1. No category

DA
Reagenser
Kittets indhold
Staphaurex*
Staphaurex*
TILSIGTET ANVENDELSE
Staphaurex* er en hurtig objektglas-agglutinationsprocedure til
differentiering af stafylokokker, der besidder koagulase og/eller
protein A, især Staphylococcus aureus, fra stafylokokker, der ikke
besidder nogen af disse faktorer.
Opsummering og forklaring af testen
Plasma-koagulasetests anvendes ofte til hjælp ved
identificeringen af Staphylococcus aureus. To distinktive
faktorer forbindes uafhængigt af hinanden hermed.
Koagulasetesten med objektglas bestemmer celle‑associeret
sammenklumpningsfaktor, til tider også kaldet
bundet koagulase, der reagerer med fibrinogen, hvilket forårsager
sammenhobning af organismerne 11. Rør-koagulasetesten
bestemmer ekstracellulær stafylokok-koagulase, til tider kaldet
fri koagulase, der aktiverer protrombin, hvorved der opstår
koageldannelse i plasmaen. Omtrent 97% af humane S. aureusislolater besidder begge faktorer. Stammer, der mangler den ene
af disse faktorer, findes stort set i lige mængder2. Falske positive
og falske negative reaktioner kan forekomme ved begge tests2.
Over 95% af humane S. aureus-stammer producerer protein A,
uafhængigt af sammenklumpningsfaktor eller stafylokok-koagulase,
og dette kan være celle‑associeret og/eller ekstracellulært4.
Protein A har en særlig lighed med Fc-delen af immunoglobulin
G (IgG).
1. Test-latex
3 pipetteflasker
2.Engangsreaktionskort
1 pakke
(RT64/R30369001)
3.Engangs rørepinde
2 bundter
4.Brugsanvisning
1
ZL31/R30859902
400 tests
10 pipetteflasker
4 pakker
5 bundter
1
Beskrivelse, klargøring til brug og anbefalede
opbevaringsforhold
Se også Advarsler og forholdsregler.
Test-latex leveres brugsklart og bør opbevares i en opretstående
stilling ved 2 til 8°C, hvor den mindst vil bibeholde sin aktivitet,
indtil den dato, der er vist på flaskens etiket. Må ikke fryses. Undgå
opbevaring ved stuetemperatur (15 til 30°C). Anbring ikke reagenset
i stærkt lys på bordet.
Reaktion kort og blanding pinde skal opbevares ved stuetemperatur.(15 to 30°C).
PROCEDURENS PRINCIP
Det er blevet påvist, at S. aureus-kulturer, der besidder
sammenklumpningsfaktor og protein A, kan identificeres ved brug
af latexpartikler belagt med human plasma, som agglutinerer i en
hurtig objektglasprocedure1. Staphaurex*-reagenset består af
polystyren latexpartikler, der er blevet belagt med fibrinogen
og IgG. Når disse på et objektglas blandes med en opslæmning
af S. aureus-organismer, sker der en reaktion mellem
sammenklumpningsfaktoren og fibrinogenet, og/eller mellem
protein A og IgG, hvilket forårsager en kraftig agglutination af
latexpartiklerne.
ZL30/R30859901
120 tests
Test-latex
3 flasker (ZL30/R30859901)
eller 10 flasker (ZL31/
R30859902) indeholdende en
bufferopslæmning af polystyren
latex, hvor hver flaske indeholder
mindst 1,7 ml (tilstrækkeligt
til 40 tests). Latexpartiklerne
er belagt med humant fibrinogen og
IgG. Indeholder 0,025% Bronidox®konserveringsmiddel.
Materialer med human oprindelse
er blevet testet for tilstedeværelsen
af hepatitis B overfladeantigen,
anti-HCV og anti-HIV-1/
HIV-2 og er her fundet negative.
Advarsler og forholdsregler
Kun til in vitro diagnostisk brug.
Kun til professionel brug.
Se iøvrigt fabrikantens sikkerhedsdatablad for produktmærkning
og information om potentielt farlige komponenter.
Sundheds- og sikkerhedsinformation
1. FORSIGTIG: Dette kit indeholder bestanddele af human
oprindelse. Der findes ingen testmetode, der kan give 100%
sikkerhed for, at produkter, der har en menneskelig kilde,
ikke vil overføre smitte. Derfor skal alt materiale af human
oprindelse betragtes som potentielt smittebærende.
I overensstemmelse med principperne for god
laboratoriepraksis anbefales det på det kraftigste, at prøver og
reagenser behandles som værende potentielt smittebærende,
og at de håndteres med alle nødvendige forholdsregler.
2. Genanvendeligt udstyr bør efter brug steriliseres ved brug af
en passende fremgangsmåde, hvor den foretrukne metode
er autoklavering i 15 minutter ved 121°C. Materialer til
engangsbrug skal autoklaveres eller destrueres. Spild af
potentielt smittebærende materiale bør straks fjernes med
absorberende papir, og de kontaminerede områder skal
vaskes af med et almindeligt bakteriedræbende middel. De
materialer, inklusive handsker, der anvendes til fjernelse af
spild, skal bortskaffes som miljøfarligt materiale.
3. Betjen ikke pipetten med munden. Bær laboratoriekittel,
engangshandsker og beskyttelsesbriller, mens prøverne
håndteres, og testen foretages. Vask hænderne grundigt efter
endt procedure.
4. De leverede reagenser anvendes i overensstemmelse med
principperne for god laboratoriepraksis. Se iøvrigt fabrikantens
sikkerhedsdatablad for produktmærkning og information om
potentielt farlige komponenter.
Analytiske Forholdsregler
1. Anvend ikke reagenserne efter den anførte holdbarhedsdato.
2.Latex-reagenser bør have stuetemperatur (15 til 30°C) før
brug. Latex-reagenser, der viser tegn på sammenhobning eller
‘klumper’ før brug, kan have været udsat for frost og bør ikke
anvendes.
3. Når der anvendes pipetteflasker, er det vigtigt, at disse holdes
lodret, og at dråben dannes ved spidsen af tuden. Hvis tuden
bliver våd, vil der dannes en forkert mængde omkring enden
og ikke ved spidsen. Hvis dette sker, skal tuden tørres af, inden
der fortsættes.
4. Rør ikke reaktionsområderne på kortene.
5. Opfat ikke agglutination, der forekommer efter 20 sekunder,
som et positivt resultat. En for lang vuggebevægelse kan
resultere i falske positive reaktioner med koagulase-negative
isolater.
6. Mikrobiologisk forurening af reagenser skal undgås, da dette
kan forkorte produktets levetid og give forkerte resultater.
Prøveopsamling og klargøring
Konsulter en standard lærebog angående detaljerede oplysninger
om prøveopsamling og -behandling3. Kulturer kan testes direkte fra
petriskålen med den primære kultur, hvis der er tilstrækkelig vækst.
Som alternativ bør der laves en subkultur på blod- eller nutrient agar
til efterfølgende tests. De bedste resultater
opnås ved berigede medier såsom blodagar
eller nutrient agar; Columbia CNA-agar og Baird‑
Parker-medium giver også tilfredsstillende resultater. DET
ANBEFALES AT BRUGE FRISKE KULTURER, DER ER DYRKET NATTEN
OVER. Dyrkning fra DNase-agar kan testes i 15 minutter efter, at
der er hældt saltsyre i petriskålen. Organismer, der vokser på
selektive medier med højt saltindhold, såsom mannitol‑saltagar,
har tendens til at blive ‘grove’ eller ‘trævlede’ i latexen, og det kan
være sværere at fortolke de reaktioner, der er opnået i testen,
når disse medier anvendes. Det anbefales, at kulturen gramfarves
i forbindelse med latextesten for at fastslå organismernes
stafylokokmorfologi.
Fremgangsmåde
Materialer der medfølger
Der medfølger tilstrækkelige mængder materialer til 120 tests
(ZL30/R30859901) og 400 tests (ZL31/R30859902), se afsnittet
Kittets indhold.
Testprocedure
Læs venligst afsnittet Analytiske forholdsregler grundigt igennem,
før testen udføres.
Trin 1Hver flaske med latexreagens indeholder mindst 1,7 ml
(tilstrækkeligt til 40 tests). Ryst latexen for at få en jævn
opslæmning, og dryp en dråbe på en cirkel på reaktionskortet
til hver kultur, der skal testes.
Trin 2
Tag en rørepind og saml noget af kulturen op ved at røre ved
den med pindens flade ende. Som retningslinje
skal der med den flade ende tages en
mængde af væksten, der omtrent svarer
til seks kolonier af gennemsnitsstørrelse. Før der tages prøver
fra kolonier fra DNase-agar, der er blevet overhældt med
saltsyre, tippes petriskålen, så væksten ikke er dækket
af saltsyre.
Trin 3Emulger prøven fra kulturen i en dråbe latex ved
at gnubbe med den flade ende af pinden. Gnub
grundigt, men ikke for hårdt, da kortets
overflade kan blive beskadiget. Nogle stammer,
især andre arter end S. aureus kan være svære at
emulgere, og dette bør bemærkes, da klumper af
kultur, som ikke er blevet emulgeret, kan få latexen til
at se ’grov’ eller ’trævlet’ ud ved resultataflæsningen.
Spred latexen ud over ca. halvdelen af
cirklen. Bortskaf rørepinden på sikker vis.
Trin 4
Roter forsigtigt kortet i op til 20 sekunder, og undersøg for
agglutination, mens kortet holdes i en normal læseafstand
(25 til 35 cm) fra øjnene. Brug ikke forstørrelsesglas. De
mønstre, der kommer, fremstår tydelige og kan genkendes
under normale lysforhold.
Trin 5 Når kortet skal smides ud, lægges det i desinficerende
middel – må ikke genbruges.
Resultater
Aflæsning af resultater
Positivt resultat
Et positivt resultat indikeres ved udviklingen af et agglutineret
mønster, der tydeligt viser sammenklumpning af latexpartiklerne,
mens den mælkefarvede baggrund bliver klar (Figur 1). De fleste
positive reaktioner forekommer nærmest øjeblikkeligt.
Negativt resultat
Et negativt resultat indikeres ved, at latexen ikke agglutinerer,
og det mælkefarvede udseende mere eller mindre forbliver
uforandret under testforløbet (Figur 2). Det bør desuden
bemærkes, at der muligvis kan ses spor af kornethed i negative
mønstre på grund af begge reagensers partikulære natur.
BEMÆRK: Øget kornethed kan ses, hvis latexopslæmningen roteres
i mere end 20 sekunder.
Grove eller trævlede reaktioner kan vise sig som hvide pletter eller
trævlede sammenhobninger (Figur 3) og bør fortolkes som følger:
1. Når disse er ledsaget af en mælkefarvet baggrund, bør de
noteres som negative.
2. Når disse er ledsaget af en klar baggrund, er der stor
sandsynlighed for, at de er positive.
Der bør udvises omhyggelighed i fortolkningen af sådanne
resultater.
Figur 1
Figur 2
Figur 3
Procedurens begrænsninger
1. Prøver, der er dyrket i medier med højt suppleret saltindhold,
såsom mannitol‑saltagar, har tendens til ikke at emulgere godt,
hvilket giver ‘grove’ eller ‘trævlede’ reaktioner (se afsnittet
Aflæsning af resultater), og kan have et relativt svagt indhold
af protein A og koagulase.
2. Nogle stafylokokarter ud over S. aureus, især S. hyicus og
S. intermedius, kan give positive resultater i konventionelle
koagulasetests9 og kan også reagere ved latexproceduren.
Om nødvendigt kan disse arter identificeres ved hjælp af
biokemiske testprocedurer, men de anses ikke for at være
af stor klinisk betydning for mennesker.
3. Nogle andre koagulase negative stafylokokarter, såsom S. capitis,
besidder plasmaproteinbindende faktorer8, men disse reagerer
ikke i Staphaurex*-testen. Dog har nogle få stammer, der
biokemisk er blevet identificeret som S. saprophyticus givet
svage positive reaktioner, og her kan det være nødvendigt
med yderligere identificering af urinvejsisolater.
4. N o g l e s t r e p t o k o k k e r o g m u l i g v i s o g s å a n d r e
organismer besidder immunoglobulin eller
andre plasmaproteinbindende faktorer, der
kan reagere ved en latextest5,6,7,10. Der findes også flere arter,
såsom Escherichia coli og Candida albicans, der er i stand til
uspecifikt at agglutinere latexpartikler. For at undgå, at disse
organismer påvirker testen, bør der foretages en gramfarvning,
således at det kun er organismer med stafylokokmorfologi, der
testes.
Forventede resultater
Kvalitetskontrol
Kvalitetskontrolprøver bør udføres, hver gang der modtages en
forsendelse og nye partinumre for sæt. Hvert laboratorium bør
følge de officielle og lokale retningslinjer.
Under normale omstændigheder vil det vise sig ved dagtil-dag testning, om reagenserne har fungeret korrekt.
Latexsuspensionen bør altid efterses for kornethed, når den
dryppes ned på testkortet. Nogle former for kornethed kan
fjernes ved at ryste suspensionen kraftigt, men hvis der er
tegn på auto‑agglutination, bør suspensionen ikke anvendes.
Som supplement bør kendte stamkulturer af S. aureus og
S. epidermidis anvendes periodisk som kontroller.
Fortolkning af resultater
En positiv reaktion indikerer tilstedeværelsen af enten koagulase
eller protein A, eller begge dele, i den kultur, der er blevet testet.
Negative resultater indikerer fravær af disse.
Kraftig agglutination med S. aureus-kulturer, ingen
agglutination med stafylokokker, der hverken besidder
sammenklumpningsfaktor eller protein A.
Særlige ydelseskarakteristika
Staphaurex* er blevet evalueret i fem centre på i alt 940 rutinemæssige
kliniske
isolater
(af
formodede
stafylokokker). Kulturerne blev også testet
af to eller flere af følgende etablerede procedurer:
objektglaskoagulase, rørkoagulase, DNase, biokemiske tests
(Tabel 1).
a) Sensitivitet
525 af de testede, kliniske kulturer gav en positiv reaktion i
mindst en af de etablerede S. aureus-identifikationstests, og
516 af disse prøver var positive i to eller flere tests (Tabel 1).
Staphaurex* identificerede 522 af de 525 formodede S. aureuskulturer korrekt. To af de tre kulturer, der gav et negativt
resultat, indeholdt hverken sammenklumpningsfaktor eller
protein A. De producerede heller ikke fri koagulase og blev
efterfølgende identificeret som andre stafylokokarter end
S. aureus. Den tredje prøve var ikke tilgængelig for yderligere
identifikation. Sensitiviteten af Staphaurex* blev beregnet til
at være 99,8% (522/523).
b) Specificitet
Staphaurex* viste et negativt resultat i 413 af de 415 kulturer,
der ikke reagerede ved en etableret S. aureus-identifikationstest
(en specificitet på 99,5%, Tabel 1). De to kulturer, der gav et
positivt resultat med Staphaurex*, blev begge identificeret
som S. saprophyticus.
c) Forudsigelige værdier
De forudsigelige værdier for positive og negative Staphaurex*tests lå på henholdsvis 99,6% (522/524) og 99,8% (415/416).
Tabel 1.
Identifikation af S. aureus: Korrelationen mellem
etablerede laboratorietestsa og Staphaurex*
på 940 rutinemæssige kliniske kulturer
Staphaurex*
+
–
I alt
S. aureus – positivt resultat i
515
1b516
to eller flere etablerede testsa
S. aureus – positivt resultat i
7
2c9
én etableret testa
Ikke S. aureus2d413415
I alt
524 416 940
a
Objektglaskoagulase, rørkoagulase, DN­ase, biokemiske tests.
b
Kulturen var ikke tilgængelig til yderligere identifikation.
c
Disse kulturer indeholdt ikke sammenklumpningsfaktor eller
protein A og producerede ikke fri koagulase og blev af et
uafhængigt referencelaboratorium identificeret som værende
andre stafylokokker end S. aureus.
d
Begge kulturer blev identificeret som S. saprophyticus.
Litteraturhenvisninger
Essers, L. og Radebold, K. (1980). Rapid and reliable identification of Staphylococcus
aureus by a latex agglutination test. J. clin. Microbiol., 12, 641.
Jeljaszewicz, J., Switalski, L.M., et al (1983). Staphylococci and Staphylococcal
infections, Vol. 2. Redigeret af Easmon, C.S.F. og Adlam, C. Academic Press, London,
s. 525‑557.
3
Kloos, W.E. og Jorgensen, J.H. (1985). Manual of Clinical Microbiology, 4th Ed.,
redigeret af Lenette, E.H., Balows, A., Hausler, W.J. og Shadomy, H.J. American Society
for Microbiology, Washington, D.C. s. 143‑153.
4
Langone, J.J. (1982). Protein A of Staphylococcus aureus and Related Immunoglobulin
Receptors Produced by Streptococci and Pneumonococci. Advances in Immunology,
32, 157.
5
Myhre, E.B. og Kronvall, G. (1980). Demonstration of specific Binding Sites for Human
Serum Albumin in Group C and G Streptococci. Inf. Immun., 27, 6.
6
Myhre, E.B. og Kronvall, G. (1980). Immunochemical Aspects of Fc‑Mediated Binding
of Human IgG Subclasses to Group A, C and G Streptococci. Molecular Immunol., 17,
1563.
7
Myhre, E.B. og Kuusela, P. (1983). Binding of Human Fibronectin to Group
A, C and G Streptococci. Inf. Immun., 40, 29.
8
Osland, A. (1982). Properties of the Serum Factor involved in the Precipitation Reaction
with Staphylococcus capitis. Acta path. microbiol. immunol. scand. Sekt. B., 90, 197.
9
Phillips. W.E. og Kloos, W.E. (1981). Identification of Coagulase‑Positive Staphylococcus
intermedius and Staphylococcus hyicus subsp. hyicus Isolates from Veterinary Clinical
Specimens. J. clin. Microbiol., 14, 671.
10
Runehagen, A., Schönbeck C., et al (1981). Binding of Fibrinogen Degradation products
to S. aureus and to ß‑Hemolytic Streptococci Group A, C and G. Acta path. microbiol.
scand. Sekt. B., 89, 49.
11
Switalski, L.M. (1976). Isolation and Purification of Staphylococcal Clumping Factor,
Zbl. Bakt. Parasit. Infekt. Hyg. I. Abt., Supplement 5, 413.
1
2
Pakning
ZL30/R30859901..........................................120 tests
ZL31/R30859902......................................... 400 tests
Symbolforklaring
Katalognummer
In vitro diagnostik
Se brugsanvisningen
Temperaturbegrænsning
(opbevaringstemperatur)
Batchkode (lot nummer)
Anvendes inden (holdbarhedsdato)
Forsigtig, se medfølgende dokumenter
Producent
Bronidox® er det registrerede varenavn, der tilhører Cognis UK Ltd.
*registreret varemærke.
IFU X7819 Revideret November 2011
Remel Europe Ltd
Clipper Boulevard West, Crossways
Dartford, Kent, DA2 6PT
Storbritannien
For teknisk assistance henvises der til Deres lokale distributør