Ulostepatogeenien diagnostiikka
Ulostepatogeenien diagnostiikka Alueellinen koulutus 28.10.2015 Kaisu Rantakokko-Jalava Tyks Mikrobiologia ja genetiikka Bakteeriripulit, vanhaa ja uutta diagnostiikkaa Tärkeimmät aiheuttajat Perinteinen tutkimus Uutta diagnostiikkaa ”Perinteinen” bakteeriripuli (turistiripuli) Salmonellat Shigellat Yersiniat Kampylobakteerit F-BaktVi 1 Viljely + PCR (F-BaktViP) ”Uudemmat” tai harvinaisemmat aiheuttajat Patogeeniset E. colit : EHEC* (EPEC, EAEC, EIEC) Vibrio* Plesiomonas/Aeromonas(*) Erikoisviljelyt* • Kaupalliset menetelmät kattavat vaihdellen Ruokamyrkytys Ym. Lisäksi toksiineja tuottavat Bacillus cereus Cl. perfringens S. aureus F-BaktVi3 - F-BaktVi 2 / F-Clditoksiininosoitus F-CldiVi Seulonta: (GDH+) PCR Antibioottiripuli, Clostridium difficilen Sairaalasyntyinen toksiinit ripuli F-BaktViP • Ulosteen bakteeriviljely ja PCR –yhdistelmä • HUSLABissa 2012- – Salmonellat, shigellat, patog. yersiniat, kampylobakteerit, Vibrio cholerae ja ripuli-E. colit • Turussa 2014- – Kaupallinen testi (Mobidiag Oy), samat patogeenit – Testi mahdollisesti vaihtuu • Salmonella spp., Shigella spp., Campylobacter spp., shiga-toksiinit • ++ Vibrio spp., ETEC, yersinia, Aeromonas • PCR on herkempi kuin viljely, poikkeuksena mahd. salmonellat Antibioottiripuli • Clostridium difficilen toksiinien aiheuttama ripuli (< pseudomembranoottinen koliitti) • Usein 2 viikon aikana mikrobilääkehoito • Tarttuu itiöiden avulla kosketustartuntana • C. difficileä esiintyy vastasyntyneillä, mutta ei heillä aiheuta tautia (koska toksiinin reseptorit puuttuvat) • ”hypervirulentit” ribotyypit 027 ja 078 Antibioottiripulin diagnostiikka F-CldiVi • Korvannut FBaktVi2:n • Kasvavan kannan toksiinintuotto varmistetaan PCR:llä F-CldiTx • Suora toksiinin osoitus ulosteesta epäherkkä (<70% verrattuna viljelyyn) • Korvattu – GDH + varmistus toksiinintuotosta – PCR l. toksiini-geenin osoitus suoraan ulosteesta GDH Cdiff seulontatestinä • GDH on entsyymi, jota esiintyy C. difficilen soluseinässä – sekä toksiinia tuottavissa että ei-tuottavissa kannoissa • Koska ripulin aiheuttaa nimenomaan toksiini, täytyy lisäksi varmistaa jotenkin se, että bakteeri pystyy tuottamaan toksiinia – Paras tapa olisi lisätä ulosteen supernatantti soluviljelmään ja katsoa onko sillä sytotoksista vaikutusta, mutta se on rutiinikäyttöön liian hidas – Nopein tapa on katsoa löytyykö ulosteesta C. difficile -bakteerin toksiinigeeniä – 90% GDH-positiivisissa näytteissä löytyy myös toksiinigeeni C. difficile -seulonta GDH Vidaksella - + Seulonta negat PCR Seulonta negat + Seulonta posit Vastaus Tulkinta Positiivinen Näytteessä on C. difficile, jonka kyky tuottaa toksiinia on varmistettu PCR:llä Negatiivinen Näytteessä ei todeta C. difficilen antigeenia tai Näytteessä on C. difficilen antigeeni, mutta kanta ei tuota toksiinia 70 2012 I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII 2013 I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII 2014 I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII 2015 I II III IV V VI VII VIII 80 VSSHP: C. difficile –löydökset/kk Toksiinitesti vaihdettu seulontaan 60 50 40 30 20 10 0 C. difficile diagnostiikasta • Monissa paikoissa C. difficile tutkitaan nykyään pelkästään PCR-menetelmällä • Edut: nopea ja herkkä diagnostiikka • Mutta: ylidiagnostiikan riski – C. difficile on melko yleinen myös oireettomilla ja varsinkin laitospotilailla, joten herkällä menetelmällä voidaan saada liikaa positiivisia, varsinkin jos testiä tilataan/tehdään, vaikka uloste ei olisi näyteastian muotoon asettuvaa Virusripulit • Rotavirus – rokotusten myötä lähes hävinnyt • Norovirus – vuosittaiset epidemiat tammi-toukokuussa – Ruoka- ja vesivälitteiset epidemiat • Sapovirukset – Erit. lasten ripuliviruksia • Astrovirukset • Adenovirukset 40 ja 41 Ripulivirusten diagnostiikkaa • F-NoroAg – Herkkyys melko huono, joten esim. osastoepidemiaepäilyissä otettava useita näytteitä, jotta saadaan edes joku kiinni – Negatiivinen tulos ei sulje pois! • F-NoroNhO – Tulossa Tyksin valikoimaan, myös päivystyksenä • Haussa laajemmin ripuliviruksia tunnistava PCR-paneeli Suolistoparasiittien aiheuttamat ripulit • Pidempi itämisaika ja pitkäaikaisempaa oireilua kuin virus- ja bakteeriripuleissa • Erityisesti matkan jälkeen • Giardia: ripuli, ylävatsakipu, pahoinvointi, ilmavaivat, vatsan turvotus • Entamoeba histolytica: (veri)ripuli • Cryptosporidium: vesiripuli – Ei voida todeta F-Para-O –tutkimuksessa, vaatii erikoisvärjäyksen (F-CrypVr) • voidaan todeta myös Cyclospora ja Isospora belli Suolistoparasiitteja mikroskoopissa hiiva Giardia lamblia Cryptosporidium, Ziehl-Nielsen ja värjäämätön Entamoeba histolytica/disparin kysta Cyclospora cayetanensis, ZiehlNielsen värjäys Dientamoeba fragilis, trikromiväärjäys Duodecim 2012 37 tapausta Ulosteen parasiitti-PCR • Syksyllä otetaan käyttöön PCR, joka tunnistaa tärkeimmät ulosteparasiitit – Giardia lamblia – Cryptosporidium – Entamoeba histolytica • Näyte voi olla tuoreulostetta (tai formaliinifiksattu) • Ei totea madonmunia Ulosteen parasiittilöydökset 5/14-5/15 1A. Patogeeniset alkueläimet Löydöksiä Tutkimusnimike Giardia lamblia 38 F-Para-O Entamoeba histolytica/dispar* 23 Jatkoon tarv. F-EhistAg Cryptosporidium# 2 F-CrypVr Cyclospora (cayetanensis)# - F-CrypVr Isospora belli# - F-CrypVr Dientamoeba fragilis - F-AmebVr yht. 63 1B. Apatogeenit alkueläimet Blastocystis hominii 572 F-Para-O sivulöydös Entamoeba dispar/ coli /haatmannii 60 - - Iodamoeba bütsclii 2 -”- Chilomastix mesnili 6 -”- yht. 700 *yl. 90% on apatogeeni E. dispar #immuunipuutteisilla rajua/pitkittynyttä/toistuvaa ripulia Ulosteen parasiittilöydökset 5/14-5/15 2. Madot tai madonmunat Löydöksiä Tutkimusnimike Sukkulamadot F-Enve-O *Kihomadot (erillinen tutkimus) *Koukkumadot (Ancylostoma) 4 F-Para-O *Suolinkainen (Ascaris lumbricoides) 4 -”- *Trichuris trichiura 14 -”- *Strongyloides 4 -”- **Muut sukkulamadot 1 Heisimadot (Diphyllobotrum, Taenia, Hymenolepis) Imumadot 3 -”- *Echinococcus granulosus 1 -”- **Muut imumadot (Schistosoma, Clonorchis) 2 -”- yht. 33 Yhteenveto • Ulostediagnostiikka on siirtymässä perinteisistä viljely-, antigeeninosoitus ja mikroskopia-menetelmistä PCR-paneeleihin – Rinnakkainen käy ö PCR-seulonta, viljely valikoiden • Parhaimmillaan epidemiatilanteissa, jolloin voidaan nopeasti kattaa iso joukko patogeeneja • PCR-tutkimus parantaa herkkyyttä – Shigella, EHEC – Cryptosporidium • Ripulitaudit rajoittuvat usein itsekseen, näyte kannattaa ottaa jos vaikuttaa hoitoon • Erityisryhmät – Tietyt elintarvike- ja terveydenhuollon työntekijät • F-BaktViP -tutkimusta voidaan käyttää (juridiikka vaatii viljelyosoitusta) – Immuunipuutteiset
© Copyright 2024