1. No category

DA
Staphaurex Plus*
Tilsigtet anvendelse
Staphaurex Plus* er en hurtig agglutinationstest til identifikation af
stafylokokker med klumpningsfaktor, protein A og/eller overfladeantigener med samme karakteristika som Staphylococcus aureus.
Oversigt og forklaring af testen
S. aureus har en række egenskaber, der kan bruges til at bekræfte
identifikation. Disse egenskaber omfatter fri koagulase, klumpningsfaktor (bunden koagulase), thermonuklease og protein A1.
Rørkoagulasetesten detekterer fri koagulase og betragtes som en
referencetest for S. aureus1. Denne test tager dog 4 til 24 timer og
plasma kan udvise en lot-til-lot variation2. I løbet af de sidste årtier
er der udviklet agglutinationsassays, der giver en meget hurtigere
identifikation3,4. Disse førstegenerationsassays er baseret på latexpartikler eller røde celler, der er beklædt enten med fibrinogen
alene, til detektion af klumpnings factor, eller fibrinogen og immunoglobulin G (IgG), til detektion af både klumpningsfaktor og
stafylokokprotein A.
Det er for nyligt vist, at disse test nogle gange ikke detekterer visse
stammer af S. aureus specielt en del af de methicillin-/oxacillinresistente stammer (MRSA)5,6,7. Nogle af disse stammer kan udvise
udetekterbare niveauer af klumpningsfaktor og protein A8.
Der er to antigener, somatisk type 189 og kapsulær type 510,11
forbundet med den methicillin-resistente fænotype. Indlemning
af antisera til disse antigener kan forbedre agglutinationsassays følsomhed for MRSA-stammer. Undersøgelser af stammer,
der er negative i hurtige assays, har vist, at antistoffer mod
et enkelt somatisk eller kapsulært antigen ikke er nok til at
detektere alle stammer, der er negative i førstegenerationstest
med partikelagglutination. Staphaurex Plus* bruger latexperler
beklædt med fibrinogen til at detektere de fleste af de kliniske stammer og IgG, der er specifik for omhyggeligt udvalgte
grupper af stammer, som er negative i førstegenerationstests.
Procedurens princip
Staphaurex Plus* testlatex består af gule latexpartikler, der er
beklædt med fibrinogen og kaninimmunoglobulin G (IgG), der er
specifik for S. aureus. Når en dråbe reagens blandes på et kort med
S. aureus organismer, sker der en hurtig agglutination pga. interaktionen mellem (i) fibrinogen og klumpningsfaktor, (ii) Fc-delen
af IgG og protein A eller (iii) specifik IgG og celleoverfladeantigener.
Visse stammer af Staphylococcus spp. specielt S. saprophyticus
kan forårsage en ikke-specifik ophobning af latexpartikler. Derfor
medfølger kontrol latex som en hjælp til at identificere ikkespecifikke reaktioner.
Reagenser
Kittets indhold
Staphaurex Plus*
1.Test-latex (gul hætte)
2. Kontrol-latex (grå hætte)
3.Engangsreaktionskort
(RT64/R30369001)
4.Engangsblandingspinde
5. Brugsanvisning
ZL33/R30950102
150 tests
1 dråbeflaske
1 dråbeflaske
2 pakker
3 bundter
1
ZL34/R30950201
450 tests
3 dråbeflasker
3 dråbeflasker
6 pakker
9 bundter
1
Beskrivelse af reagenser, klargøring til brug og anbefalede opbevaringsforhold
Se også Advarsler og forholdsregler.
Latexopløsningerne leveres klar til brug og skal opbevares i opret
stilling ved 2 to 8°C. Under disse forhold vil de bevare deres
reaktivitet til den dato, der er angivet på flaskens etiket. Må ikke
fryses. Undgå opbevaring ved rumtemperatur (15 til 30°C). Sæt
ikke reagenset i stærkt lys på arbejdsbordet
Test-latex
En bufferet opløsning af gule polystyren latexpartikler beklædt med
humant fibrinogen og kanin-IgG.
Indeholder 0,05% Bronidox ® som
konserveringsmiddel12.
Materialer af human oprindelse er
testet for tilstedeværelsen af hepatitis B overfladeantigen, anti-HCV og
anti-HIV-1/HIV-2 og er fundet negativ.
Kontrol-latex
En bufferet opløsning af gule polystyren latexpartikler beklædt med bovint
serumprotein der ikke reagerer med
S. aureus. Indeholder 0,05% Bronidox® som konserveringsmiddel12.
Reaktionskort og blandingspinde skal opbevares ved rumtemperatur (15 til 30°C). Staphaurex Plus* (ZL33/R30950102 og ZL34/
R30950201) er udviklet med brug af RT64/R30369001 engangsreaktionskort. RT64/R30369001 engangsreaktionskortene må
ikke udskiftes med andre engangskort, når prøverne testes med
Staphaurex Plus*.
Advarsler og forholdsregler.
Kun til in vitro diagnostisk brug.
Er kun beregnet til faglig brug.
Forsigtig: Dette produkt indeholder tør, naturlig gummi.
Se producentens sikkerhedsdatablad og produktmærkningen
vedrørende oplysninger om potentielt farlige komponenter.
Oplysninger om sundhed og sikkerhed
1. FORSIGTIG: Dette kit indeholder komponenter af human oprindelse. Ingen kendt test kan sikre fuldstændigt, at produkter
af human oprindelse ikke overfører infektioner. Derfor skal
alle materialer af human oprindelse betragtes som værende
potentielt smitsomme. Det anbefales, at disse reagenser og
prøver håndteres med anerkendt, god laboratoriepraksis.
2. Genanvendeligt udstyr skal steriliseres efter brug med en passende metode, men den foretrukne metode er autoklavering
i 15 minutter ved 121°C. Engangsudstyr skal autoklaveres
eller brændes. Spild af muligt smitsomt materiale skal fjernes
med det samme med absorberende papir og de forurenede
områder aftørres med et almindeligt bakteriedræbende desinfektionsmiddel. Materialer, der er brugt til at tørre spildet
op med, skal bortskaffes som biologisk farligt affald.
3. Brug kittel, engangshandsker og beskyttelsesbriller ved
håndtering af prøver og udførelse af testen. Vask hænderne
grundigt, når arbejdet er færdigt
4. Når reagenserne bruges i overensstemmelse med god laboratoriepraksis, standarder for arbejdshygiejne og anvisningerne
i denne brugsanvisning, kan de ikke betragtes som værende
sundhedsfarlige.
Analytiske forholdsregler
1. Reagenserne må ikke anvendes efter den anførte udløbsdato.
2.Latexreagenserne skal have rumtemperatur (15–30°C) inden
brug. Latexreagenser, der viser tegn på sammenhobning eller
klumper før brug, kan have været frosne og må ikke bruges.
3. Når der bruges dråbeflasker, er det vigtigt at de holdes lodret, og at dråben dannes ved dysens spids. Hvis dysen bliver
våd, dannes et forkert volumen rundt om enden og ikke ved
spidsen. Hvis dette sker, aftørres dysen, før der fortsættes.
4. Reaktionsområderne på kortene må ikke berøres.
5. Agglutination, der ses efter 30 sekunder, må ikke fortolkes som
et positivt resultat. En for lang vuggebevægelse kan forårsage
falsk positive resultater i nogle koagulase-negative isolater.
6. Mikrobiologisk forurening af reagenserne skal undgås, da
dette vil mindske produktes levetid og kan medføre forkerte
resultater.
Fremgangsmåde
Læs venligst afsnittet Analytiske forholdsregler omhyggeligt, før
testen udføres.
Trin 1
Ryst latexreagenserne grundigt
og undersøg for tegn på
sammenhobning før brug. Se
afsnittet om Kvalitetskontrol
og Visuel kontrol for yderligere
anvisninger.
Trin 2
Anbring en dråbe test-latex
for hver prøve i en cirkel på et
reaktionskort (RT64/R30369001)
og en dråbe kontrol-latex i
en anden cirkel. Sørg for, at
dråbeflaskerne holdes lodret, så de
afgiver en præcis dråbe.
Trin 3
Brug en blandingspind til at fjerne
tiltrækkelig vækst fra en ren kultur
eller velisoleret koloni til at dække
pindens stumpe ende. Som vejledning skal der anvendes en
vækstmængde, der svarer til seks
middelstore kolonier.
Trin 4
Emulger kulturprøven i en
dråbe testlatex ved at gnubbe
med pindens flade ende. Gnub
grundigt, men ikke for voldsomt,
da kortets overflade kan blive
beskadiget.
Visse
stammer,
specielt andre arter end S. aureus
kan være vanskelige at emulgere,
og dette bør bemærkes, da
klumper af kultur, som ikke er
blevet emulgeret, kan få latexen
til at virke “grov” eller trådet,
ved resultataflæsningen. Spred
latexen over ca. halvdelen af
cirklen. Bortskaf blandingspinden
sikkert.
Emulger
prøve
Trin 5
Med en anden pind, emulgeres
en tilsvarende kulturprøve med
kontrol-latex, som angivet i trin 4.
Bortskaf blandingspinden sikkert.
Emulger
prøve
Trin 6
Vip kortet langsomt i indtil 30
sekunder mens der observeres for
agglutination. Kortet skal holdes
i normal læseafstand (25 til 35
cm) fra øjnene. Brug ikke forstørrelsesglas.
Vip
Trin 7
Bortskaf det brugte reaktionskort
sikkert.
Indsamling og opbevaring af prøver
Der henvises til en standard lærebog vedrørende indsamling og
behandling af prøver1. Kulturer kan testes i et hvilket som helst
af følgende medier:
Blodagar
Nutrient Agar
Tryptone soya agar
Tryptone soya agar med 5% blod Columbia blod agar
Columbia CNA agar
Mueller Hinton agar med 5% blod
Baird-Parker agar
Mannitol salt agar†
†Bemærk: prøver der dyrkes på medier, der indeholder antibiotika
eller medier med højt saltindhold som Mannitol salt agar, kan give
agglutination som virker “grove” eller “trevlede”.
DET ANBEFALES AT BENYTTE FRISKE KULTURER, DER ER DYRKET
NATTEN OVER.
Procedure
Leverede materialer
Der leveres materiale nok til 150 (ZL33/R30950102) eller 450
(ZL34/R30950201) tests, se kittets indhold.
1 dråbe
Resultater
Positivt resultat
Agglutination af test-latex sammen med mangel på agglutination
af kontrollatex indikerer tilstedeværelse af enten koagulase, protein A eller antigener, som sædvanligvis findes på¨ S. aureus, i den
kultur der er testet. De fleste positive reaktioner vil ses næsten
med det samme. Falsk positive resultater kan forekomme, hvis
testen aflæses efter mere end 30 sekunder.
Negativt resultat
Mangel på agglutination i begge reagenser betyder, at det er
usandsynligt, at kulturen, der testes, er S. aureus.
Resultater der ikke kan tolkes
Synlig agglutination af kontrollatex angiver en ikke-specifik reaktion, hvad enten den er stærkere eller svagere end test-latex.
Kvalitetskontrol
Kvalitetskontrol skal udføres af hver levering der modtages og af
kit med nye batch numre. Hvert laboratorium bør følge kravene
i den lokale lovgivning.
Enhver afvigelse fra de forventede resultater indikerer, at der kan
være problemer med reagenserne, som skal løses, før de anvendes
igen med kliniske prøver.
Visuel kontrol
Latexopløsningerne skal altid kontrolleres for sammenhobning, når
de dryppes på reaktionskortet. Hvis der er tegn på klumpning, før
testprøven tilføjes, må opløsningen ikke anvendes. Efter længere
tids opbevaring kan der forekomme sammenhobning eller udtørring rundt om toppen af flasken. Hvis dette observeres, skal flasken
rystes kraftigt i et par sekunder, indtil materialet er helt opløst.
Kontrolprocedure
Test- og kontrol-latex reagenserne skal kontrolleres med brug af
referencestammer, som skal være friske bakteriekulturer, der er
dyrket natten over med den metode, der er angivet i Testproceduren. Herunder angives egnede referencestammer.
ARTER
S. aureus (ATCC® 25923TM)
S. epidermidis (ATCC® 12228TM)
FORVENTET RESULTAT
TESTLATEX KONTROLLATEX
+
–
–
–
3. Visse andre koagulase negative stafylokokarter, såsom S.
capitis, besidder plasmaproteinbindende faktorer, der ikke
reagerer i Staphaurex Plus* testen. Få stammer, der identificeres biokemisk som S. saprophyticus, har dog givet svagt
positive reaktioner og her kan det være nødvendigt med
yderligere identifikation af urinisolater.
4. Visse streptokokker og muligvis også andre organismer besidder immunoglobelin eller andre plasmaproteinbindende
faktorer, der kan reagere i latextesten, og der er flere bakterier
som for eksempel E. coli, der er i stand til uspecifict at agglutinere latexpartiklerne. For at eliminere mulig interference
fra disse organismer skal der udføres en Gram-farvning og
en katalasetest, så kun oganismer med stafylokokmorfologi
testes.
5. Alle tvivlsomme resultater skal kontrolleres for renhed og
identificeres med en anden metode.
Forventede resultater
Kraftig agglutination med S. aureus kulturer, ingen agglutination
med stafylokokker der hverken har klumpningsfaktorer, protein
A eller S. aureus’ overfladeantigenegenskaber.
Specifikke præstationskarakteristika
Præstationen af Staphaurex Plus* er evalueret i fire nordamerikanske og to europæiske mikrobiologiske referencelaboratorier
på i alt 646 rutine (formodet stafylokokker) kliniske isolater og
671 gemte kulturer. Kulturerne blev testet parallelt med rørkoagulase proceduren, Gram-farvning og mindst én alternativ hurtig
test til identificering af S. aureus. Resultaterne er sammenfattet
i tabel 1 og 2.
Kliniske isolater
Methicillin-resistent S. aureus (MRSA)
I alt 151 friske S. aureus kulturer viste sig at være resistente
overfor et eller flere antibiotika, da de blev testet i amerikanske
og europæiske referencelaboratorier. Staphaurex Plus* identificerede 150 af disse isolater. Det afvigende isolat var positiv i en
rørkoagulasetest og en alternativ hurtig latex test.
Staphaurex Plus* følsomhed på denne gruppe MRSA-kulturer
antages at være 99,34% (150/151).
Procedurens begrænsninger
Methicillin-følsomme S. aureus (MSSA)
335 af 337 bekræftede S. aureus kulturer fra de mikrobiologiske
referencelaboratorier blev identificeret korrekt med Staphaurex
Plus*. De afvigende isolater inkluderede ét, der også gav et negativt resultat med en alternativ latex test.
Staphaurex Plus* følsomhed på denne gruppe MSSA-kulturer
antages at være 99,41% (335/337).
1. Prøver der dyrkes på medier, der indeholder antibiotika eller
medier med højt saltindhold som Mannitol salt agar, kan give
“grov” eller “trevlet” agglutination.
2. Visse stafylokokarter ud over S. aureus især S. hyicus, S. intermedius, S. lugdunensis og S. schleiferi kan give positive
resultater i koagulasetests og kan også reagere i hurtige
latexprocedurer. Om nødvendigt kan disse arter identificeres
med biokemiske testprocedurer. S. hyicus og S. intermedius
findes sjældent i kliniske laboratorier.
Andre stafylokokker
I alt 157 friske ikke-S. aureus stafylokok isolater blev også testet.
Staphaurex Plus* gav et negativt resultat med 150 af disse isolater,
der omfattede S. saprophyticus, S. epidermidis og S. haemolyticus. De resterende syv kulturer, der gav et positivt resultat med
Staphaurex Plus*, inkluderede tre, der også var positive med en
alternativ hurtig latex test.
Staphaurex Plus* specificiteten på denne gruppe ikke-S. aureus
stafylokokkulturer antages at være 95,54% (150/157).
Fortolkning af resultater
En positiv reaktion indikerer tilstedeværelsen af enten klumpningsfaktorer, protein A eller celleoverfladeantigener, eller alle 3, i den
kultur der testes. Negative resultater indikerer fravær af disse.
Samlet præstation af Staphaurex Plus* sammenlignet
med rørkoagulase på S. aureus isolater.
Tabel 2
Reaktiviteten af Staphaurex Plus*
på gemte stafylokokkulturera
Relativ sensitivitet
99,4%
Relativ specificitet
95,5%
Samlet overensstemmelse
98,4%
BEMÆRK: Staphaurex Plus* gav et ikke tolkeligt resultat i 0,15%
(1/646) af de friske kulturer, der er udelukket fra ovenstående
oversigt.
Staphaurex Plus*
resultater
Opbevarede kulturer
Methicillin-resistent S. aureus (MRSA)
I alt 282 gemte S. aureus kulturer viste sig at være resistente overfor et eller flere antibiotiske midler, da de blev testet. Staphaurex
Plus* identificerede 281 af disse isolater. Den afvigende kultur
var positiv i en rørkoagulase test og negativ i en en alternativ
hurtig latex test.
Staphaurex Plus* følsomhed på denne gruppe MRSA-kulturer
antages at være 99,65% (281/282).
Methicillin-følsomme S. aureus (MSSA)
242 af 248 bekræftede S. aureus kulturer fra de mikrobiologiske
referencelaboratorier blev identificeret korrekt med Staphaurex
Plus*. De afvigende kulturer inkluderede fire, der også gav et
negativt resultat med en alternativ latex test.
Staphaurex Plus* følsomhed på denne gruppe MSSA-kulturer
antages at være 97,6% (242/248).
Andre stafylokokker
I alt 139 gemte ikke-S. aureus stafylokok kulturer blev også testet.
Staphaurex Plus* gav et negativt resultat med 132 af disse isolater,
der omfattede S. saprophyticus, S. epidermidis og S. haemolyticus. De resterende syv kulturer, der gav et positivt resultat med
Staphaurex Plus*, inkluderede to, der også var positive med en
anden hurtig latex test.
Staphaurex Plus* specificitet på denne gruppe ikke-S. aureus
stafylokok kulturer antages at være 95,0% (132/139).
Samlet præstation af Staphaurex Plus* sammenlignet
med rørkoagulase på gemte S. aureus kulturer.
Relativ sensitivitet
98,7%
Relativ specificitet
95,0%
Samlet overensstemmelse
97,9%
BEMÆRK: Staphaurex Plus* gav et ikke tolkeligt resultat i 0,3%
(2/671) af de gemte kulturer, der er udelukket fra ovenstående
oversigt.
Tabel 1
Reaktiviteten af Staphaurex Plus*
på formodede kliniske stafylokok-isolatera
Positiv
Negativ
I alt
Methicillin-resistent S. aureus (MRSA)
150
1
151
Methicillin-sensitiv S. aureus (MSSA)
335
2
337
7
150
157
Staphaurex Plus* gav et ikke tolkeligt resultat med 1 prøve.
Denne prøve er ikke medtaget i tabellen.
b
inkluderer S. saprophyticus, S. epidermidis og S. haemolyticus.
a
Negativ
I alt
Methicillin-resistent S. aureus (MRSA)
281
1
282
Methicillinsensitiv S. aureus (MSSA)
242
6
248
7
132
139
Ikke-S. aureus kulturerb
Staphaurex Plus* gav et ikke-fortolkeligt resultat på 2 prøver.
Disse prøver er ikke medtaget i tabellen.
b
inkluderer S. saprophyticus, S. epidermidis og S. haemolyticus.
a
Litteraturliste
Kloos, W.E. and Lambe, D.W. (1991). Staphylococcus. Manual of Clinical
Microbiology, 5th Ed., edited by Balows, A., Hausler, W.J., Herrmann,
K.L., Isenberg, H.D. and Shadomy, H.J. American Society for Microbiology,
Washington, D.C. side 222-237.
2
Selepak, S.T. and Witebsky F.G. 1985. Inoculum size and lot-to-lot variation as significant variables in the tube coagulase test for Staphylococcus
aureus. J. Clin. Microbiol., 22, 835-837.
3
Essers, L. and Radebold, K. (1980). Rapid and reliable identification
of Staphylococcus aureus by a Latex Agglutination Test. J. Clin. Microbiol.,
12, 641-643.
4
Orsi, A., Bartoloni, A., et al (1989). Evaluation of six different agglutination
methods for rapid identification of Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin.
Microbiol. Infect. Dis., 8, 655-656.
5
Piper, J., Hadfield, T., et al (1988). Efficacies of rapid agglutination tests
for identification of Methicillin-Resistant Staphylococcal strains as Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 26, 1907-1909.
6
Ruane, P., Morgan, M.A., et al (1986). Failure of rapid agglutination
methods to detect Oxacillin-Resistant Staphylococcus aureus. J. Clin.
Microbiol., 24, 490-492.
7
Wanger, A.R., Morris, S.L., et al (1992). Latex agglutination-negative
Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus recovered from Neonates:
epidemiologic features and comparison of typing methods J. Clin. Microbiol., 30, 2583-2588.
8
Roberts, J.I.S. and Gaston, M.A. (1987). Protein A and Coagulase expression in epidemic and non-epidemic Staphylococcus aureus. J. Clin. Pathol.,
40, 837‑840.
9
Chabbert, Y.A. and Pillet, J. (1967). Correlation between “Methicillin
Resistance” and serotype in Staphylococcus. Nature, 213, 1137.
10
Nelles, M.J., Niswander, C.A., et al (1985). Reactivity of type-specific
monoclonal antibodies with Staphylococcus aureus clinical isolates and
purified capsular polysacchande. Infect. Immun., 49, 14-18.
11
Fournier, J.M., Bouvet, A., et al (1987). Predominance of capsular polysacchande Type 5 among oxacillin-resistant Staphylococcus aureus. J. Clin.
Microbiol., 25, 1932-1933.
12
Henkel KGaA. Producentoplysninger og sikkerhedsdatablad for
1
Bronidox® L.
Staphaurex Plus*
resultater
Non-S. aureus isolaterb
Positiv
Emballage
ZL33/R30950102.............................
ZL34/R30950201.............................
150 tests
450 tests
Tekst til symboler
Katalognummer
In vitro diagnostisk medicinsk udstyr
Se brugsanvisningen
Temperaturbegrænsninger
(Opbevaringstemperatur)
Batchnummer (partinummer)
Anvendes senest (udløbsdato)
Forsigtig, læs de medfølgende dokumenter
producent
Bronidox® er et registreret varenavn ejet af Cognis UK Ltd.
ATCC® er et registreret varemærke tilhørende American Type Culture
Collection
*varemærke.
IFU X7826 Revideret marts 2012
Remel Europe Ltd
Clipper Boulevard West, Crossways
Dartford, Kent, DA2 6PT
Storbrittannien
For teknisk assistance kontakt den lokale distributør