( נסיה ג. השפעת מתח השוני השוני במתח האקנלוגי החמצן, הבולם היורד כמקור בשיטת של מצע מליטר במצע שקפסולציה פחמן, כמקור מתקבלת פחמן. והחנקן. במעקב אחר נתקבלו התוצאות מפוליטכריד ה נ מ ו כ י ם של כ,2$- הבסיס בעל פחמן ששמש לגידול ואשלגן לשוני כמות המסוכמות תכולה לחנקן, היה גבוהה להטרופוליסכריד הפלוובקסריום היה היחס פחמן והטמפרטורה במעבר כבר שברכ,וז נמצא -קבוע המזון. במצע ה ר ג י ל ה pH - וקביעתם הגלוקוז הםוכרוז םוכרוז והרכבו, למעבר ביחסים ניתן הפוליםכרידים כ 2 0 -מגי* נוספים ה י ה יי׳ הגדול C / Nבקרקע ביחסים הגבוהים של פחמן ל ח נ ק ן . לחנקן. 1 5 0 : 1 , החמצן״ נוספת לתרבות ל ק ב ו ע את מי י ד ת• נמצא ברכוז ה ע ב ו ד ה שמש מצע )(3 המכסימלית כ מ ק ו ר ו ת הפחמן לליטר מסתמנת שעות כ ש ם ו כ ר ו ז משמש במצע בין לפי כמות בנסויים ת ע ר ו ב ו ת של ב כ מ ו ת מ ש ת נ ה שמשו הפוליסכריד של הפוליסכריד. החיידק. בקור נורמלי במצע, כדי פוליםבריד, העלאה בחיידק נערכו בטבלה לליטר(. .0.5$ 24 גידול גלוקוז למדדה הקפסולציה מכסימום מאפשר 0.25$ שאפשר במשך הפלוובקטריום השפעת *»DP משתת TCA הפקנו גלוקוז ה ע ו ם פ ת את הנחנו לקביעת 32 ב ר כ ו ז של בקפסולה לחים תפוקת ברכוז ניטרטי רק כמותי, .בנםויים גלוקזז )כ2- אולם, ב ת מ י ס ה של 1 0 $ האנטרון. 0.5$ נמוך במיקרוסקופ, הקפםולציה לא כה כ0.01$- - קולחין ביומיים סינתטיים ה ר א ש ו נ י ם של בעמודת ההחדרה החול אל הנו מתחת - מס. טבלה השפעת י ח ס :4 פחמן/חנקן ה מ ע ט פ ת י של יחס ה C/N* - בגרמים 33 - במצע על Flavobacterium sp.ו ה ר כ ב ו . $ מגי פוליסכריד ) י ב ש ( שמצה ^ T C Aלליטר מצע ג ד ו ל גרם תאים לחים לליטר מצע** הגידול, כמות ה פ ו ל י ס כ ר יר הסוכר בתכשיר ל פ י שיטת פגול יחס גלוקו ז לכלל הסוכרים גלוקוז לפי גלוקוסטם 12 0.73 4 62.5 58.2 0.93 150 2.00 32 82.0 39.2 ' 48־ 0 600 2.50 56 64.0 33. 3 0.&2 * היחסים ובשנוי ה ש ו נ י ם ה ו ש ג ו ב ה כ נ ס ת כ מ ו ת ק ב ו ע ה של ס ו כ ר ו ז כמות חנקת האשלגן )מקור ה ח נ ק ן ( ,בהתאם. )מקור , Cתוך אורור * * ה ג י ד ו ל ע ר ך 5-7י מ י ם 25° ,בטמפרטורה ש ל ל ד ק ה ( ,על מצע ס ט נ ד ר ט י נ ז ל י המעשר ב 1 $ -ם ו כ ר ו ז . אויר V 2 5 0 ל־ גידול מתח או חיידקים החמצן בעזרת ה(0- כחול תוצאות על במתחי ב ,m V - צבעי אינדופנול ואליזדין m ע ל כן זהות. היצירה * פ ר ו ט נסויי בעבודה. נקבע צבעו צבעו שונים בעזרת אינדיקטור, )מאבד )מאבד בדקנו חמצן גורם ב- הושגו ע״י אלקסרודת צבעם ,mV(+200 במתחי חמצן כחול הפוליסכריד המעטפתי הפוליסכריד החיידקים.+ . האורור. אלקסרודת שונים, )מאבד שתי ה ע ק ו מ ו ת של )6.4 ליטר בדרגות כנגד . ( - m V מוצגות ה ד ג ר ד צ י ה של שנויים פלטינה מתילן 250 בתמונה מסי 3 המעקב אחר זה המשנים ב- ו ה ד ג ר ד צ י ה * של במצעים תוך גידול הפחמן( פנול צבעו בסביבות השיטות השפעת מתח נתנו החמצן מ פ ל ו ו בקטר י ו ם, מופיע יותר הקלומל, הגדל מאוחר השפעת מתח ודגרדציה החמצן של ט פ ל ו ו בקטר י ו ם ) ( Eh הפולימכריד על יצירה הפעםפתי - 35 - במצע סטנדרטי בלמוד , p בופר פוספט ל - תחום נמצא בכשר כ ג ו ר ם בעל מוצגת 3־ השפעה על התאים ע ״ י ואסוף צנטריפוגציה, המתקבל גדול ,כפי C80° מיצו P ל ח י ם של הפוליסכריד p , ע״יי ומחוץ א צ ם ם ל pH - הקפםולריהוא לתחום זה חלה ירידה הטמפרטורה נמצאה החיידקים. הפוליסכריד, שנקבע בעלת ממצה ש ה כ י ל ו 10 ל י ט ר ל ר ק ה ל 5 -עד 7 יומיים. ה ג ד ו ל של תלות זו מפלוובקסריום פלוובקטריום, ה ו ס פ ה של 3 2מג׳ פוליםכריד נפחי פוליסכריד הפנול-חמצה מ כ מ ו ת של כ גידול ממנו אתנול נתקבלו גפרתנית. מ ל י ט ר של מ צ ע מים הורחקו לתםנין, מליסר - חמים תאים-2 גרם בצנטריפוגת - המשכית. לקפסולות ב ר כ ו ז י ם של 5-10$ lagשל בשיטת שנתקבלו זרימה הקפסולרי נתקבלו ע״י כ מ ו ת של 2-3מגי* בחפוש אחר ליטר ממצע בצנטריפוגה. פלוובקטריום - Sharpless . , ו ה ד ג ר ד צ י ה של הפוליסכריד אקסטראצלולריים החומר של מ צ ע 6 הפוליסכריד ובופר בבופר םודיום בורס ב ת מ ו נ ה מסי" .4 חמרים של 15 H היצירה שיטת הבדזד ו ה נ ק ו י של אצטית p ה י צ י ר ה של 7-9 ה י י צ ו ר של נעזרנו H שאופםימום 1־1קקבוע הגדול 5.5-8.0 היצירה נע בין תלולה ( מעשר ב 1 $ - ה ש פ ע ת ה pH -ב מ צ ע .3.5-5.5 pH ~ 7״ נוזלי סוכרוז )כשה- ל.(7- בקור הפוליסכרידיות, כמתאימה. ל י ט ר מצע החיידק סטנדרטי ימים ב ט מ פ ר ט ו ר ה של בתקופה הלוגריתמית נמצאה נזלי .C25° גו-דל החמצה בבקבוקי המעשר ב 1 $ - בגדול ע ק ב נ ו אחר סריכלורו- הבחנו העכירות, פלסטיק ס ו כ ר ו ז ,באורח־ בתקופת הצמיגות, ־ - 36 תמונה מם' .4 השפעת של הטמפרטורה הפוליםכריד על היצירה המעטפתי והזוגרדציה מ פ ל ו ו בקטר י ו ם . - הופעת משקע )תהילת בתוספת התקופה המשכית 10$ v/v TCA במשך ב- Sen-vail -5$ של הקפסולרי שעות־ 10 מהם המימית הושקע המתקבלת של של אתנול בלתי ברכוז י של חמצת חמץ. א ת נ ו ל של הורחק. שתי בנפחים עורבבה 15 של הכיל נפח זו הושארה דקות דקות רק הוספנו בחדר הוספת )5000 ס.ד,. אתנול 9 6 $־־ כך שעות. והמשקע לתסנין ם.ד. חוזר צנטריפוגציה צורפו אתר. TCA וה- מהתמיסה המשקע בחדר שנתקבל קור. התמיסה להרחקת עקבות ערבוב לכן נפח שעות ם .ד . ( .המשקע ע ר ב ו ב 1$ ל־16 מגנטי למצוי למשך שלש פוליסכריד, אתנול תוך קור הוסף תמיסת ב5000- ס.ד(. תוך מצוי בוחש אצסון. כשעתיים מגנטי כ35$- ש ו ו ה של ב3000- . בבוחש של זרימה נ פ ח י ם של נערכה )5000 המתקבל מצע״ התמציות נפחי דקות תקופת דקות נלקח שווים ועורבב העליון 10 המצוי בבוחש לנוזל 72$ בסיום 15 בעזרת המשקע מגנטי ולתמיסה של בעוד חוזרות הוספת 4 של ע״י הוספנו 20 תוך הגדול בצנטוייפוגת לליטר ערבוב הוספת אתנול התמיסה ע״י שני צנסריפוגציה אתנול, ( והמשקע והתערובת לתםנין נעשה . צ נ ט ר י פ ו ג צ י ה של של •48$ צנםריפוגציה ברבוז (v/v תאים נשמר T שטיפות מסים. ,96$ בסיום C ס.ד. גרם לחים צנטריפוגציה העליון בסיום צנטריפוגציה,׳ לחים, נערכה A הפיגמנסציה. התאים תאים הפוליסכריד )10:1 נערכה 72$ שלש הועברה חמר ) ב5000- ע״י במים המחקר. הנוזל ב4/1, דקות הורחק לנפח 37 נערכה כ2- ממסת בסיום . שעות הומם ונתקבלו בקור, 24 אתנול הםטציונרית( Shorpless הפוליםכריך ודרגת - נוספות,, המואס שהתקבלד, לא שםש שנתקבלה סודיום לאחר ה כ י ל את והשהייה אחד אצטט מכן בהמשך תמיסה ו1$- עשינו החומר למספר השוקע ימים לא בקור גרמה שנתקבלו והכיל שבשלב הראשון ) ל ו מ60- כ60$- זה הכיל פ להרחיק ע ״ י ל ש ק י ע ת •זזופר! ליטר מצע פוליםכריד. כ3-5$- החפר ,(U.V. טפול ב - RNase(10 NaCl וביחס סובסטרס בתכשיר שעבר בקור. לאחר מ כ ן זה השוקע עד 4 8 $ )בעיקר דקות אנזים כ500- חופר גרעיניות לפי וכ 4-5$-אפר י הופקו כ ז כ ו ר שקע ה ו ר ח ק כל חפצות נוסף. גידול, מ 120-ג ר ם ת א י מגי* ח מ ר ב72$- אתנול, אתנול. הבליעה ב- זרחן ב , 3 7 ° את הופרדה והתחתונה ערכנו לשתי -פזה חמצות שבסיומו נאספה רק פרקציונציה מ 100-מיליגרם, דיאליזה של התמיסה הופרדו נוספת השוקע 48 שכבות, המזה , ה ו ס פ נ ו נ פ ח ש ו ה של ברכיזים שעות 10 תמיסה והועברו הפוליסכריד ע ו ל י ם של אלכוהול בין מ י מ י ת בה מזוקקים החמר טפול שעות הפנול, מומם - בפן- בפנול כנ״ל, המימית אוספים בנקוי את הנוסף הפרקציונציה בליופיליזר, בה הפוליסכריד שהתרכז בשכבה כשאנו ל.72$- ויבוש חוזר המצוי אתנול, 48 ט פ ו ל י ה , RNase - כנגד מים דקות תפיפ^ז ב 3000-ם .ד . ה מ י מ י ת י ח ד עם מהפנול, המימית. ברכוזי ולאחר העליונה ב0.1/^- להרחקת ח ל ב ו ני ם ^.נ^לנו RNaseבפנול. - חלבונים הגרעין C-pH7 . 4 צ נ ס ר י פ ו ג צ י ה של פנולית. הביניים הפוליסכריד פוליםכרידי 3 םים-פנול, עבר לאחר U.V, , התמיסה בליופיליזר תכשיר ^8-30$. וגפרית(. . ( w / w 1/500 א י נ ק ו ב צ י ה עם פלוובקטריום שיובש לחים יצאנו באתנול, קבלנו 40 •יי- פוליםכריד מ ס ׳ .5 המסיס תכשיר היטב מנוקה במים. ז ה שמש ה ת כ ו נ ו ת של לבדיקות הפוליסכריד הבאות. מסוכמות בסבלה מגי* - סבלה מם: 5 . - 39 הרכב הפוליםכריז־ הםנוקה שהופק ממעטפת Flavobacterium sp.כשגלוקוז ,םודיום ה- Bdvirle serum albumin ריבונוקלאט ו- מ ־ ^ .י -ד ־ ן ן .ו משמשים .״••., ,, 11ו • • ו — • n - nו - ״^- כססנדרסים. v ה ב ד י ק ה • ר ; ז י ג ׳:״• ••!•f : אחוזיםבתכולה —^|, ,ו »ffWW'1*1וווו < 1.1111 \_i ו• •111 m ——-1 •ו••••• ^N2 HjSO Park-Johnson 4 0 - 4 5 . - 95.5 סוכר כללי* לפי פנול-חנןצה גפךתנית |• )סוכרים מחזרים בהידרוליזס י 2 UisV Lowry 2 . *להוציא אמי נ ו סוכרים. בהידרוליזה חםצית של פר קצי ת החלבון ofipwמראות על ,סרוח .ח ו ג «rל חפצות האפ י נ י **החמצות האמיניות שנתקבלו _tt&ttNil$zer והופרדו ב- •';׳׳;^:־ ׳;-״׳^.:׳-i׳^v״":׳'•, י- לחלבונים .׳..׳. ; . 4 בדיקת ה ה ו פ ו ג נ י ו ת ה פ ו ל י ס כ ר י ד . 1 ה פ נ ו ק ה התכשיר נ ב ח ן המנוקד• ל פ י ד ת ה פ ו ל י ס כ ר י ד של ה ה ו פ ו ג נ י ו ת ש ב ו ב ט כ נ י ק ו ת ה ב א ו ת : א ו ל ס ר א צנ מ ר י פ ו נ ה ב פ ב ח נ י צ נטר י פ ו גה נ ע ר כ ה של ;1 ס ד י פ נ ם צ י ה נ ת ק ב ל ו א ק ס ט ר פ ו ל צ י ה סדרת ב ר כ ו ז י ם - $י ם ל ר כ ו ז א פ ס , י ו ר ד י ם ) ק ב ו ע י ב ו ש ל ה פ ו ל י ס כ ר י ד ם ב ד ב ר ג ק ב ו ץ ב א ו ל ט ר א - . (Svedberg ה ס ד י מ נ ם צ י ה ח ו ש ב מסדרה ל - 3 1 זו ~ 1 0א 3 . 8 = SJQW גסדרת המרמז של על עקומות נוכחות הפוליסכריד המשקל ונקבע חומר חושב הנפחי כ= 0.534- הסדימנטציה, השקיעה )תמונה מם' הומוגני. מקדם Vהנו הדיפוסיה פנםיונות הדיפוסיה הספציפי ) ( Vשל נמוך והמשקל )(M ונקבע ל ,200,000-ל פ י קבוע הגזים (8.31X (5נ ת ן במעט הנפחי הנוסחה להבחין ד פ ו ס י ה באו ל ט ר א צ נ מ ר י פ ו ג ה 7 כ10~ -א1.04 הפוליסכריד מערכיםשל הספציפי .D - שנעשה חושב המשקל R.T.S. הבאה: מקדם מקדם הדיפוםיה נפחי משקל המשקל .2 הרצה - S- ־ V המומס הממם g (0.99 - ( א ל ק ס ר ו פ ו ר זה ,pH - 7 כשרכוז הפולימר בזרוע ב־ ( סבדברג ) צ פ י פ ו ת ( של ב א ל ק ט ר ו פ ו ר זה .ח פ ש י ת מרמז = D ס פ צ י פ י של הסגולי .. M 7 ה א ב ס ו ל ו ט י ת ־ T (293 סדימנסציה המולקולרי 10 )R - ביחידות בעזרת פיקנומםר פוליסכרידים .מנתוני )DlP?g הטמפרטורה בשיא אחד בלבד על פולימר בצעו בבופר 0.05 הפוליסכריד הנר ה י ו ר ד ת של טעון M veronal .0.3$ המכשיר. שלילית. 2 - 1 - 1 . cm . sec . v a l t צ בתמונה מסי 6 השיא מוביליות 56x10 ״ ה י ח י ד הנע א ל הפוליסכריד מוצגת הקוטב. חושבה תנועת החיובי, - 41תםונה מם' .5 גלום עקומות הםדיםנטציה )מימין לשמאל( באולסדאצנםריפוגה, של תכשיר אפיני של פוליםכריר מנוקה ממעםפת הפלו ובקסדיום, ברכוזים II ) 0 . 2 $ , ( 1 ) 0 . 0 7 $שתי הרצות( ו .(111 ) 0 . 3 $ - בשרסום הצמוד מוצגים ערכי ה S -כנגד הרכוז ,ממנו חשבנו את המדידות בוצעו במהירות מקדם הםדימנסציה הנתון ברכוז אפם. סנובית של 56,100בדקה ,בזויות צלום של 5 0 °ב |-ו 65°-ב־־11 , ( M 0 . 0 5ובמירווחי זמן של בpH-7.0)III -בבופרפוםפט , 8דקות בין התמונות. Concentration % of the polysaccharide ־ 42 תמונה מם' .6 + גלוני עקומות הנדידה של תכשיר פוליםכריד מנוקה )(0.3$ מפל ו ו בקטר י ו ם ,בזרוע היורדת בבופר ורונל (pH לשמאל ,לעבר הקטב החיובי. של אלקםרופורזה חפשית. 0.05M ) 7 . 0ב נ ד י ד ה מימין התמונות נלקחו בדקות ה,127- ה 198-וה) 243-מלמעלה למטה(. - .3 4 3 ־ עקומת שקיעה ברכוזים עולים של אתנול כשיטה נוספת לאפיון ההומוגניות של הפוליסכריד נעשה שמוש בטכניקה שפותחה ע״י , ( W i l h a m(117המנצלת את השוני של ^ ״ ס ו ת פוליםכרידים הנםוי נערך בתנאים המפורטים בעבודתו של באתנול. הפרקציונציה וילהם ,בו לא עלה רכוז הפוליסכריד על 2מגי* לממ״׳ק. באתנול הביאה לשקיעה של 95$מהפוליםכריד בין 66-75$אתנול. .4 . כרומסוגרפיה על עמודת ספדקס 1סמ״ק של תמיסה מיסית שהכילה ןייפג׳ פוליםכריד הועלתה על מודת ספדקס -50 בנוני 10x1Gסמי(. ) של 2סמ״ק נאספות מכל מבחנה, 1 -סמ״ק נלקחו השטיפה בוצעה במים, במהירות של לבדיקת פנול-חמצה גפרתנית. 0.4סמ״ק לדקה. כשפרקציות דוגמאות של ההפרדה המוצגת בתמונה מסי 7 מצביעה על שיא אחד בלבד ,שמקומו זהה למקים יציאת הדכםטראן-כחול * על אותה עמודה ,פרוש הדבר שהפוליסכריד יוצא עם נפח הפזה הנוזלית- i , ( e x c l u d e d v o l u m eיכי מ ש ק פ י ו המולקולריי גדול מ.50000- הנעה ) תוצאות זהות הושגו עם כמויות גדולות יותר )עד 20מגי( של פיליםכריד. הפרדה של 1סמ"ק תמיסה מימית שהכילה 1מגי פוליסכריד, G -200גם )10x1 ס מ י . תמונהמיס() 8 ( . בוצעה'גם בתמונה מם' 8 מוצגת כמו כן ,ההפרדה של דכסםראן-כחי ל ,המקדים ביציאתו את הפיליםכריד מפלו ובקםרי ום ,ממצא המאשר שהפוליםכריד בעל משקל מילקילרי נמוך )בסביבות ה (200,000-מהמשקל המולקולרי של דכססריאן-כחול ,העשוי ל.275,000- להגיע תוצאות ניסוי זה מעידות כי הפוליסכריד הוא כנראה פולידיספרםי )למרות שבבדיקות אחרות נראה היה,כי אין הוא כזה(. - 44 - מסי תמונה .7 —rו—ו—ו—ו—ו—ו—ו—ו—ו 4 6 8 10 )Tube No. (2m.l/tube כרומםוגרפיה קטריום 1־ ע מ ו ד ת ספדקמ 50על להפרדה מים 2 של הפוליסכריד תכשיר , הושמה מזוקקים. נעשתה םם״ק. סךכר-כללי השטיפה ד ו ג מ א של 1 בשיטת )G םמ״ק הפנול. פוליסכריד, במים, סכל 2 המנוקה 10x כ מ ו ת של 1מגי* סמי(. המומס כסנאספות פרקציה 0 נלקחה ב1- םמ״ק פ ר ק צ י ו ת של לבדיקת - 45 תמונה מם' .8 ) Tube No. (I m l / t u b e כרומטוגרפיה של תכשיר הפוליםכריד המנוקד. לוובקטריום על עמודת םפדקם • : • ) G-200גם•( להפרדה הושמה כמות של 1פג׳ פוליםכריד ,המומס מים מזוקקים. 1םמ״ק. הפנול. ב1- )10x1 סמי(. ב 1-םמ״ק השטיפה נעשתה במים ,כשנאםפות פרקציות של כל הפרקציה נלקחה לבדיקת םוכר-כללי בשיטת בהשואה נלקחה דוגמא של 1מגי• דכםטדאץ-כחול םמ״ק מים .ההפרדה של הפוליסכריד מפלוובקסריום מוצגת בקו המלא ,והדכססראן-כחול במקוזקו. ־ הכימי .5 ההרכב א . המרכיבים לאחר של הידרוליזה סםפרסורה וזמן, משתחררים מהפוליסכריד למשך לסמ״ק משקע מים נמצא שעות. םכרידים. חמצה. בתנאי התסנינים מם'.1 תוצאות בתמונה מסי 9 הנדידה מוצגת בו נקבעו אלה הורחק ופי ע״י סנון בכרופטוגרפית בברור כתמים נויר של ^, BaCO יצירת כמות תוך של קטנה בליופיליזר. Aו־ Bפסוכסות אפיני, הסוכרים המונו־ מגי* יורדת הידרוליזט ב- פוליסכריד ע״י ויובשו C100° ללמוד 10-25 אבקת ונשסף מוזגו של ^HgSO של רכוזים, שי-טו; .פ ר ק -ג ' ו נ ס ו ן ההידרוליזה כמות ממיסים לפי שלא21 נוטרל השטיפה כרומטוגרמה נראים הושמה שורת חומצות, מחזרים כתנאי ע״י במערכות נבדקו סוכרים שנתקבל זוהו בהם הידרוליזה אלו המשקע פההידרוליזט ממיסים מכסימום ההידרוליזס רותחים. ,A המעטפתי מוקדמים הידרוליזה ^. BaSO הסוכרים כי תנאים בתנאי של מפליוגקסריום ה מ ו נ ו < 8כ ד י ר י י ם נסויי כ4- 46 הפוליסבריד - על נייר בטבלה שנדד וטמן מם'.6 במערכת את העקר י ים;::.חמרכיבים הפוליםכריד. לשם זהוי פהפוליסכריד ואפיון בכמויות נוסף של של המרכיבים מיליגרמים. המו נ ו סכר יד י י ם של מכמות 2 ברם הוכנו הסוכרים פוליםכריד * קבלנו מ2- עד בכרוםטוגרפיה מיצוי הפסים הםרכיבים המוקדמים. גבישיות, ^40מיליגרם מכל פריפרסיבית של בעודף הסוכריים מים, הריאקציות נדידה כללו המרכיבים. ההידרוליזסים סנון הבודדים סוכר מששת התמיסה בוצעו אלקטר ופ ו ר ט י ת , ויבושה ריאקציות ריאקציות על צבע, ריאקציות כל ניירות זאת וסמן מם' בליופיליזר. ספציפיות נ ק ו ד ו ת הותוך אנזימםיות על לאמות של ומדידת ״ 3 י ששת הממצןןים נגזרות הסבוב האופטי. ־ - 47 :6 טבלה מ ם . הנדידה ערכי המרכיבים ( R^jy העקריים בהידרוליזט מ- ) ( של המונוםכרידים בכרוםםוגרפית ח מ צ י של הנייר, )ששת המתקבלים הפוליסכריד . .Flavobacterium sp. מ?נר כ ת מ מ ס י ם A ממיסים מערכת B •י i . סוכר רימגו-ז סוכר רי ב ו ז 3.11 3.14 2.85 2.25 1.63 1. 63 1.25 1.25 1.00 1.00 0. 37 0.37 2.00 2.02 1.72 1.72 1.55 1.55 1.11 1.11 0.99 1.00 0.70 0.72 II III סוכר קס יל ו ז IV סוכך מנו ז V סוכר גלוקו ז VI סוכר גלוקורונית חמצה ~: י׳ י רווינו ז ז' v ז על ונבדק ס ד ר ה של ספקטרום סוכרים ה ב ל י ע ה של ה-6-דזאוכסי-הכסוזות בתמונה מסי* 10 מוצג פרסו ז, רמנוז והסוכר אפיון נוסף ע״י ל־־1ן^, 427 שהנו ריאקצית בצעה הצבעים מצטיינות ספקטרום שנתקבלו בשיא חד ה ב ל י ע ה של םפלוובקטריום ספקטרום ח י ו ב י רק בליעה זה ב מ ק ר ה של דישה •"•'־ 4־- בתחום הני*#ה ב י ן )מכסימום גלוקוז, הנחשד נעשה ל6-־־דז א ו כס י^הכסוז ו ת בליעה( ב 4 -ן ו ז ו . 396 2־־ד ז א ו כ ס י -ר י ב ו ז , כרמנוז, בחשוב .m|j.300-450 בריאקצית דישה. ה ה פ ר ש ב י ן 396mp -6דזאוכם י-הכמ־זות )ראה ת מ ו נ ה מ ס ׳ .(10 - 48 תמונה סם' .9 ? •# Rhom- —Rib —•xy Mon—Glu Glu.o. I I 8 A I Ft, I I B A כרוםטוגרמה של הידר ולי ז • 0וזימצי של הפוליםכריד ום ) -100°C'0 2 SHשעתייםבH, 2 4 שהורץ ( בברומסוגרפית הנייר במערכת מפיסים , ,Aופותח ^ - A . AgNOg-תערבת סמנים המכילה גלוקוז ,מנוז ורמנוז. .- Bתערבת סמנים המכילה חמצה גלוקורונית ק ס י ל ו ז וריבוז. - 49 - תמונה מם' .10 0.6 0.5 0.4 Flf Rhomnose 0.3 Porotose Fast running sugor from Fl, Rhomnose _2-Deoxy ribose 500 קטרום בליעה בתחום הנראה ) שהתפתחו 450 0.1 0 Glucose 350 400 y 350-500 0.2 m ( ,של הגבעים בהגבת סוכרים בריאקגית דישה ל-6-דזאוכםי הכםוזות. מכסימום בליעה ב- 4ןוזו 396מ א פ י ז את ה6-דזאוכםי-הכםוזות. Rhamnose־ Flהסוכר שזוהה כרמנוז מהפוליםכריד של פלו ו בקטר יום. ־ 50־ הכנת פיקציה הממם נ ג ז ר ת של בתמיסת הורחק נקודת מסחרי גרמות ח ה ת ו ך של קםילוז ממיסים שפותחו החמר*ם כפי ה י ת ה זהה החמר לןןתיל תוך ר פ ל ק ס של שש שעות. ג ב ו ש מחדש במתנול. המתקבל עבר רמנוזיד התערבת היתה ע״י־י ם.-1-רמנוז שנתקבל זהה. וקס י ל ו ז במערכות ,(108 ש ה כ י ל ה , ( H C I(1182$ ,c09°I הפנטוזות שני המתיל!. -י-רמנוזיד זיקוקי בוקואום. ונקודת } ריבו ז מתןול ע״י ההתוך רמנוז, בצעה גליקוזידי־ נתנו וריבוז שזוהו Aו ־ ,6נצבעובצבע באנןלין פטלט. ב ל י ע ה עם ש י א פנטוזות ש נ מ צ א גם עם בערכי אדום האפיני ..במו רכן נבדקו ב- בכרומםונרפית לפנטוזות, בכרומסו- הפנסוזות בדיאקצית אורצינול mp 520 םסחריוןז, נדידה הנייר ה מ א פ י ן את ב-ם-קםילוז ו ב -ס - הפנטוזות, ויבוז. ,ם נ ו ז a 25 למנוז הזהה שבודד עם זה של -P - Nניסרופניל לפנוז, ע ״ י פרה של 10 בםתנול. דקות נ ק ו ד ת ההתוך שלהם גליקי ס-מנוז מ ס ן ז ר י ).(118 ס ־ מ נ ו -פ י ר נ ו ז ילאמי ן ניסרו וסנון המסחרי ,216°C מ ה נ י י ר היה סיבוב אופטי בעוד היתה אנילין, התמיסה חמה. נגזרת נתקבלה בתמיסת מתנול ס ו כ ר י ת של ב ט פ ו ל של חמצה הגבישים l4°cבדומה ,2 בספרות בשווי משקל של 1 4 . 2 ' - ,fajp הסוכר החשוד מ ל ח י ת ),(119 שנתקבלו למוצר גובשו מ- רפלקס מחדש ס-מנוז .216-219°C ז הגלוקוז )ריאגנט בריאקציה שבודד מהנייר הגיב גלוקוסטס(, בתגובה ס ג ו ל י ת זהה א נ ז י מ ס י ת עם ל־־ס-גלוקוז גלוקוז-אוקםיד ז מסחרי. נגזרת ־ 51־ מסחרי, של N זה וגובשה בספרות - Pנ י סר ו פ נ י ל - בםתנול, היתד. הערך חמצה ס־-גל וק ו -פ יר נ ו ז ילאמ י ן בעלת נקודת ( התוך ),(119 של שהוכנה זהר,. ,C184° מסוכר לנגזרת . ( C 1 8 3 - 1 8 4 ° 1 1 9 גלוקורונית הסו:כר כחמצה פהפוליסכריד גלוקורונית, ה פ ל ו וי ב ק מ ר י ו ם של והתאפין הורוד בצבעו שזוהה בפתוח בכרופטוגרפית אנילין עם הנייר פטלט, i •י. אופיין בנדידתו אף האלקסרופורזה 25 דקות דישה בליעה, הסוכר של האחד הנחשד המסחרית, והיה את צבע ההבחנה של הראתה לחםצה גלוקורונית מהמוכר אצטית גלציאלית החשוד חפצה עם פירידין בין קטנה מהמצה : אצסית חמצה מים, : עם בין חומצה ב־־גןוח , 4 9 6 הגיב וחמצה אורוניות סיוגליקולית שונות. גלוקורונית והשני באופן בעצמה זהה בבחינת נבחין חזקה לחמצה לפי בשני ב4-ןוח.375 הגלוקורונית גלקסורונית. נוספות בין גפרתנית חפצות המתפתח בשיטת הקרבזול ע צ ס ו ת המליעה החמצות ,1.35חמצה . 8 0 ° עם גלוקורונית והיחסים יחס ב־ בעצמה שונה ( H o f f m a n (106 הבחנה הצבע בחומצה ריאקציות מאפשרים אורוניות מאפשרת הבליעה בופר ג ל ו ק ו ר ו נ י ת מסחרית. וולט. חםצות ),(105 ספקטרום שיאי נערכה ב3,000- הגבת באלקטר ופ ור זה, ב־־||-ק,6.5 בדומה לחמצה י ובשיטת האופטית בשתי האורוניות. גלקטורונית מסחרית האורצינול השיטות החמצה , 0 . 6 - לפי )קרב זול ב י ח ס הגלוקורונית והסוכר לאורצינול( המסחרית החשוד .1.27 לחמצה גלוקורוניית Cה ל ק ט ו ן נתקבל זוהה לקטון בטפול בכרופטוגרפית בחמצה הנייר במערכת ־ ממיסים ) u ב. G l Aכבעל זהה נדידה מרכיבים סוכריים המהיר המופיעים • ,א ו 15 . בעל חמצה בנדידתו דקות נ-דידה o ב- בכמויות מ ת ו נ ה של HjSO מהירה בפולימכריד זעירות מהרמנוז Hבתנאיה י ד ר ו ל י ז ה ח ו מ צ י ת ב מ ס ח ר י של גלוקורונית ׳ R־ . ( 1 . 8 7 סוכר C 52 ללקסון - ^ מהרמנוז, 1.08 הפוליםכריד 1 = י N R.^^. N ,ה ו פ י ע כתם .מ ח ז ר במערכת ,A ממיסים ו1.17- v . B במערכת העולה נדידה, הניירA גרם על ו- ז ו של במעקב אחר N ב100°0 הסוכרים רגילים סוכר השתחררות בזמנים ב י הפשתחרר. 5 2 - 15 מסי* ° 0 להכנה פ ר פ ר ט י ב י ת של שנעשתה הידרוליזה דקות מםרית ב.(C100° נדידה ה י ד הסוכר מהיר מהיר מ ס ב י ר ה את א י 0 הסוכר 1 ״ מהיר חמצית.מתונה בתנאי ר דזאוכסי ו ? ו י ז ה הידרוליזה ש ^ התוצאות נדידה הנדידה המצגת הרפנוז( חיידקים סוכרים. זה, לשעתיים ,נתקבלו בכרומסוגרמה ז ה ל ה י ד ר ו ל י זה;• ח מ צ י ת לו מהיר סוכר .11 רגישות בברור שששעותCH 2 4 פוליםכריד ז בתמונה נראית )זאיזוםרים 100°Cובתנאי דקות כרומסוגרפית ה כ ם ו ז ו ת מ ל י פ ו פ ו ל י ם כ ר י ד י ם של סוכר ^HjSO ש ה מ ם י ז ם י ם של ס ר י ו ז ו ת ר מ ו צ ד י ,ד ג ר ד צ י ה ש ל 0.01 בכרומטוגרפה במערכות - 6ד ז א ו כס י -ה כ ס ו ז ו ת , סםרוזות, , הרמנוז B:6,3ד י ד ז א ו כ ס י שליליים, פנסוזות, ממיסים זה, להרס בתפונה הופעתו 1NH S המוצגות הוא ראשוץ במנאי .11 2 ^4 הידרוליזה רגישותו בתנאי של ההידרוליזה . הנדידה השתמשנו ב3- N)HjSO^0.01 גרם , תמונה 00 r 53 ־ .11 הפוליסכריד כ ר ו מ ס ו ג ר מ ה של ה י ד ר ו ל י ז ם י ם ח ם צ י י ם של N-H2SO40.01 הידרוליזה מתונה ב מ פ ל ו ^ ב ק ס ר י ו ם. ) 60 , ( 1ד ק ו ת ) ( 2 ל ת ק ו פ ה ש ל 15 :ד ק ו ת C 100 ב- ב C100° - H2SO4 ה י ד ר ו ל י ז ה של 1 N .()3 דקות ) (5ו ־ 1 2 0ד ק ו ת ) . ( 6 ) 60 , ( 4ד ק ו ת 15ד ק ו ת של: ו ר מ נ ו ז )מלמסה ) ,(7מכילה ג ל ו ק ו ז ,ר י ב ו ז , סמנים - aכ ר ו מ ט ו ג ר פ י ת ה נ י י ר בוצעה כמערכת ממיסים A - b - בעזרת חנקת הכסף. זוהו כ ר ו מ ס ו ג ר פ י ת ה נ י י ר בוצעה בעזרת הנקת הכסף. זוהו במערכת ממיסים B - ו120- לתקופה תערבת לפעלה(. והסוכרים והסוכרים - 54 - \ י• י • 7י ׳ ־ ׳ • ראה ־־ w־ ״ * ׳.. : . •V>s. ה ע ר ו ת לתם וינה םם־* 1 1 ""'"׳ד* צ י ה של B ה ה י ד ר ו ל י ז ם עם פרפרטיבית מיצה על נייר מהנייר יבש שנדד ככתם דזאוכסי הטיבולוז בוסנול יחיד בכל סוכרים ב- נתקבלה שלילית , 6 , 3ד י ד ז א ו כס י ו 3 - בריאקצית דישה שנתקבלו עשויה לנבוע מנוכחות המחוזקת ע״י התגובה ׳בריאקצית כרומטוגרפיות כרופסוגרפית נייר אלו נדידת אחרות ןזשותה פוקוז ).(126-122 מ ה פ ו ל י ס כ ר י ד של אלקטרופורסית ) ב - בה דישה, מיוחדות לרמנוז, הפרדה 6.5 החמצה פוופ׳ התוצאות בצענו הכסוזות הסוכר התוצאות מהיר באופן ב ל י ע ה עם הסוכר ולנתונים ריאקציה ),(121 מהיר מסוכמות איכותית הנדידה ל-6- אפיני מהפולי- מתילית, בפערכות ).(124-122 השערה הרצה בנסיונות הנדידה מהספרות בטבלה .7 דומה הנדידה נםיונות מהיר בפירידין : מכסימום כקבוצה ל־־,6,3 וסספל, הסםוכמות הסוכר הידרופובית ל-6-דזאוכסי של פ ל ו ו ב ק ם ר י ו ם אמינו-סוכר קבוצה I־ .( A בכר ו ס ט ו ג ר פ י ת ה נ י י ר םפקםרום חמר םהפוליסכריד למעבדות סוכרים. ה מ ו א צ ת של ) שנסו ב ר י א ק צ י ה, ( W e b b(120 דזאוכםי מהיר הנדידה ו נ ת ק ב ל ו 5פגי* שהופק נתקבלו המפתחות צבע בעל . m ! a סכריד, הנדידה ל-6-דזאוכםי-ד.כםוזות מאחר הכסוזות הכרומסוגרפיה ,(C ממיסים והנדירה םכריד בהפרדה הסוכר הסוכר בליופיליזר מהיר מסלמוגלות, )מערכת דזאוכסי-הכסוזות 396 יובשה מערכות .A בסמם ו ה פ ר ט ו ז ,ו 2 -ו ז א ו כס י -ר י ב ו ז תוצאה הגיב התמצית להשואת :מים לאפיון , ווטמן מם׳ 3 במים-,״ בנםיונות די 0 ו י ב ו ש C 0 3נ ע ר כ ה כרומטוגרפי מהפוליסכריד -6דזאוכסי- עבור בסבלה מ ס . .8 פלוובקסריום H p ( של הידרוליזס ה ג ל ו ק ו ר ו נ י ת ש ב י מיתר חמשת ח מ צ י של ה פ ו ל י - המרכיבים העקריים - םם. סבלה ערכי :7 הנדידה בכרומטוגרפית הנייר, נתגלו גם אמינו סוכרים כתמים בנינהידרין, לשם - - עמודת אמין. ממיסים כמותית (129 מחזרים חלשים בפתוח סוכרים Dowex נדד כרומסוגרפית ,A נקבעו אלו, רכזנו אמינו את C הטכניקה שהסוכר של הסוכר נודד בשיטת בדרך זהה האפיני הרכוז במהירות ),104 על נעשה באלקםרופורזה לגלוקוזאמין שבוצעה והן מהידרוליזס מהאלקטרוגרמה אלסון-מורגן הכתמים בסמנים. פוליסכריד. זו, הן היות ^AgNO ש ל . ( B o a s (127 לאםינו-םוכרים, א ר ב י נ ו ז -ה ס ו כר ב־ משמשים גרם ש?ןצה באופן הן השלילי. ה א מ י נ ו -ס ו כר י ם 2 הבסיסישנתקבל (Stoffyn-Jeanloz של מ נ ו ז א מ י ן . לכוון וחמצות ( נייר הקטב אלקסדוגרמות-זהות האמינו-סוכרים שחררה R 1.16 1.16 1.25 1.29 1.29 שנדדו באמצעות הסוכר הראתה בספרות 1.02 1 0 0 °ש ל -50 סהפוליםכריד והן הנדידה 1.29 כ ש א מ י נ ו -ם ו כר י ם pH 6.5 הממיםים בנםויינו . C 1.25 אושרה בדיקת N על של במערכת ד י ד ז א ו כ ס י ס ו כ ר ים Rha קוליטו ז א בק ו ז פרטו ז אםקר י ל ו ז ט יבו לו ז הסוכר .מ ה י ר -ה נ ד י ד ה מ פ ל ו ו בקטר י ו ם ב י ,׳ ( R Rna הנדידה הסוכר 56 ) - זהה והרצתו במערכת ומנוזאםין. .(128 הסוכר לדגרדציה לגלוקוז- של דגרדצית האמיני גלוקוזאמין ־ 57־ פס׳ סבלה ערכי :8 של נדידה 6־־ד ז א ו כ ס י -ה כ ם ו ז ו ת ביחס לרםנוז ) Rha מערכת ממיסים הדזאוכםי סוכר ,מהיר ה נ ד י ד ה מ פ ל ו ו בקטר י ו ם * פוקוז Rha C 0.74 1.02 D 0.90 1.15 E 0.68 1.36 F 0.78 1.26 1.42 H 0.66 1.44 I 0.92 0.96 G *אין R 0.68 התאמה האיזומרים מתילוז, בהשואה בין של נדידת הדזאוכםי ה־־-6דזאוכםי גולומתילוז, לנתונים הכסתות פוקוז, מהספרות סוכר רמנוז, ).(126-122 םפלוובקסריום )אלומתילוז, טלומתילוז לאף אחד אלסרומתילוז, או משמונת גלוקו ידומתילוז(, ־ רק במערכת ם ו ל ו ו נ ס י ם גלוקוזאמין סכריד ממנוזאמיץ. ב א ו פ ן זהה נדד י במהירות גבייה ג. במערכת ז ו נ ד ד ה ס ו כ ר ה א מ י נ י של ה פ ו ל י - ו י ^ הרכב כמותי• של ס ו כ ר י היחסים בקסריום ה כ ו ל ל ת פ נ ו ל ו מ י ם ,אפשר ל ה פ ר י ד לגלוקוזאמין ת 58 ,J 1 9 ) 1-00־ • ן \ ן ן < ( ^ 5 0 • 1 = בעוד המנוזאמיץ •(^GluN הפוליסכריד הימולריים ב י ן ה ס ו כ ר י ם הראשיים בפוליםכריד מפלוו- נ ב ד ק ו בשלש ש י ס ו ת ש ו נ ו ת ב ה י ד ר ו ל י ז ם חמצי שעות כ פ י שמסוכם בטבלה ד. - 2N ^, h^SO מ ס . 9 מ ר כ י ב י ם שאינם ס ו כ ר י ם בתכשיר הפולימכרידי ה פ ר ק צ י ה ה מ ל ב ו נ י ת הפל ו ה את ה פ ו ל י ס כר יד ה מ נ ו ק ה מ ו ר כ ב ת מטווח רחב של ח פ צ ו ת א מ י נ י ו ת , עדות ל ז ה ו מ ח ל ב ו נ י )טבלה פ ס י . ( 5 , המבנה של ה פ ו ל י ס כ ר י ד המעטפתי מפל ו ו בקמר• ום .6 פזור א. הסוכרים השונים בפולימר בלמוד סדרת המבנה נעזרנו ב ה י ד ר ו ל י ז ו ת חםציות חלקיות. ערכנו ה י ד ר ו ל י ז ו ת ל מ צ י א ת ה ת נ א י ם ה א ו פ ט י מ ל י י ם המשחררים מ כ ס י מ ו ם ק ו מ פ ו נ נ ט ו ת של אוליגוםכרידים. ורכוזה, טמפרטורה גפרתנית ב ־ & 1 0 0 °ב ז מ נ י ם משעה עד 24שעות נ מ צ א ו פ ר ג מ נ ט י ם של א ו ל י ג סכרידיס. וזמן ב ה י ד ר ו ל י ז ו ת נ ב ח נ ו ם*ו ג החומצה ההידרוליזםים ע מ ו ד ת םפדקס . G - 5 0 הפרדה ,5 שונות נתקבלו ההידרוליזה. נוטרלו ב ה י ד ר ו ל י ז ו ת -V והומסו 0.01Nחמצה במים, ו ה ו ש מ ו להפרדה על השםיפה.נעשתה ב ע ז ר ת מ י ם עקומות ב ה י ד ר ו ל י ז ו ת שבוצעו ,12ו 2 4 -שעות ) ת מ ו נ ה מסי* . ( 1 2 מזוקקים ב ע ר כ י זמן ש ו נ י ם , 1 ,0 בסדרת ה ע ק ו מ ו ת נ ת ן להבחין 59 טבלה מסי* :9 היחסים העקריים של בין הפוליסכריד ן* שימה המרכיב חמצה הםולריים ששת והמרכיבים הםעטפתי ןן** ןןן*** הסוכרי גלוקורונית 0.5 גלוקו ז 12.5 מנו ז 7.5 . הםוכריים <sp.-t Flavobacta¥ium ערך ממצע משלש השיטות 0.5 1.0 Q.7 12.0 9.0 11.2 5.0 5.8 ׳5.0,0 . '~ iH•••;!•'. קסילוז 1.0 2.0 1. 0 1.3 ר י בו ז 0.5 1.5 ..5״0 0.8 רמ נ ו ז 3.0 3.0 5.0 3.7 פ ר י פ ר ט י ב י ת על נ י י ר כ ר ו מ ט ו ג ר פ י ה *בהפרדה ו ק ב י ע ו ת כ מ ו ת י ו ת של ס ו כ ר מהנייר, בשטיפה וליזט על A במערכת ממיסים מחזר בתמיסות הנפרדות. 96( H a l l e n 8 x 2 - D o w e xלפי, עמודת כ מ ו ת י ת של ה פ ר ק צ י ו ת ה ס ו פ ר י ו ו ^ ה ש ו נ ו ת . וקביעה , HCI ( , , Aפתוח ה ה י ד ר ו ל י ז ט ב כ ר ו מ ס ו ג ר פ י ת ה נ י י ר במערכת מ מ י ס י ם ***הפרדת בא נ י ל י ן -פ ט ל ם ו מ צ ו י ה כ ת מ י ם ב ע ז ר ת ת מ י מ ה ש ל א ת נ ו ל הכרומטוגרמה 0 . 1 Nב ה ש ו א ה ל ע ק ו מ ו ת ס ט נ ד ר ט של ה ס ו כ ר י ם ה ש ו נ י ם ).(107 - תם ונה מם׳ 60 - .12 Tube number הפרדות הידרוליזםים חלקיים של הפוליםכר יד םפלוובקםריום, כמות בפרקי זמןסונים.-100C ב N4 שבוצעו ב0.01SO2H- סל 1מג׳ )אקויולנםית לפוליםכריד( הושמה להפרדה על עמודת ( x 1סמי 1 0 )Gת ו ך שטיפה במים במהירות סל 20םמ״ק נאםפו פרקציות של 1סמייק ,כשכל הפרקציה נלקחון בסעה. לבדיקת סוכר כללי בשיטת הפנול-חםצה גפרתית. 0 ספדקם -50 ( 12 ,שעות בהידדוליזה פוליסכריד ללא הידדוליזה ) )יי״*״*•״( ,ו 2 4 -שעות בהידרוליזה ) . ( - •• - •.-לבדיקת המבנה הכימי סל הפוליםכריד נלקחו הפרקציות ,III , JI ,1ו, IV - מדוגמא שעברה הידרוליזה של 12שעות. 1 - בהתפרקות הנוזל החמר הפולימרי )זמן אפס(, המונוסכרידים. ליזה של הגבה ואילו להכנה 61 מולקולרי, בהידרוליזט'של כ מ ו ת י ת של הנע 23 12 4 פרקציות אוליגוםכרידיות עולות השרשרת באורך G שנקבע 2 החמר זה ׳־ יחידות, כפי י \' בשיטת ם עד פרק-גיונסון 4 למוכרים הנייר ב־ במערכת N סכרידים השלם, ביחסים חםצית, ו- זמן לאחר בהמשך בשיטה הזהים ממיסים Aעד ר ר הםוכריים בקרוב, ה י י כ ם ו ת י ת של , היחידות הסוכריות המעקב (. שנקבע' ־ הידרוליזה פרקציות אלו 96 שעות. ו כל הראשיים לאלה אנילין חמצית נעו לא בהידרוליזה ארבעת האוליגו־ המופיעים שמצאנו פטלס פרקציות בפולימר השלם. בפולימר ) (107לאחר הפרדה במערכת .A סדר כבר םולריים נקבעו מפיסים בפרקי ש ב־ ח א ת כ ל ששת ה מ ד כ י ב י י ם הסוכרים ב. מחזרים, 10q°C\.ש ע ו ת בכרומטוגרפית עתיים נלקחו י״ לפני בתחום בהידרו- . ואחרי חזית בכרומטוגרפיה 1 20 עם בחרנו מהידרוליזט כפי ה ס ו כ ר י ת ס־ 8ע ד פרוקו מתרכז אוליגוםכרידים, הומוגניות, מ ו נ ה מ ס ׳—IVר לפני שעות H j S Oב. 1 0 0 ° 0 ^0.01N שעות אלו - אחר נעשה השתחררות בתנאי עולים. 15 ההידרוליזה bב ת נ א י הסוכרים הידרוליזה ראשון דקות., בשרשרת עד מופיע הנו ד ק ו ת חמר הריייבוז ה י ד ר ו ל י ז ה של מהשרשרת 1 N הפולימרית, מ ת ו נ י ם של להשתחרר 120 הפולימרית הסוכר מהיר הנו החמר זה ולאחריו תוך הידרוליזה ^-10 °CN0. 1HUjSOב ' הנדידה, המופיע *מחזר היחידי. הגלוקוז ) ת מ ו נ ה מסי! , כל SO.״H100° C מופיעים , a .11 המרכיבים בר אחר 15 ד ק ו ת *bת פ ו נ ה ליזה פ ממושכת )6 ולאחריו שעות(. הסגר לפי ה גל ו ק ו ר ו נ י ת . ג. הקשרים ואחר הגליקוזידיים הקסילוז, פמעקב הםוכריים נית, .7 מקום בחמצת אחרי סהיר הנדידה, והחמצה והרמנוז הפנים. הקפסולה נייר התהוו נהרסו במעטפת החיצון של ).(B-13 ללפוד דיאליזה עברו הידרוליזה ^BaCO במערכת סוגי כנגד ש ל 0 . 0 1 ויבוש ממיסים הקשרים ^1 מים 2 בקרוב, םזוקקים 0SH בליופיליזר . A לגלוקוז, אוליגוסכרידים, 4 , והושם בכרומטו^רמות מנוז וכי וריכוז. החמצה הגלוקורו- כליל. הפלוובקסריום חיידק TCA בחיידקים שפשו הפוליםכריד, צ ר ך פ ו ל יק ו ל ת פר י ו ד ס אחת בפריודט עבר בפולימר ה פ ר י ו ד ם של לחפצון, מ ח ז ר ים• ש ה ת א י מ ו מ ע י ד ו ת שלא 10$ המצרי על כתמים הפוליסכריד בשטח בנוכחות ב- שלשה הקסילוז בהידרוליזה הגלוקוז הסוכריות תצרוכת C 1 0 0 °נ ט ר ו ל ב- , בכרומסוגרפיה תוצאות הסוכר הרמנוז, הפוליםכריד וליופיליזציה. אלו בתנאי הםוכריים, היה היחידות העפידים החמר נתקבלו ראשונה אחר שהתקבל רק הרס בין םוכרי. להפרדה הפרכיבים המנוז, מוצרי 15 . ( a l l 1 הידרו- ..י• בפוליפר. דקות - : שנהרס החמצון במשך שויה החמר שנתקבלו השיירים לשייר גם אחר הגליקוזידיים נתונים להתמצות ס האחר ו נ י ם ,ע ק ב נ ו י ) - 62 - לפני הפלוובקטריום בקור. בתמונה המצוי ),(A-13 מצויה מ ם ' 13 קפסולה נתן ובחםרונה עבה, להבחין בחיידקים - תמונה חיידקי A B 63 ־ ס ם ' 13 פלוובקטריום משטח ממסת ת א י ם -משטח הצבועים שנקצרה ממסת ת א י ם שעברה בפוקםיץ ממצע מצוי חמצי. גדול נזלי ב10$- TCA אימונולוגיה בעבודה י יי מפלוובקסריום, באתנול ו ה TGA - שבועות בין הורחק נתקבלו C80° ע״י שסיפת ריאקציות דקותTCA,וכנגד החיידקים פריציפיטין מחיות שחוסנו נגד פריציפיסין נתקבלו בין כל בין החיידק החיידק השלם מחיות היתה שמצה בך• הנילבה TCA בין מחיות שחוסנו ונוגודניהם באנטיםרוסים הדיפוסיה בשיטת באגד, תגובה'חיובית ובין סכריד ג. בין החדרת קולחין הנםיון חלחול נגד והסרום הפעילות אוכטרלוני האחרים. שמוצו מחיות גם ).(114 לחי ידק 'שמוצה לפוליםכריד ב- חיוביות המתאימים, החיידק הפוליסכריד, הן והסר ו מ י ם תוצאות נגד » נערכו והאנטיסרומים וכן השלם, בין )ולהיפך(. TCA שחוסנו •נגד ,החיידק הן בהצלבות, לבין ל א ח ר ששה האנטיגנים הסרולוגית, והן שמוצו המומת ב־־ המבחנים שחוסנו החיידקים המתאימים ב י ו ד ג ר ד צ י ה של ב י ו ד ג ר ד צ י ה של נגד האנםיסרום האנטיסרום מהחיות שחוסנו הפוליפכדיד )ולהיפיך(.־ בין האנסיג,נים השלם בדמום בולטות. שני הפוליסכריד החיידק באתר. האנטיגנים והסרום הפוליםכריד החיידקים האנטיגנים השלם תוך נוגדנים והאנטיסרו^ והםרום .1 ל3- כנגד והן בהצלבות לא הוכנו נוגדנים בהצלבות שנתקבלו של כמו ב ח מ ו ם של כץ יצרנו כנגד המנוקה בין הוכחה בשיטה ב־־ , J C A החיידקים האנסיגינים אף זו בשיטת נראתה לא לבין שמוצו הפולי- ב־־ TCA . פולימכרידים הפוליסכרידים המצטברים בעמודות חול, בתהליך סינתטיים' המעשי קולחין, מלמד שתקופות את כשר יובש ההחדרה, מחזירות המתקרב לכשר לאגן החדרה ההחדרה שנסתם הרבעוני )(130 - 65מם. בטבלה לסתימה החדרת על מסוכם 10 - הפוליסכרידים, הקולחין ירידה מפל ו ו בקטר י ו ם, פחמן כמקור כמתח מתח החמצן מם׳ תוחם משפיע המחקר נערך ו pH - בצורה את פעילות אחר מעשי פתרון קולחין, בשדות בחרנו בגדול לגדול האורז בעמודות, הםינתסיים. ראינו בין בגדול פרוק בתמונה לבעית על בשתילים בסבלה ב ג ו ד ל של מס. 11 ואילו האקולוגיים )תמונה ה pH - כאמצעי פשוט, זול הידועים )מטר סינתטיים כ7-ם״מ , מסוכמות הפוליסכרידים המסוגלים כמפרישי בעומד החדרת חול, הפוליסכריד. לשמור עד ש נ י י ם ( . קולחין ,4 הצטברות ) מים הגורמים על ההחדרה. גבוה מעמודות הפוליםכריד ( O r y z o sativa J a p o n i c a sensho אורז עליה הפוליסכריד פרוק מס׳ מלמדות פ פ ל ו ו ב ק ס ר י ום - את על 10 ובהתאם חיידקים להשפיע לאמצעים צמחים אחר מם׳ תוך .7-9 אפשרי במערכת פרוק להכיר תהליך משורטטת פנינו ( + m V חלחול, המסוגל הטמפרטוךה על היבוש תרבית במטרה שנסתמו בטבלה הפוליסכריד העשויים בולטת הפרוק ^־pH 250 השפעת המכיל בתוכו את .(3 החדרות מעקב ע״י השפעת בזמן גבוה נוזלי, זמן בחםרים חול, המובאות גדול טמפרטורה בחפוש )מעל נעשה עם עמודות עלית העמודות. במעבדה בלעדי. חמצן, התוצאות הפוליסכרידים ה ה י ד ר א ו ל י ת של סטנדרטי עם אחר ה י ב ו ש של הסינתםיים. בתכולת במוליכות במצע נסיון העוקב השנויים האחראים הידוע בעמודות כ3-4- תוצאות חמצן ימים חול, ובר בצוע םשרשיהם. בצות, לבדיקהשל נשתל לפני המוליכות מתח כצמח בנםיון חמצן האורז החדרת הקולחין ה ה י ד ר א ו ל י ת של מס. טבלה מעקב :10 שעור ימים ביבוש אחר השנויים החלחול, בעמודות ב׳ חש י פ תן ל יבוש. בתכולת חול שהחדירו מ י ל י ג ר ם פ ו ל י ס כ ר יד ל פ י פ נ ו ל ,בגרם ח ו ל החלחול *־Pt/p יבש 2.7 4 7 2.0 0.47 1.6 9 14 1.5 0 . 68 * מ ו ל י כ ו ת ה י ד ר א ו ל י ת ב ז מ ן *הבדיקה ב ז מ ן אפס ) .(-•Pi ההתחלתית, עמודות חול, עמודות חול שבתוכן נשתלו רגילות, במעבר קולחין לפעילות שרשי האורז בעמודות החול במעבר קולחין בעמודות חול וכוי ) , ( Pt שלשה היא בשל סינתטיים, 2.7 0.05 באחור פוליםכרידים קולחיץ ושעור מניעת מחדדות ג י ד ו ל השרשים שתילי אורז למוליכות בהם םינתטץים. קולחין, )תמונה בהם הקיימים קיימת הסתימה מתמתנת אינדיקציה ה ו צ ר ו ת שכבה של סינתטיים בתנאים ביחס ההידראולית לעומת נוספת סולפיד הברזל .(14 אורז שנשתל כל השפעה מס׳ סתימה, ) ת מ ו נ ה מסי" חסר .(15 הנוצרת ־ 67 ־ תמונה פסי 14 3 שתילי םתימתה כבקרת ברזל אורז והן שגדלו את שמשה וגפרית ללא התהוותה שכבת FeS הוצרות עמודה שכבת בעמודה הימנית בה הוחדרו צמחים, ,FeS וכשר ה- קולחין בעמודה חלחולה מנעו הן את בהחדרת הקולחי מכילי קזאין, האחרונה ירד. )השמאלית - תמונה מ ס ׳ 15 A שתילי של 68 - אורז הקולחין B נורמליים ועמדו החדרת A ) , ( A בתנאים, הקולחין, שנשתלו עם התנאים האקולוגיים, שנשתלו לעומת B לפני שתילי והתפתחותם תחילת אורז דוכאה ההחדרה ) ( B ע״י 69 -־ סבלה מם. :11 השפעת שתילי אורז על כשל החלחול ,של •''עמודות חול לק ו לח י ן סינתטיים. ימים .בהחדרת ק ו לח י ץ שעור החלחול בעמודות ללא י. , צמחים שעור החלח ו ל • בעמודות בנוכחות שתי ל י אורז *Pt/Pi 0 1.00 1.00 1 0.30 0.85 2 0. 10 0.70 0.15 0.50 4 0.21 0.34. 5 0.30 0.49. 6 0. 30 0.58 7 0. 38 0.65 3 . מוליכות הידראולית בזמן הבדיקה ) ההתחלתית ,בזמן אפס ) .(PI , (Ptביחס־ למוליכו״ת ההידראולית .2 נסיונות בדו.ד סכניקת מצעי סטנדרטי למצע המכילים אחר מצע על ב״־0.5$ אחד פטרי שהודבק שבודד מעשר חיידק של החיידקים המלחים אחוז שהגדרו כזני ו . בהם הוו זה היותו מובאת׳יותר שבודדו במצעים ממי-ים עד פםוידומונס, B * דפנות אגר(. פעילות והתוצאות נראות < מפרק 1 חיידקים חיידקים הטוב אגר גדלו הראו פעילות Arthrobacter s אלו בתמוינה מם־* מקור פחמן נבחנה .16 בשני בדוגמת המשיכו םי-ים מחוף ל ה ת פ ת ח .כש 5,ז ר ע ו ביותר חיידק ארלנםיירים, .הושג בודד זה בחיידק זן . (agar decomposer באופן לוכוז אלו ) דוגמאות לזריעה. שכנה הגדרתו מאוחר. מי-הים p אלו בארץ. ס ט נ ד ר ט י ( המעשר רק והשני ח ו ז ר ו ת של שונים לקחנו )מצע חיידקים אדלנמיידים ממקורות פלוובקםריום. הגידול בהעברות הוסף נזליים מלחים הפוליסכריד)(0.5$ לסדרת ומים מרחובות, בפוליםכריד. ,AD]- מזון חיידקים. מקרקע-רחובות. על-ידינו המלאה תרבויות בשל בלעדי.. עם ה ם נ ו ק ה של בדוגמת קרקע-חמרה גדלו אגר בקרקעי מצע מ פ ר ק י פ ו ל י פ כ ר י ד ים... אנארגניים, ואנרגיה אגר הפוליסכריד חיידקים ד ו ג מ א ו ת קרקע העברות שהכילו מפרקי לקבלת ממלחים פחמן מהפולי$כריד אשקלון, על המרכב הוכנסו ס ד ר ה של חמש צלחות המשרה שמשה כמקור זה 70 מיקרואורגניזמים נזלי מפלוובקטדיום - איטי, )כ־־.(3$ לימית חיידקי־ים שגדלו בלעדי במי-ים גם לגבי לאחר כאשר הגדלנואת אלו, חיידקים ב מ צ ע י ׳העשרה )בנוסף מלאכותיים לבשרם להנזיל ) ל פ י, ( ( Z o B e l l(131 תמונה מסי .16 —r—rר—ו—ו—ו——1ו —1 0 e 7 a 1 ו 1, ו 0 1 י ! 2 8 י י i *6 Bays Pseudomonas sp.שבודדו מפי־ הפעילות הליסית של חיידקי לאחר שגדלו במצעי העשרה ים ,על חיידקים ממקור יבשתי. בהם דפנות החיידקים היבשתיים שמשו כמקורות פחמן בלעדיים ( o ) Eschar!chia coli-B עקומת השארות בחיים של י״ ( A ) Arthroboctersp.במי-ים מלאכותיים לפי( Z o B e l l(•131 המעושר ים ב 0.1?4-פפםוץ ,בנוכחות וללא נוכחות החיידקים. הליטיים- R .מיצג את היחס )ב־־ ($בין הצפיפות האופסית E. coif B ) ( O.D.באמצע התקופה הלוגריתמית של דגימות ואדהדובקסד שנזרעו למרק נוטרינס ,לאחר שעברו אינקובציה בםי-ים מלאכותיים ,בנוכחות וללא נוכחות החיידקים הליסיי יכלת במי-ים מלאכותיים תוצאות פוליסכריד חיידקים־ אלו נםיונות צרכה םובסטרם . 3 טוב -הגדרת עבור ןADהנו ספציפיות, מפרק ב- וסנזיל במצעים אוטי המזון את תוך צריכה בדוד שעות כץ כ6- ונקוי רבים מפלוובקסריום שנויים שהכילה מגי* 10 מהווה שהפוליסכריד נםיונות אארובי, בעל בגדלו נמצא שעות על ) פ ו ל י ס כ ר י ד ז ו ת מ- . מתמציות כמקור אלו פחמן כללו הנו בעל פיגמנס בלעדי. המכיל קצב הוא 1.5$ גידול בכל צהוב קרקעי .(ADj .1AD החיידק בלעדי, שבירת תזונתיות פחמן סטנדרטי לח,יידק Pseudomonas להפיק כמקור אגר שהחיידק דור. דרישות בלתי , ADj תכשיר התאים הגדל אנזימטי על שיפרק Manton- בהומוגניזר M ופרקציונציה רכוז מראה ורבורג. Bergey Everett-, Mass התכשירים זו פוליםכרידים ה ח י י ד ק הוגוז־ הפוליםכריד. של לפי 1AD ר ח ב של .(17 נסויים • הפוליסכריד 1 םם״ק מי-ים לשעה, שלילי, 24 נזליים, 4נ ס י ו נ ו ת נערכו גרם סס־" שנבדקו. קליסת חמצן המומס החיידקים. ע ל טווח )25°0תפונה מפלוובקטריום במכשיר שתמימה הפוליסכריד אגר פוליםכריד בסים חמצן מתג גדל על מורות pi מפרק לגדול על נבחנה אלו 75 ־ 72 ח ל ק י ת של הופעלו ו1-־1ק התמצית ע״י , רכוזים עולים על הפוליםכריד מפלוובקםריום שונים, אחר סוכרים במשקל ועקבנו המולקולרי שחרור של•הפוליםכריד של בתנאי א מ ו נ י.ום טמפרטורה, מחזרים, בהעברתו על סולפט.׳ וכץ קולונת אחר ספדקס ו 50 G- בינוני. נתקבלה.אמנם עליה קלה בסוכר מחזר, אולם לא היה 73 תמונה מס־" צלחת ) פםרי (ADj המנוקד. בעוד .17 המכילה שבורר אגר מקרקע םפלוובקסריום באינקובציה האגר - של C°^25 התנזל. ומלחים עליה נזרע רחובות במצע העשרה כמקור פממן בלעדי. החורים במצע נוצרו Pseudomonas sp. בו שפס תוך הנראים הפוליםכר 48 שעות, בתמונה, - במשקל שנוי •פעיל, למרות יחי״ד גדל בקרקע המזון* החיידק ], AD הא גר ו ז פרק המולקולרי. העובדה מבין - ד׳ גרם כגורמי החמרים כמקור לאינדוקציה הפולייסכריד פחמן ליצירת יחידי אגרז כמקור ה מ ז ו בקרקע הפועל פחמן על ז בו פרקצית האגר. ס ת י מ ה של את הצטברות גזים בהחדרת סולפידי )(FeS לבדיקת חול,. נקבוביות הקרקע, בקרקעות המשמשות חמרי בכרנו להשתמש בקולחין בעמודות ללא השפעה, גרגירי הגפרית כגורם המוםפת תלות כנראה ועוברת גורמת מועשרות בקיום הן בגפרית מערכת ו בגלל לאחור של תכולה בעומק ,1 דוי-ערכי והן קולחין העולה על של בעמודות טבעיים. אפשר תחמצת במתח למיתונה; ברזל נבנתה םולפידי. מ ס פ ק ת של כברזל בסתימה מופיעים פס׳ ברזל הקולואיה מיוחדת על ק ו לחיין ובטבלה לתמיסה, המחקר ים' ש נ ע ש ו מתמשכת של סינתטיים שכבה במעט זכים, מיקרואורגניזמים ת ה ו ם ,נמצא בהחדרה 1 הסתימה .(75 ).(86 ב ת מ ו נ ה מסי" וזאת הקורץ, ),67 הסתימה בהחדרת מים הצטברות תאי להעשרת מ י הסתימה סתימה כל מוסים י ם קרקעות המסוכמות כגורמי הפוליסכרידים, בלתי דרך בספרות המצטברים הנםיונות מתהוה המוצעים הצטברות קולחין את נ ו כ ח ו ת אגר יפה תכשיר מים. מציינים חסר גדל איפוא על לקבל אנזימסי דיון י בין או הצלחנו שהחיידק פרקציות פוליסכרידים לס נ י ז לא 74־־ מתוצאות לראות כי הברזל המוסף הברזל חמצן בעוד 4ם״מ, המצפה נמוך. חמרי השכבה הסתימה - 75 - הסתומה בטפולי קזאין מופיעה בעומק של 2-4ס״מ )טבלה מם׳ .(1 הסיבות עשויות להיות: גפוית, א( התפתחות אוכלוסיה מיקרוביאלית ה ל המנצלים חלק מחמדי המזון לפעילותם הםטבולית. מחזרי ב( הגפרית 1 בקבל מימנים מאריכה את הזמן הדרוש עד להתפתחות סביגה מיקרואירו- פילית -אנארובית ,תנאים אלה מתקבלים תחילה בעומק העמודה ,לעומת עמודות חול המגבלות בגפרית ,בהן מתפתחים תנאים אנארובים גבר בם״מ העליונים תוך זמן של יום-יומיים. מאחר וסתימה ע״י סולפיד הברזל הוכחה כבלתי נכונה ,לא נתגלו בעמודות מבלעות גזיות ,ואף לא נמצא מתאם בין מספר החיידקים והסתימה )סבלה םם׳ ,(3 נבדקה תכולת הפוליסכרידים והשפעתם על שעור הסתימה. מטבלה מספר 2חושב המיתאם בין פוליםכרידים ושעור הסתימה ,שהראה קשר חיובי גבוה. לפוליםכרידים בקרקעות נודעת חשיבות ראשונית בהשפעתם על מבנה הקרקע ).(132 ,74 ,70 ההשפעה אינה חולפת: הפולי- םכרידים בקרקע מהווים מרכיב חשוב בחמר האורגני היציב ),(133 ,69 שהנו בעל קצב פרוק איטי -ודליך המתמשך עד למאות ואלפי שנה. מתאם גבוה יותר פוליאורונידים וסתימה. ) 0.91לעומת 0.72בפוליסכרידים( נמצא בין זאת ניתן להסביר בהטרוגניות של .חמדי הסתימה ומדת יציבותם השונה לפרוק םיקרוביאלי. לפוליאור1ונידים מכלל הפוליסכרידים נודעת ההשפעה השאריתית הגבוהה ביותר ).(67 הפוליםכריד סמוצה מעמודות חול סתומות דומה בהרכב סוכריו לפולי- סכריד הקפסולרי של החיידק פלוובקטריום שממצאי מחקרו יובאו לדיון בשלב מאוחר יותר. כאן המקום לציין שתכשיר נקי מהפוליסכריד - 76הקפםולרי לירידה שלפני םפלוובקטריום מידית במוליכות ההוספה. יש לציין ללבון עמודות חול סתימה כ פ ו נ ק צ י ה של אינן מועד ה ו פ ע ת הסתימה המשפיע בעמוד המיקרוביאלית החול. החומר ו ב ע ט י ה גם כפונקציה משתנה של הזמן ויבוש . כאץ, בפעילות מיקרוביאלית. 1 אורגניזמים, על עמדנו ההחדרה הפטריות התופעה התבטאה ושיש פעילותם השנויים של ב ע ל י ה חדה לטהור מים בקצב בשדות לשנויים בתנאים אקולוגיים בשלב ש נ י של המטבולית, ואתור חמוי המיקרוביאלית במספר שנתבלתה אופי ודאי גורם יותר, הסתימה ב ע ק ו מ ו ת סתימה ב מ ח ז ו ר של החדרה הגורמים לשנוי נגשנו להכרת הסתימה. המיקרו בטבלה מ ם ׳ 3 מתחילת וירידה לקרקות האוכלוםיה מהירה, דומים החלים החיידקים אופינית תקופת בקבוצות מוצפות ),83 .(85 ב מ ע ק ב אחר השנויים במיקרופלורה, הגדלים במושבות מוקואידיות החיידקים פוליסכרידים. ).(84 העבודה דומה תופעה אך הנעלמת איטי חלחול, במספר כמפרישי לסתימה שהופעלו והאקט י נ ו מ י צ ט י ם ,הנה לראותם המשמשים העמודה שוים התפתחות מחדש. העליה ה מ ע נ י נ ת האחרת גורם עקומות בערבוב מזול או בשקימ פלםסית ל ה ש פ י ע על בשקית מתפרק באוכלוםיה הקולחיץ. בחול בעלות שנויים הובחנו ניחס זה בתנאים ש ל ש ה .. . יומיים עשוי ש ה ת ו צ א ו ת של המבוצעים עקום הקזאין, הערבוב זאת זהים ב ג ב ו ל ו ת של שהושם בתופעה ע ק ו מ ו ת הסתימה שנוי פתיחת ה מ ע ב ד ת י י ם שבהם שמשו נתקלנו םטפולים במדויק. ומוצריה. בעוד מתאחרת הסתימה, ע ק ו מ ו ת הסתימה ה נ ו ה מ י ם שמעל במהירות, גםשבנסיונות הזמן עצמן שהוסף ה ה י ד ר א ו ל י ת ,א ל סתחת ל ־ 5 0 $ -ס ה ש ע ו ר בעית ח ו ז ר ו ת על על ) 1ג ר ׳ חפר יבש( לעמורות חול גרם זו ידועה ממסנני חול - 77 - הגורם הקולחין, ופרוק האקולוגי הנו של מתח החמצן. הפוליםכרידים, הקפסולרי מהחיידק סינתטיים ) ת מ ו נ ה מסי* בקצב את ה פ ר ו ק עם הצטברות ירידה הארגניים פלוובקםריום, תהליכי החםרים המסונסזים. חול נדלג )נושאים אלו של התשובות של המערכת החדרה חדירת מס׳ פעילות ,(10 המרי על הכרת לבצוע על קצב הדרושים הפוליםכריד ה י צ י ר ה של לחיידקים בנפרד(, תופעת הינוש המאזן בין ה צ ט ב ר ו ת ם של לעתים בלבד )ולא האורור. לפרטיו נגיע ודרכי לשאלה היא ה כ נ ס ת משטר מוסס המשקל שווי העליה הפוליסכריד ה פ ו ל י ס כ ר י ד מגביל יוצרי החמרים הסתימה? לכווןהפרוק. מפרקי לכלל סםפטום מ י ד י ת עם החלחול, בתקופת פוליםכרידים להסביר FeSהמתפתחת הנה לדיון בשדות א י נ ט נ ס י ב י ת של בעוד מזון. שכבה להתגבר לכוון תלולה ת ו פ ע ה של שנוי ששכבת זו יעמדו אפינית המשקל סינתטיים, לסרוגין. י צ י ר ה -פ ר ו ק של מאפשרת וטבלה ויבוש היצירה, בפרוק. נעלמת כיצד הפשוסות הנה שווי להבמיר בשלב מחזורי 2 להסטת זה של אחת החמצן עד הדיון שנגנה בקצב וירידה ; להפסקה לירידה הפוליםכדיד ל \ / -ו ו ו ( + 2 5 0עשו יה במתח במתח בפנינו מתונה מתחת קולחין והיא בסוי החמצן המקום הוחדרו האנזיםםיים הבאה של בהן גורם כאן בהשפעתו על על ב ת נ א י ם מ יקר וא יר ופ י ל י י י ם . החמצן$ אם פרוקו החמצן ירידה והפרוק של מתח החמצן יצירה והפוליםסרידים מענו דו ת חול בהן הועברו ק ו ל ח י ן . •)ירידה ירידה ,(135 היצירה גורם( (3 ה פ ר ו ק עם השונה כ פ י שבאי ,ל י ד י י ר י ד ת מתח ),134 בהש־גנותו; ב ע מ ו ד ו ת ה ח ו ל השפעתו הפוליסכרידים בקצב בעמודות הבולט בהש.פעת מ ע ב ר במתח ) ת מ ו נ ה מס־* . ע״י פוליסכרידים ההפסקה המצויים בקולחין. דומה תקופת בתום לשעורההתחלתי, כפוליאוררנידים ההרםבהוהיבוש עד החדירות כוון ההחדרה אוכלוםית או חמצן המשחרר למתן מתח לפסילת שדות והשפעות חיידקים של ).(67 חלק כך הקולחין, מחמרי שעםהעליה העשויים היה ע״י מניעת ה מ י ק ר ו א ו ר י ג נ י ז מ י ם -ם פ ר ק י הפ ו ל י ם כר י ד י ם . בתקופת גבוה אולם על )טבלה שמירת ה ה צ ט ב ר ו ת של ההחדרה חמצן המים טיב אינו .(11 בשעת ה ח ד ר ת תתכן כלכלי משרשריו. מס. השפעה ה מ ע ר כ ת במתח הפוליסכרידים כיון גידולו במספר מחזורי החלחול. חמצן אויר הסתימה, ל ה ו ר י ד את שאינו את ה ס ת י מ ה הסתימה, אחר במערכת חמצן ע״י עמידות יתר המוליכות ה צ ס ב ר ו ת של פ ו ל י א ו ר י נ י ד י ם מחשבתי של אין ו ז א ת בשל לפרוק חלה היבוש עדיין שעור ההידראולית אנו הקולחין, קריטי מים, בעזרת שתילי רואים ששמוש באמצעים סיב מחייבים או למנוע הםנוץ. בדיקות לגבי שבעבוע אורז עשוי ש ל י ל י ת על המסתננים פנינו לצמחי בתקופת כאורז, הצלחנו לשמירת ל ה ח ל י ש את השמוש קפדניות בצמחי מים החדרת במפעלי קולחין. יצירה, הרכב בעמודות חיידקים אידיות ו מ ב נ ה של חול עשירה. על בהן הפוליסכריד הוחדרו באוכלוסיה פלטות אגר. הקפסולרי קולחין שולטים ממושבות אלו סינתטיים חיידקים בודד Flavobactenum sp.ה מ צ ט י י ן בפיגמנס ),84 (87 פוליםכרידית. כבר :צויין ,85 מפלוובקטריום התפתחה היוצרים חיידק ורוד מושבות שגוגדר ובהפרשה שבקרקעות אוכלוםית מוקו- כפלוובקסריוס חזקה סל קפסולה־ ח ו ל י ו מ רוויות במ ים מתפתחת אוכלוםיה הפרטים חיידקים של מבין הבאים Z o o g l e a ramigero , aquatile החיידקים הבצילוס B עמודות למערכות שלנו, החיידק ערכנו ה א ח ר ו ת של TCA ודיאליזה המתקבל גרעיניות. שעות להמשך כנגד מים זו ובין הנוקרדיות ה ד מ י ו ן של הקפסולה מוצתה במערכת המערכת לאחר השוקעת ז ו עבר לאחר ויובש העבה ה ע ו ט פ ת את בנסיונותנו שעות ,עבר הפרקציה המתקבל מזוקקים Flavobacterium ה פ ל ו ו גןקםר י ו ם מלמדת על . ('B-13 בפרקציה החמר באוכלוסיה: sp.וזו F l a v o b a c t e r i u ה- ל ר א ו ת את קפסולה נאספה הזואוגליאה מים. מזוקקים ל72- באתנול. החומר והמצות קרקע )תמונה מס׳ כנגד מים פרקציוינציה אתנול. בקור ששליטת נםיונותנו, פ ל ו ו בקטוי י ו ם . של 10$ כך מם׳ A-13ניתן בתמונה שולסים Alcaligenes faecalis האלקליגנם החול בהן יצירה , Bacilus cerus . Nocardia actinomorpe ה- 24 הםאו־פינים קבוצות בכשר ג ב ו ה של פ ו ל י ס כ ר י ד י ם ״ בעזרת תמיסה ה ר ח ק ת ה ־ TCA באתר, התכשיר הפולימכרידי ב ר כ ו ז של טפולים 48ע ד להרחקת שאריות ט פ ו ל י ם אלה עבר בליופיליזר. 72$ חלבון דיאל״יזה הלבנה האבקה של שמשה המחקר. בחינת ה ה ו מ ו ג נ י ו ת של הא ו ל ט ר א צ נ ס ר י פ ו ג ה , ברכוזים חסרה ע ו ל י ם של נתונים מקביעה השלילית זו והן בהפרדה על אתנול. מספיקים, ניתן תכשיר עמודת המוביליות מאחר ל ל מ ו ד על הפוליסכריד ובצעה רק אחידות מ ו ס ק ת .מ ת נ ו ע ת ו אל המנוקה ספדקס , G -200 ה א ל ק ט ר ו פ ו ר ם י ת של קביעה אחת הפוליסכריד הנע האנודה. בצעה הן ב pH - על ופרקציונציה הפוליחכויד ניטרלי. בשיא א ח ד , וטעינתו מ ה ה ס ת כ ל ו י ו ת ה מ צ ו י ב "־ ד ה י י נ ו ה ם י ק ר ו ס ק ו פ י ו ת ו ה נ ם י ו נ ו ת ,TCA ה פ ו ל י ס כ ר י ד י מהשכבה הופק מ ה ק פ ס ו ל ה ב ל מ ו ד העבה ה ג ו ר מ י ם ה ק פ ס ו ל ר י ו ה ר כ ב ו , ל ו ג י י ם . ב ב ח י נ ת C/N-71 ביחס על ע ל י ה ל ם ט ב ו ל י ז ם , ה מ ס ו כ מ י ם עם מטבלה העשיר ב ג ל ו ק ו ז , מ י ח י ד ו ת ח נ ק ן 3ם ע ל י ה ל ש נ ו י על ברמת ה מ ו צ ר י ם א ו ל י ל ה ט ר ו פ ו ל י ס כ רי ד י ם , או בהשפעת ) ת מ ו נ ה ת ו ך )ראה מ ס ׳ השואת מפל ו ו בקטר י ו ם, מ ז ו ן כל י ס ו ד אלו ה ש ו נ י ם ב י צ י ר ת ה י צ י ר ה פ ו ל י ם כ ר י ד י ם ק י י מ ת א י נ ד י ק צ י ה מתח ע צ מ ו ( , על מ פ ו ל י ם כ ר י ד ביחס ל ח נ ק ן חמצן פחמן ג ה ב נ ו י י ם ב ) ת מ ו נ ה ע ר כ נ ו י צ י ר ה הדרוש מ נ ס י ו נ ו ת נ ו פ ו ל י ס כ ר י ד י ם פחמן מ ו ס ר ו ת אחר הממצאים ה א ק ו ו ה . ; ס מ ׳ ( 3 , כבר ק.ודם ו פ ר ו ק של ה פ ו ל י - .(77 ע ס ו ד ה מ ר כ י ב י ם ה ש פ ע ו ת ביחס )בטקסט ג ו ר מ י ם ו ה ג ו ר מ י ם ק ר ק ע י ת ע ר ו ב ת ה ג ו ר מ י ם (4 ה פ ו ל י ס כ ר י ד ה ו מ ו פ ו ל י ס כ ר י ד ה א ק ו ל ו ג י י ם ו - ה ח י י ד ק , ה פ ו ל י ס כ ר י ד י ים. מ ו נ ו מ ר י ם pH של או מקור ם ו כ ר י י ם ט מ פ ר ט ו ר ה ם כ ר י ד ו ש ב ע י ק ר ו של שהתכשיר ),(137 ,136 ,67 א נ ר ג י ה . אף הוא ב ח נ ו ש ו נ י ם , ד י ו ן ל כ ן , ש נ ו י למסקנה ה8נרגיה מקור ב ס פ ר ו ת ב ה ג ב ל ת מ ו ר י ם ה ח י צ ו ן ה י צ י ר ה ה א נ ר ג י ה , של בהרכב ה פ נ י ם כ מ ו ת ש ע ב ו ד ו ת נ ו ס ף .C/N על נ מ ו ך , ב י ן ע ו ד ף 4 את מ ו ל י כ י ם ל פ נ י הפל ו ו בקטר י ו ם. השפעת מקור כ י ו ן מסי ׳ ה ג ד ל ת ה י ח ס ל ח נ ק ן השפעת בשסח על פ ו ל י ס כ ר י ד י ם בטבלה מ ס ׳ ה ע ו ט פ ת המשפיעים ו ב נ ו כ ח ו ת 4 הא ים ו נ ו ל ו גי ים ה מ צ ו י ה ה פ ר ד נ ו שבהם,, ב ת כ ו ל ת בחיידק ה פ ל ו ו ג ק ט ר י ו ם ו א ח ר י ה מ ו נ ו ם כ ר י ד י י ם הנם מ ר כ י ב י ם ה ע ק ר י י ם נ פ ו צ י ם של ה פ ו ל י ס כ ר י ד ב ק פ ס ו ל ו ת של ה ק פ ס ו ל ר י ח י י ד ק י ם . ה י ח ו ד במספר נובע הרב בפולימריאחד. מצו מקרקעות ישראל סוכרים בידינו קביעת ההבדל מהריסת המחזר לא כרומסוגרפיות )תמונות הסלםונלות, סוכרים בפוליסכריד טרמינליים הסרולוגית נתגלה סוכרים הבדיקות נותנים עמידים לחםצון, בנקודות דבר העשוי הסתעפות בהידרוליזות בהן חלקיות אותו לא מסי שונה ו(8- 7 אלה הגליקוזידיים בה נראה להתפרש השייר הצלחנו שחלק שהם קשור לנבוע נדידתו עלינו הידועים. לסווגו ומאפינים הליפופוליסכריד י כדיטרמיננםים את הקובעים קצות בקבוצת זה כנרזמ ב ק צ ה באמצעות ו בין הסוכרים מהםוכרים מופיעים הכוללת, המרכיבים בערכי יהיה כמלוה פנול עשוי שבין ם פ ל ו ו ב ק ס ר י ו ם טופ יע סוכר הקשרים תמונה שהיה לפי שבין הרי רחובות השלילית כללי בעוד נדירים, בקומפלקס של חלקית מס. שונים הפוליםכריד, בחלקו ,(5 a l l־ ,( b נודעים בלבד, תוצאות של בטעינה סוכר סוכרים לחקלאות מרכיבי ההבחנה סוכר )'•סבלה הפוליסכרידים. לקביעת בין )סבלה 1 הסוכרי אלה את סוכרים מם' הפולימר גם שלינגר, מספר הנראה חב הפקולסה ההידרוליזה. רבות ה ד ז א ו כס י־־ס ו כ ר י ם . המכילים בין בהידרוליזט נתגלו המופיעים השרשרת הגדול זעירות השונות, גלוקורונית סוכרים בכפו י ו ת של קורט במהלך הםוכריים בקבוצת חומצה להבדל העקריים הכימיות מר דומים נ י ט ר ל י י ם ,מחזקת הסבר הסוכר במערכות מתכונותיו ע״י נוכחות חמישה אין היחידות פוליםכרידים )בכתיבה(. של של הסוכריות שכפי מופיעות את השרשרת הספציפיות בפריודס חמצון מהגלוקוז, המנוז, והריכוז קשורים .בקשרי או ממוקפים ביותר מקשר לקבל א ו ל י ג ו ס כ ר י ד ים 1:3 גליקוזידי קצרי אחד. שרשרת )די, - או טרי טסרא(, שהכילו את המולריים כל אלא טוח ש ר ש ר ת של 8 )סבלה זזםציות, ה ד ז א ו כ ס י -ס ו כר סוכרים המונוםכרידים, המקוריים בהידרוליזות 82 מם' כללה )תמונה )תמונה בפולימר הופעת שלבים ,(11 ויותר שהכרנו .(9 שני מסי - וביחסים המו נ וסכר-ידים בלבד. ובשלב מסי השלם השני בשלב כל ,(12 בתמיסה הראשון יתר הופיע הםונוסכרירים יחד, מבנה לייזות על הפוליםכריד חלקיות עצמה. ה צ ד ד י ת שלי )תמונה היחידה הביודגרדציה גישתנו דזות( אדפסיביים בו הווה גם בכשרו בודד לפרוק חיידק להנזיל אגר, של מקבוצת בנסיונותינו, בטכניקה מ ל א של הגרם תופעה ההבחנות מיחידה הדומה מבנה השליליים המבטיחה לשרשרת ).(10 פחמן בעלי בנוכחות הפסוידוםונם דומה מקור של בחיידקי ),(56 בספרות, קרקע של הסובסטרס שגדל הוליכו הן משותף על מצעי לחפוש זו ידועים הספציפי יפה יחיד, ),(55 )פוליסכרי- פוליםכרידזות שבודדו בטכניקת ההעשרה מטכניקה אנזימים פחמן פרוק מצעי בלעדי. הפוליסכריד. פלוובקסריום הפנויםוקוקוס בצרוף ה ס ו כ ר י י ם ־־ כמקור גדול מקבוצת נתגלתה הבנוי החוזרת םפלוובקסריום הדורשים אגר. מבנה מיקרואורגניזמים, ה פ ו ל י ס כ ר י ד של והן המונומרים התרכזה ב ד ו ד י ם של - על ב א נ ד ו ט ו ק ם י נ י ם של זה אדפםיביים, בנםיונותינו מכל - מ ה ק ו מ פ ו נ נ ס ו ת .שהתקבלו מרמז מ פ ל ו ו ב ק ם ר י ו ם משמש צפינו באנזימים (12 הפוליסכריד לקבל חיידקים מם' מרכבת למחקר כשהפוליסכריד ספציפי כפי הפוליסכרידים של שמצטייר בהיררו- קרקע על ואשר של ).(54 מזון הצםייץ פוליםכריד ק פ ס ו ל ו ת סל העשרה. אחר הממצא מקורות - 83 - בעשירותם נודעים חיידקים שמש רחבה של הפוליסכריד פי־ים או הנסיונות שבוצעו מקרקע נתברר, וגדל שקיימת במי אגר םפלוובקסריום גרגירי )!(AD במפרקי מפרקי א ג ר ( S t o n i e r(138. קרקע, עם על כמקור בודדו תכשירים הים. בטכניקת פחמן חיידקים אנזימוסיים שהופקו רגרסיבית מפלוובקםדיום על הן קיום מצעי יחידי, מקבוצות הפוליסכריד פעילות הוכית אוכלוםית בהם ההעשרה נלקחו וכאינוקולום מתוך הפסוידומונם. מפסוידומונס פחמן כמקור שבודד יחידי, הפ ו ל י ם כ ר י ד ' מ פ ל ו ו ב ק ס ר י ו ם ו ה ן ע ל א ג ר ו א ג ר ו ז . בנםיונות והמוצרים .של נמוך מעמיק מחזרות כנראה מהפולימר כפי שנבדק בהפרדה ע ל היא המקורי, דרוש לחשיפת שחוסר הטרדות הנגרמות עומדות עבודות עתה מיחסות לביודגרדציה, עבודות לו הפעילות הן פרוק, הסיבות המעניקים האנזימים .(140 מקצה בפולימר המפרקים מספר המולקולה. של בקרקעות במוקד את ל ח מ ר י ם .המצ ו י ים אחרות ),68 (69 דגרדציה במים ההתענינות בהם גבוה נמוך שבירה יחסית )G-50 אך . של מחקר הפוליפר אנ־זימסית. נובע - מאי הםוכרי אפשרות יציבותם .in vitro והן ה ע מ י ד ו ת ש.ל. כל ובמבנה האנזימםיים הפוליםכריד בשחרור נראתה מפדקס בהרכב בפני התכשירים ומתבסאת מולקולרי הטמונות יציבות פוליםכריד לא לקומפוננסות את קשי שהפעילות נמוכה בעלות מ פ ל ו ו בקטר י ו ם , של - התברר האנזימסי משקל נוסף נוספת אחר המשתחררים, קבוצות קסיעה מעקב הפרוק של מ פ ל ו'ו בקסר י ו ם של בעטין מיחסות את הצטברויות ר ש ו י ו ת ר ב ו ת ).(133 סטרוקםורות בכמויות של חמרים ממעטפות זעירות עמידות חיידקים כמלנין ואפר פוליסכרידים ),139 מקרקעות ־ לביודגרדציה, גלקטוז( בפוליםרים. בקסריום יתכן מצוי שקיום בין לנוכחות שיירי שייר הסוכר בעל 84 )0-2־־מתיל-רמנ ו ז םתיל-הכםוזות באחד דזאוכםי ־ ה ק צ ו ו ת של מוכר נסיה האחרים העשוי הפוליסכריד הקפםולרי לעמידות בפני לגרום הידרופובית במולקולה ו-0-4-מתיל בקצה מחסן יתר מפלוו- דגרדציה. השרשרת הםוכרית תקיפת אנזימים בפני כחייץ , ה ידרול יסי ים. חלק נ' פרק הי: פוליסכרידים - סקירת האצות במעטפות ספרות הקדמה ההתענינות המדעי, העניין מאכלסות תאיים בחקר כנושאים ב ש פ ע של כאיאוגלנה מהירוקיות דרך לאצות לאורך מטר עשוי א. של לעזור עזרה בתפרים ב. את מקבוצת בסיסיים האזורים בתהליכי האקווסיים השוטדניות, המאוגדים במושבות ויותר. מספר הרעב הענין בעיות בעולם, באצות מעשיות בו האצות החיים. למינ״יהם. ,מיצורים פרידיניום מהפירופיםים, מהחומיות, הוגבר בשליי״יהצ י פ י ו ת המעסיקות תשמשנה העשויה האצות את חד כלורלה כ מ י ק ר ו צ י ס מ י ם מה כ ח ו ל י ו ת , Macrocystis pyrifera כ- בפתרון בפתרון למחקרים בשנים ולא ועד להגיע שידע זה האנושות. למאכל, כמתכון חשוב ).(141 שמירה ).(142 זנים תאים הרב-תאיות 60 האצות גברה האחרונות, רק בעקבות על מקורות המים םזהוםים הנגרמים ע״י גדול יתר של אצות 85 - אחוז לחסרי תשמ"1ת התאים ואת עולה על .(143 הוא ניכר ממסת בתוך החמר כלל המוליך לשוני הםוכר׳ים ועמילן האפיניים הקבוצות בין נובע עוזרת בהרכב קיימים לצמחים כהתאמה לצוף פני התיבשותן על ב ת ק ו פ ו ת שפל הידע החופיות ובמבנה שהצטבר הצמודות, טכנית על ובעלות המםונתזים צמחי רק חםציות בסביבה בין המימית, מגינה מצלולוז יש ה ה י ד ר ו פ י ל י ו ת של עליהן - הפוליסכרידים להניח ממלאות בפני ),141 הפוליםכרידים אחרות. בו האצות והאצות ושונים נציין ע״י היבשה היבשה את מעטפות שהשוני המעטפות חסרי מכות המעטפות הגלים ומונעת המים. ומבנה מעטפות האצות, העין בגדלן, בנוסף את ערך צמחי משתייך את המסונתזים לאצות ביניהם יונים. הרכב ובונים ע״י בין שמעוטם הפו ל י ס כ ר י ד ים. קבוצות המים, מרוכזים הפוליסכרידים העלאיים. בפני שמשכו הגדול האפיניים לגדול ת פ ק י ד של ה פ ו ל י ם כר י ד י ם , הפחמימות, כאלו מחליפי לאצות מבחינה הפוליםכרידים ה ם ו ל פ ט י ו ת או היתר הטעונות כמות ב ס ם ב ו ל י ז ם של באצות, בעלי התא, םהוים ב ע ו ד רובם הבינתאי. כמות השוני האצות - מסחרי, בעוד עבודות םתיחם בעיקר לאצות להיותן נוחות לאסוף מעסות עוסקות נאצות הפלנקמונ י ות. השיטות ובצמחים, הרב בסוגי התעשייתים סכרידים שפותחו למחקר פוליסכרידים מ ש מ ש ו ת את מחקרי הפוליסכרידים הפו ל י ם כ ר י ד ים והביתיים מאצות בםקוי הםסונתזים הגוברים מים מחד, מאידך, ע״י בבעלי המופקים אצות, וההטרדות מבטיחים חיים, בחיידקים מאצות. השמושים הנגרמות ה ת פ ת ח ו ת שדה הגוון הרפואיים, ע״י פולי- מדעי זה. השכבות הרכב בלמוד הכירו הכימי. (151 הם שכבות ספרים בהשוואה ממחקרים העלאיים. )פהקרובה א. את השכבות בשלש שכבה החיצוניות השונות ומאמרים שנערכו אנו אל זו כאן נוקשה ) בשכבה זו העבודה המיקרופיברילות, ב. אורינטציה. שכבה פיברילות. במים ג. זו בשכבות ומוצילגים לפי בתאי בארגונם, האצות מעטפות ובהרכבם ),2 מ ר ב י ת התוצאות במחקרי סדר לפוליסכרידים קרבתן עם השזורות מרכבת שכבה הפהוה נע בין -144 האצות בצמחים ל מ מ ב ר נ ה הצ י ס ו פ ל ם מ ו ס י ת נוסףלרםת זו קרויה בקור פקטיניים בתמיסות ) -שכבותדניקות Preston עד הארגון נמדד שאינם matrix , תאי באצה בארגון העשויה ב ק ר נ י ^ -כדרגת מסיסים אלקלי רק רובדים מיקרופיברילות ומצטיינת ( pectic substances הקטר וקבוצתו קיימות במים באולטךא-םבנה, מ ה ו ל ו ת של ע״י לרשת המעצב ארג ו ן )״אולםרא צ י ר י ת מפותחת, וערב, החללים המפרשות האלקטרוני ו ר י א צ י ו ת רבות ספוליסכרידים ה- שלד ע״י אורינטציה בשתי . חיצוני, ) ft 1 0 0 - 2 0 0ב כ ל ו ר ל ה ביוזהעה . ( V a I o n i a בטוי פעין גלה ;הפיקריםקופ א מ ו ר פ י ת ה מ מ ל א ת את ר ו ת ח י ם או חפרים במחקר תוךיהשוואה הראשונה מארגון מיקרופיברילות שכבה עוסקים , ( firm envelope ה י ר ו ק י ת ventricosa (152 נוקשה ב צ פ י פ ו ת החמר י ם , האצות הרחוקה(. & .(30-50 חסרת הציטופלםםטית החיידקים. מ ב נ ה " ( במ י ק ר ו -פ י בריל ו ת שקםרם של לממברנה מועטים בעשבי-ים, נדון האצות ו aב נ ן פזו, ל ס פ ר ו ת של חקר צ ו ר ת התא. בין 86 ב מ ע ט פ ו ת ה ת א י ם של - הגבישיות. רותחים, ו מ ק י פ ה את המיקרו- בפוליםכרידים המםיםים או חמצה. המצויים בחללים האצות ועוטפות הבינתאיים, אותם. חמרים הנם אלה ליצור אמורפיים, מוצאים )151 מן רק את עמוד ההרכב האצות חלקן, ה כ י מ י של נוכחותם הפרקציה האי במיוחד אצל תחמוצות וקרבונטים. מרכיבים אין מעטפות שומנים צורן, העקרי וחלבונים אושרה ש כ ב כ ת י ב תחמוצות ו ר ברורות, ק י Prasiola j a p o n i c a ת בעבר במרכיביו לדופן הצמחים הטכניקות )(160 ובמיוחד הדיוק פוליסכרידים רבות, באבחון מינרלי וברזל, טיט עיקר הידע של פתוח ),(158,157 דופן מקובל היה לחשוב, מכיל שדופן שנעשו ).(159 שיטת הצלולוז, ונתגלה שבדופן השונים מצלולוז. זהה עם השתפרות פולימרים סוכריים מצויים האצות גם צלולוז הופק מדופן על בסים הסוכרים והחומיות. להבחין האצה צלולוז. קרני-א חומצית, ):(146 מסביבת הגידול ובחומיות להגדרת נהוג האצה, האצות דהיינו, האדומיות (154 מקרקעות הצטבריממחקר ים העלאיים, הירוקיות, בהידרוליזה השכיחים באצות המעטפות באדומיות סטרוקטורליים מבין (90$ ברם, ,153 ממעטפת עשוי רחוק נוכחות )עד ),146 ל ה י ו ת משפע הנוקשה הלא נייכר הפוליםכריד ים. מנוקות האנאורגניים ).(151 ,(156-154 המצויים במעטפות אלומיניום ה כ י מ י של בשכבה ה א צ ו ת הם ל ה ו ו ת חלק החםרים ו ע ו נ ת השנה ),152 המשתחררים ארבע במעטפות הצורניות. הצלו לו ז: אצות מ כ י ל ה שלש ו שכבות לעתים אצות א ו ר ג נ י ו מ ע ש ו יה ההרכב הגידול בירוקיות המעטפת ו ל ע ת י ם אף האורגני של גדל ונודעים לספווז .(14 המרכיב עומק במים, בכשרם מים- ג ־״ל. ברבות דו נמסים 87 בקלות - בין צלולוז אמיתי 88 - ) (euocellulose משחרר בהידרוליזה רםנוז, פוקוז םצלולוזות המופקים )p(l:3 קשרי כקסילוז, הדיאגרמות שונים, הציון גלקמוז, השונות מורים על גלוקן מצויים מצלולוז ה ק ר ו י בשם והן קאלוז ), p(l:3 מנן כ ד ו ג מ ת u m b i l i c a l i s (162 בדופן מנוז, המתקבלות ש נ ו י י ם הן ) מקשרי קסילנים בקשרי בקרני*- בדרגת ). (164 החמצה האלגיניתהיא בחומיות כלמינריה החמצה ).(165 המנורונית ומעם גלוקץ אחר האצה ה ח ד תא י ת נמצא ה ן כדוגמת ה - ברבות נפוץ האלגינית מהחמצה בירוקיות ב י ר ו ק י ו ת כ sp(163.- בירוקיות מרכיב (. ),P(l:4 ( P o r p h v r aוהן נתגלו הנוקשה.. callose מםונתז ע ״ י הבנוי ))3(1:3 בעקר צלולוז ללא המיוחד, השריג י. . ( s u b s t e r r a n e u s (161 החמצה בעוד נוספים אורוניות. השונים )p(l:4 בלבד, סוכרים ממקורות במבנה גלוקנים נמצא עקבות וחםצות הגביסיות והן הן המשחרר גלוקוז - הגולודונית Monodus באדומיות . ( C o d i u m Caulerpa ftliformis מדפנות מכילה המכיל האצות, במיוחד חמצות אורוני־ות )בקשרי )( (3(1:4 יו. ). (165 הכיםין הנפוץ לה ו ם ו פ ו ל י ס כ ר י ד י ם ה ומ ו פ ו ל יםר י ם( מרכיבי החסרים בעקר -N4K O Hו ה ם בעקר שהזכרנו, כצלולוקםילן ב י ר ו ק י ת j a p o n i c a (164 המסריקס בשריון החרקים מצויים ומוצילגים המרכיבים את הומופוליסכרידים הה סר ו פ ו ל י מ ר י ם בדופן שכבת זהים נ£צא ).(166 הםרופולימרים )או בירוקית , ( P r a s i o l a בצורניות תערובות , H a l i c y s t i s o v a l is ו ג ל ו קו ר ו נ ומ נ ן נוסף קםילומנן בצורניות ).(167 האצות נחלקים המטריקס ל מ ו צ י ל ג י ם בם כהמיצלולוזות ) ע נדון מ ו ד למסיסים יותר במים, מאוחר, , והם ולמםיסים ( 3 3 1 1 4 6 באדוםיות ה ה מ י צ ל ו ל ו ז ות< מ ר כ ב ו ת ופוקוז, מופיע ו בירוק יות מספר קסילוז גדול ורמנוז כ70$- המתקבלים כמו ה מ ס י ם י ם בתא ) 1 4 6 הקסילוז, העוסקים ארכיטקטורה תכונתם גילים. נעשה באנר ),(170 להגדרה ארבינוז, החםרים רבים הנמצא העשויה בשמוש ובתעשית שיסות האגד נעשו נ ו כ ח ו ת ם של י כ ו ל ת ה ה פ ר ד ה של חמצה בחלקה זה בגלל מחקרים גלקסוז. מתוך שנים פוליסכרידים כשוני רבות, הנו חשיבותו המעשית אינםנםיביים )(169 המופיעים שהותאמו ד ו מ י ם ),(171 םםפוס לספח מים במיוחד הכימיים )סולפסייס(. >)קפ«( מעסים הםוצילגים להתפרש במחקרים חםצייס החמצה פירובית. אולם ואנזימסיות, השונות. גלקםנים אגרופקסיץ',קרגינין וה-0-6-מתיל למחקר• ה ^ ו ל י ם כ ר י ד י ם פיסיקליות מהאדוםיות הגלוקודינית, מסחרי המזון, ןזדישות הםנוז, מ ה מ ו צ י ל ג י ם ה י • הכ״שר באגד ביותר ל ה ו ו ת עד הפונוםכרידים הגלוקוז, הפוצילגים, המופק ביניהם כאגרוז, מגגונת, ושיירי מהאצות ו ל מ י ו ן של הראשונים מנוז, ועשויים בין החמצה האדומיות. בטכניקות הובחנה גפרתית ה ב ו ל ט ת של אחד מוצילג שמוש נ צ י י ן את הארבינוז, במבנה במיקרוביולוגיה חפרים ח מ ד י ם אלה ה ם פ ו ד ס של האגד-אגד, כגלקסוז, עמוד .(338 משתחררים וליצור Hydrodrctyon africanum במים הפוקוז ,ה-6.3-אנהידרוגלקםוז מסתמנת התפתחות פוליםכרידים שיירי בתפקודים. סוכריים המםיםים חמצה הסחקרים שנחקרו הם הרםנוז, הגלקסורזנית, כן י ו ת ר של ב ה י ד ר ו ל י ז ה של הגלקםוז, G h l o r e l l a pyrenoidosa מרכיבים ו- בחומיות ).(168 הםוצילגים מהתמרים כ- מקסילוז, בעוד מקםילוז י• • עם נ י ת ן היה ומספום להפריד ) Xלמדז,$ ־־ קס י ל נ י ם ופוקנים. דגרדציה אנזימסית מסת בשרשרת ע״י האצות המזון של משמשת כמזון בגופי חיידקים. במשקעי אצות בעקר הפוליםכרידים העוברים ולסווג מצוי בנקל של ונפגםת בעלי פרוק אנזימסי. בחיידקים בחמר מקבוצת ימיים כ א ל ג י נט־־הם י ד ן היוצר גם אנזימים המפרקים של םוצילגים פוליסכרידזות בודדו אנזימטי ל ב ע י ת הרעב את האגרז אנזימים של בעולם<178 לממברנה נמצא ספציפיים דפנות האצות, . ( c j הציסופלסםטית נוספים האגר, לאנזימים המחקרים אינן החמרים כאמצעי לאנזימים להגדרה . אלה קרובות מפרק החמצה האלגינית מופיעה כפסוידומונם בסבע , ( P s e u d o m o n a s atlantica שחיידקי הפסוידומונס ).(177 החיות הרואים מצביעים נעכלות על הקרגינין על כ . ( f u c o i d i n a s e(178- יש משמשת על בעקרו. זוהה הרכיכות של שהצטבר הנמנים וקבוצות כפוקואידין לאלו של בעקר הפוליסכר ידים, םתיחס המקורי :העקרי (173 מסתבר בקיבת דוגמת אנזימטי הידע סטרוקטורליים, גם החיידק ).(176 האצות. הפסוידומונם c a r r a g e e n o v o r a (175 אותה מדופן ).(173 . ( P s e u d o m o n a s חלה ראשונה הצטברות ה ם צ ם ב ו ן ר ב חיליק^ם הרגישות . ( A g a r b a c t e r i u m מפרק עוברת כחוליה פרוק החיידקים מסחרית, הםםחריים אצות לנעלי-חיים, פעילות פוליסכרידים חשיבות ממעספות ובחלקה המטרוקטורלי ים של החסרים כ v e r s a t i l e(174- ),(172 הקרקעית. אנזימסית לפוליםכרידים בחלקה מים במידה בעקר דגרדציר, 90 פוליסכרידים - במעי את על האדם, מקור אחר עשיר מזון צמחי׳, ומהן ענין מיוחד בעכול בפתרון אפשרי האצות כך מסנתזים שהשכבות החי»וניות ונצולן רק יתאפשר 91 - ע״י תוספת ביותר, אנזימים ר ו א י ם את בין התזונתי. סטרוקטורליים זידזות, מפרקים ממקורות ה א ו ר ג נ י ז מ י ם בהם האנזימים הידועים מ מ ע ט פ ו ת של - אצות ה פ ק ט י נ ז ות ו ה ס ו ל פ ס ז ו ת אחרים. המקורות בין ה א צ ו ת מ מ ל א ו ת חלק כ ב ע ל י כשר מ צ י י נ י ם את פ ר ו ק של בתפריט פוליסכרידים הגלוקונזות, המקור ).(183-179 המבטיחים העקרי הגלוקו- לגלוקונזות- M y r o t h e c i u m v e r r u c a r i a-Aspergillusnigefr ),(185 הם הטריכודרמות. הזרעים לאחרונה ה נ ו ב ם י ם של בודדו הצלוליסית ה sp(174.- על באגמים אצות ),(189 בספציפיות של המקורות )(182 וימים בסביבה ).(186 העלאיים, פטריות אקווטית כנבטי עשירות מיוחסת ל א ק ט י נ ו ם י צם י ם הגלוקונזות העשירים בגופי מים, ומיחסים לפקטינזות הרכיכות אותה ).(187 השעורה אמנם ב צ ל ו ל ז ו ת ,א ך עקר ה פ ע י ל ו לחיידקים מקבוצת מ ק ב ו צ ת ה , ( S t r e p t o m y c e s(188- ב מ י ו ח ד ה . H e l i x pomotia - ולסולפטזות-את מטרדים הצמחים .( C y t o p h a g a ולרכיכות בין ופטריות אחרות מקור נוסף לצלולזות מחקרים למבנה נ צ י י ן את רבים הםובםטרט הפטריות עוסקים ).(181-179 והצמחים העילאיים ).(183 הנגרמים ע״י פוליסכרידים סטרוקטורליים מאצות. ר ק ע ל»מ נ ו ל ו ג י ארצות מקורות רבות המים, ומצטמצמים לזהוםים בעולם מאחר ).(190 ולירידת קציה מתבטא פחמן אורגני( מקדישות רבים, מאמצים לשמירתם ומקורות מים קונבנציונליים ג ד ו ל י ת ר של א צ ו ת )א יא ו ט ר ו פ י ק צ י ה ( ה ו א איכות בתופעות ),(194 המים הבאות: שנויים ).(193-191 עליה חדשים ה ת ק י נ ה של החרפת בפרודוקטיביות במחזורים תהליך הולכים : i האיאוטרופי- הראשונית המיקר ו ב י ו ם י י ם המקור )תוספת ובםוקםציה - הופעה( )סדר השולטים חדשים( בכמות של המינים ),(191 תכיפות בפריחות ),(191 החמצן רכוז המסים השפעה להחזיר עצמם, את המים ב( ניתן ) לא המים השגחה, נכיר: ביעילות הן המואצת ניטרםים )בעקר רמת משקל שהמעמס לה ו ד י ר בעלית מאופינת ומיקר ואלמנטים ),(197 מ מ ע ס פ ו ת של אצות(, מבנים המזונות העומדים נעשה ביולוגי האורגני א( פריחות משך הגורמים עליה תוך -בו לרשות לא מטרה המיקרו- לשמור, יטהרו יעלה על או ה מ י ם את הטהור כשר העצמי קיומן, עצמת ),197 .(198 אך פ ר י ח ו ת אף מוציאים אצות ׳וקבוצות בכמות חמרי בין גורם העלמותן התופעות בקולחין זה אורגניזמים לא כקובע אחרות פריחות בהם החודרים י ד ו ע י ם הגורמים המזונות בלעדי. בפלנקטון, שבפריחות. כפוםפטים בטרם הורק ניטרםים- או המזונות, מלאי מנויים בתנו* גורמים אם לאגן ההקוות הבולטות'האגמים והמחזוריות ה ר ח ק ת חמר י י מ ז ו ן העלמות ת ה ל י ך הא י א ו טר ו פ י ק צ יה,- המזון ה מ י ם הא י נ ס נ ם י ב י ו ת . פריחה וקיום ה מ ז ר ז י ם את המזונות. ע"י מחזוריות מתמיד כל ניצול הפריחות, ממקוי של פרוק על לשווי ידועים המים באופן כפוספטים, דוחים, . ( Recreational v a l u e . Heterotrophic potential א יא וםר־ופ י י ם , להתפתחות ).(196 ת ה ל י ך הא י א ו מ ר ו פ י ק צ י ה ע״י הגורמים עליה בריחות ומעמים וירידה ).(191 גופי עדיין בין המתמשכות לתקופות ארוכות )מספר האיאוסר ופיקציה א ו ר ג נ י ו ת קשות אחר וזאת שנויים בעכירות שאריתית ארוכה ו המקרופלור ה המעקב .(195 בטוח המינים ובזנים המים, התזונתיים בשאריות בעלות של עליה המינרלים ועליה 92 ),191 - אחרים, כחומרים גבוהה כהפרשות מעכבים מזרזי או ג ד ו ל של בחיידקים, את פטריות, ה ם ו ק ס צ י ה של למשנהו, נעלמים בתוך .(146 מחזוריות ממוזג-קד( האביב וירוסים המינים הקובעים - אצות ),199 קומפלקס קיום הגורמים המעבירים והעלמות קבוצה לאצות מתחרות כגורמים משווי מסוימת, המכונים משקל הם אחד בחזקת האקו ל ו ג י י ם -פ י ס י ו ל ו ג י י ם -כ י מ י י ם שנסתמנה באגמים בשליטתן פריחות או קבוצות זואופלנקט ון-מוצעים משך מצטיינת הצורניות, ,(200 או הגורמים הפריחות ),(191 93 ).(191 התפתחות, - - הקיץ של באזורים האצות זני הירוקיות, צפוניים הבאים: ופריחות ),201 )אקלים פריחות הקיץ המאוחר - הכחולי ות. הסתכלויות ובארה״ב לאורך ובמינים שנויים על הבולטת שנים זו של מספר השולטים. מלאכותיים, בשאיבות או דומים היא המעבר גורמים אצות ג. פרופ׳ ).(203 של קימור מ פ ר י ח ו ת של מספר ב. שנויים באותם במחזוריות מקורות מים ב ה ו ס פ ה של הכנרת, וקבוצתו ל-מנברת משתייך למערכת תופעות הזהירה מתוקים והן ביולוגיות הביולוגית במיוחד מים הפריחות בהם ).(202 מזמןיהפיכתה הכחוליות במים הפרש ו ת סוקס י ו ת מלאכותיים לפריחה הפירידיניום ל פ ר י ח ו ת הן נחקרו יתר בפיטופלנקםון ה ש נ ת י י ם של הביולוגיים ).(203 מ ל מ ד ו ת על השנויים . Peridinium westii , מזניה באגמים בולטים שנויים בדו״חים שנערכו ובמקוי מים באירופה . ב ל ע ד י ת של במלוחים מענינות: נתונים למאנר, ״מקורות". ה- נעשו התופעה הדינופלגלט , Pyrrhophyta ).(191 א. נמסרו שרבים בקבוצה השעונים ) ב י ויל ו מ י נ ס צ נ צ י ה ( מ ה ז ן tamarensis (204 . ( G o n y a u l a x ־ - 94 החמר מקורות האצות האורגני במקוי ו ש א ר י ו ת י ה ם הן ).(191 באגמים ממקורות חיצוניים( אין אלא הופעה הצטברות לפרקו. ק י י מ ו ת מספר לאצות ה ה צ ט ב ר ו ת של מאגן U ) dim בקאוגלנטים .3 לחפוש זני זרוז אצות, הטרוגני. או ו 2 שפוש ג כאלום או פ הוספת ת ה ט ב ע י ־־ ב י ן עדוד למקור. אפשריות עצמית( עצמי חלה מסוגלים ל ה ת ג ב ר ו ת ע ל יו מזון כ- חיוניים chlorophenyl- ב י ו ל ו ג י י ם ),191 המפרקים בשנוי אצות, הסובםטרם מיקרואורגנזםים המים באגמים נ ח ש ת א ושמוש.dichloronaphtoquinone(, הטבעיים מיקרואורגנזםים המוסף מהחומר ר לטהור באלגיצידים קאוגלנםים האנזיםטיים לפרוק(, האורגני חלק תאי, שארית לתהליך ה?ניתנות החמר התוך כימיים דרכי לפרוק C ^ המנגנונים אצות האצות. קיצוניים הרחקת חמרי .1 מזון באה האוכלוסיות, ה מ ז ו ן היא הטבעיים דרכים במקוי מים תוספת המרי שבמקרים חמרי המנגנונים גישות 3 בעוד לחפוש ארגני צ ד ד י ת של א ח ת תוספת ה נ ק ו ז ).2":. (198 M למוד שאין לחמר ) א ג מ י ם בהם והעלמות, . הראשוני ה צ ט ב ר ו ת חד ) א ג מ י ם בהם ע ק ר חמר-ארגני, תופעות המקור אוליגוםרופיים מ ח ז ו ר י ם של איאוםרופיים מים בעלי .(205 במטרה )הכנסת אנזימים כ א ל ה ).(205 א ח ר י כל פריחה, ה א ו ר ג נ י מםיס ובעל .פרוק מהיר, הנו בעיקר חמר החומר ב ע ו ד מבניו׳ מ ע ט פ ו ת ה ת א י ם הם בלתי מסיסים,בדלי .ק»ב» prאימי ,וץםכאן השפעתם השאריתית באגמים, נתקבלו ה א ר ו כ ה ).(206 ע ר כ י ם של אלפי ב ב ד י ק ו ת ג י ל של ש נ י ם ).(133 משקעים אורגניים - \"; פרק 95 זזמרים ,מכשור ושיטות בפרק הערה: של חלק ־ המרים, זה ה ו ש מ ט ו י מכשור שהזכר ו ושיטות, הנםיוני בפרק אי*. חמר י ם פחמימות: צלדלדז צלולוז-אבקת מתוצרת ( )P(1:6. ( p o w d e r , standard g r a d e , Engפ ו ם ם ו ל ן ג ל וק ן )p(l:3 - מד ״ר . K . M a r e c h a l •Koch-Light - P(l:3) - למינרין בקשרי מ ע ב ד ו ת )של מתוצרת מהאצה מהידרוליזט )p(i-3 דייר במתנה מדייר למנריביוז נרכש צלולוז ,Fluka ולמנריטריוז, דייר צלודקסםרינים כמתואר ם- נרכש ודייר מרשל גבוהים בספרות מופיעים ממעבדות שויצריה. נתקבלו האולי- כמתנות פרסיבל(. יותר .E.T.Reese התקבל שבהםתעפויות , Laminaria hyperborea גולדשטיין, . Pfanstiehl ח ל ק י של התקבל -ג ל וק ן עמ י ל ( S o l u b l e starch A . R ) j גוםכרידים היה - ג ל ו ק ן ם־־, ( E u g l e n a g r a c i l i s(208 ) ", p ( l : 6שהופק ממספר ) P u s t u l a n־ - מ ה א צ ה , ( U m b i l i c a r i a pustulata (207 פראמילון קשרי W & R Balston ( W h a t m a n c e l l u l o s e הוכנו צלוביוז על-ידינו ).(209 אנזימים צ ל ל ו ז נרכש מ- ~£גלוקוזידז תמצית • N u t r i t i o n a l BiochemicaIs C o r p o r a t i o n , O h i o , C l e v e l a n d )אמולםין( חלזונות - נרכש » Sigma C h e m i c a l C o . M i s s o u r i״ מ- Digestive Juice o f Helix pomatia נרכש ממעבדות .Koch-Light ר יאג נסים ריאגנם של לאוגר שוויצר ווילםון )הידרוכםיד ).(210 נחשת-־אמ ו נ י א ק ל י ( קדוכםן הוכן כדלהלן הוכן ):(211 לפי תשעה עבודתם גרם ו - אבקת של תמיסה בחדר המכילה ה ו ס פ ו !. ו־־14 28$ עודף ^CdO- קור, סם״ק( הקדסיום ) ( C d O תחמצת מימית ג ר ם של 96 הוספה תוך )( w/v אתילן הורחק י בקור הידרוכםיד - בחישה, בצנטר י פ ו ג צ י ה . סמ״ק 60 בקור, די-אמין. ה ת מ י ס ה הושחתה לתסנין אתילן לליסר של דיאמין, העליון 155 ללילה )950 מים סמ״ק הנתרן. מכשור דיפרקציה דיאגרמות אבקות ב ק ר נ י * -של גלוקנים, בצעו כשמקור הקרינה , Philips X - r a y diffractometer type P.W. 1030 שקרינתה קובלס, הצלוםים 57.3 סיים, שנכתשה סל כשעה וחצי נעשו םםוננת במצלמות ע ג ו ל ו ת של במתח ס ל הוכנסה לקפילרה K.V 3 0 . ספקטרום Norelco Straumnis ב ק ט ר של א י נ פ ר א -א ד ו ם של ) KBrכ ' 2 -מ ג י ח מ ר ל 1 0 0 -מ ג י הגלוקנים KBr ב- היו . m A בדסקיות (pellet של החשיפות 10 נקבע ברזל. הדוגמא 0.3מ ״ מ . ו ע צ מ ת ז ר ם של שפופרת ב ע ל ו ת קטר . K o d a k - n o - s c r e e n medical x-ray f i l m על ס ר ט ס ל לאבקה דקה לקבלת קרן מ ו נ ו כ ר ו מ ט י ת דרך ל ו ח במכשיר ל ח ו צ ו ת עם Perkin-Elmer במכשיר . ( I n f r a c o r d Spectrorrieter model(212137 א נ ל י ט י ות שיטות אנליזות המיקרואנליטית רוגוזינםקי וזרחן מעשנת, בשיטת וחמום \ אלמנטריות בשעו שבמחלקה לכימיה מהמחלקה אורגנית לביופיםיקה. .(King(214 בכוריות במכון אפר פלטינה וייצמן והן חנקן נקבע תוך למדע הן ב מ ע ב ד ה של נקבע חמצון ל 6 0 0 ° 0עד ע״י המעבדה. ג ב י שרה ב ש י ט ת, ( D u m a s(213 ה ד ו ג מ א עם למשקל קבוע. HNOg 1 - - 97 הידר ו ל י ז ו ת דפנות תמציות .1 שות החםרים מאצת בתנאים שונים 'הידרוליזות להידרוליזה הפירידניום בהתאם למעקב אחר בצעו חמצית וגלוקנים למטרת מסחריות עברו הנסיון . מרכיבים מ ו נ ו פ כ ר י ד י ים ,או l-LSOב1N ב- בזמנים ההידרוליזטים ע ו ל י ם עד ניטרול עברו ל־־24 בעזרת כשרכוז אבקת מעקב 2 לסם״ק ה ח ם ר י ם 10פ ג ' סולפט שנוצר, הורחק ע״י מוזגו ויובשו בליופיליזר. .BaC .2 ב הידרוליזות N-H S0 0 . 1 4 חלקיות תמציות מ ־ 4עד 2 חמצה. 0 3ה מ ש ק ע של י i סנון, אחד 1 0 0 ° 0 - . 4 שעות, הידרוליזות במים ונרחץ חסים. ב ו צ ע ו ע " י HCI התםנין מעשיות ל15- בריום י יו,הרחיצות דקות . C 1 0 0 ° 2 4 שעות ב ־ אצסו לי ז ו ת אצטוליזה ודה־־אצטילציה חלקית ל פ י ש י ט ת. ( G o l d s t e i n and Whelah(209 אצטוליזה ה -ס -ג ל ו ק ו ז של ה פ ו ל י ס כ ר י ד י ם , ה ת כ ו ל ה של ).(216 שבוצעו לשם באצטוליזות, בדוד לצורך בצעה מחקרי מלאה לצורך בשיטת נוטרלו האצסוליזםים ב- והרחקת קביעת Schramm-Hestrin ו ^ ה ו י הא ו ל י ג ו פ כ ר י ד י ם ו ה ם ו נ ו ס כ ר י ד י ם ״,BaCO המבנה, נערכו המשתחררים המלחים בצעה עי א ם ב ר ל י ט . M.B.-3 בעזרת ר יאקצ י ו ת חמצון ),(110 לארבינוז חמצון בעזרת פריודס, דגדרציה לפי בעזרת םמית עופרת המעקב ),217 טטרא-אצטם בוצע בU.V.- באורך גל ,(218 וחמצון מ ת ו ן של )(219 - בצעו ל פ י שלנןוח223 למנריביוז הספרות. - בחמצה זרחתית מפול הטפול בגלוקנים לסוםפנםיה ב~1 בטמפרטורת החדר. תוך נאסף והועבר לא היו הסוםפנסיה כל של שעות 72 בוצע חמצה ע״י נרחץ כנגד במהלך עייי זרחתית נמהלה המשקע ה פ ס ד י ם של חמר 9 )72$ םמ״ק במים מים הכנסת עד מים ששקע ניטרלית, ויובש דהיינו לחצי שעה והחמר לתגובה מזוקקים, הטפול, 10 , (w/v מגי חמר נתקבלה בליופיליזר. נצולת של . 1 0 $ אגזימסיים דפנות פירידיניום הנםיוניות(, בבופר של 98 זרחתית תמיסת צנטריפוגציה. דיאליזה נסיונות םודיום םמ״ק בחפצה ־ שספלו אצטס )דרך בחמצה הכנתם זרחתית 1 לםוםפנםית דפנות תתואר עברו בראשית פרק אינקובציה ל׳־-pH.,5 פירידיניום עם התוצאות תמצית ,0.05 שעברו בחמצה טפול 8 זרחתית חלזונות, . 5 )10 M מגי* . לםמ״ק( ו הוספה תמצית העמדה לאינקובציה ע״י הטבלת ל60- דקות ה מ ב ח נ ו ת ל־־3 דקות לתכולת ריאגנט הגלוקוסטמ. כמות .A -אצטט ,0.05 מחזרים מ כ ס י מ ל י ת של M5.0 לאנזים. בשיטת נלקחו עם , )(v/v ב־־.30°0 באפבס הריאקציה םים רותחים. הפריציאניד, דגימות להרצה שעות )בתנאים א י נ ק ו ב צ י ו ת ל־־8 אינקובציות -pH חלזונות סוכרים נטיצזים ביחס של 4 ל־־1 סובםטרם לאנזים. האנזיםסית התערובת ול־-ס־גלוקוז בכרומסוגרפית האמורים(, שמשו פרגמנטים א ו ל י גוםכר י ד י ים לםמ״ק בצעו -|3גלוקוזידז ב,30°0 ביחס )10 של 2 מגי* ל - ( v/v הופסקה נבדקה' בעזרת הנייר מ ד פ נ ו ת אצת בופר( - התערובת במערכת לקבלת הפירידניום. בבופר ) 1ם ו ב ם ט ר ס 99 -־ כר ומטו גרפ י ת הנייר המערכות בחלק הבאות ה י ו )נוסף בשםוש המזכרות לאלו השיטות בפרק אי(: ו >-1פרופנול אתיל-אצטט :מים : -1.אתיל-אצטט : די כרומטוגרפיה ח ם י ה ) 6 0 נשטפה במים והן 2 א ו ת ר ו על על עמודת של םכרידים א נ ז י מ ט י ו ת של ה כ ר ו מ ט ו ג ר מ ו ת גם ע ״ י )(209 דפנות ערבוב־־500 אתנול. שנתקבלו )2:5:15:90 רסוס בדי ) ג ( תא -תא פניל- ערבוב250- בצעה ע ל ) w ה ח ל ק י ו ת הן עמודה ע מ ו ד N גרדינםים מיכל-ליטר ם מ ״ ק 32$ בדגרדציות פירידיניום, /wl:l ב ס ר י ה ׳ ש ל שלשה ערבוב-ליסר מים )ב( ( , בוצעו תא l . ר צ י פ י ם של א ת נ ו ל 32$ -תא אתנול ם מ ״ ק 64$ אתנול )א( ).(v/v מיכל500- א ת נ ו ל ־־ ת א פ ר ק צ י ו ת של 10 של 0 . 5 סם״ק צביעות היססוכימיות ב ס פ ר ו של נלקחו םמ״ק ל ב ד י ק ה של ).(221 תכולת והסתכלויות היסטוכימיים ינסן נאספו ב ק צ ב של 50 סוכר ס מ ״ ק של 64$ מיכל250- סמ״ק לשעה. בשיטת דגימות הפנול. מיקרוסקופיות ספציפיים האצות ודפנותיהם תאי סמ״ק כללית לגלוקנים, ה . . 96$ צבעים (v/v פחם-סליס מזוקקים תא חמצה פורמית :מים : ו ס ל י ט ־ ־ . ( 5 3 5 האלוציות )13:57:32 ).(220 פרקציונציה ־ ־ ( Darco G : וםריסכרידים אמין-אנילין כימיות חמצה 2 אצטית : (v/v הוכנו לפי צולמו המתואר במיקרוסקופ אתנול - - 100 ו Hהפולים החמצות בעזרת בתכשירים של פ ר ק ז י: הכנת (. דפנות מאחר מאצת פירידיניום את תאי חוזרים הדרך ה פ י ר י ד י נ י ו ם,ממסת מים נאספו לםוספנסיה נקיה ).(223 פסי סוםפנםית ,1 מהכנרת וזאת ברז המבוסס תאי הורחפו - )(USAבעומס עבר ף ע ״ י הכנסתו צנסריפוגציה חזרה חזרנו סקופ של ),1:20 על והפעם שנית, לסוספנסיה על השטיפה אופטי הראתה . P.S..I. במים התאים רוכזה ותאי ,(v/v אל הנקיה למשך 15 ( שתי שנתקבל תנועתם - על e דקות(, ) / v אצת הפירידיניום במים מ ז ו ק ק י ם t 0 פעמים בשלב 1 )1:10 e שלש 1 הכיל הדחוסה רוכזו הפוטוטקטית סבון וסמן .( v/v ^ v פעמים. התםניץ הורחק, M בדיקה והםשקע דפנות במיקרו תאים ( ההומוגנט וצ נטריפוגציה, נוספות. זה נייר r זו : םרכוז מסת םוננה t המסווגת התאים האור חזרנו v בתקופה תוך על בצנסריפוגציה כי אצות שהצטיינה רשת פעולה ם.ד. המשקע בעזרת משיכתם הפירידיניום )5,000 על פלנקטונית לעשר י ר ק ו ת ( . ,Mass.)Mpnton-Gaulinh o m o g e n i z e r , model 15 6,000 )(28.2.66 םוספנםית ס.ד. במי בתהליך והתאים לקבלת תרבית נקיה, . ( b o l t i n g ב צ נ ס ר י פ ו ג תS e r v a l l(2000 הפירידיניום םהרת בתרבית טבעית. אינטנסיביות, כ s i l k N o (18.222 - ונשנים לגדול אצת הבאה, פלנקטון פירידיניום בפריחות בצורה למיקרוסקופ. הפירידיניום ונםיונות פתחנו הועברה מתחת o תוצאות הדפנות נכשלו, HF-^phase בצעו המלווים I - בשאריות פר ו סו פלסטי ו ת, - 101 זהומימ פרומו- בעקר פיגםנםים כלורופיליים. פלסטיים אלה הורחקו תוך שטיפות חוזרות עם ממיסים ,שהוכנו נפח אחד של תמיסת 80־ , ( 0 . 5 $ v / v ) T w e e nעם נפח סוה ו במים של םולונט ארגני )אתר ,פטר ולי ו ם-אתר , א צ ט יז חוזרות בוצעו עם כל אחד מתערוכות הממיסים, הוא 10נפחים לכל נפח תאים. בקור ואתנול(. שלש שטיפות כשיחס התערובת לתאים הדפ נ ו ת־הנקי ו ת נרחצו חוזרות במים ,עד שנתקבל משקע לבנבן. של דפנות דחוסות ע"י בססיפות ) 1םמ״ק הדפנות הורחפו במים ל 100-םמ״ק מים( ,נעשתה דיאליזה כנגד מים, ל 7 2 -שעות ,לבסוף הוצאו התאים מתוך שקית הדיאליזה ,ונאספו בצנםריפוגציה ,ויבשו בליופיליזר. היבול הסופי של הדפנות היה כ 40$-מהמשקל היבש של תאים שלמים )הערכה נעשתה ביבושבואק־ום של התאים והן של הדפנות עד למשקל קבוע בדסיקסור שהכיל י־ ^"".(h^SO הן NaOH אבקה זו שמשה למחקר הכימי של הדפנות. הסתכלויות מיקרוסקופיות בחינת תאי אצת הפירידיניום )תמונה מסי" )תמונה מסי" ואילו (18והדפנות המנוקים (19במיקרוסקופ הפאזות מלמדים ,שלתאים צורת כדורים כפי שניתן לצפות הדפנות המבודדים עשויים מלוחות לוחות, ממבנה התא השלם. בדיקה מיקרוסקופית של תאים שלמים שטופלו תחת המיקרוסקופ בחמצה חנקתית מעשנת ,העלתה כי הם נפתחו לראשונה לשניים, פלםט נעלם ולאחר מכן החלה התפוררות הדופן ללוחות, כדורי דק. כשנותר מבנה חמצון הלוחות הבודדות הותיר גר^יר מכל לוח. \ הפרוטו־ - תמונה מס׳ :19 102 א ב ק ה של ד פ נ ו ת .(450 )הגדלה פי ־ האצה • Peridinium westii , ההרכב • ־ והתכונות הפיסיקליייות סל הדפנות פוספורית אינן )(72$ הדפנות הנם בתכולה נמוכה מתמוססות קרה, חנקן, של 103 דפנות במים, ריאגנט הפוליסכרידים ־ זרחן בחמצות שוויצר ),95$ הפירידיניום או בשיטת ואפר. או מהולות קדוקםן. הפנול, באנליזה בסיסים, המרכיב טבלה של העקרי מס׳ חמצות חמצה ,(12 של המלווים אמי׳נו, נקבעה $ t נוכחות של םוח ר ח ב של מתאימה לתכולת החנקן. הצורן, בשריג 1 קרינה כמקור של דפנות של מספר שסונן גלוקנים: ספקטרום בליעה של ים וקריסטובליט הדפנות. לוח ניקל בקרניx- בצעו זו בעקרה כפי שמשה השואה מתחמיצת שנקבע שפופרת דיאגרמות לשם האינפדא-אדום 11.2־- אלפא׳, ).(224 ספציפי, מרכבת בבדיקה לצלולו ז, ב -בן דיפרקציה לדיאגרמות לפוססולן נחשת )תמונה (21 דיפרקציה .(20 מס׳ הצביע ע 1י של הדפנות )תמונה מם׳ בליעה אפינית לקשרים ג ל י ק ו ז י ד י ים• םהםפ ום .(D-3 ) על הדפנות, H6 ,ש ע ו ת לדגרדצייה פםיסה, לתמיסה. נוכחות פית אפר חלבון האנאורגנית ללמינרין, ה פ ע ל ת ^!מצה ניטרליים קורץ דרך הפירידיניום חזקה הפרקציה גבישי.של ב ק ר נ x -י של בדיפרקציה חמצות המאפינות בלתי הכמות חלקית כפי בעוד הגלוקוז הנייר, והן 1N בלבד. טפול היה להסיק שניתן 55$ ממשקל כמרכיב עם בתנאים זה S 0 בסמצה מקביעת הדפנות מקרי 4 המקובלים הפך כמות נותרו בפרקציה גלוקוז־־אוקסידז. 2 ° להידרוליזה 0 42$ 0 1 ממשקל הסוכרים כפרקציה המסיסה C בכרומטוגרפית הוליכה הדפנות המחזרים בלתי נקבעה ( חםצית הן לפרקציה שהשתחררו מסימה. בכרוםטוגר- הנייר של הפרקציה 104 ־ סבלה מסי* הרכב :12 דפנות הפירידיניום. $ נ י ט ר י ל י ים*־ סוכרים - של משקל יבש הדפנות 95 , חלבון: חמצותאמינו** 3.0 חנק ן x6.253.1 זרחן אפר 0.22 )מופל *נקבעו בשימת מתמוססים בצעו הפגול, במים, כדלהלן: םוספנםיה במים הסוםפנסיה לבדיקת על נחמצה עצםן הנקנית( או משקל מדויק )כ־־6 עד שגיאה **הה״כ חומצות א & י נ ו שנקבעו ידרוליזטים חמציים ) 0 • של נקרא חמזנות ב- )סטית Klett מאחר במיקרובלנדד ב10- דגימות והדפנות ובסיסים, •י" שנגרם דפנות נלקחו +3$ כםטנדדס, דפנות מג׳ שהתפתח של משמש מהולות של 10 היטב, והצבע בתחום כשגלוקוז בתמיסות שעורבבה פנול, 0.40 סמ״ק )0,05 מים(. ו0.1- בפילטר אינם הבדיקות הועבר מתוך םמ״ק בשלש התוצאות .42 תקן(. ב B e c k m a n | Spinco amino acid a n a l y z e r 2 -100°N6, H C Iש ע ו ת ב C ( של הדפנות. חזרות( חזרו J ו תפונה - 105 ' . D O 20 של ה ג ל ו ק נ י ם דיאגרמות p^^-x לםינרין ) ,(2ד פ נ ו ת פ י ר י ד י נ י ו ם - ד פ נ ו ת ה פ י ר י ד י נ י ו ם העמידה לחמצה )(5 וכיסין *()1לולוז , ) ,(3פרקצית ) ,(4פ ו ס ס ו ל ן ).(6 * נ ל ו ם י ם 1-4משקפים את ה נ ג ס י ב ,בעוד הצלומים 5-6את הפו ז י ס י ג . / תמונה מם־״ הספקטרום )ן (, 106 - 21 הא י נ פ ר א -א ד ו ם של דפנות הגלוקנים פ י ר י ד י נ י ו ם ) ןן ( , ־ ולמינרין צלולוז ) (ill - 107 - המסיסה בטפול עם החמצה ,יזוהו נוסף לגלוקוז עקבות של המו נ והכר יד ים מנוז ,פוקוז ,ורמנוז ,ואוליגוםכךידים ארוכי שרשרת בעלי נדידה הכרומטוגרפיות בוצעו בסער כת ממיס י ם איטית. Aו־־ . K '. את הפרקציה העמידה לחמצה שטפנו מספר פעמים במים עד לתגובה ניטרלית ,ולאחר מכן יבשנו בלי ופיליי׳זר. שעותב, HjSO^,IN הפרקציה המתקבלת עמידה לטפול חוזר פירקציה זו לא התמוססה (C100° V בריאגנט שוייצר ,אולם התמוססה בקדוקםן. ; י דיאגרמת קרני-א של פרקציה זו )תמונה מסי ,(20הציגה קוים ברורים יותר מדיאגדמת הדפנות השלמות, אולם עדיין היתה הדיאגרמה שוגה מדיאג־רמת הצלולוז. הן הדפנות , השלמים והן פרקצלת הדפנות העמידה לחמצה ,עבדו טפול לאצמולייזה מלאה )שימת שדם-הםסדי ,(fונתנו כמוצר עקרי בבדיקה א ת ה ג ל ו ק ו ז )סבלה מם* ,(13 בכרומטוגרפיה של נייד של אצטוליזם מלא של המדיקצ יה .העמידה לוןמצה זוהו בנוסף לגלוקוז ,גנ-*£לקבות:ז!מנו ז ,פוקוז ,ורמנוז. בנסיונות מתילציה ואצסילציה של הפוליגלוקן.מדופן הפירידיניום במטרה לקבל פולימר־ מםיס ,לסם בדיקת מידת ההומוגניות ,נתקבלו בשתי השיטות פולימרים גבה מולקולריים ביבולים נמ1כים. מהירות הסדימנטציה ומקדם הדיפוסיה לווה השיא העקרי בנסיונות לקביעת בחםרי לואי, כך שהתוצאות חסרות משמעות ללא מחקר ע?* מידת המתילציה או האצסילציה, והדגרדציה שנגרמה לפולימר בעקבות הטפול. שורת צביעות היםטוכימיות של דפנות הפירידיניום וסדרת הגלוקנים בצעו כבדיקות השואתיות • .התוצאות מסוכמות בטבלה מם' .14 ־ מם טבלה T הרכב הפיקציה הטפול סוכרים חמצית * * א צ מ ו ל י זה * 4 H S Qשש 2 **אצטוליזה שעות בשיטת ***בכר ומטו גרפ ית מ נ ו ז .,פ ו ק ו ז , טבלה - הקרבוהידרסית בדופן מם•׳׳ :14 גןצ ב י ע ה החמר צלולו ז ל ם י נר י ן עמילן גל יק ו ג ן ד כססרן דפנות פירידיניום ה פ יו־ י ד י נ י ו ם,13: %משקל הדפנות הבדיקה *הידרוליזה IN 108 t 6 42 מחזרים** * 55 לחמצה פרקציה עמידה ס ו כר י ם מחזרי ם*** 90 נלוקוז אוקסידז 79 ב.100°C - שרם־הסטרי ן . ה נ י ר נמצא ורמנוז. צביעות ה י ס ם ו כ י מ י ו ת של א בץ-בלור-יו ד כח ו ל צהוב-כתום סגול חום צהוב חום הגלוקוז כמרכיב העקרי םי+וה בעקבות גלוקנים. י וד-אשלג ן -י ו ד י H2SQ4 ג1#- ירוק-כחו ל צ ה ו ב־־ח ו ם כחול אדמדם צהוב ירוק-חום מתיל-אד ומ ורוד, ורוד ורוד ורוד חסר צבע חסר צבע ־ - 109 הפוליגלוקן מבנה נערכו לעומת מדפנות נסיונות פוליגלוקנים ועמילן( ידועים )תמונה )דגרדציה .(23 זו אנליזה בצעה בכרומםוגרפית - בסבלה מם ״ מוצרי דגרדצית בדגרדצית םפית, מוליקולת הלמינרין רב מספר הגלוקוז נהרס על מרבית זו מובאות נותרו 1-3 משאר ב־ היו אריסריטול ועקבות שלמים, בפוליפר 6 ° לאחר 0 ניםרול גליצרול, גליצרול. בדפנות בעוד הופרדו 0 עם C סמית ד התוצאות הידרוליזה של נפגע מלאה בחמצון הגלוקוז שכ70$- של ..(217 של נוכחות 40$ העמידה דגרדצית נהרס םהגלוקוז הנתונים שבפרקציה ( נ ת ומלמינרין, הפירידיניום של פ ו מסוכמות מתנולת לחמצה סמית, על שבוצעו עמודת הא ו ל י ג ו ס כ ר י ד י ם והושמו ההידרוליזט. ומדפנות 1 אוליגוסכרידים )לפי 1 מ מצלולוז מרבית בעוד המוצרים הריאקציה ° 0 ה ג ל ו ק ו ז שלא בהתאמה ממית, מתעריבות מוצרי תוצאות צלולוז, זה. פירידיניום,׳ הנייר, ועקבות של פריודט בדגרדצית 0 .A ממיסים אחול פוסטולן, בם ו ד י ו ם -ב ו ר ו ה י ד ר י ד . לחמצה, אריטריטול, בדגרדצית N בכרומטוגרפית את שבמקרה שחרור ודפנות Q-50 גלוקוז המראים הגלוקוז. למינרין ספדקם דקות לא נהרסו חזור גם פרמילון, המתקבלים העמידה הנייר תוך של (22 הפירידיניום ובתצרוכת C להבחין קשרי פריודס, במערכת סםית, הפריודם. מם־* המוצרים הדפנות בטבלה ניתן של דפנות למינרין, ( מפרקצית .15 )תמונה חמצון )(217,218 התנהגות )צלולוז, ןןמצית כוללת: הפירידיניום, של השואתיים בהידרוליזה מסי הפירידיניום להפרדה מוצרי הפירידיניום הלמינרין נתקבלו' גלוקוז, 110מס׳ תמונה 22 TIME, hours התנהגות גלוקנים גהידרוליזה כפי סנקבע חםצית עייי ) 100°0S Hב גלוקוז 2 אוקסידז N , )—; ( 1 ופנול 4 0 ) (. 1 עמילן פרמילון ) •( , ) , ( 8 צלולוז ודפנות ),(e למינרין פירידיניום. ),(0 פוסםולן ) . ( A ( ),(A , - 111־־ תמונה מסי .23 2 3 4 8 Day• at room tamp. I מעקג אחד קליסת פריודט ע״י גלוקנים 7 ,ימים בספרםורת החדר ).(c23° צלולוז )§( ,למי גר יין ),(0 פריס ילון ) , (B חפנות פיר י די נ יום ה6ירידיניום העמידה לחמצה ) • ( . ) פוםםולז (A ) , ( Aופרקציתת דפנות ־ טבלה :15 מ0׳ דגרדצית הגלוקן 0.01 N םמ י ת HCI אריסרימול - 112 והידרוליזה ת 10רק ו ת גליצרול ת מ צ י ת של ם נ א י ב100°0 אוליג ו- סכר י ד י ם * * ג ל ו ק נ י ם* . ז ה ב ה י ד ר ו ל י 30ד ק ו ת HCI 6 N ב 100 C - גלוקוז גלוקוז i + צל ו ל ו ז למ י נר י ן — דפנות פ ר י ד י נ י וים + פרקציה עמידה לחמצה מ ד פ נ ו ת הפרידיניום *ה ג ל ו ק נ י ם עברו דגרדצית םמית בטבלה. מוצרי גלוקוז נ ק ב ע ' אף ).(217 עמודת ספדקם G -50 0 40 + ידי - בפר י ו ד ס , וחזרו ת ע ר ו ב ת עם ההידרוליזה * * ה א ו ל י ג ו ס כר י ד י ם + + 0 70 + חמצון על + - 5 3 + H- הוןםצית ריאגנס המצויים ועברו • בין 3 3 ב ס ו ד י ו ם ב ו ר ו ה י דר י ד מוצרי הדגרדציה נבחנו בתנאי טפלו בתמצות בכרוםםוגרפית הנייר. כמתואר הגלוקוסטט. מוצרי הידרוליזה דגרדצית בנפרד ממית, מיתר הופרדו מוצרי על הריאקציה. ־ אינפורמציה בפולימר)ים( דגרדציות של חלקיות תערבת של דפנות הופרדה מהעמודה מורכבת נוספת דפנות )הן על בעקר ופרקציות פגלוקוז. בכרוםסוגרפית אוליגוםכרידים. נתקבלו נדידתם במערכות כימיים ואנזימטיים. כרומסוגרפיה ל מ י נ ר י ס ר י ו ז' ) , ( I I I גלוקוז המשתחררים והיבול אחד של רים ).(VI בשרסום של כל האוליגוםכרידים ל פ יand W i l d(225 ואופן אחר ,11 ,111 סר י ( F r e n c h .(24 פס׳ ר — IV של גרם 1 הפדקציות .(25 בעקר , במערכת ממיסים א ולי גוםכרידים אלה )סבלה מס׳ ,(16 ובעזרת נייר ) , ( V 16 I דיסכרידים, זוהו של שנתקבלו פרקציה מכילות פריפרטיבית זוהו מוצגים חמצית ^־)p(l:4 כלםינריביוז צלוביוז גם ),(11 מספר מאקויולנס האוליגוסכרידים. )םרית מתונה אנזימסיות(. לפי בהידרוליזה מששת מם׳ והן באמצעות ו ס ט ר א ם כ ר י דיםII-VI Iמפדקציות. נייר למינססרוז בטבלה אצטוליזה )תמונה הא ו ל י ג ו ס כ ר י ד י ם מם׳ התחלקותם, המצויים הושגה ואצסוליזה )תמונה הנייר פרקציות בעקר הגליקוזידיים כהידרוליזה פחם-םלים מכילות ששה הקשרים שנתקבלה בכרומסוגרפית ונוקו וצלוסטרוז ספוסי כימיות עמודת I1V-VI 113 הפירידיניום אוליגוסכרידים נבחנו שהופרדו על - שתי ומרית של ,A מהירות ) מבחנים ,(1 )(IV צלוטריוז האקויולנסים של אוליגוםכריד, המריות ^p(l:3)- —^—ך של ההומולוגיות (, 2 נתנו + קוים log 1 )כשנתוני באוליגוםכריד 3 , H^SO R_.הם Glu המסוים מערכת )תמונה דקות, מ מ י ס י ם ^ מם׳ (C100° (. של כנגד מספר יחידות הגלוקוז 2 6־ ה י ז ־ ר ו ־ ל י ז ה ־ח־מז־י־ת הדיםכרידים )I ו ,(11 - "Glu K ),N1 הסריםכרידים ־114 תמונה - מסי* 2 4 100 140 180 220 260 300 340 60 20 Tube No. ה פ ר ד ה כ ר ו מ ם ו ג ר פ י ת של א ו ל י ג ו ס כ ר י ד י ם מ ג ל ו ק ן ד ו פ ן ההפרדה שנתקבלו באצםוליזה מ ת ו נ ה . הפירידיניום, ב ו צ ע ה על ג ב י ק ו ל ו נ ה של פ ח ם -ס ל י ם ,ת ו ך ש ט י פ ה נאספו ב ג ר ד י נ ט י ם ע ו ל י ם של א ת נ ו ל ) ה פ ר ו ט ב ע י ט ו ת ( . דגימות פ ר ק צ י ו ת של 10ם ם ״ ק ב ק צ ב של 5 0ם ם ״ ק ל ש ע ה . של 0 . 5ס מ ״ ק נ ל ק ח ו ל ק ב י ע ת ס ו כ ר י ם כ ל ל י ת ב ש י ט ת ה פ נ ו ל ־ -:115 תמונה םס.25 . ו ס ט ר ו ז, כרומטוגרמה סל המוכרים המצויים בכל אחת משמונת הפרקציות ) ,(1-8שנתקבלו בהפרדת תערבת האוליגוםכרידים פגלוקן הדופן )נתקבלה באצםוליז מתונה( והפרדה על ק ו ל ו נ ת פחם-םלים) .תמונה .(24 !- Mג ל וק ו ז-^2 ,לםי נר י ב י ו ז->^3 ,צל ו ב י ו ז, ז/ ו ^ £ - -ל מ י נר יסר י ו - 116סבלה מסי" א ו ל י ג ו סכר יד ים :16 מאצטוליזס הנקוי המשך יבול במג י אוליגוםכריד 1 9 חלקי הושג מ ד פ נ ו ת הפ י ר י ד י נ י ו , 0 שהופרד על בכרומטוגרפית י ח ס כשר ח ז ו ר כמויל המבוטא לפני גלוקוז ואחרי ה יד ר ו ל י ז ה * 1.90 : 1 אוליגוםכריד אוליגוסכריד אוליגוסכריד, אוליגוםכריד אוליגוםכריד VI C B 0. 69 0.56 0. 40 0.45 0.84 0.5 6 0.42 0. 45 0.84 0. 40 0.24 0.20 0.76 0.40 0.24 0.20 0,76 0.17 . 0.28 0.09 0. 62 0.28 0.18 0.10 0. 62 4 3.8 : 1 0..20 0.11 0.03 0.54 19 3.7 : 1 0. 10 0. 06 0.01 0. 32 0. 10 0.06 0.01 0.32 23 1.95 : 1 7 2.9 : 1 16 3.0 : 1 * ת ם י ס ו ת ה א ו ל י ג ו ס כ ר י ד י ם נבד׳קו ל ת כ ו ל ת ו ב ש י ט ת פרק־־ג י ו נ ם ו ן ... גפותנית, נקבעו D 0. 64 צל ו טסר א ו ז H30 ,ד ק ו ת נ ־ ובהידרוליזט A R 0. 98 '0.55 צ ל ו טר י ו ז V Glu כמערכת ם ולו נסים 0. 68 למינריטריוז IV הנייר. 0. 62 צ ל ו בי ו ז ווו פוזם-םליט, 0.54 למ י נ ר י ב י ו ז II עמודת נתקבלו 4 I N הסוכרים המחזרים. הגלוקו ז 0 S 2 0. 98 •יו. ג ס י ס ת הפ נ ו ל ־• ח מ צ ה למוכרים מחזרים. ° 0 0 1 C ( , ־ תפונה מס׳ 117 26־ CM 2 3 4I n,glucose units שעורי של הנדידה סדרת בכרופטוגרפית הצלודקםסר׳ינים Glu הפבוםאים כ- R )(0 . הנייר במערכת מפיסים A והלמינדידקסםרינים )(0 י״ z+logx-K כנגד מספר יחידות הגלוקוז באוליגומר. קו ישר מעיד א ח ת ).(225 על השתיכות האוליגוםרים לםריה הומולוגית - 118 - (IVוהטםראםכרידים ) !11ו- ) Vו־ ,(VIגרמה לשחרור של פי שתיים וארבע )בהתאם( אקויולנםים מחזרים שלש )המבוםאים כגלוקוז( ,לאקוי- ולנס סכרידי ,שנקבע באגלי זןנ_ פרק-גי״ו נסו ן לסוברים מחזרים. הP- קונפיגורציה של כל ששת האוליג וסכרידים הוכחה ע״י פרוקם המלא לגלוקוז, לאחר אינקובציה של 24שעות עם זה׳ימ לא היתה דגרדציה של מלט ו ז ) ) . (a (1: 4 10דקותp(l:4של( - n ) -א ו ליגוםכריד ים עם צלו בי ו ז וגלוקוז םאוליגוסכריד ,VIכפי שנקבע מאוליגוםכריד בתנאים -0גלוקוזידז. אינקובציות קיצ־רות )-30 ^ ג ל ו ק ו ז י ד ז ,שחררו ,IVוצלוטריוז, צלוביוז וגלוקוז בכרומסוגרפית הנייר במערכת ממיסים ,A אינקובציות קצרות זהות ,עמ -(3גלוקוזידז שבצעו על אוליגוםכדידיס IIIד — , Vשחרון בעקר ג ל ר ק ו ז ,ורק עקבות דימריפ וטרימרימ, על p(lשבצע ללילה ( מריים שחרר מהם גלוקוז, בקורN »n)3;NoOHo.oi ספול א ו ל י ב ו- פרוק זה חוא ספוסי לסוכרים מחזרים המותמריה בפחמן ,3שהנם רגישים לאלקלי ועוברים בהשפעתו ריאקציות ^-אלימינציה, טפול זהה בp (1:4)- אוליגומרים שחרר דק עקבות של גלוקוז, בעוד מרבית החמר נשאר ללא שגוי. חמצון מלוה אוליגוםכריד ) Iלמינריביוז( ע״י םטרא-אצטט העופרת )(219 בהידרוליזה חמצית של התערבת המןןםצנת ,סחרר ארבינוז וגלוקוז כפי שנקבע בכר ומטו גרפית הנייר. (II שחרר גלוקוז ו אריטרוז בלבד. ; טפול זהה בצלוביוז )אוליגוסכריד ־ אנזימסית דגרדציה אינקובציות )בנפרד אחר עם או חמצה עלתה של בתכולת זרחתית תכולת 119 של הפוליגלוקז דפנות בתערובת(, שנויים - לא הפירידיניום עם צלולז לדגרדציה סל הדפנות גרמו הקבוצות היו לא הזרחן. המחזרות(. הפסדי דפנות חמר, שסופלו בטפול הפולימר בחמצה ותמצית )המעקב דפנות לא עבר זרחתית חלזונות היה הפירידיניום דגרדציה וכן ולא פרקצית _o פנות העמידה ) לחמצה חלקית דגרדציה -100N1,.l-USOב,ש ע ו ת 6 עי׳י צלולז תכשירי ותמצית C חלזונות. עברו ( הדפנות המטופל T ז ר ח ת י ת הוו בון מ צ ה סוב םובסטרט מהפרקציה יותר לחמצה, העמידה *% ו* עבור צלולז תמצית את והן עבור תמצית חלזונות החלזונות הרתה תכשיר אנזימטי המחקר חלזונות עם תכשיר הפכו 15$ מ ס י מ ה ;'כפי שנקבע בהעמדת תלזונות, מסימה נתון הורחקה כמות 100 מגי המצביע זה בלבד. ממשקל בבדיקות לסוכר לאינקובציה הפרקציה המסיסה בצנטר י פ ו גצ יה , של חדשה דפנות על אנזים, נותרה הפיכת טוב מחזר מדי ונרחצה 48 של מהדפנות ולכן בחמצה זרחתית, לצורה נחשב מחזר שעות( שעות. עם כגלוקוז(. תמצית לשארית שטיפות הושארה מסיסה, הבלתי חוזרות לאינקובציה. ש א ר י ת של 6 לצורה המשכנו 60 במספר שעות גם ד ק ו ת עם )48 12 -|3גלוקוזיד תמצית )סוכר ארוכה מכיל מהצלולז, המטופלים והתערבת אחר 94$ )הצלולז באינקובציה הדפנות הדפנות שנאספה הוספה של הן מג׳ בעקר במים, מכמות בלבדי- גלוקוז. ־ בדוד אצות ת א י ם של ט ו ח ר ה ב של אצות הפוטוטקהית ה מ ה י ר ה של בספרות )(226 cinctum fa. westii ע״י בעל-פה ימים של כ ש ל ש ה ע ד י י ן קשי בצפיפות שעליה בר-קימא שיטת שלטת אצה זו, דפנות הכנת מכנית מלווה להכנת דפנות גורמת לשבירת טובה בין חלקי התא. והמבנה כשטיפות גורמת נוחה בדרך הכימי הנוקשה, זו שלו. הוכן אצות נמצאה לגרום נזק השוקע תכשיר ) )באותו תאים אחרי ניכר במהירות דפנות שנמסרו קרקע וליצירת מזון(. גם גופי- הצלחת •הגדול מגופי נ כ ר ו ת של ת א י המים, ופטריות ).(2 שיטה לדופן, והיא מאפשרת הומוגני, ששמש בהם שבירה השיטות בצנסר י פ וגצי ה, במעבדה אצה. שבצעה ע ״ י מבין דור הנמשכת ב מ ע ב ד ה ,מה ישירות מתאימה בחיידקים האצה, ( lag period פירידיניום כשיטה הנתונים מ ל מ ד י ם על זמן אצות כך,שגם זו Peridinium ה ח י י ם של לשניה הפירידיניום לקבלת מתרבות רבות, תנוחה כמויות עבודה נמסר הפירידניום. מחזור לתמותת המכילות תנועתם הפירידיניום ג ד ו ל ה של ת א י מיקרואורגניזמים הדופן ותקופת (endocysta התאים בלי מקבוצת ל ג ד ו ל אצת ת א י ם של א צ ה תאים ה מ ב ו ס ס ת על שהושלמה מ ת ר ב ו ת אחת בתרבות כשיטה דגימות מים, מ מ ע ב ד ת "מק ו ר ו ת ״ -נ צ ר ת כמות מטפום בדוד לאחר נ ת ו נ י ם על במעבר התאים מתוך בשיטה אצות אופטימלי, בקבלת )ספורה בהצלחה י .ארן ש ב ו ע ו ת עד חדש כשלשה בגדול מהכנרת. במצע בוצע אצות א ל ו . הצלחה הותאמו דייר הפירידיניום פלנקסוניות, ) ,(226על מהספרות נותרה 120 דייז פ ר ק חי*: קיים ־ לבין למחקר המשמשות זו הפרדה שאר ההרכב ־ 121 המורפולוגיה המיקרוסקופיות א צ ו ת חד של של או ת ע ר ב ת של השונה מתמוססות הוצעה נקלה. ע ל סמך הp- הבליעה ,(21 דפנות של )ראה מקובל ובקדוקסן, השונים באינפרא-אדום בעלות הדפנות השלמה של א ו ל י ג ו ס כר י ד י ם ב א י נ ק ו ב צ י ו ת עם - האנזים דיאגרמת אינן הצלולוז בפוליגלוקן, J מוצרי פוליגלוקן מתמוסס הגליקוזידי ) הנו והמבחנים בתכונותיהם המבודדות 11.2 תאים הנםיונות ר י א ג נ ט י ם בהם הקשר סדפנות בדפנות, ) ת מ ו נ ה מסי* . ( 2 0 מההםתכלויות J ( )תמונה פרוקים מס׳ חלקיים ^גלוקוזידז להלן(. ו ג ל ו ק ו ז היה באצםוליזה מ ל א ה של הפירידיניום וסדרת העקרי נערכו פוליגלוקנים פוםסולן הפריודט ) ת מ ו נ ו ת מם־* ( הסוכר הדפנות, ודכססראן(. עקומות הנראית את גבוהה בנוסף דופן בדיקות ידועים בהידרוליזה השואתיות בין והן דפנות )עמילן, צלולוז, לםינרין, החמצית ועקומות תצרכת , ( 2 3 ^ 2 2סרסזות על אפשרות של נוכחות שני סוגים של קשרים כקשרים הפירידיניום. בהרבה שנתקבל הן ההידרוליזה , . > ( 1 : 3 ) ^p(p המרכיבים זה, העקרי הדפנות ק ו נ פ י ג ו ר צ י ה של הפירידיניום מאחר ו זידיים))1:4 ).(227 המצופה תוצאות פוליגלוקנים, צלולוז שוויצר האפינית והדגרדציה יותר ת ו א מ ת את ו.(19- שהמרכיב מצלולוז. מ ז ו של בריאגנט םצלולוז מראות שניים או והכימיות המבודדות ) ת מ ו נ ו ת 18 בנויות הפירידיניום הפיסיקליות על השלם תאיות דפנות קרני*- של בתא הדפנות - מהמצופה ל ^ ( 1 : 3 ) - ה צ ר י כ ה של -מקורה הלמינרין הטפוםיים בגלוקן פריודם ע״י ב נ ו כ ח ו ת קשרי א י נ ו חמר או למינרין )p(l:6 מ ו ג ד ר ,אלא גלוקנים תלוי בפולימר ממקור , - ההפקה ) ס ו ג מיהם האצה( סונה בין בשעור צריכות בספרות נמסרו מקובלת ללמד על בעבודתו נוסו )p(1:3 לחלוטין מקשרים נוספים המניםול למולי , או/ו־ ),228 גלוקוז .(229 אנהידריד קשרים לספום גלוקנים המרכבים רגישים הקשר מיחידות לעמידים הגליקוזידי בהידרוליזה בהתנהגותם ומספר לתרום להבדלי גלוקוז. תורמים הפרמילון חםצית. שעור ה ת נ ה ג ו ת של המצית. ממצאיו )(a(l:4 ((l:6))<£ )p(1:6 ההסתעפויות, להידרוליזה לחמצה)): )p(l:4 קשרי המצית עשויה ב פ ו ל י מ ר , ( W o l f r o m (230 . כ ד ו ג מ א נ ק ה את )לאחרון להידרוליזה גליקוזידיים (^<)), p(l:6 חמצית. מדת ה ל י נ א ר י ו ת לריים בעמידות )p(l:3 עשויים הלמינרין בפוליםרים, הפוליגלוקנים הגליקוזידיים דיםכרידים על הסדר ה ב א , ־ מול׳ ושעור .פריודס שרגישות הקשרים הראה על בהידרוליזה וה־)p(1:6 המוליקולה כ־0.58 ההנח3 השוני גורמים גודל בסוגי נובע ).(229 סוגי )), p(l:2 השוני ה־)P(1:3 קשרי ההסתעפות, גבוהות ודרך. 122 ההפקה. ־ a (. מצביעים a,1:2 ( ^ כפי הנראה, ליציבות פוליסכרידים והלמינרין שניהם בנקודות שנויים וחוזק - ההסתעפות(, באורך המולקולה, הקשרים פוליםכרידים השונים הבינמולקו- בהידרוליזה חםצ י ת. נוכחות מתאשרת ע ״ י קשרי אנליזת ו־)(1:3 )(1:4 מוצרי שארית בלתי מחמצנת סל מצביעה על נ ו כ ח ו ת קשרי בגלוקן סל דגרדצית כ־40$ גלוקוז ממית )מבלה ממשקל ) ,(1:3ו מ צ ד ש נ י דפנות ממי* הפירידיניום, (15 ה ה ת ח ל ת י של נוכחות שלהן. הדפנות, אריטריטול בין - הדגרדציה מוצרי עובדות )(J1:3 מלמד המחזקות (3ב ג ל ו ק ן או ואפיון הדפנות ) ת מ ו נ ו ת 24 עם במספר לציין ששעור ו,25- הקשרים .(16 נייר הנייר ; u)Glu(l:4)Glu( l : 3 ) G l u שונה של מזו צלוטריוז, סכרידים בתחום זהים -100°S , 2 לאלו שעות בציה של דומים נראים בתמונה 24 שהשתחררו בN בעלי ולמנריסריוז הנדידה 0.1 דפנות מסי* הלמינריםריוז וזוהו 0 מטופלי סל אלה עברו זהה .(16 בהקשר ראו טרי סכדידים זה בעלי G קשרים חמרים אחד שיתכן בפרקציות נתגלו ( בלבד, C ז ר ח ת י ת עם תמצית כמו ליחסם ו- VII למרי- , VIII א ו ל י ג ו ם כ ר י ד ים בהידרוליזם ( 4 ח ל ק י ת של לספנים והצלוםריוז. באצטוליזט חמצה סס־* סוג ).(231 שבין באופן מבדוד המתאימ l עקבות מעורבים מתקבלות א ו ל י ג ו סכר י ד י ם )טבלה .(39. ה ג ל י ק ו ז יד י ים ) ) ( 1 : 4 הפירידניום, ונדדו בכרוםטוגרפית סריםכרידים ב פ ו ל י מ ר ) 1 5 1עסי* המסתחרר ים ,ב א צ ט ו ל י ז ה -|3גלוקוזידז, כרוםטוגדפיה הנדידה סוגי ט ב ל ה מסי* סל )(1:4 דופן אוליגוסכרידיים האנזים מערכות נוכחות קשרי שני ב ג ל ו ק נ י ם של מרכיבים דגרדציה על 123 נוכחות - וכן חלקי בתערובות )8 חלזונות של אינקו שעות •י ב.(30°0 יבול החלקיות, בדופן הא ו ל י ג ו סכר י ד י ם היה השלם הכימיות מרגישות פחות היא כנראה )אצטוליזה היתר של מיבול שוה פםרית ה|3(1:3)- ^)p(1:4 )תאור והידרוליזה( קשרי )P(l:3 אוליגומרים, להלן(? קרוב לעמת שנתקבלו במקרה לודאי למרות של שהתוצאה ה־)P (1:4 בדגרדציות שתכולתם הדגרדציות נובעת לטפולים אלו. - מאצםוליזות נתקבלו ד ו מ ו ת של רק אוליגוסכרידים הפרקציה הדפנות מאשר בדיאגרמות פרקצית של קשרי טול זו מרמזת על מתוך הדופן או היות ההידרוליזה דגרדצית במוצרי השרשרת הקשרים תכונות כאלו גבוהה ה ת מ צ י ת של הדפנות. כמות הדגרדציה של פרקצית הגליצרול הדפנות בפרקציה המתגלים שוויצר. הדומות )p(l:4 על לצלולוז, בריאגנם מספר יחסית עמי .(150 יותר )כתוצאה אולם הגלוקוז לחמצה שאינם מכלל מתחמצנים הדופן הגליקוזידיים של לצלולוז פריודם. מהרס המוצר הדפנות לאריטרי יחסית השלמות. העמידה, מועדף קצרה תוצאה מזו ) בצד ) 4 בפריודם שני, : 1 נתן ((p)/1:3(p מצד לשער אחד, שיחם בפולימר ואחוזי שני השלם, נמצא ל.1:1- תוצאות המחקרים הקשרים הגליקוזידיים בדרך ההתמוםסות ס מ י ת שבצעה הגלוקנית דומה הבדלים, וצריכה קשרי )145 )p(l ( השלם. העמידה מהוה בעלת י ח ס י ת של םוכרים עדיין ואי לחמצה האריטריסול, כמותו אחוזי ביחס .המקורב סוגי הנו לעומת בדופן השארית העשרה בתערבת לחמצה, הקיימת עמידות (20 היא 4))3:p(l: הפירידיניום קיימים מם׳* קשרים n־)p(l:4 מדופן לחמצה ) (p ( 1 : 3ב מ ה ל ך עלתה ספוסי שחלה המופיע העמידה )תמונה בקדוקסן, לודאי העקרי השלמות. ברם, הדפנות כהתםוםםות קרוב העמידה העמידה מעורכי מםרית לוזמצה קרני-א 124 גלוקנים ־ ת ע ר ב ת של פזורם. עד עתה קניים לא מאפשרים מצויים או באותה יותר להחליט בפסקנות ה מ ק ר ו ם ו ל יק ו ל ה , גלוקנים השונים באם או בספוסי שני באם הקשרים - טבעיים גלוקנים ) ) p ( 1 : 4ו ( p(l: 3 ) - בפולימר אחד גבוהה במים ההנחה ה מ ו צ ע ת ) 145עם־* זכריים מוליקולת 125 המכילים את שני ועוברים בשרשרת - בנקל ,(397 ( F l e m i n g & Manners (232 שנוכחות שני ס ו ג י ם של מסיסות הגלוקנים מסיסות ),185 האורינםציה ה מ ג ד י ל את שתכונות כבעלי גלוקונזות שוברת את שנוי הראו ידועים ד ג ר ד צ י ה ע.ם סוכריתאחת, הפוליגלוקן, םוגי ),(232 ה ק ש ר י ם ה ג ל י ק ו ז י ד־ י י ם .(187 גליקו- קשרים ה ל י נ א ר י ת של בסים. המוליקולה )). p(l:4 המעורבים 3)-o ( בפולימר, מכאן, ו כ י הן שההסבר הפירידיניום הקשורים מושפעות להתנהגות טמון פחות מן ה מ ו ז ר ה של ב ס ד ו ר של ב ס ו ג קשר א ח ד ב ל ב ד ( של ש נ י כגשרי חזקים, בפני והעמידות דפנות חלזונות, בחמצות להקנות לאחר ),184 המתבטא מדפנות בתפיחה כימיים המתאימים ה פ י ר י ד י נ י ו ם בשל שלהן .(234 הטפול -ג ו ש של שיירי בהקנית גלוקן זרחתית. ),(234 וסובסטרטים תכונות מתמצית טפולים ידועים דומים השנוי בחמצה זרחתית הנו פוליסכרידים המסיםות דופן' הפירידיניום. היחיד המופקים במבנה ב י נ מ ו ל ק ו ל ר י ים לפוליסכרידזות בחמ צה גלוקוז בפולימר ,או קשרים מפתח בגריסה צלולוז ),233 . רגישים מכני, ר ג י ש ו ת של תפקיד טופלו גלוקנים מדופן טפוסיהזקשרים ו ב י ו ל ו ג י י ם של הופכים טפול )בלוק גלוקניים. למלא שדפנות אלו (233א ו להעלות ההידרוליםיים גלוקן טפולים פירידיניום רק או עשויים הכללי בין הגלוקן או הבלוקים ה ד ו ק וסגור של שניים׳או יותר פולימרים מימן, היחס הקשרים בפולימר. בבשרם לאנזימים הנגרם מחמדים דומים לפולי- מורפולוגי, מעצבי מבנה, - ידועים מבנים כתמרים המצויים ס ג ו ר י ם אלה כחמצה בלמצות, לשבירת חדירות אנזימים. בתוך שלל הדפנות. המבנה קבוצות קיימת שכבת כבנויה אצות, בשנים מצלולוז. ו ה ג ו ו נ י ם של כ ו ל ל שלש בדופן בטבע, ומכאן שכבות לכל פתיחת להבחין היותר, השונים האחרונות מצלולוז בדופן ה ק ו מ פ ק ט י של נתונים גליקן במבנה הפירידיניום )מה- זה באופן דומים, האצות. המסיס במים, מספר , (Dinophyceae נוכחות זו גלוקן מהצלולוז. נוכחות בדופן בפני משותף קומפקטית מהותי על לגרום המבנה בעוד מ צ ב י ע י ם על .(2 טפולים עשויים נהוג היה מחקר ) ,235ע מ י לתוכם. ל ר א ו ת שכבה הפירידיניום מצוי וסגור אנזימים אצות נתן משתייכת אצת בלבד. הדוק ארוכת זמן נמסרו ו|3(1:3)- גלוקנים האצה הבנוי Monodus בקשרי )P(l:4 . הצטברות להועיל סתיה. לקרקעית חשיפה ה מ מ צ א י ם של ( s u b t e r r a n e u s (161 למי חדירת בספרות השונים היתר, או אליהם דופן אחת גלוקנים להגביל במבנה ה מ ש נ י י ם ה ב י נם ו לק ו לד י י ם, הצורות של או עשויים זרחתית, הקשרים במבנה באופן 126 סבעי - מידע על לשפור הרכב תנאי במאגרי מים ומהוות הביווגודציה, הביולוגיים מקור או דרך במאגרי ומבנה ה א ח ז ק ה של רבים זהום גופי מים מצטברים מתמיד לזרוזם, מים. כ י מ י של לחמר עשוי דופן המשמשים ד פ נ ו ת של ארגני ל ה י ו ת צעד א צ ו ת ,עש ויה אצות, ).(133 חשוב בין כמקורות השוקעות גלוי בהבנת מנגנוני התהליכים 127 ־ פוליםכרידים מסיסה מקו י של פוליסכרידים מים בחמר המרכיבים האחרים, דגרדציה. עמידות המחקר כווני בהכרת מקפסולה של םכרידים בקרקע האורגני, מרמזת זו שני םים-קרקע. שחלה על משכה הראשי בעקבות עמידות את רווית השולטת שבודד פוליםכריד בפריחות המהירה חפרים והיא היחסית אלו של מהדופן מאגרי לביו־ א. כנציג מים, לבחירת פוליםכריד מפרישי של של של שהוליכה ־ מיקר ו ב י א ל י י ם . , F l a v o b a c t e r i u m sp. מים. של לבנו, פוליסכרידים בכמות ההתפרקות יחסית תשומת ב. בפרקציה העליה הארג נית הבלתי הפולי- אצת ובארץ מצויה בכנרת. חלק א: חול המחרידות בחפוש בעמודות מתח אחר אלו. הדכוי הסתומות מנגנוני קולחין החלקי בודדו והסתימה. שיטה סכויו לבדוד הנו נמצא תהליכי חיידקים , F l a v o b a c t e r i u m sp. כי את היצירה הטרופולימר, חלה הפרוק של הוכח מייצר ותכונותיו הומוגני הקשר הסתימה, הצטברות בעמודה, של בין פוליםכרידים ירידת הפוליסכרידים, מתוך השולט ביניהם החיידק, מוצרי פוליםכריד והרכבו בעמודות ובמיוחד הפוליסכרידים. פוליםכרידים. הפלוובקטריום הפוליסכריד, כי חמרי המתפתחים תהליכי מפרישי ובעזרתו ומהות מצאנו האקולוגיים לחלוטין של הסתימה, סינתטיים, התנאים החםצן ,מ ד כ א י ם לעמת ב*- המרכיב ומערכות החיידק ?!,. P e r i d i n i u m west בעקר מהרים את ־ נחקרו בא ו ל ט ר י א צ נ ט ר י פ ו ג ה , העמודות הוגדר הפרשתו קפסולרי. עובדה במפורט. הפולי־ בהשקעה ברכוזים עולים אתנול. של זהו בהידרוליזסים חומציים )ס-גלוקוז, ס-מנוז, כמו נמצאו כן כמויות ודזאוכסי־םוכר פולימר שלו נתגלו ה נ ו ד ד מהר )עד מולקולרי ו ז ו ה ו ששה .ו-רסנוז, קטנות 128 גבה - חמצה ),(200,000 מרכיבים גלוקורונית, ומסים םוכריים קםילוז במים. עקריים וריכוז(. ( 1 $של סוכרים אחרים, כגלוקוז-אמין בכרומטוגרפית הנייר, והשונה מהדזאוכסי- S סוכרים הידועים. הידרוליזות על ־ עצמה חומציות יחידה ביחסים סולריים הריבוז והמנוז בקטריום, )(1:3 הראשון או שמוכרים טרמינלי הםרולוגיות לחםצון, אחר סדר התברר -דבר המרמז כהסתעפות של ליחסים מוצרי אלו בפולימר השלם. בנקודות על הפוליםר סוכר סוכר וכן השלם, בנוי החוזרת המופיעים הפוליסכריד בקשרים בפולימר, מהגלוקוז, מהפלוו- גליקוזידיים הסתעפות. בהידרוליזה )שלא הטרמינלי צדדית. מיחידה נ ו ס ח ו ת חלק בפוליםר, ההשתחררות לתמיסה מקומו המבנה י הםוכריים ב פ ר י ו ד ס של מופיעים שהדזאוכםי סופית. שהפוליםכריד המרכיבים החמצון או לא נמצא, ה מ כ י ל ה את כ ל בין העמידים מהפוליםכריד, חלקיות הזהים מראה במעקב הד זא ו כס י -ס ו כר זוהה במ חקר בעזרת זוהה הלא טרמינלי להשפיע על סופית( מחזר זה חומצית, בשרשרת עשוי של מופיע הסוכרים כסוכר הפולימר, ל ק ב ו ע את עמידותו בפני התכונות פרוק א נ ז ימס י . במבחן נמצא שמתח גורמים הגורמים החמצן קריסיים. המשפיעים במערכת על הגדול ב מ ע ק ב אחר יצירת ויחסי העלםות הפוליסכריד הפחמן לחנקן פוליםכרידים )כמותית במצע ואיכותית(, הגדול, בעמודות מהוים. ־ חול .במעבדה, נמצא מתח ה ע ש ר ה ב ה ם שמש החמצן הפוליסכריד חיידק שהוגדר לפרוק הפוליסכריד ע״י למרות ש ה ח י י ד ק ג ד ל י פ ה על התכשירים האור, האצה ידינו וכללה ע״י ב ו צ ע על המרכיב גלוקנים( 5 קרני(*- ממנו בהסתמך על התכשיר ה ע ק ר י של בצורה התאים ה ם נ ו ק ה של הדפנות. יחידות זוהה )(95$ הפיסיקליות הגלוקוז המצית, ליזה מחקר כימיות דיניום והן תצרכת המבנה נעשה ע ״ י אנזימטיות. ב ו ד ד ו על כרוםסוגרפית פריודם עמודות הנייר ומוצרי סמוש מוצרי אופינו כימיות הרכב וממיסים )או )מסיסות מנסויי טבעית, חמרים אורגניים. פולי־־ ודיאגרמות בשני התנהגות ומבנה שפותחה והרחקת קשורות הראו מאד. בשיטה כפוליגלוקץ ב ט כ נ י ק ו ת של פחם-סליט, ובריאקציות דטרגנט דגרדציה לפי הדגרדציות החלבונים. למוד שהוכנו בפוליגלוקן ג ל י ק ו ז י ד י י ם ) P(l:4ו ' , 0 ( 1 : 3 ) - קשרים ממסת והכימיות וזאת תכשיר בודד אנזימסי פלנקםון בהומוגניזר, חוזרות יחידי, נמוכה הפוטוםקטי. דפנות במצעי מפלוובקטריום פירוק נקיה בתמיסות בתכונותיו מצלולוז. פעילות בוצע על הדפנות פחמן להפיק קפםולרי כשרן מ כ נ י ת של נסינו הפרוק. ו פ ר ק צ י ו נ צ י ה של פוליסכריד התקבלו שטיפות השונה - כמקור ממנו התאים שהופקו שבירה ה מ כ ת י ב את ק צ ב מפלוובקסריום Peridinium westii פרוטופלססיים המחקר כגורם שבירת ה3ירידיניום משיבתן אל דפנות על אצות 129 Pseudomonas sp. האנזימסיים ח ל ק ב: ע״י כ- - סוגי בהידרו- סםית. דגרדציות ה ח ל ק י ו ת של ונוקו חלקיות~הן דופן הפירי- ב ט כ נ י ק ו ת של ואנזימסיות. הפרגמנטים ־ 130־ הא ו ל י ג ו סכר י ד י י ם שהתקבלו, צלוסריוז, )צלוביוז, למינרייטריוז טפול חלזונות. מ ש ת י י כ י ם לסתי הסדר ו ת-הצל ו דקםםרקנ ים וצלוםטראוז(, והלמינרידקםטרינים )למיגריביוז, ולם י נ ר י םטרא ו ז ( . בחמצה ז ר ח ת י ת הפך את ד פ נ ו ת ה פ י ר י ד י נ י ו ם פ ר ו ק של 9 4 $ממשקל ה ד פ נ ו ת ל ר ג י ש ו ת לתמצית )המטופלות( הוסג באינקובציות של 4 8שעות עם תמצית ח ל ז ו נ ו ת . נידונו .1 ה א פ ל י ק צ י ו ת המעשיות מעבודה זו והז: דרכים אפשריות ל מ נ י ע ת הצטברות פ ו ל י ס כ ר י ד י ם המשמשות א. לסינון ק ו ל ח י ן , שמירה על מתח חמצן תכופים ב. .2 ; להעשרת גבוה כיבושים ה ע ו ק ב י ם את ההחדרה. הבהרת ח ש י ב ו ת ד פ נ ו ת בחלזונות נושאת המים, במערכת ת ו ך ה ה ח ד ר ה ,א ו ה ע ז ר ו ת בם יקר ו א ו ר ג נ י ז מ י ם א ו • שא ריחי ת א ר ו כ ה השכבה בקטריאליים, בקרקעו בגופי מים, ב א נ ז י מ י ם המפרקים הפירידיניום כמקור ז ה ו ם א ר ג נ י בעל פ ע י ל ו ת והצבעה על ם ק ו ר ו ת ע ש י ר י ם ה מ ס ו ג ל י ם לפרק ש א ר י ו ת א ל ו . פוליסכרידים . באנזימים - 131 - ספרות 1. D a v i s B.D. and W a r r e n , L ( e d ) 1 9 6 7 , T h e & p e c i f i c i t y o f C e l l Surfaces, Prentice Hall I n c . , Englewood C l i f f s , N e w Jersey R o g e r s H J . a n d P e r k i n s , H.R., 1968. C e l l W a l l s a n d M e m b r a n e s , E & F . N . S p o n , L.T.D. London. p 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. S t a c e y , M . a n d B a r k e r , S.A. a t the C l a r e n d o n Press. S h a r o n , N . 1 9 6 6 , A n n . Rev. Evans. T . H . a n d H i b b e r t , H . , Burger, M . , 1 9 5 0 , B a c t e r i a l I 9 6 0 , Polysaccharides o f M i c r o o r g a n i s m s . B i o c h e m . 35 ( I I ) : 4 8 5 . 1946. A d v . C a r b o h y d r a t e C h e m . 2 ; 2 0 3 . p o l y s a c c h a r i d e s , C C . Thomas, S p r i n g f i e l d , Oxford Illinois. H e i d e l b e r g e r , M . , P l e s c i a , O . J . a n d D a y , R.A. (Eds.) 1 9 6 1 , I m m u n o c h e m i c a l Approaches t o ,Problems i n M i c r o b i o l o g y , pp. י91-144, The Rutgers U n i v e r s i t y Press, N e w B r u n s w i c k , N . J . H o w , M . J . , B r i m a c o m b e , J.S. a n d S t a c e y , M . , 1964. A d v . C a r b o h y d r a t e C h e m . 19 : 3 0 3 . Bleises, A . S . a n d K r a u s e , R . M . , 1 9 6 5 , J . E x p t l . M e d . 122 : 2 3 7 . 10. R o a n t r e e , R . J . , 1 9 6 7 , A n n . Rev. M i c r o b i o l . 21 : 4 4 3 . 1 1 . T o m c s i k , J . , 1956. Symp. Soc. G e n . M i c r o b i o l . 6 ; 4 1 . . 1 2 . W i l k i n s o n , J . F . 1 9 5 8 , B a c t e r i d . Rev. 2 2 : 4 6 . 13. S a l t o n , M . R . J . , 1 9 6 7 , A n n . Rev. M i c r o b i o l . 21 : 4 1 7 . 14. S h i l o , M . , 1965. i n Symp. o n C e l l Surfaces B i o l o g i c a l c o n f e r e n c e s " O h o J o " 1 0 t h a n n u a l m e e t i n g , Z i c h r o n Y a a c o v , p. 8 3 . 15. K a l c k a r , H . M . , 1 9 6 5 , Symp. C e l l S u r f a c e s , B i o l o g i c a l c o n f e r e n c e s " O h o l o " 10th a n n u a l m e e t i n g , Z i c h r o n Y a a c o v , p. 8 8 . 16. N o m u r a , M . , 1 9 6 7 , A n n . Rev. M i c r o b i o l . 21 : 2 5 7 . 16a. G h u y s e n , J . M . 1968. B a c t e r i o l . Rev. 32 : 4 2 5 . 17. M i t c h e l l , P. a n d M o y l e , J . 1 9 5 1 , J . G e n . M i c r o b i o l . 5 : 9 8 1 . 18. S a l t o n , M . R . J , a n d H o m e , R.W., 1 9 5 1 , B i o c h i m . Biophys. A c t a 7 ; 19. 19. 20. 21. S a l t o n , M . R . J . , 1 9 6 4 , The B a c t e r i o l C e l l W a l l , A m e r . Elsevier P u b l i s h i n g C o m p . Inc. N . Y . K u s h n e r , D . J . , B a y l e y , S.T., Boring J . a n d K a t e s , M . 1 9 6 4 , C a n . J . M i c r o b i o l , 1 0 ? 4 8 3 . B r o w n , A . D . , 1 9 6 4 , B a c t e r i o l . Rev. 28 : 2 9 6 . 22. M i t c h e l l , P. a n d M o y l e , J . , 1 9 5 6 , Soc. G e n . M i c r o b i o l . Symp. N o . 6 : 150. 23. 24. 25. 26. 27. Sud. I . J . a n d T y l e r , M . E . , 1 9 6 4 , J . B a c t e r i o l 87 : 6 9 6 . W o r k , E., 1 9 6 1 , J . G e n . M i c r o b i o l . 25 : 1 6 7 . K r u l w i c h , A . T . Ensign, J . C . T i p p e r , D . J . a n d Strominger, J.L.,. 1 9 6 7 , J . B a c t e r i o l . 9 4 : ״74.1 D e i b e J , R . H . , 1 9 6 4 , B a c t e r i o l . Rev. 28 : 3 3 0 . B r o w n , A . D . 1 9 6 1 , B i o c h i m . Biophys. A c t a , I , 48s 3 5 2 , I I , 58 : 5 1 4 , ( 1 9 6 2 ) , I I I , 6 2 : 1 3 2 28. 29. 30. (1962) and I V , 7 5 ' : 425 .(1963). C o l i , R . M . , 1 9 6 5 , B a c t e r i o l Rev. 2 9 : 3 2 6 . W e i d e l , W . , F r a n k , H . , a n d L e u t g e b , ״W . , 1 9 6 3 , J . G e n . M i c r o b i o l . 3 0 : 127. B u t t o n , D. A r c h i b a l d , A . R . a n d B a d d i l e y , J . , 1 9 6 6 , B i o c h e m . J . 99 : 116. ־132 31. Markovitz,, A . , 32. B a r t n i c k i - G a r c i a . י, S. a n d N i c k e r s o n , W . J . , 1 9 6 2 , B i o c h i m . Biophys. A c t a , 58 : 102 « 1 9 6 1 , J . Bacteriol. 82 : 436. 33. L i p p m a n , , M . , 1 9 6 5 , Trans. N e w Y o r k A c a d . S c i . Sr. II 2 7 : 3 4 2 . 34. L u d e r i t z , O . Staub, S . M . and W e s t p h a l , O . , 35. B u l m e r , G . S . a n d Sans. M . D . , 36. M a x t e d , W . R . , 1 9 5 2 , N a t u r e 1 7 0 : 1020. 1 9 6 6 , B a c t e r i o l . R e v . , 3 0 : 192. 1 9 6 8 , J . B a c t e r i o l . 95 : 5 . 37. C a r s o n , K J . a n d E a y o n , R . G . , 1 9 6 6 , C a n d . J . M i c r o b i o l . 12 : 105. 38. B r a u d e , A . J . , 1 9 6 4 , S c i e n t i f i c A m e r i c a n , M a r c h p. 3 6 . 39. H o r e c k e r , B.L., 1 9 6 6 , A n n . Rev. M i c r o b i o l . 2 0 : 2 5 3 . 40. Carlson, D . M . and M a t t h e w s , L.W., 1 9 6 8 , B i o c h e m i s t r y 5 (9) : 2 8 1 7 . 41. S i d d i q u i , I.R. 1 9 6 7 , C a r b o h y d r a t e Res. 4 (4) : 2 8 4 . 42. C o h e n , G . H . a n d J o h n s t o n e , D . B . , 1 9 6 4 , J . B a c t e r i o l . 88 : 3 2 9 . 43. Dudman, W . F . , 1964, J . 44. M a r t i n , J.P. a n d Richards, S . J , 1 9 6 3 , J . B a c t e r i o l . 85 : 1288. 45. H a r a d a , T. 1965. A r c h . B i o c h e m . Biophys. 112 : 6 5 . 46. M a r k o v i t z , A . , 1 9 6 4 , Proc. N a t l . A c a d . S c i . , 51 : 2 3 9 . 47. H a h m , P.S., E r i k s e n , J . a n d H e n r i k s o n , S . D . , 1 9 6 7 , A c t a P a t h o l . M i c r o b i o l . S c a n d . B a c t e r i o l . 88 : 6 4 0 a n d 8 8 : 7 8 2 . 9 (B) : 4 3 1 . 48. S a n d f o r d , P.A. a n d C o n a r d , H . E . , 1 9 6 6 , B i o c h e m i s t r y 5 : 1508. 49. Y o u n g , R. a n d A d a m s , G . A . , 50. S i d d i q u i , I.R., 1965, Cand. J . C h e m . , 43 {11) : 2929. 51. G a u d y , E. a n d W o l f e , R.S., 1 9 6 2 , A p p l . M i c r o b i o l . 10 : 2 0 0 . 52. Kohn, A . , 1 9 6 7 , C a r b o h y d r a t e Res. 4 (4) : 2 7 7 . 1960, J . Bacteriol. 79 : 697. 53. P e r k i n s , H.R., 54. M o n o d , J . , 1 9 4 7 , G r o w t h , 11 : 2 2 3 . 1 9 6 5 , B i o c h e m . J . , 95 : 8 7 6 . 55. S c h l e g e l , H . G . and Jannasch, H.W., 1 9 6 7 , A n n . Rev. M i c r o b i o l . 21 • 4 9 . 56. S i c k l e s , G . M . and Shaw, M . , 1934, J . B a c t e r i o l . 28 : 415. 57. W h a n g , H.Y. a n d N e t e r , E., 1 9 6 5 , J . B a c t e r i o l . 8 9 : 1437. 58. B a c k e r , E.E. a n d W h i t e s i d e , R.E., 1 9 6 5 , J . B a c t e r i o l , 8 9 : 1217. 59. E n s i g n , J . C . a n d W o l f e , R.S., 1 9 6 5 , J . B a c t e r i o l . 9 0 : 3 9 5 . 60. M c C a r t y , M . , 1 9 5 6 , J . E x p t l . M e d . 104 : 6 2 9 . 61. V i n c e n t , W . F . and Cameron, J . A . , 62. S t o l p , H. a n d S t a r r , M . P . , 1965. L i f e S c i . 4 . : 1989. 63. S h i l o , M . a n d B r u f f , B., 1 9 6 5 , J . G e n . . M i c r o b i o l , 4 0 : 3 1 7 . 1963, A n t o n i e Van Leeuwenhock 29 : 64. Humphries, J . C , 65. S u t h e r l a n d , I.W. a n d W i l k i n s o n , J . P . , 1 9 6 5 , J . G e n . M i c r o b i o l . 3 9 ; 3 7 3 . ־217 1 9 4 8 , J . B a c t e r i o l 56 : 6 8 3 . 66. C h a k r a b a k r t y , A . N . , N i b l o c k , J.F. and Gunsalus, I.C., 67. A v n i m e l e c h , Y . a n d N e v o , Z . , 1 9 6 4 , S o i l S c i . 98 : 2 2 2 . 1 9 6 7 , V i r o l o g y 32 (3) : 5 3 2 . 68. D u f f , R.B., 1 9 6 1 , J . S c i . Food A g r . , 8 2 : 8 2 6 . 69. W h i s t l e r , R.L. a n d K i r b y , 1 9 5 6 , J . A m e r . C h e m . S o c , 78 : 1755. 70. H a w o r t h , W . W . P i n k a r d , R.W. a n d S t a c e y , M . , 1946. N a t u r e 158 : 8 3 6 . ־133 71. W h i s t l e r , R.L. a n d K i r b y , K . W . , 1 9 5 6 , J . A m . C h e m . S o c , 78 : 1755. 72. 73. 74. M e h t a , N . C . , D u b a c h , P. a n d D e u e l , H . , 1 9 6 1 , A d v . C a r b o h y d r a t e C h e m . 16 : 3 3 5 . J a c k s , G . U . , 1 9 6 3 , S o i l a n d F e r t i l i z e r s , 26 : 147. H a r r i s , B.F., A l l e n , O . N . , C h e s t e r s , G . , a n d A t t o e , O . J . , 1 9 6 3 , S o i l S c i . 75. A l l i s o n . L.E., 1947, Soil. Sci. 63 ; 439. 76. 77. Parr, J . F . a n d B e r t r a c h , A . R . , I 9 6 0 , A d v . i n A g r o n o m y , 12 ; 3 1 1 . Chesters, G . , 1 9 5 9 , S o i l a g g r e g a t i o n a n d o r g a n i c m a t t e r d e c o m p o s t i o n P h . D . Thesis U n i v e r s i t y o f W i s c o n s i n , M a d i s o n , Disser. A b s . 2 0 : 1 9 6 1 . D u g u i d , J . P . a n d W i l k i n s o n , J . F . , 1 9 5 3 , J . Genr. M i c r o b i o l . 9 : 174. Tempest, D . W . , H u n t e r , J.R. a n d S y k e s , J . , 1 9 6 5 , J . G e n . M i c r o b i o l . , 3 9 : 3 5 5 . Soc. A m . Proc. 27 : 5 4 2 . 78. 79. 80. G n s e b e r g , A . E . a n d G o t t o a s , H . B . , 1 9 5 7 , A m . J . Pub. H e a l t h , 4 2 • 4 0 1 . 81. B r o w n , E . G . a n d W a r n e , W . E . , 1 9 6 1 , D e p t . W a t e r Resources A g e n c y , C a l i f . Bu. N o . 8 0 . 82. A m r a m y , A . , C a s p i , B. a n d M e l a m e d , A . , 1 9 6 2 , D a n r e g i o n sewage r e c l a m a t i o n p r o j e c t , i n f i l t r a t i o n a n d p e r c u l a t i o n studies. T A H A L , w a t e r p l a n n i n g f o r Israel L t d . Sept. N o . 2 4 7 . T a k a i , Y . , K o y o m a , T . , a n d K a m u r a , T . , 1 9 5 6 , S o i l a n d Plant Food 2 : 2 . J a m e s , A . , 1 9 6 4 , J . A p p l . Bact. 27 (2) : 197. M i t c h e l l , .R, a n d A l e x a n d e r , M . , 1 9 6 2 , S o i l . S c i . 93 % 4 1 3 . M c G a u h e y , P.H. a n d W i n n e b e r g e r , J . H . , 1 9 6 3 , B e r k e l e y , C a l i f o r n i a S a n i t a r y Eng. Res. L a b . Report N o . 6 3 - 5 . C a l a w a y , W . T . , 1957. Sewage I n d u s t r i a l W a t e r s , 2 9 : 1. I n g r a m , W . M . , 1 9 5 8 , Sewage I n d u s t r i a l Wastes 3 0 : 8 2 1 . A l l e n , O . N . , 1 9 5 7 , Experiments i n S o i l B a c t e r i o l o g y , Burgess P u b l i s h i n g C o . , J a c k s o n , M . L . , 1958. S o i l C h e m i c a l A n a l y s i s , P r e n t i c e H a l l , I n c . , E n g l e w o o d , C l i f f s , N.J. 83. 84. 85. 86. 87. 88. 89. 90; 91. Baver, L . D . , 1956, 92. S c h a c h m a n , H . K . , U l t r a c e n t r i f u g a t i o n , D i f f u s i o n a n d V i s c o s i m e t r y , M e t h o d s in E n z y m o l o g y , 4 : 3 2 , , A c a d . Press N . Y . 93. 99. 100. U m b r e i t , W . W . , B u r n s , R.H. a n d S t a u f f e r , J . F . , 1 9 6 4 , M a n o m e t r i c T e c h n i q u e s , Burgess P u b l i s h i n g C o . , M i n n e a p o l i s , U . S . A . S h a r o n , N . a n d J e a n l o z , R.W., I 9 6 0 , J . B i o l . C h e m . 2 3 5 : 1. P a r t i d g e , S . M . , 1 9 4 9 , N a t u r e , 164 : 4 4 3 . H a l l e n , A . , 1 9 6 4 , A c t a C h e m . S c a n d . 14 : 2 2 4 9 . B r i n k , R . H . D u b a c h , J . P . a n d L y n c h , D . L . , I 9 6 0 , S o i l S c i . 8 9 : 157, M o r r i s , D . L . , 1 9 4 8 , S c i e n c e , 107 : 2 5 4 . D u b o i s , M ־, G i l l e s , K . A . , H a m i l t o n , J . K . , Rebers, P.A. a n d S m i t h , F., 1 9 5 6 , A n a l . C h e m . 28 : 3 5 0 . L y n c h , D . L . , H e o r n s , E.E. a n d C o t n o i r • , L . T . , 1 9 5 7 , S o i l . S c i . A m . Proc. 21 : 160. SomogyS, M . J . , 1 9 4 5 , J . B i o l . C h e m . , 1 6 0 : 6 1 . , I I , 1 9 5 : 1 9 (1952). 101. Nelson, N.J., 102. Park, J . T . and J o h n s o n , M . J . , 1 9 4 9 , J . B i o l . C h e m . 181 : 149. 94. 95. 96. 97. 98. S o i l Physics, J o h n W i l e y a n d Sons, Inc. N.Y. 1 9 4 4 , J . B i o l . C h e m . , 153 : 3 7 5 . - 134 103. 104. 105. H a l l i w e l l , G . , 1 9 6 1 , B i o c h e m . J . 7 9 : 185. Elson, L A . a n d M o r g a n , W . T . , 1 9 3 3 , B i o c h e m . J . 2 7 : 1824. D i s c h e , Z . 1 9 4 7 , J . B i o l . C h e m . 167 : 1 8 9 . 106. 107. 108. 109. H o f f m a n , P., L i n k e r , A . a n d M e y e r , K . , 1 9 5 6 , S c i e n c e , 1 2 4 : 1 2 5 2 . Hughes, R.A. a n d J e a n l o z , R.W., 1 9 6 4 , B i o c h e m i s t r y 3 : 1 5 3 5 . Dische, Z . , 1955, Methods B i o c h e m . A n a l . , 2 : 313. H o u g h , L. 1 9 6 2 , M e t h o d s in C a r b o h y d r a t e C h e m . 1 : 4 0 0 . 110. 111. G u t h r i e , R.D., 1962, Methods in Carbohydrate Chem. 1 : 435. L o w r y , O . H . , Rosenbrough, N . J . , K a r r y A . L . a n d R a n d a l l , R.J., 1 9 5 1 , J. B i o l . C h e m . , 193 : 2 6 5 . S p a c k m a n , D . H . , S t e i n , W . H . a n d M o o r e , S . , 1958., A n a l . C h e m . 3 0 : 1 1 9 0 . K a b a t , E.A. a n d M a y e r , M . M . , 1 9 6 1 , E x p e r i m e n t a l Immunocjhemistry, Charles C . Thomas, Publisher, S p r i n g f i e l d 1 : 1 1 . O u c h t e r l o n y , V 1 9 4 8 ,־, A c t a Path. M i c r o b i o l . Scand. 2 5 : 186. B r e e d , R.S. M u r r a y , E . G . D . a n d S m i t h , N . R . , 1 9 5 7 , Bergey's M a n u a l o f D e t e r m i n a t i v e B a c t e r i o l o g y , The W i l l i a m s & W i l k i n s C o m p a n y , B a l t i m o r e . S k e r m a n , V . B . D . , 1 9 5 9 , A G u i d e t o the I d e n t i f i c a t i o n o f t h e G e n e r a o f B a c t e r i a . The W i l l i a m s & W i l k i n s C o m p a n y B a l t i m o r e 2 , M a r y l a n d . W i l h a m , C . A . , A l e x a n d e r , B.H. a n d J e a n e s , A . , 1 9 5 5 , A r c h . B i o c h e m . Biophys. 5 9 : 16. 112. 113. 114. 115. 116. 117. 118. 119. 120. 121. 122. 123. 124. 125. 126. 127. 128. 129. 130. 131. 132. 133. 134. 135. 136. 137. 138. S t a n e k , J . , C e r n y , M.< ׳K o c o u r e k , J . a n d P a c a k , J . , 1963. The M o n o s a c c h a r i d e , A c a d e m i c Press. A d a m s , G . A . and M a r t i n , S . M . , 1964. C a n . J . B i o c h e m . 4 2 : 1403. W e b b , J . M . a n d L e v y , H . B . , 1 9 5 5 , J . B i o l . C h e m . 2 1 3 : 107. D i s c h e , Z . a n d S h e t t l e s , L . B . , 1 9 4 8 , J. B i o l . C h e m . 175 • 5 9 5 . I s h e r w o o d , F.A. a n d J e r m y n , M . A . , 1 9 5 1 , B i o c h e m . J . ., 4 8 : 5 1 5 . M a r k o v i t z , A . , 1 9 6 2 , J . B i o l . C h e m . 2 3 7 : 1767. Krauss, M . T . , J a g e r , H.J.., S c h i n d l e r , O . a n d R e i c h e s t e i n , T . , I 9 6 0 , J . C h r o m a t o g r a p h y 3 : 63. Hanessian, 1 9 6 6 , A d v . i n C a r b o h y d r a t e C h e m . 21 : 143. R e i c h e s t e i n , T. a n d W e i s s , E 1 9 6 2 ,״, A d v . i n C a r b o h y d r a t e C h e m . 17 : 6 5 . Boas, N . F . , 1 9 5 3 , j . B i o l . C h e m . 2 0 4 : 5 5 3 . B!«x, G . , 1948. A c t a C h e m . S c a n d . 2 : 4 6 7 . S t o f f y n , P.J. and J e a n l o z , . R.W., 1 9 5 4 , A r c h . B i o c h e m . Biophys. 5 2 : 3 7 3 . A m r q m y , A . , 1965, A i r & W a t . Pollut. Int. J . 9 : 605. Z o B e l l , C . E . , 1 9 4 6 , M a r i n e M i c r o b i o l o g y , C h r o n i c a B o t a n i c a W a f t h a m , Mass. G e o g h e g a n , M . J . and B r a i n , R."Cl, 1948,'~BT6ch'6mrJ., 4 3 • 5. Alexander, M 1 9 6 5 ־ > A d v . A p p l . M i c r o b i o l . 7 : 35. G r e e n w o o d , D . J . , 1 9 6 1 , Plant & S o i l 14 : 3 6 0 . V a r m a M . M . a n d Reed, G . W . , 1 9 6 4 , J . W a t e r P o l l . C o n t . F e d . 36 : 176. W r i g h t , D . N . a n d L o c k h a r f , W . R . , 1 9 6 5 , J . B a c t e r i o l . 8 9 1.082 :־. Tempest, D . W . , H u n t e r , J.R. a n d S y k e s , J . , 1%$7J.'Gen. M i c r o b i o l . 3 9 : 3 5 5 . S t o n i e r , R . Y . , 1 9 4 1 , J. ׳B a t e r i o l . 4 2 : 5 2 7 . - ו35 ־ 139. K u o , M . J . a n d A l e x a n d e r , M . , 1 9 6 7 , J . B a c t e r i o l . 94 : 6 2 4 , 140. 142. C h e t . , I . , 1 9 6 7 , Ph. D. Thesis. The H e b r e w U n i v e r s i t y , J e r u s a l e m , The S t r u c t u r e a n d B e h a v i o r o f the Fungus S c l e r o t i u m rolfsi? Sacc. J o h n s t o n , H . W . , 1 9 6 6 , The B i o l o g i c a l a n d E c o n o m i c I m p o r t a n c e o f A l g a e , Tuatara 13 (2) : 90 a n d 14 (1) : 3 0 ( N e w Z e a l a n d ) . H e u k e f e k k s n , H. a n d N . C . D o n d e r s , 1 9 6 4 , P r i n c i p l e s a n d A p p l i c a t i o n s i n A q u a t i c 143. M i c r o b i o l o g y , Proceedings o f R u d o l f s Research C o n f e r e n c e , J o h n W i l e y & Sons I n c . T o n o l l i , V., 1 9 6 6 , N e w S c i e n t i s t , 1 4 A p r . p. 119. 141. 144. Preston, R.D., 1 9 5 9 , Inter Rev. C y t o l . 8 : 3 3 . 145. S m i t h , F. a n d M o n t g o m e r y , R., 1959. 146. 147. 148. 149. 152. 153. 154. 155. L e w i n , R.A., 1 9 6 2 , P h y s i o l o g y a n d B i o c h e m i s t r y o f A l g a e , A c a d e m i c Press, N . Y . Preston, R.D., 1 9 6 4 , Endevour 23 : 153. N o r d i n , J . H , a n d K i r k w o o d , S , , 1 9 6 5 , A n n , Rev. Plant P h y s i o l . 16 % 3 9 3 . T u r v e y , J.R. a n d W a l e s , B . N 1 9 6 6,־,P o l y s a c c h a r i d e o f M a r i n e A l g a e , Progress i n the C h e m i s t r y o f O r g a n i c N a t u r a l Product 23. Muhlethaler, 1 9 6 7 , A n n . Rev. Plant P h y s i o l . 1 8 : 1 . P e r c i v a l , E. a n d M c D o w e l l , R.H., 1 9 6 7 , C h e m i s t r y a n d E n z y m o l o g y o f M a r i n e A l g a l Polysaccharides, A c a d e m i c Press, L o n d o n . Preston, R.D., N i c o l a i , E., Reed, R. a n d M i l l a r , A . , 1 9 4 8 , N a t u r e , 162 : 6 6 5 . P u n n e t t , T. a n d D e r r e n b a c k e r , E . C . , 1 9 6 6 , J . G e n . M i c r o b i o l . 4 4 : 105. Thompson, E.W. a n d Preston, R . D . , 1 9 6 7 , N a t u r e 213 : 6 8 4 . . N i c o l a i , E. a n d Preston, R.D., 1 9 5 2 , Proc. Roy. Soc. B 140 : 2 4 4 . 156. 157. F r e i , E. a n d Preston, R.D., 1 9 6 8 , Proc. Roy, Soc. B. 169 5 127. M y e r s , A . a n d Preston, R.D., 1 9 5 9 , Proc. Roy. Soc. B 150 : 4 4 7 . 158. N u n n , J.R. a n d Parol i s , H 1 9 6 8 ,־, C a r b o h y d r a t e Res, 6 : 1 . Reinhold Publishing C o r p o r a t i o n , 150. 151. ־159 160. 161. 162. 163. 164. 165. 166. The C h e m i s t r y o f Plant Gums a n d M u c i l a g e s N.Y. L a r s e n , B., H a n y , A . , P a i n t e r , T . J . , 1 9 6 6 , A c t a Chejm S c a n d , 2 0 : 2 1 9 , O H , E, S p u r l i n , H . M . a n d G r a f f l i n , M . W . , 1 9 5 4 , C e l l u l o s e a n d C e l l u l o s e D e r i v a t i v e s 2nd Edition V o l . 5 of High P o l y m e r s i n t e r s c i e n c e , N . Y . Ford C . W . a n d P e r c i v a l , E., 1 9 6 5 , J . C h e m . Soc. 3 0 1 4 . J o n e s , J . K . N . . , 1 9 5 0 , J . C h e m , Soc. pp. 3 2 9 2 . L o v e , J . a n d P e r c i v a ! , E., 1 9 6 4 , J . C h e m , Soc. 3 3 3 8 , F r e i , E. a n d Preston, R.D. 1 9 6 4 , Proc. R o y . Soc, B 160 : 2 9 3 . L a r s e n , A.B, a n d Smidsrod. D . , 1 9 6 6 , A c t a C h e m i c a S c a n d . 2 0 : 183. F o l k , M ־, S m i t h , D . G . , . M c L a c h l a n , J . and M c l n n e s , A . G . , 1966, Can, J . Chem. 4 4 : 2269. 167. Ford C . W , and P e r c i v a l , E., 1 9 6 5 , j , C h e m . Soc. 7 0 2 4 . 168. N o r t h c o t e , D . H . , G o u l d i n g , K J , , a n d H o m e , R.W., 1 9 5 8 , B i o c h e m , J . 7 0 : 3 9 1 . 169. A n d e r s o n , N ־S . , DoSan, T־C,S ־a n d j t e e s , D . A . , 1 9 6 5 , N a t u r e 2 0 5 : 1060. 170. B o u v e n g , H . O . a n d . L i n d b e r g , B־, I 9 6 0 , A d v . C a r b o h y d r a t e C h e m . 15 : 5 3 . 171. N e w k o m , H., D e u e l , H., H e n , W . J . and K u n d i g , W . , I״960 Helv. Chim. A c t a 43 : 64, 172. H u a n g , H . , a n d G i e s e , A . C . , 1 9 5 8 , S c i e n c e 127 : 4 7 5 . ־136 173. 174־ Y a p h e , W . , 1 9 6 2 , N a t u r e 196 : T u r v e y . J.R. a n d C h r i s t e s o n , J . , 1 9 6 7 , B i o c h e m . J . 105 : 3 1 1 . 175. Y a p h e , W ־, a n d B a x t e r , B., 1 9 5 5 , A p p l . M i c r o b i o l . 3 % 3 8 0 . 176. 177. 178. 178a. 181. 182. 183. 184. Preiss, J . a n d A s h w e l l , G . , 1 9 6 3 , J . B i o l . C h e m . , 2 3 8 : Y a p h e , W . a n d M o r g a n , M 1 9 5 9 ,־, N a t u r e 188 % 7 6 1 . G a l l ! , D.R. a n d G i e s e , A . C , 1 9 5 9 , J . E x p t l . Z o o l . 140 : S h e f n e r , A . M . , K i n g , M ־E . a n d K o h n , B., 1 9 6 2 , E n z y m a t i c D i g e s t i o n o f A l g a l C e l l s p. 391 in B i o l o g i s t i c s f o r Space Systems Sympos8um,Technical D o c u m e n t a r y Rep. N o . A M R L - T.D.R. 6 2 - 1 1 6 . Reese, E.T., M a g u i r e , A . H . , Panrish, F . W . , 1 9 6 8 , C a n . J ־B i o c h e m . 46 : ־25 Reese, E.T. ( e d i . ) 1 9 6 3 , A d v a n c e s i n E n z y m i c H y d r o l y s i s o f C e l l u l o s e a n d Related M a t e r i a l s , Pergomon Press, O x f o r d . Reese, E.T., 1 9 6 5 , J . Ferment. T e c h n o l . ( J a p a n ) 43 : 6 2 . T u t t o b e l o , K. a n d M i l l , P . J . , 1 9 6 1 , B i o c h e m . J . 7 9 : 5 1 . T a k a h a s h i , N . a n d E g a m i , F., 1 9 6 1 . B i o c h e m . J 3 8 4 : 80 ־ . H a l l i w e l l , G . , 1 9 6 6 , B i o c h e m . J ־1 0 0 : 315־ 185־ C l a r k e , A . E . and Stone, B.A., 186. S e l b y , K., and M a i t l a n d , C C , 187. 194. L u c h s i n g e r , W . W . a n d Richards, A . W . , 1 9 6 5 , BiochSm ־Biophys, A c t a , 112 : I I I , 5 2 4 a n d SV, 5 3 1 . Elorza, M־V ־and V i l i a n e u v a , R.E.M., 1966, N a t u r e 210 : 442. N o r t h c o t e , D . H . , G o u l d ? n g , K . J . a n d H o m e , R.W., 1 9 5 8 , B i o c h i m . J . 7 0 : 3 9 1 . S p e r r y , K . , 1967. S c i e n c e 158 : 3 5 1 . J a c k s o n , D . F . , 1 9 6 4 , A l g a e a n d M a n , Plenum Press, N . Y . W o l f , L , 1 9 6 5 , M a n a n d His H a b i t a t : Problems o f W a t e r P o l l u t i o n . B u l l e t i n o f the A t o m i c Scientists Apr. S w a r t z , S . O . , 1 9 5 6 , Sew. I n d . Wastes 2 8 (6) : 7 3 2 . L u n d . J . W . G . 1 9 6 5 , B i o l . Rev. 4 0 : 231. V e r d u i m , J 1 9 5 6 ,־, Lsmnoh & O c e a n o g r . 1 : 8 5 . 195. S i l v e y , J . K . G . a n d A . W . R a o c h , 1 9 6 4 , A . W . W . A . , 56 : 6 0 . 179. 180־ 188. 189. 190. 191. 192. 193. ־1571 ־415 1 9 6 6 , Biochem ־J . , 99 • 5 8 2 . 1 9 6 7 , B i o c h e m . J . , 104 • 196. ־199 ־1120 ־716 W h f f e f i e l d , C . E . , 1 9 5 1 , Teste a n d O d o r Problems 5n the Tennessee V t a i e y R e g i o n , 1 9 4 7 - 5 0 U.S. P u b l i c H e a l t h S e r v i c e W a s h i n g t o n , D . C 197. Bereoit, R ־J . , 1 9 5 5 , Sewage I n d u s t r i a l W a s t e s , 27 : 3 , 1267. 198. G a t e s , W . E . , 1 9 6 4 , j . W a t e r P o l l u t i o n C o n t r o l F e d e r a t i o n , 3 6 : 4 4 3 . T r y o n , C A . & (•terrmcsnn, R.T., I 9 6 0 , A l g a e a n d M e t a b o l i s m s o f N a t u r a l W a t e r s i n the E c o l o g y o f A l g a e , p. 38 . P y m a t u n i n g L a b , o f F i e l d B i o l o g y , Spec. Publt 2 U n i v e r s i t y o f Pittsburgh. 2 0 0 . S h i l o , M . , 1967. B a c t e r i o l . R e v 3 1 ־ 180. 2 0 1 . L u n d , J . W . G . , 1 9 6 7 , S c i e n c e Progress 5 5 : 4 0 1 . 2 0 2 . B r a d k a , J . , 1 9 6 3 , E v a l u a t i o n o f W a t e r Q u a l i t y Changes i n the S l a p y Reservoir. ManuscrifH y d r a u l i c Res. inst. Prague. s ן ־37 ־ 203. 204. 205. 206. 207. 208. 209. 210. 211. G i o r g i o , S . , 1 9 6 6 , L i m n o l . O c e a n o g r . 11 (3) • 3 5 5 . Prakash, A . , 1 9 6 7 , J . Fish. Res. Board C a n . 2 4 (7) : 1584. M o r a v c o v a , V . , 1 9 6 6 , V e r h . Internal•. V e r e i n . L i m n o l . 16 s 1 0 0 3 , S t u t t g a r t . N e u m a n , I . , 1 9 6 7 , M e k o r o t h T e c h n i c a l L e a f l e t 3 (3) 6 7 . L i n d b e r g , B ־and M c P h e r s o n , J . , 1 9 5 4 , A c t a C h e m . S c a n d . 8 % 985. C l a r k e , A . E . a n d S t o n e , B . A . , I 9 6 0 , B i o c h i m . Biophys. A c t a , 4 4 • 1 6 1 . G o l d s t e i n , I.J. and W h e l a n , W . J . , 1 9 6 2 , J . C h e m . Soc. 180 s 170. L a u n e r , H.F. a n d W i l s o n , W . K . , 1 9 5 0 , A n a l . C h e m . , 22 : 4 5 5 . B r o w n , W . , 1 9 6 7 , Svensk P a p p e r s i i d n i n g , 7 0 s 4 5 8 212. 213. 214. 215. 216. 217. N a k a n i s h i , K . , 1 9 6 2 , Infrared A b s o r p t i o n S p e c t r o s c o p y , Haiders, Day Inc.,$an F r a n c i s c o . S t e y e r m a r k , A . , 1 9 6 1 . Q u a n t i t a t i v e O r g a n i c . M i c r o a n a l y s i s p.177. A c a d e m i c Press, \ Y . K i n g , E . J . , 1932. B i o c h e m . J . , 26 : 2 9 2 . ^ B a i l e y , R.W. a n d Hassid, W . Z . , 1 9 6 6 , Proc. N a t l . A c a d . S c i . 56 : 1 5 8 6 . S c h r a m m , M . and H e s t r i n , S . , 1 9 5 4 , B i o c h e m . J . 5 6 : 163. A b d e l - A k h e r , M . , H a m i l t o n , J . K . M o n t g o m e r y , K . , and S m i t h , F., 1 9 5 2 , J . A m e r . C h e m . Soc. 7 4 ; 4 9 7 0 . a n d M o n t g o m e r y , R., 1 9 6 5 , B i o c h e m i s t r y 4 ; 5 7 8 . G o l d s t e i n , I . J . , H a y , G . W . , L e w i s , B.A. a n d S m i t h , F 1 9 6 5 ־ , Methods Carbohy Chem. 5; 3 6 1 . F e i n g o l d , D.S. N e u f e l d , E.F. a n d Hassid, W . Z . , 1958. J . B i o l . C h e m . 233 • 7 8 3 a n d C h a r l s o n , A . J . a n d Perl i n , A . S . , 1 9 5 6 , C a n J . C h e m . 3 4 : 1200. B a i l e y , R.W. and B o u r n e , E . J . , I 9 6 0 , J . C h r o m a t o g r a p h y 4 ; 2 0 6 . J e n s e n , W . A . , 1 9 6 2 , Bot. H i s t o c h e m i s t r y , W . H . Freeman a n d C o . , K o m a r o v s k y , B 1 9 5 9 ,־, C o n t r i b u t i o n o f the Sea Fisheries Research S t a t i o n , H a i f a N o , 2 5 . M i e a s e , B . J . D . , 1 9 6 3 , A r c h . Fur. M I k r o b i o l . 4 5 : 4 2 4 , B r o w n , G . , 1 9 6 1 , The X ״R a y I d e n t i f i c a t i o n and Crystal Structures o f C l a y M i n e r a l s . J a r r o l d and Sons, L t d . N o r w i c h . F r e n c h , D . and W i l d , G . M . , 1 9 5 3 , J . A m . C h e m , Soc. 75 : 2 6 1 2 . C a r e f o o f , J . R . , 1 9 6 8 , J . P h y c o l , 4 ; 129. K i m o r , B. and Pol l i n g e r , U 1 9 6 5 ,־, C o n t r i b u t i o n o f the Sea Fisheries Research S t a t i o n , H a i f a , N o . 78 s 4 1 . B o l l , A . T . , and Chesters, C . G . C . , 1 9 6 6 , A d v . E n z y m o l . 28 • 3 2 5 . M a e d o , M ־end N f s o z c w a , K 1 9 6 8 ,־, C a r b o h y d r a t e Res. 7 • 97 and J . B i o c h e m . ( J a p a n ) 6 3 ; 199. 218. 219. 220. 221. 222. 223. 224. 225. 226. 227. 228. 229. 6 2 3 0 . W o l f r a m , M . L . Thompson, A . , a n d T s m b e r l a k e , C . E . , 1 9 6 3 , C e r e a l C h e m , , 4 0 s 8 2 . 2 3 1 . C h e n , S.C. and LuchsSnger, W . W . , 1 9 6 4 , A r c h . B i o c h e m . Biophys, 106 s 7 1 . 2 3 2 . F l e m i n g , M ־a n d M a n n e r s , D . J . , 1 9 6 6 , B i o c h e m . J . 100 ; 4 - P 2 3 3 . M o r k r a n s , B 1 9 6 7 ,־, A d v . A p p l . M i c r o b i o l . 9 s 9 1 . 2 3 4 . Kafrz, M ־, a n d Reese, E.T., 1 9 6 8 , A p p l . M i c r o b i o l . 16 s 4 1 9 . 2 3 5 . W h i s t l e r , R.L., aimd S m a r t , C . L . , 1 9 5 3 , P o l y s a c c h a r i d e C h e m i s t r y , A c a d . Press. N . Y . x II r e a c t i o n s a n d t h e resistance towards e n z y m i c d e g r a d a t i o n o f t h e w h o l e p o l y m e r . endo- The geneous C / N r a t i o i n the e n e r g y source used for g r o w i n g F l a v o b a c t e r i u m sp. has been f o u n d t o a f f e c t the synthesis o f t h e capsular p o l y s a c c h a r i d e both q u a n t i t a t i v e l y a n d q u a l i tatively. Enrichment c u l t u r e s w e r e p r e p a r e d and seeded by s o i l g r a i n s . capsular p o l y s a c c h a r i d e o f F l a v o b a c t e r i u m o f a Pseudomonas species. A d d i t i o n o f the as sole c a r b o n s o u r c e , r e s u l t e d i n t h e I s o l a t i o n A l t h o u g h this b a c t e r i u m g r e w w e l l on the capsular p o l y s a c c h a - r i d e , w e d i d n o t s u c c e e d I n - I s o l a t i n g d e g r a d i n g enzymes c a p a b l e o f d e g r a d i n g rhe bacterium Flcvo- capsular p o l y s a c c h a r i d e , e i t h e r from the c u l t u r e f i l t r a t e or from e x t r a c t s o f the cells. Part 2: Cells of the d l n o f l a g e l l a t e alga Perldlnlum w e s t l l w e r e c o l l e c t e d from w a t e r samples, t a k e n from Lake T i b e r i a s , d u r i n g t h e p e r i o d o f a l g a l b l o o m s , a n d w e r e p u r i f i e d by a p r o c e d u r e based on t h e i r phototaxJs. C l e a n c e l l w a l l s w e r e i s o l a t e d b y m e c h a n i c a l d i s i n t e g r a t i o n o f t h e p u r i f i e d w h o l e c e l l s , f o l l o w e d by d i f f e r e n t i a l c e n t n f u g a t i o n a n d w a s h ing w i t h detergents a n d o r g a n i c solvents. The i s o l a t e d w a l l s w e r e e x a m i n e d by p h y s i c a l , c h e m i c a l a n d e n z y m a t i c t e c h n i q u e s . The m a j o r c o m p o n e n t o f t h e s k e l e t a l c e l l w a l l (about 9 5 % o f its w e i g h t ) was f o u n d t o be a p o l y m e r o f D - g l u c o s e w h i c h d i f f e r e d from c e l l u l o s e in its X - r a y d i f f r a c t i o n p a t t e r n , s o l u b i l i t y i n S c h w e i t z e r r e a g e n t a n d c a d o x e n a n d o t h e r physical and chemical properties. Partial d e g r a d a t i o n o f c e l l w a l l g l u c a n by a c e t o l y s i s and a c i d h y d r o l y s i s a f f o r d e d a series o f c e l l o d e x t r i n s (n = 2 to 4 ) , as w e l l , as l a m i n a r i b i o s e and l a m i n a r i t r i o s e , i n d i c a t i n g t h a t the g l u c o s e units are j o i n e d by p (1:4) a n d P (1:3) l i n k a g e s . It has not been e s t a b l i s h e d w h e t h e r t h e t w o types o f l i n k a g e s are present i n the same p o l y m e r or in different polymeric molecules. A p r o n o u n c e d d e g r a d a t i o n o f t h e c e l l w a l l g l u c a n by P־gluconases o f s n a i l d i g e s t i v e j u i c e was a c h i e v e d o n l y w h e n phosphoric a c i d - t r e a t e d c e l l w a l l s w e r e used as a substrate. The r e l a t i v e l y low r a t e o f d e c o m p o s i t i o n o f the c e l l was g l u c a n , i n comparison t o o t h e r k n o w n g l u c a n s , under n a t u r a l c o n d i t i o n s , seems t o be r e l a t e d t o its closed s t r u c t u r e w h i c h serves as a p h y s i c a l b a r r i e r for e n z y m e p e n e t r a t i o n . We h a v e also discussed possible p r a c t i c a l a p p l i c a t i o n s o f the results o b t a i n e d d u r i n g t h e course o f t h e w o r k d e s c r i b e d . SUMMARY Polysaccharides are the m a i n c o n s t i t u e n t o f t h e m a c r o m o l e c u l e s composing t h e i n s o l u b l e o r g a n i c f r a c t i o n o f w a t e r bodies a n d soils. the p r o p o r t i o n o f p o l y s a c c h a r i d e s increases. In p a r t i a l l y d e g r a d e d o r g a n i c matter This e n r i c h m e n t o f p o l y s a c c h a r i d e s p o i n t s t o t h e i r h i g h e r resistance t o b i o d e g r a d t i o n . The research program was a i m e d a t e l u c i d a t i n g t h e f a c t o r s c o n t r i b u t i n g t o the resistance towards b i o d ^ j r a d a t i o n o f t w o kinds o f p o l y m e r s : (1) t h e capsular p o l y s a c c h a r i d e o f a F l a v o b a c t e r i u m s p e c i e s , i s o l a t e d from sand columns w h i c h w e r e p e r c o l a t e d w i t h s y n t h e t i c e f f l u e n t (tap w a t e r c o n t a i n i n g c a s e i n ) , a n d (2) c e l l - w a l l polysaccharide of the alga Peridinium westii the w h i c h predominates i n a l g a l blooms o f w a t e r reservoirs such as Lake T i b e r i a s . Part 1: The e c o l o g i c a l c o n d i t i o n s w h i c h e x i s t i n sand columns p e r c o l a t e d w i t h s y n t h e t i c e f f l u e n t , g r e a t l y a f f e c t t h e e q u i l i b r i u m b e t w e e n synthesis a n d d e g r a d a t i o n o f p o l y s a c c h a r i d e s . The o x y g e n t e n s i o n , e s p e c i a l l y , is a f f e c t e d a n d decreased as a r e s u l t o f p e r c o l a t i o n o f the synthetic effluent. A c l e a r e f f e c t o f the r e d u c t i o n i n o x y g e n t e n s i o n is the depression o f the a c t i v i t y o f those b a c t e r i a w h i c h p r i m a r i l y degrade p o l y s a c c h a r i d e s . e s t a b l i s h e d b e t w e e n a F l a v o b a c t e r i u m sp. i s o l a t e d from such sand c o l u m n s , its e x t r a c e l l u l a r p o l y s a c c h a r i d e and c l o g g i n g o f those sand columns. that the capsular polysaccharide of a molecular w e i g h t of about tituents: a n d ribose. D - glucose, In pure c u l t u r e - s t u d i e s , i t was f o u n d t h e F l a v o b a c t e r i u m is a homogeneous p o l y m e r w i t h 200,000. D ־ A h i g h c o r r e l a t i o n was It is s o l u b l e in w a t e r a n d c o n t a i n s s i x m a i n c o n s - mannose, L - rhamnose, g l u c u r o n i c a c i d , xylose Small amounts (less than 1%) o f g l u c o s e a m i n e a n d an u n i d e n t i f i e d deoxysugar w e r e also d e t e c t e d i n a c i d hydrolysates o f the p o l y m e r . the presence o f a r e p e a t i n g u n i t i n the p o l y m e r . i n t h e i n t a c t p o l y m e r i n the o r i g i n a l m o l a r r a t i o s . Partial a c i d hydrolysis i n d i c a t e d This u n i t c o n t a i n e d a l l t h e sugars present The results o f p e r i o d a t e o x i d a t i o n showed t h a t some o f t h e g l u c o s e , mannose and ribose w e r e resistant t o t h e o x i d a t i o n , most l i k e l y d u e t o s u b s t i t u t i o n at t h e 3 position. The f i r s t sugar t o appear i n s o l u t i o n d u r i n g a c i d h y d r o l y s i s is a deoxysugar w i t h a h i g h Rf v a l u e on paper chromatograms rhamnose). (greater t h a n Its e a r l y a p p e a r a n c e i n d i c a t e s t h a t i t has a t e r m i n a l (exposed) p o s i t i o n on t h e polysaccharide chain. This exposed deoxysugar may c o n t r i b u t e t o the s p e c i f i c s e r o l o g i c a l Page Part B: Polysaccharides o f a l g a l e n v e l o p e s C h a p t e r 5: L i t e r a t u r e Review The layers in a l g a l e n v e l o p e s , t h e i r structure a n d composition E n z y m a t i c d e g r a d a t i o n o f p o l y s a c c h a r i d e s from a l g a l 84 envelopes 90 S t r u c t u r a l p o l y s a c c h a r i d e s o f a l g a e , as the cause o f water contamination 91 Chapter 6: Materials and Methods 95 C h a p t e r 7• Experiments a n d Results C h a p t e r 8• The i s o l a t i o n o f P e r i d i n i u m w e s t i i c e l l w a l l The properties a n d c o m p o s i t i o n o f the c e l l w a l l The structure o f the c e l l w a l l p o l y g l u c a n E n z y m a t i c d e g r a d a t i o n o f the p o l y g l u c a n 100 103 109 119 Discussion 120 Summary ( i n H e b r e w ) 127 References 131 Summary (in English) I Contents Page Introduction Part A : 1 Polysaccharide in bacterial envelopes C h a p t e r 1 : L i t e r a t u r e Review Polysaccharides i n b a c t e r i a l c e l l s Structures a n d layers i n b a c t e r i a l e n v e l o p e s Capsular polysaccharides o f bacteria accumulated i n soils 12 Chapter 2: Materia b a n d Methods 14 C h a p t e r 3: Experiments a n d Results a : Studies on the r o l e o f b a c t e r i a l p o l y s a c c h a r i d e s as c l o g g i n g agents i n sand columns p e r c o l a t e d w i t h synthetic effluent b: I s o l a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f the capsular p o l y s a c c h a r i d e o f F l a v o b a c t e r i u m sp. 1. The d e s c r i p t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f the m u c o i d bacteria 2. E c o l o g i c a l a n d n u t r i t i o n a l factors a f f e c t i n g the biosynthesis a n d the b i o d e g r a d a t i o n o f the capsular polysaccharide 2 4 22 30 30 3. I s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n o f the capsular polysaccharide 35 4 . Studies on the h o m o g e n e i t y o f the p o l y s a c c h a r i d e preparation 39 5. The c h e m i c a l c o m p o s i t i o n o f the capsular poly?-, saccharide. 46 6. S t r u c t u r a l studies o f the capsular p o l y s a c c h a r i d e 7. I m m u n o l o g i c a l studies i n d i c a t i n g on the l o c a l i z a t i o n o f the p o l y s a c c h a r i d e i n the c e l l e n v e l o p e c. B i o d e g r a d a t i o n o f p o l y s a c c h a r i d e s C h a p t e r 4 : Discussion Polysaccharides as c l o g g i n g agents o f s o i l s , used for - percolating water Factors a f f e c t i n g t h e . p r o d u c t i o n a n d d e g r a d a t i o n o f the capsular p o l y s a c c h a r i d e The c o m p o s i t i o n and structure o f the capsular p o l y saccharide The b i o d e g r a d a t i o n o f the capsular p o l y s a c c h a r i d e 58 62 64 74 77 78 82 This w o r k was c a r r i e d o u t under the supervision o f Professor N a t h a n Sharon a n d Dr. Ralph M i t c h e l l a t the D e p a r t m e n t o f B i o c h e m i s t r y , The W e i z m a n n I n s t i t u t e of Science, Rehovot. This i n v e s t i g a t i o n was supported in p a r t by grants from the companies M e k o r o t h a n d Tahal W a t e r A u t h o r i t i e s , Israel. POLYSACCHARIDES IN ENVELOPES O F ISOLATED F R O M A Q U A T I C MICROORGANISMS, ENVIRONMENT Thesis S u b m i t t e d for the degree Doctor of Phylosophy by ZVI NEVO S u b m i t t e d t o the S c i e n t i f i c C o u n c i l o f the W e i z m a n n Rehovot, Israel April, Institute of 1969. Science, POLYSACCHARIDES I N ENVELOPES O F ISOLATED F R O M A Q U A T I C MICROORGANISMS, ENVIRONMENT Thesis S u b m i t t e d for the degree Doctor of Phylosophy by ZVI NEVO S u b m i t t e d t o the S c i e n t i f i c C o u n c i l o f the W e i z m a n n Rehovot, Israel April, Institute of Science, 1969.
© Copyright 2024