1. No category

BIMA15 HT 2015. Säkerhetsföreskrifter och kompletterande laborationer
1
Innehåll:
1. Säkerhet på labbet
2. Övning: spädning och spektrofotometer
3. Övning: att väga och ställa pH
4. Labrapport
Laborationerna kommer att starta och sluta med genomgångar
och ni ska lämna in labrapport för alla labbar.
Lab. I – Cellens strukturer
Lab. II – Vad innehåller ägget?
Lab. III – Isolering av DNA från topsade celler
BIMA15 HT 2015. Säkerhetsföreskrifter och kompletterande laborationer
2
1. Säkerhet på labbet:
Att tänka på innan du börjar:
o Läs noga igenom riskbedömningarna och gör Säkerhetstestet i
Moodle.
o Läs noga igenom labprotokollet innan varje laboration för att
förstå laborationen.
o Fundera redan innan laborationen börjar på var du skall kasta
avfallet från dagen. Fråga handledaren om vad du kan kasta i
soptunnan eller i vasken. Mycket av avfallet skall tas om hand
separat och det finns därför lådor eller flaskor märkta med
t.ex. Riskavfall, Biologiskt/Bakteriologiskt material, Glasavfall,
Organisk slask, Tungmetaller slask. Använd dem.
o Använd alltid labbrock, handskar och skyddsglasögon om inget
annat anges hos en kemekalies risk eller skydsfras. I BIMA15
bör man använda komplett skyddsutrustning i varje moment.
o Det förbjudet att äta, tugga tugummi, dricka, röka eller snusa i
labblokalerna. Tänk också på att tvätta händerna innan du äter,
snusar eller likande efter laborationen.
o Spring inte omkring i labblokalerna, utan ta det lugnt. Då
minskar risken för olyckor och dragskåpens flöden bibehålls så
att de fungerar på rätt sätt.
o Organisera arbetet på din labbänk och plocka fram vad du
behöver.
o Tvätta med kallt vatten om du spiller någon kemikalie på dig.
Det finns både ögon- och vanlig dusch om det skulle behövas.
Informera handledaren. Kontrollera i riskbedömningen om extra
åtgärder ska vidtas. Om det är bråttom till sjukhus kan man ta
med burken med etikett, för att snabbt få korrekt behandling.
BIMA15 HT 2015. Säkerhetsföreskrifter och kompletterande laborationer
o Använd dragskåp för arbete med starka
lösningsmedel, starka syror och liknande lösningar.
3
organiska
o Lämna utrusningen, labbänken, pipetter etc. i samma skick som
du själv vill finna dem.
BIMA15 HT 2015. Säkerhetsföreskrifter och kompletterande laborationer
4
2. Spädning och spektrofotometri
BSA (Bovint Serumalbumin)-standard 1mg/ml är redan gjord för att spara tid idag,
men det är viktigt att veta hur man gör för framtida mätningar
Lambert- Beers lag: A= C .  (mg-1ml cm-1) . l (cm)
A = absorbans
 = ämnets molära absorptionskoefficient vid en viss våglängd. -enhet kan även ges i
molar (M-1.cm-1)
C = koncentration
l = kyvettens längd i cm.
1. Lös >10 mg BSA i 10 ml vatten. Mät A280.
2. Beräkna koncentrationen (C) enligt Lambert- Beers lag. 280 för albumin = 0,67 mg-1ml
cm-1
3. Späd till 1mg/ml
Mätning:
1. Räkna ut hur mycket vatten respektive 1mg/ml BSA-lösning som behövs till de
1ml av varje prov som ska tillredas. Skriv ner och visa handledare innan ni
fortsätter till punkt 2 (Se tabell)
2. Förbered 1mL av de olika standardspädningarna enligt tabell (dubbelprover!).
3. Tillsätt 1ml Bradfordreagens och vortexa direkt.
4. Låt stå i minst 2 minuter, men inte längre än 1 timme.
4. Mät A595 i plastkyvett.
5. Gör en standardkurva genom att plotta de uppmätta absorbansvärdena mot de
förutbestämda standardkoncentrationerna.
BSA
standard
(µg/mL)
0
200
400
600
800
1000
Mätning (A 595)
BIMA15 HT 2015. Säkerhetsföreskrifter och kompletterande laborationer
3. Att väga och ställa pH
Du ska göra 50 mM acetatbuffert pH 5,0
Denna lösning kommer du att använda under laborationen ”Vad
finns i ägget?”
1.
2.
3.
4.
Väg upp 205 mg Na-acetat (MW 82,03)
Lös i ca 40 mL dH2O
Kontrollera pH och justera ev med HAc till pH 5,0
Justera volymen till 50 mL
Kalibrering av pH-meter
1. Tryck på knappen Cal.
2. Följ instruktionen som apparaten ger. Använd  för att
komma vidare.
3. Skölj elektroden och doppa den i buffert med pH 7
4. När det står STAB i fönstret kan du byta buffert. Det pH
som din lösning ska ha avgör om du ska ha högre eller lägre
pH än 7 på den andra bufferten. Glöm ej att skölja
elektroden mellan de olika buffertarna.
S
5
BIMA15 HT 2015. Säkerhetsföreskrifter och kompletterande laborationer
6
4.Labbrapport:
1. Introduktion. Teoretisk bakgrund och kort sammanfattning av
laborationens syfte.
2. Material och metoder. Förklara principerna för de olika metoderna
som använts och beskriv hur ni utförde dem. Här kan ni hänvisa till
labbprotokoll (men kopiera inte direkt från protokollet). Alla ändringar
som gjordes eller steg som inte utfördes enligt protokollet skall
beskrivas så att andra personer som läser labbrapporten förstår hur
experimenten har utförts.
3. Resultat. Redovisning/beskrivning av de erhållna resultaten skall vara
sammanställt av samtliga rådata (tabeller, figurer, fotografier etc.,
om beräkningar finns, ge även ett exempel på hur de gjorts). Större
mängder data, t ex från ett mätinstrument, kan man bifoga i form av
bilagor till labbrapporten i appendix, men hänvisa i så fall till dem i
resultatdelen. Till figurerna ska även en figurtext skrivas. Resultat är
alltid objektiva och i resultatdelen ska det altså inte finnas några
gissningar, tolkningar eller bedömningar.
4. Diskussion. Generell beskrivning och tolkning av resultaten. Förklara
om resultaten motsvarade förväntningarna, och redogör för eventuella
fel (och hur de påverkade resultaten). Genom tolkning av resultaten
visar man att man förstått laborationen och att man kan dra
slutsatser från den.
5. Appendix. Bilagor, som skall vara numrerade, kan t ex bestå av längre
uträkningar eller långa listor av rådata.
Lab I – ”Cellens strukturer” redovisas endast med Resultat.
Lab III-”DNA-lab” redovisas med Material & metod och Resultat.
Lab II-”Proteinlab” redovisas med Introduktion, Material & metod och
Resultat.