1. No category

(12) Oversettelse av
(11) NO/EP 2307375 B1
europeisk patentskrift
(19)
NORGE
NO
(51) Int Cl.
C07D 213/75 (2006.01)
A61K 31/44 (2006.01)
A61P 29/00 (2006.01)
Patentstyret
(21)
Oversettelse publisert
2015.03.16
(80)
Dato for Den Europeiske
Patentmyndighets
publisering av det meddelte
patentet
2014.11.19
(86)
Europeisk søknadsnr
09786592.7
(86)
Europeisk innleveringsdag
2009.07.14
(87)
Den europeiske søknadens
Publiseringsdato
2011.04.13
(30)
Prioritet
2008.07.28, US, 84095 P
(84)
Utpekte stater
AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR
HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL
PT RO SE SI SK SM TR
Utpekte samarbeidende
stater
AL BA RS
(73)
Innehaver
Pfizer Inc., 235 East 42nd Street, New York, NY 10017, US-USA
(72)
Oppfinner
RUCKER, Paul Vincent, 4307 Sierra Morena Avenue, CarlsbadCalifornia 92010,
US-USA
(74)
Fullmektig
Zacco Norway AS, Postboks 2003 Vika, 0125 OSLO, Norge
(54)
Benevnelse
(56)
Anførte
publikasjoner
Fenantrenonforbindelser, sammensetninger og fremgangsmåter
WO-A-2004/005229
WO-A-2008/093227
WO-A-2008/093236
NO/EP2307375
1
FENANTRENONFORBINDELSER,
SAMMENSETNINGER
OG
FREMGANGSMÅTER
OPPFINNELSENS OMRÅDE
5
Den
foreliggende
oppfinnelsen
inkluderer
forbindelser
som
er
glukokortikoidreseptormodulatorer. Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer
også sammensetninger og fremgangsmåter for anvendelse av forbindelser og
sammensetninger.
10
OPPFINNELSENS BAKGRUNN
Glukokortikoidreseptormodulatorer
er
glukokortikoidreseptorligander
som
anvendes til å behandle en rekke tilstander på grunn av sin kraftige anti15
inflammatoriske, antiproliferative og immunmodulerende aktivitet. J. Miner, et
al., Expert Opin. Investig. Drugs (2005) 14(12):1527–1545.
Eksempel
på
glukokortikoidreseptormodulatorer
inkluderer
deksametason,
prednison, prednisolon, RU-486, og som beskrevet i WO 2000/66522 og WO
20
2004/005229.
Behandling
med
glukokortikoidreseptormodulatorer
er
ofte
assosiert
med
bivirkninger, så som tap av benmasse og osteoporose.
25
Det å identifisere en glukokortikoidreseptormodulator som er effektiv, potent, og
har dempede bivirkninger, dekker et medisinsk behov.
KORT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
30
Denne oppfinnelsen vedrører en forbindelse med formel I:
NO/EP2307375
2
eller salt derav. Dette inkluderer forbindelsen 4b-benzyl-6,7-dihydroksy-6-metylN-(2-metylpyridin-3-yl)-10-okso-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10oktahydrofenantren-2-karboksamid eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
5
Oppfinnelsen vedrører også sammensetninger omfattende en terapeutisk effektiv
mengde av en forbindelse med formel I og en farmasøytisk akseptabel bærer. En
fremgangsmåte for å bringe en glukokortikoidreseptor i kontakt med en
forbindelse med formel I er også tilveiebrakt. Fremgangsmåter for behandling av
10
en tilstand hos et individ mediert av glukokortikoidreseptoraktivitet ved
administrering til individet av en forbindelse med formel I er videre tilveiebrakt.
DETALJERT BESKRIVELSE
15
A. Definisjoner
For de følgende definerte betegnelsene skal disse definisjonene benyttes, med
mindre en annen definisjon er gitt i patentkravene eller andre steder i denne
beskrivelsen.
20
Betegnelsen
"bærer"
beskriver
en
annen
ingrediens
i
en
farmasøytisk
sammensetning eller formulering enn en aktiv farmasøytisk forbindelse. Bærere
kan
være
et
farmasøytisk
akseptabelt
materiale
eller
vehikkel
eller
kombinasjoner av ett eller flere materialer og/eller vehikler. Eksempel inkluderer
25
flytende eller faste fyllstoff, fortynnere, eksipienter, løsemiddel, ko-løsemiddel,
buffermiddel,
konserveringsmiddel,
antioksidanter,
fuktemiddel,
oppløsningsfremmende middel, bindemiddel, suspensjonsmiddel, surfaktanter,
fuktemiddel,
fyllmiddel,
polymerer,
glidemiddel,
fargestoffer,
NO/EP2307375
3
smakstilsetningsmiddel,
søtningsmiddel,
smøremiddel,
humektanter
og
tabletterings- eller innkapslingsmaterialer.
Setningen "bringe i kontakt med en glukokortikoidreseptor" betyr at det dannes
5
kontakt, in vivo, ex vivo eller in vitro, med en glukokortikoidreseptor og
inkluderer administrering av en forbindelse eller et salt ifølge den foreliggende
oppfinnelsen til et individ som har en glukokortikoidreseptor, samt for eksempel
innføring av en forbindelse eller et salt ifølge oppfinnelsen i en forbindelse
inneholdende
10
et
urenset
glukokortikoidreseptoren.
eller
Bringe
renset
i
cellepreparat
kontakt
inkluderer
inneholdende
for
eksempel
samhandlinger mellom forbindelsen og reseptoren, så som binding.
Setningen
Bekhterevs
15
"inflammasjonsrelatert
sykdom,
psoriasis,
tilstand"
systemisk
inkluderer
artritt,
lupuserytematose,
fibromyalgi,
urinsyregikt,
udifferensiert spondyloartropati, juvenil spondylartritt, Crohns sykdom, ulcerøs
kolitt, irritabel tarm-syndrom, inflammatorisk tarmsykdom og smerte assosiert
med de ovennevnte tilstandene. Spesifikke eksempel på artritt inkluderer
revmatoid artritt, osteoartritt, reaktiv artritt, infeksiøs artritt, psoriasisartritt,
polyartritt, juvenil artritt, juvenil revmatoid artritt, juvenil reaktiv artritt og
20
juvenile psoriasisartritt.
Betegnelsen "modulering" eller "modulatorer" inkluderer antagonist, agonist,
delantagonister, delagonister eller blandinger eller forhold derav.
25
Betegnelsen "individ" viser til et hvilket som helst dyr, inkludert pattedyr, så som
mus, rotter, andre gnagere, kaniner, hunder, katter, griser, kveg, sauer, hester,
primater eller mennesker.
Betegnelsen
30
"behandle"
(og
tilsvarende
betegnelser
"behandler"
og
"behandling") inkluderer palliativ, restorativ og forebyggende ("profylaktisk")
behandling av et individ. Betegnelsen "palliativ behandling" viser til behandling
som lindrer eller reduserer effekten eller intensiteten av en tilstand hos et individ
uten å kurere tilstanden. Betegnelsen "forebyggende behandling" (og tilsvarende
betegnelse "profylaktisk behandling") viser til behandling som forebygger
35
forekomsten av en tilstand hos et individ. Betegnelsen "restorativ behandling"
("kurativ") viser til behandling som stopper progresjonen av, reduserer de
patologiske manifestasjonene av, eller fullstendig eliminerer en tilstand hos et
NO/EP2307375
4
individ. Behandling kan utføres med en terapeutisk effektiv mengde forbindelse,
salt eller sammensetning som fremkaller den biologiske eller medisinske
responsen i et vev, system eller individ som søkes av en person så som en
pasient, forsker, doktor, veterinær eller kliniker.
5
Betegnelsene "farmasøytisk effektiv" eller "terapeutisk effektiv" viser til en
mengde av en forbindelse heri, eller salt derav, som er tilstrekkelig til å
tilveiebringe en effektiv behandling, som drøftet ovenfor. Det skal forstås at det
som omfatter en farmasøytisk eller terapeutisk effektiv mengde kan være en
10
mindre mengde av forbindelsen eller saltet når det administreres i kombinasjon
med et annet middel enn når det benyttes alene.
B. Forbindelser
15
Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer trisykliske forbindelser med formel
I. Disse forbindelsene er nyttige som glukokortikoidreseptormodulatorer.
Den foreliggende oppfinnelsen omfatter også en forbindelse med formel II:
20
eller salt derav.
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer forbindelsen 4b-benzyl-6,7-dihydroksy25
6-metyl-N-(2metylpyridin-3-yl)-10-okso-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10oktahydrofenantren-2-karboksamid eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.
Forbindelsen
(4bR,6R,7R,8aS)-4b-benzyl-6,7-dihydroksy-6-metyl-N-(2-
metylpyridin-3-yl)-10-okso-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2karboksamid eller farmasøytisk akseptabelt salt derav er også inkludert.
30
NO/EP2307375
5
Farmasøytisk
akseptable
salter
av
forbindelser
ifølge
den
foreliggende
oppfinnelsen inkluderer syreaddisjonssaltene og basesaltene (inkludert di-salter)
derav.
I
én
utførelsesform
inkluderer
den
foreliggende
oppfinnelsen
et
hydrokloridsalt av forbindelsen med formel I. I en annen utførelsesform
5
inkluderer den foreliggende oppfinnelsen et kalsiumsalt av forbindelsen med
formel I. I en annen utførelsesform inkluderer den foreliggende oppfinnelsen et
natriumsalt av forbindelsen med formel I.
Farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter salter dannes fra syrer som danner
10
ikke-toksiske salter. Eksempel inkluderer acetat-, aspartat-, benzoat-, besylat-,
bikarbonat/karbonat-,
bisulfat/sulfat-,
borat-,
kamsylat-,
citrat-,
edisylat-,
esylat-, format-, fumarat-, gluceptat-, glukonat-, glukuronat-, heksafluorfosfat-,
hibenzat-,
hydroklorid/klorid-,
hydrobromid/bromid-,
hydrojodid/jodid-,
isetionat-, laktat-, malat-, maleat-, malonat-, mesylat-, metylsulfat-, naftylat-,
15
2-napsylat-,
nikotinat-,
fosfat/hydrogen-
nitrat-,
orotat-,
fosfat/dihydrogen-
fosfat-,
oksalat-,
sakkarat-,
palmitat-,
pamoat-,
stearat-,
suksinat-,
tartrat-, tosylat- og trifluoracetatsalter. Farmasøytisk akseptable basiske salter
dannes
fra
baser
som
danner
ikke-toksiske
salter.
Eksempel
inkluderer
aluminium-, arginin-, benzatin-, kalsium-, kolin-, dietylamin-, diolamin-, glysin-,
20
lysin-, magnesium-, meglumin-, olamin-, kalium-, natrium-, trometamin- og
sinksalter.
For en oversikt over egnede salter, se "Handbook of Pharmaceutical Salts:
Properties, Selection, and Use" av Stahl og Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim,
25
Tyskland, 2002).
Et salt kan lett fremstilles ved å blande sammen oppløsninger av forbindelser
ifølge den foreliggende oppfinnelsen og den ønskede syren eller basen, slik det
passer. Saltet kan bunnfelles fra oppløsning og samles opp ved filtrering eller
30
kan gjenfinnes ved fordamping av løsemidlet. Ioniseringsgraden i saltet kan
variere fra fullstendig ionisert til nesten uionisert.
Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan administreres som
prodruger. Således kan enkelte derivater som kan ha liten eller ingen
35
farmakologisk aktivitet i seg selv, når de administreres i eller på kroppen,
konverteres til forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen som har den
ønskede aktivitet, for eksempel gjennom hydrolytisk spaltning. Slike derivater
NO/EP2307375
6
henvises til som "prodruger". Ytterligere informasjon om anvendelse av
prodruger kan finnes i Pro-drugs as Novel Delivery Systems, bd. 14, ACS
Symposium Series (T Higuchi og W Stella) og "Bioreversible Carriers in Drug
Design", Pergamon Press, 1987 (utg. E B Roche, American Pharmaceutical
5
Association).
Fosfatformer av forbindelsene heri kan fremstilles ved fremgangsmåter av kjent
teknikk, så som dem beskrevet i WO 2008/070149, WO 2008/064274 og WO
2006/078846.
10
Forbindelsen
(4a-benzyl-2,3-dihydroksy-3-metyl-N-(2-
metylpyridin-3-yl)-9-okso-2-fenyl-1,2,3,4,4a,9,10,10a-oktahydrofenantren-7karboksamido)metyl-dihydrogen-fosfat og stereoisomer ((2R,3R,4aR10aS)-4abenzyl-2,3-hydroksy-3-metyl-N-(2-metylpyridin-3-yl)-9-okso-2-fenyl1,2,3,4,4a,9,10,10a-oktahydrofenantren-7-karboksamido)metyl-dihydrogenfosfat kan fremstilles ifølge skjemaet nedenfor:
15
Alle isomerer, så som stereoisomerer, (cis-/trans- eller Z/E)-isomerer og
tautomere former av forbindelsene eller salter er inkludert i omfanget av den
foreliggende oppfinnelsen, inkludert forbindelser eller former som har mer enn
20
én type isomerisme, og blandinger av én eller flere derav. Det følgende skildrer
for eksempel en forbindelse med formel II og en tautomer.
NO/EP2307375
7
Syreaddisjonssalter eller basiske salter hvori mot-ionet er optisk aktivt, for
eksempel D-laktat eller L-lysin, eller rasemisk, for eksempel DL-tartrat eller DL5
arginin er også inkludert.
Isomerer kan separeres gjennom konvensjonelle teknikker som er velkjent for
fagmannen.
10
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer isotopmerkede forbindelser ifølge
oppfinnelsen hvori ett eller flere atomer er erstattet av atomer med samme
atomnummer, men en atommasse eller et massetall som er forskjellig fra
atommassen eller massetallet som vanligvis finnes i naturen.
15
Isotopt merkede forbindelser ifølge oppfinnelsen kan generelt fremstilles
gjennom konvensjonelle teknikker som er kjent for fagmannen, eller gjennom
fremgangsmåter som er analoge med dem som er beskrevet i de medfølgende
eksemplene og fremstillingene ved hjelp av en formålstjenlig isotopmerket
reagens
20
i
stedet
for
den
ikke-merkede
tidligere
benyttede
reagensen.
administreres. Salter av forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan
også anvendes.
C. Sammensetninger
25
Forbindelser eller salter ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan være del av en
sammensetning. Sammensetninger kan også inkludere én eller flere forbindelser
eller salter ifølge den foreliggende oppfinnelsen. Sammensetningen kan også
inkludere et enantiomerisk overskudd av én eller flere forbindelser ifølge den
foreliggende oppfinnelsen. Andre farmakologisk aktive substanser og bærestoffer
30
kan være inkludert i sammensetningen.
NO/EP2307375
8
Én utførelsesform er en sammensetning omfattende en forbindelse med formel I
eller et salt derav. En annen utførelsesform er en sammensetning omfattende en
forbindelse med formel I eller et salt derav og en bærer.
5
Bærestoffet kan for eksempel være et hjelpestoff. Valget av eksipient vil i stor
grad avhenge av faktorer slik som den bestemte administrasjonsmåten,
eksipientens virkning på oppløselighet og stabilitet samt doseringsformens art.
Sammensetningen kan være et faststoff, en væske eller begge deler og kan
10
formuleres med forbindelsen som en enhetsdosesammensetning, for eksempel
en tablett, som kan inneholde fra 0,05 vekt-% til 95 vekt-% av de aktive
forbindelsene. Forbindelser eller salter ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan
kobles med egnede polymerer eller andre legemiddelbærere.
15
D. Fremgangsmåter
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer en forbindelse eller farmasøytisk
akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse for å komme
i kontakt med en glukokortikoidreseptor.
20
Den
foreliggende
oppfinnelsen
inkluderer
også
en
fremgangsmåter
for
behandling av en tilstand mediert av glukokortikoidreseptoraktivitet hos et
individ, omfattende administrering til individet av en forbindelse eller et salt
ifølge den foreliggende oppfinnelsen.
25
En tilstand mediert av glukokortikoidreseptoraktivitet inkluderer:
a) endokrine lidelser, så som primær eller sekundær adrenokortikal insuffisiens,
medfødt adrenal hyperplasi, ikke-suppurativ tyreoiditt, og hyperkalsemi assosiert
med cancer;
30
b) revmatiske lidelser, så som psoriasisartritt, revmatoid artritt, inkludert juvenil
revmatoid artritt, Bekhterevs sykdom, akutt og subakutt bursitt, akutt uspesifikk
tenosynovitt, akutt giktisk artritt, post-traumatisk osteoartritt, synovitt av
osteoartritt, og epikondylitt;
c) kollagensykdommer, så som systemisk lupuserytematose, og akutt revmatisk
35
karditt;
NO/EP2307375
9
d) dermatologiske tilstander, så som pemfigus, bulløs dermatitis herpetiformis,
alvorlig
erythema
multiforme
(Stevens-Johnsons
syndrom),
eksfolierende
dermatitt, mycosis fungoides, psoriasis, og seboreisk dermatitt;
e) allergisk tilstander, så som sesongavhengig - eller helårsallergier, allergisk
5
rhinitt, bronkial astma, kontaktdermatitt, atopisk dermatitt, serumsykdom, og
legemiddel-hypersensitivitetsreaksjoner;
f)
oftalmiske
sykdommer
og
tilstander,
så
som
allergiske
marginale
hornhinnesår, herpes zoster ophthalmicus, inflammasjon i fremre segment,
diffus bakre uveitt og koroiditt, kronisk uveitt, sympatisk oftalmi, allergisk
10
konjunktivitt, keratitt, korioretinitt, optisk nevritt, iritt og iridosyklitt;
g) respiratoriske sykdommer, så som symptomatisk sarkoidose, Loefflers
syndrom,
berylliose,
fulminant
eller
utbredd
lungetuberkulose,
og
aspirasjonspneumonitt;
h)
15
hematologiske
sekundær
lidelser,
trombocytopeni,
så
som
ervervet
idiopatisk
trombocytopenisk
(autoimmun)
purpura,
hemolytisk
anemi,
erytroblastopeni (rød blodcelleanemi), og medfødt (erytroid) hypoplastisk anemi;
i) neoplastiske sykdommer, så som leukemi og lymfom;
j) ødematøse tilstander, så som induserer diurese eller utslipp av proteinuri i
nefrotisk syndrom, uten uremi, av den idiopatiske typen eller den som skyldes
20
lupuserytematose;
k) gastrointestinale sykdommer, så som ulcerøs kolitt, regional enteritt,
inflammatorisk tarmsykdom, Crohns sykdom, gastritt, irritabel tarm-syndrom;
l) diverse tilstander, så som tuberkuløs meningitt og trikinose; og
m) nevrologiske tilstander, så som Alzheimers sykdom, Parkinsons sykdom,
25
Huntingtons sykdom, amyotrofisk lateral sklerose, ryggmargsskade, psykotisk
alvorlig depresjon og perifer nevropati.
En
tilstand
mediert
av
glukokortikoidreseptoraktivitet
inkluderer
også
transplantatavstøtning (f.eks. nyre, lever, hjerte, lunge, pankreas (f.eks.
30
øyceller), benmarg, hornhinne, tynntarm, hudallografter, hudhomografter (så
som
benyttet
i
behandling
av
forbrenning),
hjerteklaff-xenografter,
serumsykdom, og transplantat-mot-vert-sykdom, autoimmune sykdommer, så
som revmatoid artritt, psoriasisartritt, multippel sklerose, type I- og type IIdiabetes, juvenil diabetes, fedme, astma, inflammatorisk tarmsykdom (så som
NO/EP2307375
10
Crohns sykdom og ulcerøs kolitt), pyoderma gangrenum, lupus (systemisk
lupuserytematose), myastenia gravis, psoriasis, dermatitt, dermatomyositt;
eksem,
seborré,
lungeinflammasjon,
øyeuveitt,
hepatitt,
Graves
sykdom,
Hashimotos tyreoiditt, autoimmun tyreoiditt, Behcets eller Sjøgrens syndrom
5
(tørre øyne/munn), pernisiøs eller immunohemolytisk anemi, aterosklerose,
Addisons
sykdom
(autoimmun
sykdom
i
binyrene),
idiopatisk
adrenal
insuffisiens, autoimmun polyglandular sykdom (også kjent som autoimmunt
polyglandulært syndrom), glomerulonefritt, morphea-sklerodermi, lichen planus,
viteligo (pigmenttap i huden), alopecia areata, autoimmun alopesi, autoimmun
10
hypofyseinsuffisiens,
Guillain-Barré-syndrom,
hypersensitivitetssykdommer,
inkludert
og
alveolitt;
T-cellemedierte
kontakthypersensitivitet,
forsinket
hypersensitivitet, kontaktdermatitt (inkludert den som skyldes giftsumak),
urtikaria, hudallergier, respiratoriske allergier (høyfeber, allergisk rhinitt) og
gluten-sensitiv
15
enteropati
(cøliaki);
inflammatoriske
sykdommer
så
som
osteoartritt, akutt pankreatitt, kronisk pankreatitt, akutt lungesviktsyndrom,
Sezarys syndrom og karsykdommer som har en inflammatorisk og eller en
proliferatorisk komponent så som restenose, stenose og arterosklerose.
En tilstand mediert av glukokortikoidreseptoraktivitet inkluderer også:
20
a) astma av enhver type, etiologi eller patogenese, særlig astma som er et
medlem valgt fra gruppen bestående av atopisk astma, ikke-atopisk astma,
allergisk astma, atopisk bronkial IgE-mediert astma, bronkial astma, essensiell,
ekte
astma,
intrinsik
astma
forårsaket
av
patofysiologiske
forstyrrelser,
ekstrinsik astma forårsaket av miljøfaktorer, essensiell astma av ukjent eller
25
ikke-åpenbar årsak, ikke-atopisk astma, astmatisk bronkitt, emfysematisk
astma, treningsindusert astma, allergenindusert astma, kaldluftindusert astma,
yrkesrelatert astma, infeksjonsutløst astma forårsaket av bakterie-, sopp-,
protozo- eller virusinfeksjon, ikke-allergisk astma, begynnende astma, "wheezyinfant"-syndrom og bronkiolitt
30
b) kronisk eller akutt bronkokonstriksjon, kronisk bronkitt, obstruksjon av de
små luftveiene, og emfysem;
c) obstruktive eller inflammatoriske luftveissykdommer av enhver type, etiologi
eller patogenese, særlig en obstruktiv eller inflammatorisk luftveissykdom som
er et medlem valgt fra gruppen bestående av kronisk eosinofil pneumoni, kronisk
35
obstruktiv
lungesykdom
(KOLS),
KOLS
som
inkluderer
kronisk
bronkitt,
lungeemfysem eller dyspné som er assosiert eller ikke-assosiert med KOLS,
NO/EP2307375
11
KOLS som er karakterisert ved irreversibel, progressiv luftveisobstruksjon,
ARDS-lungesvikt (eng.: adult respiratory distress syndrome), luftveisirritasjon,
forverring av overreaktivitet i luftveiene som følger av annen legemiddel og
luftveissykdommer som er assosiert med pulmonal hypertensjon
5
d) bronkitt av enhver type, etiologi eller patogenese, særlig bronkitt som er et
medlem valgt fra gruppen bestående av akutt bronkitt, akutt laryngotrakeal
bronkitt, arakidisk bronkitt, katarral bronkitt, kruppøs bronkitt, tørr bronkitt,
infeksiøs
astmatisk
bronkitt,
produktiv
bronkitt,
stafylokokk-
eller
streptokokkbronkitt og vesikulær bronkitt, akutt lungeskade; og
10
e) bronkiektasi av enhver type, etiologi eller patogenese, særlig bronkiektasi
som er et medlem valgt fra gruppen bestående av sylindrisk bronkiektasi,
sakkulær bronkiektasi, fusiform bronkiektasi, kapillær bronkiektasi, cystisk
bronkiektasi, tørr bronkiektasi og follikulær bronkiektasi.
15
En annen utførelsesform inkluderer en anvendelse av en forbindelse eller et salt
ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse i behandling av obstruktive
eller
inflammatoriske
luftveissykdommer
av
enhver
type,
etiologi
eller
patogenese, særlig en obstruktiv eller inflammatorisk luftveissykdom som er et
medlem valgt fra gruppen bestående av kronisk eosinofil pneumoni, kronisk
20
obstruktiv
lungesykdom
(KOLS),
KOLS
som
inkluderer
kronisk
bronkitt,
lungeemfysem eller dyspné assosiert eller ikke assosiert med KOLS, KOLS som
er kjennetegnet ved irreversibel, progressiv luftveisobstruksjon, ARDS-lungesvikt
(eng.: adult respiratory distress syndrom), forverring av overrreaktivitet i
luftveiene som følge av annen legemiddelterapi og luftveissykdom som er
25
assosiert med pulmonal hypertensjon, eller astma av enhver type, etiologi, eller
patogenese, særlig astma som er et medlem valgt fra gruppen bestående av
atopisk astma, ikke-atopisk astma, allergisk astma, atopisk bronkial IgE-mediert
astma, bronkial astma, essensiell astma, ekte astma, intrinsik astma forårsaket
av patofysiologiske forstyrrelser, ekstrinsik astma forårsaket av miljøfakorer,
30
essensiell astma av ukjent eller ikke-åpenbar årsak, ikke-atopisk astma,
astmatisk
bronkitt,
allergenindusert
infeksjonsutløst
virusinfeksjon,
35
amfysematisk
astma,
astma
kaldluftsindusert
forårsaket
ikke-allergisk
syndrom og bronkiolitt.
astma,
astma,
av
treningsindusert
astma,
bakterie-,
begynnende
yrkesrelatert
sopp-,
astma,
protozo-
astma,
astma,
eller
"wheezy-infant"-
NO/EP2307375
12
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer en forbindelse eller et farmasøytisk
akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse i behandling
av en inflammasjonsrelatert tilstand hos et individ.
5
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer en forbindelse eller et farmasøytisk
akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse i behandling
av tilstander så som astma, dermatitt, inflammatorisk tarmsykdom, Alzheimers
sykdom,
psykotisk
alvorlig
depresjon,
nevropati,
transplantatavstøtning,
multippel sklerose, kronisk uveitt eller kronisk obstruktiv lungesykdom hos et
10
individ.
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer en forbindelse eller et farmasøytisk
akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse i behandling
av revmatoid artritt hos et individ.
15
Revmatoid artritt betraktes som en kronisk autoimmun og inflammatorisk
sykdom som fremkaller betente ledd som til slutt hovner opp, blir smertefulle og
opplever nedbrytning av leddets brusk, ben og ligamenter. Et resultat av
revmatoid artritt er deformering, ustabilitet og stivhet av leddet og arrdannelse i
20
leddet. Leddene forringes i en svært variabel hastighet. Mange faktorer,
inkludert genetisk anlegg, kan påvirke sykdommens mønster. Mennesker med
revmatoid artritt kan ha et mildt forløp, sporadiske oppblussinger med lange
perioder med remisjon uten sykdom, eller en jevnt progressiv sykdom, som kan
være sakte eller hurtig. Revmatoid artritt kan starte plutselig, med mange ledd
25
som blir betente samtidig. Oftere starter det subtilt, gradvis, og rammer ulike
ledd. Vanligvis er inflammasjonen symmetrisk, med rammede ledd på begge
sider av kroppen. De små leddene i fingrene, tærne, hendene føttene,
håndleddene, albuene og anklene blir typisk betente først, etterfulgt av knærne
og hoftene.
30
Smerte assosiert med revmatoid artritt er typisk somatisk nociseptiv leddsmerte.
Hovne håndledd kan klemme en nerve og resultere i nummenhet eller prikking
som skyldes karpaltunnelsyndrom. Cyster kan utvikle seg bak rammede knær,
briste og forårsake smerte og hevelse i nedre del av bena.
35
NO/EP2307375
13
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer en forbindelse eller farmasøytisk
akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse i behandling
av dermatitt hos et individ.
5
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer en forbindelse eller et farmasøytisk
akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse i behandling
av kronisk obstruktiv lungesykdom hos et individ.
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer en forbindelse eller et farmasøytisk
10
akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse i behandling
av astma hos et individ.
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer en forbindelse eller et farmasøytisk
akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse i behandling
15
av Alzheimers sykdom hos et individ.
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer en forbindelse eller farmasøytisk
akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse i lindring av
bivirkninger assosiert med glukokortikoidreseptormodulering.
20
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer en forbindelse eller farmasøytisk
akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse i lindring av
bivirkninger assosiert med prednisolonbehandling.
25
Den
foreliggende
oppfinnelsen
omfatter
videre
en
forbindelse
eller
et
farmasøytisk akseptabelt salt ifølge den foreliggende oppfinnelsen til anvendelse
i behandling av de ovennevnte tilstandene, sykdommene og lidelsene hos et
individ eller et individ som kan komme til å ha en slik tilstand.
30
I én utførelsesform er den ovennevnte behandlingen forebyggende behandling.
I en annen utførelsesform er den ovennevnte behandlingen palliativ behandling.
I
35
en
annen
utførelsesform
er
behandling.
E. Dosering og administrering
den
ovennevnte
behandlingen
restorativ
NO/EP2307375
14
For å velge den mest hensiktsmessige doseringsformen og administrasjonsmåten
for behandling av den foreslåtte indikasjonen, kan forbindelsene eller salter
ifølge oppfinnelsen vurderes med hensyn til sine biofarmasøytiske egenskaper,
5
så som oppløselighet og løsningsstabilitet (på tvers av pH), og permeabilitet.
Doser for forbindelser eller salter ifølge oppfinnelsen går fra 0,1 mg til 100 mg
for oral administrering og doser går fra 2 mg eller mindre for inhalert
administrering. Dosen kan administreres i enkeltdose eller to eller flere delte
10
doser, og kan falle utenfor det typisk området gitt heri.
Dosene er basert på et gjennomsnittlig menneskelig individ med en vekt på
omtrent 60 kg til 70 kg. Dosering og doseregimer avhenger av individ og en
rekke tilstander som kan påvirke dosering (alder, kjønn, kroppsvekt osv.). En
15
lege eller annet medisinsk personale vil uten videre være i stand til å bestemme
doser for individer hvis vekt faller utenfor dette området, så som spedbarn og
eldre.
Oral administrering
20
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen og salter derav kan administreres oralt. Oral
administrasjon kan innebære svelging, slik at forbindelsen eller saltet kommer
inn i fordøyelseskanalen, og/eller bukkal administrasjon eller administrasjon på
eller under tungen hvormed forbindelsen eller saltet kommer inn i blodbanen
25
direkte fra munnen.
Egnede formuleringer for oral administrasjon inkluderer faste, halvfaste og
flytende systemer så som tabletter; myke eller harde kapsler inneholdende
multi- eller nanopartikkelstoffer, væsker eller pulver; sugetabletter (inkludert
30
væskefylte);
tyggetabletter;
gel;
hurtigoppløselige
doseringsformer;
film;
stikkpiller; spray og bukkal-/slimhinneplaster. Forbindelsen eller salter ifølge
oppfinnelsen kan videre administreres som en spraytørket dispersjon.
Flytende
35
formuleringer
inkluderer
suspensjoner,
oppløsninger,
siruper
og
eliksirer. Slike formuleringer kan benyttes som fyllstoffer i myke eller harde
kapsler (for eksempel dannet av gelatin eller hydroksypropylmetylcellulose) og
NO/EP2307375
15
omfatter typisk et bærestoff, for eksempel vann, etanol, polyetylenglykol,
propylenglykol, metylcellulose eller en egnet olje og ett eller flere emulgerende
middel og/eller suspensjonsmiddel. Flytende formuleringer kan også fremstilles
gjennom rekonstitusjon av et faststoff, f.eks. fra en pose.
5
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen og salter derav kan
også anvendes i
hurtigoppløselige, hurtigdesintegrerte doseringsformer, så som dem beskrevet i
Expert Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981–986, av Liang og Chen
(2001).
10
For tablettdoseringsformer kan legemidlet, avhengig av dosen, utgjøre fra 1
vekt-% til 80 vekt-% av doseringsformen, mer typisk fra 5 vekt-% til 60 vekt-%
av doseringsformen. I tillegg til legemidlet kan tabletter som regel inneholde et
oppløsningsfremmende middel. Eksempel på oppløsningsfremmende middel
15
inkluderer
natriumstivelseglykolat,
kroskarmellosenatrium,
mikrokrystallinsk
stivelse,
natriumkarboksymetylcellulose,
krospovidon,
cellulose,
pregelatinisert
lavere
stivelse
polyvinylpyrrolidon,
alkylsubstituert
og
metylcellulose,
hydroksypropylcellulose,
natriumalginat.
Som
regel
vil
det
oppløsningsfremmende middelet omfatte fra 1 vekt-% til 25 vekt-%, foretrukket
20
fra 5 vekt-% til 20 vekt-% av doseringsformen. Bindemiddel anvendes generelt
for å gi en tablettformulering kohesive egenskaper. Egnede bindemiddel
inkluderer mikrokrystallinsk cellulose, gelatin, sukker, polyetylenglykol, naturlig
og
syntetisk
gummi,
polyvinylpyrrolidon,
pregelatinisert
stivelse,
hydroksypropylcellulose og hydroksypropylmetylcellulose. Tabletter kan også
25
inneholde
fortynningsmiddel,
så
som
laktose
(monohydrat,
spraytørket
monohydrat, vannfri og lignende), mannitol, xylitol, dekstrose, sukrose, sorbitol,
mikrokrystallinsk cellulose, stivelse og dibasisk kalsiumfosfatdihydrat. Tabletter
kan også eventuelt omfatte overflateaktive middel, så som natriumlaurylsulfat
og polysorbat 80, og glidemiddel så som silisiumdioksid og talkum. Når de er
30
tilstedeværende kan overflateaktive middel omfatte fra 0,2 vekt-% til 5 vekt-%
av tabletten og glidemiddel kan omfatte fra 0,2 vekt-% til 1 vekt-% av tabletten.
Tabletter inneholder også som regel smøremiddel så som magnesiumstearat,
kalsiumstearat,
35
sinkstearat,
natriumstearylfumarat
og
blandinger
av
magnesiumstearat med natriumlaurylsulfat. Smøremiddel omfatter som regel fra
0,25 vekt-% til 10 vekt-%, fortrinnsvis fra 0,5 vekt-% til 3 vekt-% av tabletten.
NO/EP2307375
16
Andre mulige ingredienser inkluderer anti-oksidanter, fargestoffer, smaksstoffer,
konserveringsmiddel og smaksmaskerende middel.
Eksempel på tabletter inneholder opptil omtrent 80 % legemiddel, fra omtrent
5
10 vekt-% til omtrent 90 vekt-% bindemiddel, fra omtrent 0 vekt-% til omtrent
85 vekt-% fortynningsmiddel, fra omtrent 2 vekt-% til omtrent 10 vekt-%
oppløsningsfremmende middel og fra omtrent 0,25 vekt-% til omtrent 10 vekt% smøremiddel.
10
Faste formuleringer for oral administrasjon kan formuleres for umiddelbar
og/eller modifisert frisetting. Formuleringer med modifisert frisetting inkluderer
forsinket, langsom, tidsbestemt, kontrollert, målsøkt og programmert frisetting.
Egnede formuleringer med modifisert frisetting ifølge oppfinnelsen er beskrevet i
15
US-patentnr. 6,106,864. Detaljer om andre egnede frisettingsteknikker, så som
høyenergidispersjoner
og
osmotiske
og
belagte
partikler
kan
finnes
i
Pharmaceutical Technology On-line, 25(2), 1–14, av Verma et al (2001).
Doseområder for oral administrering inkluderer også fra 0,1 mg til 80 mg, 15 mg
20
til 80 mg, 0,1 mg til 25 mg.
Parenteral administrering
Forbindelsene eller saltene ifølge oppfinnelsen kan også administreres direkte inn
25
i blodbanen, inn i en muskel eller inn i et indre organ. Eksempel 2 vil kunne
administreres inn i blodbanen. Egnede middel for parenteral administrasjon
inkluderer
intravenøse,
intra-arterielle,
intraperitoneale,
intratekale,
intraventrikulære, intrauretrale, intrasternale, intrakraniale, intramuskulære,
intrasynoviale og subkutane. Egnede innretninger for parenteral administrering
30
inkluderer nåleinjektorer (inkludert mikronåleinjektorer), nålefrie injektorer og
infusjonsteknikker. Parenterale formuleringer er typisk vandige oppløsninger
som kan inneholde hjelpestoffer, så som salter, karbohydrater og buffermiddel
(foretrukket til en pH fra 3 til 9), men for noen anvendelsesområder kan de
formuleres mer hensiktsmessig som en steril ikke-vandig oppløsning eller som
35
en tørket form til anvendelse i kombinasjon med et egnet vehikkel, så som sterilt
pyrogenfritt vann.
NO/EP2307375
17
Fremstillingen av parenterale formuleringer under sterile betingelser, f.eks. ved
frysetørking,
kan
uten
videre
gjennomføres
ved
hjelp
av
farmasøytiske
standardteknikker som vil være velkjent for fagmannen.
5
Oppløseligheten av forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelser og salter
derav anvendt i fremstillingen av parenterale oppløsninger kan økes ved å
anvende
formålstjenlige
formuleringsteknikker,
så
som
iblanding
av
oppløsningsfremmende middel.
10
Formuleringer for parenteral administrasjon kan formuleres for umiddelbar
og/eller modifisert frisetting. Formuleringer med modifisert frisetting inkluderer
forsinket, langsom, tidsbestemt, kontrollert, målsøkt og programmert frisetting.
Således kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen formuleres som en suspensjon
15
eller som et faststoff, halvfast stoff eller tiksotropisk væske for administrasjon
som et implantert depot som tilveiebringer modifisert frisetting av den aktive
forbindelsen. Eksempel på slike formuleringer inkluderer legemiddelbelagte
stenter og halvfaste stoffer og suspensjoner omfattende legemiddelfylte poly(dlmelke-koglykol)syre-mikrosfærer (PGLA-mikrosfærer).
20
Topisk administrering
Forbindelsene eller saltene ifølge oppfinnelsen kan også administreres topisk,
(intra-)dermalt eller transdermalt i huden eller slimhinnene. Eksempel 1 vil
25
kunne administreres til huden. Typiske formuleringer for dette formål inkluderer
gel, hydrogel, lotion, oppløsninger, kremer, salver, pudder, forbindinger, skum,
filmer,
hudplaster,
skiver,
implantater,
svamper,
fiber,
bandasjer
og
mikroemulsjoner. Liposomer kan også anvendes. Typiske bærere inkluderer
alkohol, vann, mineralolje, flytende petrolatum, hvitt petrolatum, glyserin,
30
polyetylenglykol og propylenglykol. Penetrasjonsforsterkere kan blandes i, se for
eksempel J Pharm Sci, 88 (10), 955–958, av Finnin og Morgan (oktober 1999).
Andre middel for topisk administrasjon inkluderer levering ved elektroporasjon,
iontoforese,
35
fonoforese,
sonoforese
Powderject™, Bioject™, osv.) injeksjon.
og
mikronål-
eller
nålefri
(f.eks.
NO/EP2307375
18
Formuleringer for topisk administrasjon kan formuleres for umiddelbar og/eller
modifisert frisetting. Formuleringer med modifisert frisetting inkluderer forsinket,
langsom, tidsbestemt, kontrollert, målsøkt og programmert frisetting.
5
Inhalert/intranasal administrering
Forbindelsene eller saltene ifølge oppfinnelsen kan også administreres intranasalt
eller ved inhalasjon, typisk i form av et tørt pulver (enten alene, som en
blanding, for eksempel i en tørr blanding med laktose, eller som en blandet10
komponent-partikkel,
fosfatidylkolin)
fra
for
en
eksempel
blandet
tørrpulverinhalator,
med
som
fosfolipider,
en
aerosolspray
så
som
fra
en
trykkbeholder, pumpe, spray, sprayfordeler (foretrukket en sprayfordeler som
anvender elektrohydrodynamikk for å produsere en lett tåke) eller forstøver,
med eller uten anvendelse av et egnet drivmiddel, så som 1,1,1,2-tetrafluoretan
15
eller 1,1,1,2,3,3,3-heptafluorpropan eller som nesedråper. For intranasal bruk
kan pulveret omfatte et bioadhesivt middel, f.eks. kitosan eller syklodekstrin.
Trykkbeholderen, pumpen, sprayen, sprayfordeleren eller forstøveren inneholder
en
20
oppløsning
eller
suspensjon
av
forbindelsen(-e)
ifølge
oppfinnelsen
omfattende, for eksempel, etanol, vandig etanol eller et egnet alternativt middel
for å dispergere, solubilisere eller forlenge frisettingen av virkestoffet, et
drivmiddel/drivmiddel som løsemiddel og en eventuell surfaktant, så som
sorbitantrioleat, oleinsyre eller en oligomelkesyre.
Forut for anvendelse i en tørrpulver- eller suspensjonformulering mikroniseres
25
legemidlet til en størrelse som er egnet for levering gjennom inhalasjon (typisk
mindre enn
5
mikroner). Dette kan
oppnås gjennom
enhver
passende
fremgangsmåte for finmaling, så som spiralstrålemaling, virvelsjiktstrålemaling,
superkritisk-fluid-behandling
for
å
danne
nanopartikler,
høytrykkshomogenisering eller spraytørking.
30
Kapsler (for eksempel dannet av gelatin eller hydroksypropylmetylcellulose),
trekkplaster og patroner for anvendelse i en inhalator eller et pusteapparat kan
formuleres til å inneholde en pulverblanding av forbindelsen ifølge oppfinnelsen,
en egnet pulverbase, så som laktose eller stivelse og en ytelsesmodifikator, så
35
som L-leucin, mannitol eller magnesiumstearat. Laktosen kan være vannfri eller i
NO/EP2307375
19
monohydratform, foretrukket det siste. Andre egnede hjelpestoffer inkluderer
dekstran, glukose, maltose, sorbitol, xylitol, fruktose, sukrose og trehalose.
En egnet løsningsformulering til anvendelse i en sprayfordeler som anvender
5
elektrohydrodynamikk, kan omfatte en forbindelse ifølge den foreliggende
oppfinnelsen, propylenglykol, sterilt vann, etanol og natriumklorid. Alternative
løsemiddel som kan anvendes i stedet for propylenglykol inkluderer glyserol og
polyetylenglykol.
10
Formuleringer
for
inhalert/intranasal
administrasjon
kan
formuleres
for
umiddelbar og/eller modifisert frisetting, for eksempel ved hjelp av PGLA.
Formuleringer
med
modifisert
frisetting
inkluderer
forsinket,
langsom,
tidsbestemt, kontrollert, målsøkt og programmert frisetting.
15
Når det gjelder tørrpulverinhalatorer og aerosoler, bestemmes doseenhet ved
hjelp av en ventil som leverer en tilmålt mengde. Enheter i samsvar med
oppfinnelsen er typisk anordnet for å administrere en målt dose eller "puff' som
kan administreres i en enkeltdose eller, mer vanligvis som delte doser gjennom
dagen.
20
Doseområder for inhalert administrering går fra 2 mg til mindre eller 1 mg til
mindre.
Kombinasjon
25
Forbindelsene eller saltene ifølge oppfinnelsen kan administreres i kombinasjon
med ett eller flere terapeutiske middel, så som et legemiddel. Forbindelsen ifølge
den foreliggende oppfinnelsen eller salt derav kan administreres på samme
tidspunkt eller forskjellig tidspunkt fra ett eller flere andre terapeutiske middel.
30
"I kombinasjon" inkluderer for eksempel: samtidig administrering av en
kombinasjon av forbindelse eller salt ifølge oppfinnelsen og et terapeutisk middel
til et individ, når slike komponenter er formulert sammen i en enkelt
doseringsform som frisetter komponentene på vesentlig samme tid til individet;
35
vesentlig samtidig administrering av en kombinasjon av forbindelse eller salt
ifølge oppfinnelsen og et terapeutisk middel til et individ med behov for
NO/EP2307375
20
behandling, når komponentene er formulert atskilt fra hverandre til separate
doseringsformer
som
tas
på
vesentlig
samme
tid
av
individet,
hvorpå
komponentene frisettes vesentlig på samme tid til individet; sekvensiell
administrering av en kombinasjon av forbindelse eller salt ifølge oppfinnelsen og
5
et terapeutisk middel til et individ, når slike komponenter er formulert atskilt fra
hverandre til separate doseringsformer tom tas på etterfølgende tidspunkter av
individet med et tilstrekkelig tidsintervall mellom hver administrering, hvorpå
komponentene
frisettes
på
vesentlig,
hvorpå
komponentene
frisettes
på
vesentlig ulike tidspunkter til individet; og sekvensiell administrering av slik
10
kombinasjon av forbindelse eller salt ifølge oppfinnelsen og et terapeutisk middel
til et individ, når slike komponenter er formulert sammen til en enkelt
doseringsform som frisetter komponentene på en kontrollert måte hvorpå de
administreres samtidig, etter hverandre og/eller overlappende på samme
og/eller ulik tid av pasienten, hvor hver del kan administreres enten på samme
15
eller ulik måte.
Forbindelsene eller saltene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan for eksempel
anvendes i kombinasjon, delvis eller fullstendig, i tillegg til andre antiinflammatoriske middel. Eksempel på farmasøytiske middel som kan anvendes i
20
kombinasjon med forbindelsene og saltene beskrevet heri, inkluderer TNF-αhemmere, COX-2-hemmere, 5-lipoksygenase-hemmere, reseptorantagonister for
leukotriener, PDE4-hemmere, antihistaminske H1-hemmere, gastrobeskyttende
H2-reseptorantagonister,
hemmere
25
av
insulinlignende
matrisemetalloproteaser,
vekstfaktortype
ikke-steroide
(IGF-1)-mimetika,
anti-inflammatoriske
middel, p38-hemmere, P2X7-hemmere, α2Δ-hemmere, antivirale middel og
andre middel beskrevet på side 32–38 av WO 2004/005229.
F. Anvendelse i fremstillingen av en sammensetning eller et legemiddel
30
I én utførelsesform omfatter den foreliggende oppfinnelsen fremgangsmåter for
fremstilling av en sammensetning eller et legemiddel omfattende forbindelsene
eller saltene ifølge den foreliggende oppfinnelsen for anvendelse i behandling av
en tilstand som medieres av glukokortikoidreseptoraktivitet.
35
I en annen utførelsesform omfatter oppfinnelsen anvendelsen av én eller flere
forbindelser eller salter ifølge den foreliggende oppfinnelsen i fremstillingen av
NO/EP2307375
21
en sammensetning eller et legemiddel for inflammasjon, inflammasjonsrelatert
tilstand, revmatoid artritt, dermatitt, Alzheimers sykdom.
Den foreliggende oppfinnelsen inkluderer også anvendelsen av én/ett eller flere
5
forbindelser eller salter ifølge den foreliggende oppfinnelsen for fremstilling av en
sammensetning eller et legemiddel for behandling av én eller flere tilstander som
er skildret i detalj i avsnittet Fremgangsmåter.
G. Skjemaer
10
Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan fremstilles ved hjelp av
fremgangsmåtene illustrert i de generelle synteseskjemaene og eksperimentelle
prosedyrene som er skildret i detalj nedenfor. Reaksjonene av de syntetiske
fremgangsmåtene heri gjennomføres i egnede løsemiddel som lett kan velges av
15
en fagmann innen organisk syntese, hvor de egnede løsemidlene som regel er et
hvilket
som
helst
løsemiddel
som
er
vesentlig
ikke-reaktivt
med
utgangsmaterialene (reaktantene), mellomproduktene eller produktene ved
temperaturene
hvor
reaksjonene
gjennomføres.
En
gitt
reaksjon
kan
gjennomføres i ett løsemiddel eller en blanding av mer enn ett løsemiddel.
20
Avhengig av det bestemte reaksjonstrinnet kan det velges egnede løsemiddel for
en bestemt reaksjon.
Fremstilling av forbindelser ifølge oppfinnelsen kan innebære beskyttelse og
avbeskyttelse av et antall kjemiske grupper. Behovet for beskyttelse og
25
avbeskyttelse og valget av passende beskyttelsesgrupper kan lett fastsettes av
en fagmann. Beskyttelsesgruppenes kjemiske egenskaper kan for eksempel
finnes i T.W. Greene og P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3.
utg., Wiley & Sons, Inc., New York (1999), som er inkorporert heri ved
henvisning i sin helhet.
30
Reaksjonene kan overvåkes ifølge en hvilken som helst egnet fremgangsmåte av
kjent
teknikk.
Produktdannelse
kan
for
eksempel
overvåkes
spektroskopimiddel, så som kjernemagnetisk resonansspektroskopi (f.eks.
eller
35
13
C), infrarød
spektroskopi, spektrofotometri
ved
1
H
(f.eks. UV-synlig) eller
massespektrometri, eller ved kromatografi så som høytrykks-væskekromatografi
(HPLC) eller tynnsjiktkromatografi.
NO/EP2307375
22
Utgangsmaterialene anvendt heri er enten kommersielt tilgjengelig eller de kan
fremstilles syntetisk gjennom rutinemetoder.
5
De generelle synteseskjemaene presenteres til illustrasjonsformål og er ikke
ment å være begrensende.
10
1(R)-benzyl-5-brom-9(S)-hydro-10(R)-hydroksy-10(R)-metyltrisyklo[7.3.1.02,7]trideka-2,4,6-trien-13-onet med formel A-8 ble fremstilt ved
hjelp av protokollen beskrevet i skjema A, som er generelt beskrevet i WO
00/66522. Ph skildrer fenyl. Bn skildrer benzyl. Forbindelse A-1 kan kjøpes (for
15
eksempel (Sanmar, Vuf, Kingchem). Forbindelse A-2, 6-brom-3,4-dihydro2(1H)-naftalenon (Chem. Abstr. Reg. nr. 4133-35-1), kan fremstilles som
NO/EP2307375
23
beskrevet i Org. Syn. 1971, 51, 109–112. Forbindelse A-3, 1-(6-brom-1,2,3,4tetrahydro-2-naftalenyl)-pyrrolidin (Chem. Abst. Reg. nr. 863925-40-0) som
beskrevet i WO 2007/105053 (McHardy et al.). Forbindelse A-4, 1-[6-brom-3,4dihydro-1-(fenylmetyl)-2-(1H)-naftalenyliden]-pyrrolidiniumbromid
5
(Chem.
Abstr. Reg. nr. 418772-22-2) er også beskrevet i US 2002/0107235 (Liu et al.)
og US-patent nr. 6,852,719 (Liu et al.).
Forbindelsen
10
B-1,7-brom-2-etoksy-3,4,4a,9-tetrahydro-4a-(fenylmetyl)-(4aS)-
fenantren kan fremstilles som beskrevet i europeisk patentsøknad EP 1201649
og EP 1201660 (begge av Liu et al.) og EP 1201665 (Murry et al.).
Fremstilling
1:
(S)-4α-benzyl-7-brom-2-etoksy-3,4,4α,9-
tetrahydrofenantren
15
Utgangsmateriale A-8 (450 g; 1,17 mol) ble oppløst i etanol (4,5 l) ved
20
omgivelsestemperatur. 21 % natriumetoksid i etanol (44 ml; 0,12 mol) ble
tilsatt,
og
blandingen
ble
varmet
til
tilbakeløp
i
tre
timer.
Etter
at
utgangsmaterialet A-8 var fortært, ble reaksjonsblandingen avkjølt til -25 °C.
NO/EP2307375
24
Acetylklorid (250 ml; 3,51 mol) ble sakte tilsatt i blandingen mens temperaturen
ble opprettholdt nær -25 °C. Etter at tilsetningen var fullført, ble blandingen
varmet til 0 °C og holdt der til mellomprodukt-enonet var fortært. Blandingen
var slurry på dette tidspunktet. 21 % natriumetoksid i etanol (1,31 l; 3,51 mol)
5
ble tilsatt i blandingen mens temperaturen ble opprettholdt mellom -5 °C og
5 °C. Dersom blandingen ikke var basisk, ble det tilsatt mer natriumetoksid.
Blandingens temperatur ble økt til 25 °C og deretter fortynnet med vann (5,9 l).
Blandingen
ble
filtrert,
og
faststoffet
ble
vasket
med
vann
(3
x).
1
Tittelforbindelsen (440 g, 85 område-%) ble oppnådd som et beige faststoff. H10
NMR (DMSO) δ ppm: 1,27 (t, 3H), 1,65 (dt, 1 H), 2,06 (d, 1 H), 2,21 (dd, 1 H),
2,49 (m, 1 H), 2,65 (m, 2H), 2,89 (m, 2H), 3,85 (q, 2H), 5,45 (m, 2H), 6,44 (d,
2H), 6,98 (t, 2H), 7,06 (m, 2H), 7,25 (d, 1H), 7,33 (dd, 1H).
Fremstilling
15
2:
(S)-4α-benzyl-7-brom-2,2-(1,2-etylendioksy)-
1,2,3,4,4α,9-heksahydrofenantren
(S)-4α-benzyl-7-brom-2-etoksy-3,4,4α,9-tetrahydrofenantrenen
20
(1270
g;
3,2 mol; 85 område-%, som kan fremstilles som beskrevet i fremstilling 1) ble
oppløst
i
toluen
(6,45 l).
Etylenglykolen
(898 ml;
16,1 mol)
og
p-
toluensulfonsyren (6,1 g; 0,03 mol) ble tilsatt, og reaksjonen varmet til
tilbakeløp. Løsemiddel (1 l) ble destillert fra blandingen og erstattet med ny
toluen (1 l). Denne destillasjonsprosessen ble gjentatt to ganger til. Mer p25
toluensulfonsyre (6,1 g) ble tilsatt hver gang ny toluen ble tilsatt. Under
reaksjonen ble det dannet to mellomprodukter (detektert ved LC) etter som
substratet
ble
likevektspunkt
endepunktet
30
omdannet
mellom
var
nådd,
de
til
produkt.
to
mellomproduktene
ble
blandingen
Reaksjonens
avkjølt
og
til
endepunkt
produktet.
ble
et
Etter
at
omgivelsestemperatur.
Blandingen ble vasket med 0,5 M NaOH (2 l). Fasene ble raskt separert, og
begge ble mørke med et lite rutt lag. Blandingen ble vasket med vann (2 l).
NO/EP2307375
25
Fasene separert svært sakte. Blandingen ble tørket by azeotropisk destillering.
Metanol (4 l) ble tilsatt i blandingen, og løsemiddel (4 l) ble destillert fra
blandingen. Metanoltilsetningen og løsemiddeldestilleringen ble gjentatt to
ganger til. Metanol ble tilsatt i blandingen og utfelling forekom noen minutter
5
senere. Mer metanol (4 l) ble tilsatt i blandingen og deretter brakt til tilbakeløp.
Etter 30 minutter ble blandingen avkjølt til 0 °C. Blandingen ble filtrert, og
faststoffet ble vasket med avkjølt metanol (2 x 2 l). Faststoffet ble tørket i en
vakuumovn ved 65 °C. Tittelforbindelsen (882 g; 98 område-%) ble oppnådd
som et beige faststoff. 1H-NMR (DMSO) δ ppm: 1,71 (m, 2H), 2,06 (m, 2H),
10
2,31 (dd, 1H), 2,39 (m, 1H), 2,68 (d, 1 H), 2,77 (m, 1 H), 2,86 (dd, 1 H), 3,36
(d, 1 H), 3,86 (m, 4H), 5,45 (m, 1 H), 6,50 (m, 2H), 7,00 (m, 4H), 7,37 (dd, 1
H), 7,44 (d, 1 H).
Fremstilling
15
3:
(S)-metyl
4β-benzyl-7,7-(1,2-etylendioksy)-
4β,5,6,7,8,10-heksahydrofenantren-2-karboksylat
(S)-4-benzyl-7-brom-2,2-(1,2-etylendioksy)-1,2,3,4,4,9-heksahydrofenantrenen
20
(719 g; 1,75 mol, som kan fremstilles som beskrevet i fremstilling 2), ble
oppløst i tetrahydrofuran (7,19 l) og avkjølt til -70 °C. 1,6 M n-butyllitiumet i
heksan (2270 ml; 2,27 mol) ble tilsatt i en hastighet slik at temperaturen ble
opprettholdt under -60°C. Blandingen holdt ytterligere 15 minutter etter
tilsetningen. Karbondioksid (108 g; 2,45 mol) ble tilsatt mens temperaturen ble
25
opprettholdt under -60 °C. Blandingen holdt ytterligere 15 minutter etter
tilsetningen. Blandingen ble varmet til omgivelsestemperatur. Løsemiddel (7 l)
ble destillert fra blandingen ved atmosfæretrykk. DMF (7 l) ble tilsatt i
blandingen. Blandingen ble avkjølt til omgivelsestemperatur. Metyljodid (152 ml;
2,45 mol) ble tilsatt, og blandingen ble holdt til reaksjonen var fullført (∼1
30
time). Blandingen ble varmet opp til 70 °C, og løsemiddel ble destillert ved
NO/EP2307375
26
gradvis å redusere trykket til 70 mmHg. Etter at destillering hadde opphørt, ble
blandingen avkjølt til romtemperatur. Vann (6,5 l) ble sakte tilsatt i blandingen
for å utfelle produktet. Prøven ble filtrert og faststoffet vasket med vann (3 x).
Faststoffet ble tørket på filteret. Det ubearbeidede produktet (736 g; 74 område5
%) ble oppnådd som et beige faststoff. Produktet ble renset ved kromatografi.
463 g produkt ble gjenvunnet fra kromatografien. Dette materialet ble separert
fra n-heptan (6130 ml). 394 g av tittelforbindelsen ble gjenvunnet. Ytterligere
70 g tittelforbindelse ble gjenvunnet fra moderluten ved kromatografi. 1H-NMR
(DMSO) δ ppm: 1,74 (m, 2H), 2,10 (m, 2H), 2,33 (dd, 1 H), 2,45 (m, 1 H), 2,72
10
(d, 1 H), 2,79 (m, 1 H), 2,94 (dd, 1 H), 3,40 (d, 1 H), 3,87 (m, 7H), 5,49 (m,
1H), 6,47 (m, 2H), 6,93 (m, 2H), 7,01 (m, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,64 (d, 1H), 7,79
(dd, 1H).
Fremstilling
15
4:
(4βS,8αR)-metyl
4β-benzyl-7,7-(1,2-etylendioksy)-
4β,5,6,7,8,8α,9,10-oktahydrofenantren-2-karboksylat
(S)-metyl 4β-benzyl-7,7-(1,2-etylendioksy)-4β,5,6,7,8,10heksahydrofenantren20
2-karboksylatet (201 g; 0,515 mol, som kan fremstilles som beskrevet i
fremstilling 3) og 50 ml etylenglykol ble oppløst i toluen (2,0 l) i en autoklav. I
dette ble det tilsatt 10 gram av en 5-% Pd/C (tørr katalysator). Autoklaven ble
deretter forseglet og spylt med nitrogen (tre sykluser) etterfulgt av hydrogen
(tre sykluser). Reaksjonen ble kjørt i 18 timer med et trykk på 80 psig og en
25
temperatur på 50 °C. HPLC-analyse for fullføring og selektivitet (typiske
selektiviteter er: 95 til 5, Trans til Cis). Suspensjonen ble filtrert gjennom
Celite® for å fjerne katalysatoren, og toluenløsningen konsentreres ved 50 °C,
under vakuum, til tilnærmet 200 ml. Mens den fortsatt var på 50 °C, ble 1 l 1butanol tilsatt, og løsningen varmet opp til 60 °C, til den ble klar. Etter avkjøling
NO/EP2307375
27
ble den resulterende faste tittelforbindelsen isolert ved vakuumfiltrering (196
gram; 97 %; Trans til Cis 95,75 til 4,24). 1H-NMR (300 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,79
(bs, 1 H, Ar-H), 7,47 (d, J= 9 Hz, 1H, Ar-H), 7,13–7,05 (cm, 3H, Ar-H), 6,56–
6,53 (cm, 2H, Ar-H), 6,43 (d, J= 9 Hz, 1H, Ar-H), 4,04–3,93 (cm, 4H, 2-CH2),
5
3,89 (s, 3H, CH3),3,08–3,03 (cm, 3H, CH2, CH-H), 2,63 (d, J= 15 Hz, CH-H),
2,22–1,72 (cm, 8H, 4-CH2), 1,57 (cm, 1H, CH-H),;
13
CNMR (CDCl3, δ): 167,7,
149,2, 137,7, 136,4, 131,1, 130,5, 127,8, 127,7, 127,4, 126,3, 125,5, 108,9,
64,6, 64,5, 52,1, 40,5, 39,8, 38,3, 35,8, 31,6, 30,3, 27,9, 24,6.
10
Fremstilling
5:
(4bS,8aR)-4b-benzyl-7-okso-4b,5,6,7,8,8a,9,10-
oktahydrofenantren-2-karboksylsyre
15
NO/EP2307375
28
(4βS,8αR)-metyl
4β-benzyl-7,7-(1,2-etylendioksy)-4β,5,6,7,8,8α,9,10-
oktahydrofenantren-2-karboksylat (10 g, 25,5 mmol), IPA (75 ml), og vandig
2 M HCl (25 ml, 51,0 mmol) ble blandet sammen og varmet til tilbakeløp.
Blandingen ble homogen under oppvarmingen. Blandingen ble holdt ved
5
tilbakeløp til ketalet var hydrolysert (omtrent 30–45 min). Reaksjonen stoppet
med omtrent 3 % av ketalet gjenværende. 2,5 M NaOH (40 ml, 101,9 mmol) ble
tilsatt i blandingen, og oppvarmingen fortsatte. Blandingen ble holdt ved
tilbakeløp til esteren var hydrolysert (omtrent 30 min). Vandig 2 M HCl (40 ml)
ble tilsatt, og blandingen ble avkjølt til 40 °C. To væskefaser ble dannet etter
10
som syren ble tilsatt. Såkrystaller ble tilsatt for å innlede krystallisering. Mer
vandig 2 M HCl (40 ml) ble tilsatt 30 minutter etter at krystalliseringen hadde
startet. Blandingen ble avkjølt til 20 °C og holdt i 60 minutter. Blandingen ble
filtrert, og faststoffet ble vasket med vann. Faststoffet ble tørket i en vakuumovn
ved 70 °C. Et blekgult faststoff (7,86 g, 92 % utbytte) ble oppnådd.
15
1
H-NMR
(DMSO): δ 1,50 (m, 1 H), 1,65 (m, 1 H), 1,90 (m, 1 H), 2,05 (m, 1 H), 2,20 (d,
1 H), 2,30 (d, 1 H), 2,40 (dd, 1 H), 2,65 (d, 1 H), 2,80 (d, 1 H), 3,00 (m, 3H),
4,30 (d, 1H), 6,40 (d, 1H), 6,60 (d, 2H), 7,10 (m, 3H), 7,35 (d, 1H), 7,65 (s,
1H), 12,75 (s, 1H).
20
Fremstilling
6:
(4bR,6E,8aR)-4b-benzyl-6-benzyliden-7-okso-
4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2-karboksylsyre
25
(4bS,8aR)-4b-benzyl-7-okso-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2karboksylsyre (6,5 g, 19,44 mmol) ble suspendert i vann (65 ml). 2,5 M NaOH
(11,7 ml,
29,16 mmol)
ble
tilsatt
etterfulgt
av
benzaldehyd
(2,16 ml,
21,38 mmol). Over tid (ved 50 °C i 4 timer eller ved 25 °C over natten) ble
blandingen homogen. Reaksjonen ble betraktet som fullført da det var mindre
NO/EP2307375
29
enn 2 % (4bS,8aR)-4b-benzyl-7-okso-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2karboksylsyre (fremstilling 5) igjen. Blandingen ble avkjølt til 25 °C dersom den
ikke allerede var på 25 °C. EtOAc (65 ml) ble tilsatt i blandingen etterfulgt av
vandig 2 M HCl (29 ml). Krystallisering forekom normalt under syretilsetningen
5
eller kort etter. Blandingen ble omrørt i 60 minutter. Heptan (65 ml) ble tilsatt,
og blandingen ble omrørt i ytterligere 60 minutter. Ikke tenk på å separere ut
den vandige fasen; filtrer hele blandingen og vask faststoffet med vann
etterfulgt av heptan. Et blekgult faststoff (6,55 g, 80 % utbytte) ble oppnådd.
1
H-NMR(DMSO): δ 1,70 (m, 1 H), 1,85 (m, 1 H), 2,45 (m, 3H), 2,65 (d, 3H),
10
2,95 (m, 2H), 3,50 (d, 1H), 6,15 (d, 2H), 6,25 (d, 1H), 6,70 (t, 2H), 6,90 (t,
1H), 7,30 (d, 1H), 7,50 (m, 5H), 7,70 (d, 2H), 12,75 (s, 1H).
Fremstilling 7: (4bR,6E,7S,8aR)-4b-benzyl-6-benzyliden-7-hydroksy-7fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2-karboksylsyre
15
Cerium-(III)-klorid (5,00 g, 20,29 mmol) ble blandet i tetrahydrofuran (50 ml)
ved 50 °C i 16 timer. Reaksjonens temperatur ble overvåket internt med en
20
JKEM. Den resulterende melkeaktige løsningen ble avkjølt til -75 C og kraftig
omrørt. Den kalde slurryen ble dråpevis fylt med fenylmagnesiumbromid (1,0 M i
THF, 19,1 mmol) over 15 minutter og temperaturen opprettholdt under -70 °C.
Løsningen ble holdt ved -73 °C i 15 minutter og en løsning av (4bR,6E,8aR)-4bbenzyl-6-benzyliden-7-okso-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2-
25
karboksylsyre (3,5 g, 8,311 mmol) i tetrahydrofuran (40 ml). ble dråpevis tilsatt
over 20 minutter og reaksjonstemperaturen holdt under -70 °C. HPLC/MS ble
oppnådd og indikerte gjenværende utgangsmateriale. Reaksjonen ble blandet i
ytterligere 3 timer, og en HPLC/MS ble oppnådd, og utgangsmateriale var igjen.
Ytterligere 2 ml benzylmagnesiumbromidløsning (2,0 mmol) ble tilsatt over 10
NO/EP2307375
30
minutter,
og
en
HPLC/MS
oppnådd.
Ytterligere
1 ml
benzylmagnesiumbromidløsning (1,0 mmol) ble tilsatt over 10 minutter, og en
HPLC/MS oppnådd. Løsningen ble blandet i 30 minutter ved -73 °C og fikk varme
seg til 10 °C og deretter avkjølt til 0 °C. Reaksjonen ble bråkjølt ved tilsetningen
5
av mettet vandig KHSO4 dråpevis, og temperaturen holdt under 10 °C. Totalt
50 ml av den mettede løsningen ble tilsatt. Fastformer ble dannet i løsningen og
ble fjernet ved vakuumfiltrering. Filterkaken ble vasket med tetrahydrofuran
(40 ml) og vann (40 ml). Etylacetat (100 ml) ble tilsatt og lagene separert. Det
organiske laget ble vasket med mettet ammoniumklorid (100 ml), tørket over
10
natriumsulfat, og løsemiddel fjernet ved redusert trykk. Det vandige laget ble
kontrollert ved HPLC/MS og inneholdt ikke noe produkt. Resten ble tatt opp i
metanol (15 ml) og vann tilsatt. Løsningen ble melkeaktig og til slutt ble det
dannet en utfelling. Små mengder metanol og vann ble tilsatt for å forbedre
utfellingens
15
kvalitet
og
kvantitet.
Faststoffene
ble
samlet
opp
ved
vakuumfiltrering og lufttørket i omtrent 2 timer. 3,4 gram av tittelforbindelsen
som et lysegult faststoff ble oppnådd med 81 % utbytte. 1H-NMR (400 MHz,
DMSO-d6) d ppm 12,65 (1 H, s), 7,44–7,56 (7 H, m), 7,34–7,39 (2 H, m), 7,30
(2 H, t, J=7,7 Hz), 7,12–7,22 (2 H, m), 6,78 (1 H, t, J=7,4 Hz), 6,50 (2 H, t,
J=7,8 Hz), 6,12 (1 H, d, J=8,3 Hz), 5,86 (2 H, d, J=7,3 Hz), 5,44 (1 H, s), 3,61
20
(1 H, d, J=14,2 Hz), 2,96 (1 H, dd, J=17,6, 7,9 Hz), 2,80–2,91 (1 H, m), 2,66–
2,74 (1 H, m), 2,50–2,65 (2 H, m), 2,08 (1 H, t, J=13,3 Hz), 1,82–1,93 (1 H, m,
J=13,2 Hz), 1,75–1,82 (1 H, m), 1,59–1,74 (2 H, m); LC/MS, tr = 3,77 minutter
(5 til 95 % acetonitril/vann over 5 minutter ved 1 ml/min, ved 254 nm, ved
50 °C).
25
Fremstilling
8:
(4bR,7R,8aR)-4b-benzyl-7-hydroksy-6-okso-7-fenyl-
4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2-karboksylsyre
30
NO/EP2307375
31
(4bR,6E,7S,8aR)-4b-benzyl-6-benzyliden-7-hydroksy-7-fenyl4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2-karboksylsyre (37,7 gram, 75,7 mmol)
ble oppløst i 1200 ml metlylenklorid. Reaksjonen ble avkjølt til -78°C og boblet
gjennom reaksjonsblandingen i 15 minutter. Så ble ozon boblet gjennom
5
blandingen og et blåaktig skjær kom til syne. Ozonet ble boble kontinuerlig
gjennom reaksjonen i 3 timer. HPLC/MS oppnådd etter 1 time og resterende
utgangsmateriale. Ozonfyllingen fortsatte. HPLC/MS oppnådd etter 2 timer
HPLC/MS oppnådd etter 1 time og resterende utgangsmateriale. Ozonfyllingen
fortsatte. HPLC/MS oppnådd etter 3 timer. Forbruket av utgangsmateriale endret
10
seg ikke. Ozonet ble stoppet, og nitrogen ble boblet gjennom reaksjonen til
blåfargen forsvant.
Dimetylsulfid (20 ml) og metanol (20 ml) ble tilsatt, og
reaksjonen varmet til romtemperatur. Løsemiddelet ble fjernet ved redusert
trykk, og den resulterende tykke oljen oppløst i etylacetat (100 ml). Heptan
(100 ml) ble tilsatt i løsningen, og blandingen virvlet. Den resulterende løsningen
15
var litt uklar. Løsningen ble lagret er romtemperatur over natten uten blanding.
Hvite krystaller ble dannet. 5,7 gram av krystallene ble samlet opp HPLC/MS og
1 H-NMR ble oppnådd. Løsemiddelet ble fjernet fra moderlutene. 44 gram av en
oransjebrun olje ble oppnådd. Oppnådd HPLC/MS. Moderluten ble renset ved å
benytte forberedende omvendt fase-kromatografi for å avgi ytterligere 22 g av
20
tittelforbindelsen for en total gjenvinning på 27,5 g med 85 % utbytte. MH+
[m/z] 501 M+Na [m/z] 523 ; 1 H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 2,00 (s, 4 H)
2,10–2,21 (m, 3 H) 2,51 (q, 3 H) 2,73–2,85 (m, 4 H) 2,96–3,10 (m, 3 H) 6,15
(dd, 1 H) 6,60 (dd, 2 H) 7,09–7,15 (m, 3 H) 7,25 (d, 1 H) 7,30 (d, 1 H) 7,34–
7,40 (m, 4 H) 7,69 (s, 1 H).
25
Fremstilling 9: (4bR,7R,8aR)-4b-benzyl-7-hydroksy-N-(2-metylpyridin3-yl)-6-okso-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2karboksamid
30
NO/EP2307375
32
(4bR,7R,8aR)-4b-benzyl-7-hydroksy-6-okso-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10oktahydrofenantren-2-karboksylsyre
(21 g,
49,2 mmol),
3-amino-2-pikolin
(5,8 g, 52,2 mmol) og 1-metylimidazol (20 ml, 246.2 mmol) ble oppløst i vannfri
5
acetonitril
(105 ml).
1-propanfosfonsyre
syklisk
anhydrid
(50
vekt-%
i
etylacetat) (47 ml, 78.8 mmol) ble sakte tilsatt for å regulere den milde
eksoterme reaksjonen. Blandingen ble omrørt ved 25 °C til reaksjonen ble
fullført (mindre enn en time). Etylacetat (86 ml) ble tilsatt i blandingen.
Blandingen ble vasket med vann (4 x 100 ml). Den organiske fasen ble tørket
10
med MgSO4 og konsentrert til tørr tilstand. Tittelproduktet (22,3 g, 89 %
utbytte) ble oppnådd som et lysegult skum. 1H-NMR (DMSO): δ 1,95 (m, 2H),
2,10 (m, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,75 (m, 3H), 3,0 (d, 1H), 3,05 (m, 2H), 5,70 (s,
1H), 6,15 (d 1H), 6,60 (m, 2H), 7,10 (m, 3H), 7,25 (m, 2H), 7,30 (m, 5H), 7,65
(d, 1H), 7,70 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 9,85 (s, 1H).
15
Fremstilling 10: (4bR,6R,7R,8aR)-4b-benzyl-6,7-dihydroksy-6-metyl-N(2-metylpyridin-3-yl)-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2karboksamid
20
I en flammetørket 50 ml rundbunnet kolbe ble (4bR,7R,8aR)-4b-benzyl-7hydroksy-N-(2-metylpyridin-3-yl)-6-okso-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10oktahydrofenantren-2-karboksamidet (0,28 g, 0,54 mmol) tilsatt i en
25
THF
(5 ml). Løsningen ble avkjølt til -17°C i et is-/acetonbad. I reaksjonen ble det
tilsatt
MeLi*LiBr
(0,1 ml).
Etter
1
time
indikerte
LCMS
at
det
var
utgangsmateriale igjen, så ytterligere 0,15 ml ble tilsatt. Reaksjonen omrørt til
romtemperatur over 2 timer. Ved HPLC var 2,5 % av utgangsmaterialet igjen. I
reaksjonen ble det sakte tilsatt NH4Cl, og avgassing ble observert. Reaksjonen
30
ble fortynnet til 125 ml med acetonitril og vann. Reaksjonen ble renset ved
NO/EP2307375
33
omvendt fase-kromatografi og ble deretter frysetørket. Det resulterende tørkede
pulveret ble oppløst i acetonitril og vann igjen med to dråper konsentrert HCl.
Løsningen ble frysetørket til tørr tilstand. Dette avga tittelproduktet (231,4 mg)
som HCl-saltet med 73 % utbytte. LRMS ES+ 533,1 1 H-NMR (300 MHz,
5
METANOL-d4) δ ppm 1,23–1,28 (m, 3 H) 1,53–1,62 (m, 1 H) 1,90–2,20 (m, 3 H)
2,70–2,74 (m, 3 H) 2,84 (d, J=14,90 Hz, 1 H) 2,92–3,22 (m, 2 H) 3,28–3,40
(m, 4 H) 3,91 (d, J=12,08 Hz, 1 H) 6,50 (d, J=8,26 Hz, 2 H) 6,84–6,92 (m, 2 H)
6,99–7,10 (m, 3 H) 7,13–7,29 (m, 3 H) 7,45 (dd, J=8,15, 1,91 Hz, 1 H) 7,56–
7,65 (m, 2 H) 7,77 (d, J=1,81 Hz, 1 H) 7,88 (dd, J=8,26, 5,84 Hz, 1 H) 8,51–
10
8,63 (m, 2 H).
Eksempel 1: (4bR,6R,7R,8aS)-4b-benzyl-6,7-dihydroksy-6-metyl-N-(2metylpyridin-3-yl)-10-okso-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10oktahydrofenantren-2-karboksamid
15
En
prøve
faststoff
(4bR,6R,7R,8aR)-4b-benzyl-6,7-dihydroksy-6-metyl-N-(2-
metylpyridin-3-yl)-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-220
karboksamid (2200 mg, 4,130 mmol) ble oppløst ved romtemperatur løsning i
metylenklorid (10 ml) og metanol (100 ml). Denne resulterende løsningen ble
behandlet med en 10 ml løsning av 2 N HCl i MeOH og ble omrørt i ytterligere 10
minutter. Reaksjonsløsningen ble undersøkt visuelt på dette tidspunktet for å
sikre at alle faststoffer var oppløst, og ble deretter avkjølt til -78°C. Den avkjølte
25
løsningen
ble
behandlet
med
en
jevn
strøm
av
ozon
(5 cc
gjennomstrømningsmengde, generert ved hjelp av en Azcozon-generator, AZCO
Industries Ltd., modell # RMU16-8 med O2-trykk satt til 30 psi). Etter fem timer
med
konstant
ozonstrøm
var
reaksjonen
nesten
fullstendig
for
ønsket
tittelforbindelse ved LCMS-analyse (M+H LRMS 547,2 amu). Løsningen hadde
NO/EP2307375
34
antatt en dypblå farge. Den kalde reaksjonsløsningen ble spylt med nitrogen i 5
minutter for å få mesteparten av ozonet til å forsvinne, og reaksjonen antok en
signifikant mindre blå farge. På dette tidspunktet ble 20 ml diemetylsulfid tilsatt
på en måte som ikke hevet den indre reaksjonstemperaturen over -70 C. Dette
5
ble etterfulgt av fjerning av kjølebadet, og reaksjonen fikk varme seg i sitt eget
tempo til romtemperatur (1 time), og ble opprettholdt ved denne temperaturen i
ytterligere 3 timer. På dette tidspunktet ble reaksjonsløsningen konsentrert til en
rest og oppløst i 25 ml THF, og deretter ble den resulterende THF-løsningen
direkte utsatt for C-18 omvendt fase-kromatografi (15 minutters gradientkjøring,
10
5%
acetonitril-mobilfase
resulterende
til
tittelforbindelsen
95 %
ble
acetonitril-mobilfase
filtrert
gjennom
en
og
vann).
Den
utvekslingsharpiks
(StratoSphere SPE, PL-HCO3 MP-Resin, produktnummer 3540-C603) for å fjerne
eventuelle TFA-salter og tilveiebringe tittelproduktet som sin morforbindelse. Det
resulterende faststoffet ble krystallisert ved følgende prosedyre: Faststoffet ble
15
oppslemmet med MeOH (7 ml), faststoffene ble samlet opp etter 1 time og
vasket med ytterligere 2 ml MeOH for å levere tittelforbindelsen 1802 mg, 79 %.
Analytiske data som følger: 1H-NMR (500 MHz, D6 DMSO) δ ppm 1,18 (s, 3 H)
1,51 (dd, J=12,66, 1,96 Hz, 1 H) 1,99 (d, J=14,96 Hz, 1 H) 2,40 (dd, J=18,88,
4,85 Hz, 1 H) 2,43–2,49 (m, 1 H) 2,49 (br, s,, 3 H) 2,56 (t, J=12,82 Hz, 1 H)
20
2,61 (d, J=12,53 Hz, 1 H) 2,75 (d, J=15,12 Hz, 1 H) 2,92 (dd, J=18,59, 12,74
Hz, 1 H) 4,05 (d, J=12,45 Hz, 1 H) 6,65 (d, J=8,27 Hz, 1 H) 6,79 (dd, J=7,69,
1,59 Hz, 2 H) 7,05–7,13 (m, 3 H) 7,15–7,21 (m, 1 H) 7,25 (t, J=7,69 Hz, 2 H)
7,49 (dd, J=7,94, 5,10 Hz, 1H) 7,62 (dd, J=7,44, 1,25 Hz, 2 H) 7,87 (dd,
J=8,23, 2,13 Hz, 1H) 8,01 (dd, J=7,78, 1,00 Hz, 1 H) 8,46 (dd, J=5,01, 1,50 Hz,
25
1 H) 8,54 (d, J=2,09 Hz, 1 H) 10,18–10,58 (m, 1 H, NH). Avhengig av
vanninnholdet av DMSO, kan to OH-protoner være synlige ved 4,78 og 5,44
ppm. HRMS m/z 547,2619 (C35H35N2O4: beregnet for M+H, 547,2591).
I. BIOLOGISKE DATA
30
Lipopolysakkarid (LPS)-indusert humant fullblod
Veneblod fra humane donorer ble samlet opp som 10 ml alikvoter i rør
inneholdende
35
natriumheparin
(BD
Vacutainer
fra
Becton
Dickinson
and
Company, Franklin Lakes, USA). Blod ble tilsatt i sterile rundbunnede 96-brønns
vevskulturplater av polystyren (Corning Costar) med 180 µl/brønn. Blod ble satt
NO/EP2307375
35
i en fuktet 37 C inkubator med 5 % CO2 mens forbindelser ble fremstilt (nær 60
minutter).
Forbindelser ble fremstilt fra 10 mM bruksløsninger i dimetylsulfoksid (DMSO,
5
Sigma-Aldrich). Bruksforbindelse ble fortynnet i DMSO for å gi passende
utgangskonsentrasjon,
deretter
seriefortynnet
1/3
i
DMSO
(dvs.
15 µl
forbindelse + 30 µl DMSO), etterfulgt av fortynning av hver seriefortynning
1/167 til vehikkelløsning (2 % DMSO i fosfatbufret saltløsning (Dulbeccos
fosfatbufret saltløsning uten kalsiumklorid uten magnesiumklorid, Invitrogen
10
Corporation, Carlsbad USA)). Forbindelse eller vehikkel ble tilsatt i blod i 10 µl
alikvoter som triplikater, og de ytterste brønnene ble utelatt for å minimere
mulige kanteffekter. De høyeste sluttkonsentrasjonene av hver forbindelse i
assayet gikk fra 3 til 0,3 µM. Endelig DMSO-konsentrasjon i assayet var 0,1 %.
Platen inneholdende prøvene ble forsiktig vortekset for å blande, og erstattet i
15
inkubatoren. LPS-bruksmateriale (E.-coli serotype 0111:B4, Sigma-Aldrich),
lagret i alikvoter på 100 µg/ml i RPMI ved -20°C, ble fortynnet 1/50 i RPMI for å
danne en fungerende bruksløsning. Etter 60 minutters inkubering ble 10 µl av
det fremstilte LPS-arbeidsmaterialet tilsatt i blodet til en sluttkonsentrasjon på
100 ng/ml. Brønner som skulle brukes som negativ kontroll mottok RPMI-
20
medium uten LPS. Platen ble igjen forsiktig vortekset, og platene ble inkubert
over natten i 22 timer. Etter inkubering ble blodet sentrifugert ved1500 x g i 5
minutter, og plasmaen ble fjernet enten til frysing ved -20°C eller assay med
hensyn til cytokinfrisetting.
25
Måling og analyse av cytokinfrisetting
IL-1β-, IFNγ- og TNFα-proteinnivåer ble målt ved hjelp av Meso Scale assay-sett
(Meso
Scale
Discovery,
Gaithersburg,
USA).
Reagenser
fikk
komme
til
romtemperatur. Meso Scale-plater ble blokkert med 150 µl Meso Scale Block B30
fortynner, ved forsiktig risting ved romtemperatur i 60 minutter. Plater ble
vasket 3x med vaskebuffer (PBS, Invitrogen Corporation, med 0,05 % Tween20, Sigma-Aldrich). Kalibratrorer for standardkurver ble fremstilt i human
plasma-/serumassayfortynner
som
en
1/5
seriefortynning
for
å
oppnå
sluttkonsentrasjoner som går fra 50000 pg/ml til 3,2 pg/ml. Prøver ble tilsatt
35
med 10 til 20 µl/brønn, og kalibratorer ble tilsatt med 20 µl/brønn, deretter
inkubert ved romtemperatur med forsiktig risting i 2 timer. Plater ble igjen
NO/EP2307375
36
vasket 3x med vaskebuffer. Deteksjonsantistoff ble fortynnet i human plasma/serumantistoffortynner til 1 µg/ml og tilsatt i platen med 20 µl/brønn. Plater ble
inkubert som før i 2 timer og vasket igjen. Lesebuffer T (4x) ble fortynnet 1:1
med mqH2O til 2x konsentrasjon og 150 µl tilsatt i hver brønn. Plater ble avlest
5
på SECTOR Imager 6000 (Meso Scale Discovery) for å generere råsignalverdier.
Individuelle prøvesignalverdier ble sammenlignet med positive og negative
kontroller (henholdsvis vehikkelbehandlet blod med LPS og vehikkelbehandlet
blod uten LPS) for å generere hemmings-%. Det ble beregnet gjennomsnitt av
10
triplikatverdiene for hver donor. Det ble beregnet gjennomsnitt og dannet grafer
av verdiene for tre eller fire donorer ved hjelp av 4-parameters justerte kurver i
LabStats programtillegget for Microsoft Excel.
Prednisolon ble oppnådd fra Sigma-Aldrich (Saint Louis, USA).
15
Tabell 1. Gjennomsnittlige hemmingsverdier for prednisolon
Konsentrasjon (nM)
IFNγ
TNFα
IL-1β
(hemmings-%)
(hemmings-%)
(hemmings-%)
1000
96,41887
90,42849
91,81285
333,3333
94,80171
86,9239
87,6417
111,1111
85,21585
67,08184
61,87842
37,03704
70,72071
49,23688
36,70005
12,34568
34,71695
19,56738
7,168145
4,115226
25,24299
8,949503
0,83998
1,371742
9,7537
6,36281
-1,2607
0,457247
1,188799
2,756104
-0,57073
Tabell 2. Gjennomsnittlige hemmingsverdier for eksempel 1
Konsentrasjon (nM)
IFNγ
TNFα
IL-1β
(hemmings-%)
(hemmings-%)
(hemmings-%)
300
72,90548
42,80632
38,01507
100
72,50547
42,18648
37,61988
NO/EP2307375
37
Konsentrasjon (nM)
IFNγ
TNFα
IL-1β
(hemmings-%)
(hemmings-%)
(hemmings-%)
33,33333
66,18697
30,67716
26,41755
11,11111
50,99181
18,11116
15,35196
3,703704
26,94135
7,08568
5,139857
1,234568
18,37372
0,8113
1,175317
0,411523
15,63071
-3,618
-1,0797
0,137174
-3,92851
0,604014
-0,93988
Sammenligner A er (4βS,7S,8αR)-4β-benzyl-7-hydroksy-N-((2-metylpyridin-3yl)metyl)-7-(3,3,3-trifluorpropyl)-4β,5,6,7,8,8α,9,10-oktahydrofenantren-25
karboksamid, hvis syntese er beskrevet som eksempel nr. 771C-3 på side 241
av WO 00/66522 (Dow et al.), og har følgende struktur:
Følgende komparative forbindelser, sammenligner B, C og D, kan fremstilles ved
10
fremgangsmåter beskrevet heri, fremgangsmåter som er kjente i teknikken, og
skjema D, nedenfor.
NO/EP2307375
38
(4bR,6R,7R,8aR)-4b-benzyl-N-(6-brom-2-metylpyridin-3-yl)-6,7dihydroksy-6-metyl-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2karboksamid
5
(4bR,6R,7R,8aR)-4b-benzyl-6,7-dihydroksy-6-metyl-N-(2-metylpyridin10
3-yl)-7-(pyridin-2-yl)-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2karboksamid
15
(4bR,6R,7R,8aR)-4b-benzyl-6,7-dihydroksy-6-metyl-7-fenyl-N-(pyridin3-ylmetyl)-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2-karboksamid
NO/EP2307375
39
Følgende komparative forbindelse, sammenligner E, kan fremstilles ved generelle
fremgangsmåter som er kjente i teknikken, og reaksjonsskjema E nedenfor.
5
(4bR,6R,7S, 8aR)-4b-benzyl-6,7-dihydroksy-6-metyl-N-(2-metylpyridin3-yl)-7-(trifluormetyl)-4b,5,6,7,
karboksamid
10
8,
8a,9,10-oktahydrofenantren-2-
NO/EP2307375
40
Sammenligner F er (2R, 3S, 4aR, 10aR)-4a-benzyl-2-fenyl-1,2,3,4,4a,9,10,10aoktahydrofenantren-2,3,7-triol, hvis syntese er beskrevet som eksempel 30 på
5
side 106 av internasjonal patentsøknad WO 2004/005229 (Chantigny et al.) og
har følgende struktur:
Sammenligner
10
G
er
(2R,
3S,
4aR,
10aR)-4a-benzyl-7(2-metyulpyridin-3-
ylmetoksy)-2-fenyl-1,2,3,4,4a,9,10,10a-oktahydrofenantren-2,3-diol,
syntese
er
beskrevet
som
eksempel
32
på
side
107
av
internasjonal
patentsøknad WO 2004/005229 (Chantigny et al.) og har følgende struktur:
15
hvis
NO/EP2307375
41
Tabell 3. Gjennomsnittlige hemmingsverdier for sammenligner A
Konsentrasjon
IFNγ
TNFα
IL-1β
IL-6
(hemmings-
(hemmings-
(hemmings-
(hemmings-
%)
%)
%)
%)
3000
28,02163
-3,03631
16,37219
-1,97032
1000
16,52981
-5,43701
14,96801
-0,88954
333,3333
-6,31952
-4,61436
12,23526
-2,8341
111,1111
8,737671
-3,82374
8,59594
-3,49518
37,03704
-9,80677
-4,19291
17,27236
-3,52461
12,34568
0,016012
0,030908
22,84851
-1,12581
4,115226
-1,69672
-0,86051
22,01534
-4,3436
1,371742
18,09167
18,1316
31,97474
1,459164
(nM)
Tabell 4. Gjennomsnittlige hemmingsverdier for sammenligner F
Konsentrasjon (nM)
5
IFNγ
TNFα
IL-1β
(hemmings-%)
(hemmings-%)
(hemmings-%)
3000
21,95778
3,808591
3,308508
1000
14,6234
4,138398
0,21981
333,3333
-3,30077
-3,43225
-2,45189
111,1111
-4,60435
-6,35337
-4,59067
37,03704
-13,3589
-4,22595
-6,15082
12,34568
-8,35374
-6,79409
-5,49194
4,115226
-15,284
-8,12294
-6,1571
1,371742
-12,4462
-2,51053
-4,16143
NO/EP2307375
42
Tabell 5. Gjennomsnittlige hemmingsverdier for sammenligner G
Konsentrasjon (nM)
IFNγ
TNFα
IL-1β
(hemmings-%)
(hemmings-%)
(hemmings-%)
3000
41,3796
16,28448
15,47551
1000
13,20202
-8,47459
-1,19319
333,3333
2,019883
-13,7986
-6,75215
111,1111
2,655063
-8,76041
-5,37397
37,03704
-2,5794
-13,8733
-7,35195
12,34568
-9,15435
-14,0438
-7,52021
4,115226
12,82205
-2,89901
-2,63902
1,371742
16,69609
3,216606
-0,11505
Eksempel 1, sammenligner F, sammenligner G og prednisolon er alle ligander av
5
glukokortikoidreseptoren,
hver
enkelt
gir
imidlertid
en
distinkt
profil
i
hemmingen av cytokiner fra ex vivo LPS-stimulert humant fullblod. Prednisolon,
en fullstendig GR-agonist, demonstrerer fullstendig hemming av IFN, TNF og IL1. Eksempel 1 hemmer også cytokinfrisetting på en konsentrasjonsavhengig
måte. Da eksempel 1 er en delagonist/-antagonist, viser den ikke hemming i
10
samme grad som prednisolon. Dessuten er hemmingsnivået som observeres for
eksempel 1 ulikt mellom cytokinene som måles, det vil si, IFN = 73 %, TNF
= 43 %
og
IL-1
= 38 %.
I
motsetning
til
eksempel
1,
hemmer
ikke
sammenligner F og sammenligner G TNF eller IL-1 signifikant (mindre enn 20 %
ved 3000 nM), og viser en svært mye mindre effektiv hemming av IFN (kun
15
henholdsvis 22 % eller 41 % hemming ved 3000 nM). Således, selv om
eksempel 1, sammenligner F, sammenligner G og prednisolon binder til den
samme reseptoren, demonstrerer de markert ulike aktiviteter.
IN VIVO-DATA
20
Kollagen-indusert artritt hos mus (mouse collagen-induced arthritis,
mCIA)
NO/EP2307375
43
Kollagen-indusert artritt hos mus er en alminnelig anvendt kronisk, preklinisk
modell av revmatoid artritt i hvilken hevelser i ledd og ødeleggelse av ben
forekommer
5
etter
immunisering
med
type
II-kollagen.
Reduksjon
av
sykdomsforekomst og alvorlighet har tidligere vist seg å være prediktiv for
henholdsvis sykdomsmodifikasjon og lindring av tegn og symptomer, i en klinisk
sammenheng.
I den terapeutiske mCIA-modellen ble induksjon av sykdomsforekomst og -
10
alvorlighet synkronisert via LPS-stimulering. DBA/J-hannmus ble immunisert
med 100 ug bovint type II-kollagen (bCII) på dag 0. Alle mus fikk en
intraperitoneal injeksjon på 20 µg LPS på dag 28, og sykdom fikk utvikle seg til
og med dag 34. På dag 34 hadde alle musene sykdom (forekomst = 100 %)
med en gjennomsnittlig alvorlighetsscore på sju. Dosering av forbindelser ble
15
innledet i teraptutisk modus på dag 34, og fortsatte til og med dag 49. Ulike
behandlinger ble sammenlignet ved å måle reduksjonen i forekomst (dvs.
resolution av sykdom) og reduksjonen i alvorlighet av potehevelse over tid.
28-dagers musemodell av bivirkninger
20
10–12 uker gamle Swiss Webster-hunnmus (Taconic, Germantown, USA.) som
veier 27–29 gram anvendes i samsvar med retningslinjene til Institutional
Animal Care and Use Committee og i samsvar med NIH-retningslinjene for
forsøksdyrevelferd. Mus akklimatiseres til Pfizer-dyrefasilteten i 3–7 dager før de
25
plasseres på studien. Prednisolon- og DAGR-forbindelser administreres ved oral
tvangsfôring i totalt 28 dager. Hver behandlingsgruppe inneholder generelt 8–10
mus. For å etablere et doseringsregime for studiene, gjennomføres et pilotforsøk
med hensyn til farmakodynamisk tidsforløp for å kvantifisere TNFa-undertrykking
etter
30
en
enkelt
ED80-dose
(bestemt
fra
musemodellen
for
akutt
LPS-
endotoksemi). For å undertrykke TNFa signifikant over en 24-timers periode, ble
det bestemt at prednisolon krevde dosering b.i.d. DAGR-forbindelser varierer
med hensyn til sin nødvendige dosefrekvens.
Kroppsvekt måles på den første og siste dagen av hvert forsøk. Blodprøver
35
oppnås etter ∼3 uksers dosering for farmakokinetisk steady-state-analyse. For å
vurdere forbindelseseffekter på LPS-indusert TNF-a, mottar alle mus en
NO/EP2307375
44
intraperitoneal injeksjon av LPS (Salmonella Typhosa, Sigma, St. Louis, L-7895)
2,5 t etter den siste dosen på dag 28. Mus avlives 90 min. etter LPSadministrering. Serumprøver analyseres for osteokalsin og TNFa ved hjelp av
Linco-multipleksassay (St. Charles, USA) og Luminex 100 (Austin, USA). Prøver
5
fortynnes
1:20,
og
assayet
kjøres
ifølge
produsentens
instrukser.
En
osteokalsinstandard er kjøpt separat fra Biomedical Technologies Incorporated
(Stoughton, USA). Seruminsulin måles for å vurdere forbindelseseffekter på
insulinresistens. Insulin ble målt ved hjelp av UltraSensitive Mouse EIA-sett fra
Alpco Diagnostics (Salem, USA) i henhold til produsentens protokoll.
10
Histomorfometri av kortikalt ben
Under
i-live-delen
av
hver
studie
fikk
mus
to
IP-injeksjoner
av
fluorkromkalseinet (C-0875; Sigma-Aldrich; 20 mg/kg; 200 µl/mus), oppløst i
15
2 % natriumbikarbonat, på dag 1 og 26 for histomorfometriske benmålinger.
Fluorkrommerker
inkorporeres
i
benmineralet
og
tillater
måling
av
bendannelseshastigheten. Under høstingen av vevet skjæres venstre skinneben
ut og rengjøres for kortikale histomorfometriske målinger. Etter at all hud og
muskel er fjernet, plasseres skinneben i 70 % etanol (4 °C) i mørke i minimum
20
24 timer.
Malte tverrsnitt anvendes for histomorfometrisk analyse av kortikalt ben1. Ben
skjæres ved hjelp av en lavhastighetssag (Isomet, Buehler, Lake Bluff, USA)
utstyrt med et diamantskiveblad. Enden av hvert skinneben fjernes proksimalt
25
for skinneben-leggben-synostose, og et 75 mm tverrsnitt kuttes. Ved hjelp av en
rugjort glassplate og en kork, males stykkene til -25 mm til de er gjennomsiktige
og
alle merkene kan
skjelnes under et
fluorescensmikroskop.
Stykkene
dehydreres ved hjelp av følgende løsninger i minimum 2 minutter hver: 1) 70 %
etanol, 2) 95 % etanol, 3) 100 % etanol, 4) 50/50 etanol/xylen, og 5) xylen (to
30
ganger) (Sigma, St. Louis, 534056). Stykkene monteres ved hjelp av Eukitt
Quick Mounting Medium (Sigma, St. Louis, 03989) og får dekkglass på. Ved
hjelp av programmet Osteomeasure Bone Analysis Program (Decatur, Georgia,
USA),
beregnes
fluorescensmerket
35
bendannelseshastigheten
i
tillegg
til
å
spore
ved
benets
å
spore
indre
og
det
ytre
1.
og
2.
omkrets.
Bendannelseshastighet beregnes ved følgende ligning: (bredde mellom merker /
NO/EP2307375
45
merkeintervall) * (merket omkrets / benomkrets). Minst 5 prøver måles fra hver
behandlingsgruppe i hver studie.
Standard- og prøvefremstilling for PK-analyse og LC/MS/MS-systemet
5
Nivåer av kortikosteron, prednisolon og forbindelseare måles i alle serumprøver.
Følgende standarder fremstilles i kontrollmuseserum fra en bruksløsning i DMSO:
5,
2,5,
1,25,
0,3125,
0,078,
0,0195,
0,00488,
0,00122,
0,00305,
0,000076 µg/ml. 30 µl serumprøver (ukjente prøver og std serumprøver)
10
overføres til en ny 96-brønns plate. Acetonitril (170 ml, inneholdende 1 µM
tolbutamid som intern std) tilsettes for å utfelle serumet og tilveiebringe den
interne standarden for MS/MS-analyse. Platen sentrifugeres i 5 min ved
4000 rpm, 25 °C. Nitti µl supernatant overføres for injeksjon, og 5 µl ble injisert
i LC/MS/MS-systemet for analyse. Konsentrasjoner under kvanfiseringsgrensen
15
(limit of quantitation, LOQ) er rapportert som null (0) og anvendes i
evalueringen av gjennomsnittskonsentrasjoner og estimeringen av AUC. Område
under konsentrasjon-tidskurven fra nulltidspunktet til tidspunktet for siste
kvantifiserbare konsentrasjon (t) [AUC(0-t)] bestemmes ved hjelp av lineær
trapesmetode.
20
Statistisk evaluering
ED50- og ED80-verdier oppnås for de ulike parameterne ved hjelp av fireparameters logistiske justeringer av data. For hver forsøks-/dosegruppe,
25
detekteres sterkt avvikende verdier ved å beregne antallet standardavvik hver
mus' verdi var fra gjennomsnittet av sin gruppe, og deretter dividere med
gruppens standardavvik. Gjennomsnitt- og standardavvikene som anvendes i
denne beregningen, utelot verdien som ble undersøkt, slik at den ikke ville ha
noen innvirkning dersom den skulle være en sterkt avvikende verdi. Dersom
30
verdien som undersøkes er mer enn 2,5 standardavvik fra gjennomsnittet, ble
den ikke anvendt i resten av beregningene.
Hemmingsprosentverdiene beregnes deretter for hvert dyr ved hjelp av
gjennomsnittene
35
individuelle
av
vehikkel-
og
10 mpk
musehemmingsprosentverdiene
prednisonkontrollgruppene.
justeres
deretter
til
en
De
fire-
NO/EP2307375
46
parameters logistisk modell ved hjelp av AUC-gjennomsnittet for hver gruppe.
Siden alle fire parameterne er estimater og det nedre platået ikke er satt til 0 %
og det øvre platået ikke var satt til 100 %, beregnes ED50- og ED80-verdier ved
hjelp av en omvendt kalibreringsformel for en respons lik 50 % eller 80 %.
5
Betegnelsen "nd" betyr ikke bestemt (not determined).
Terapeut Terapeut
Forbindels isk mCIA isk mCIA
ens navn
(ED50-
(ED80-
dose)
dose)
Eksempel 1 0,3
1,61
Sammenlig
ikke
ikke
ner B
angitt
angitt
0,8
2,9
Sammenlig
ikke
ikke
ner D
angitt
angitt
0,13
1,15
Sammenlig
ner C
Sammenlig
ner E
Forbindelsens
navn
Eksempel 1
Sammenligner B
TNFα-
TNFα-
suppres suppresj inon
suppresji suppresji
(ED50-
(ED50-
on (ED50- on (ED80-
dose)
dose)
dose)
dose)
0,029
0,11
0,081
0,35
0,083
0,45
0,21
0,97
3,08
9,87
3,68
> 20
11,40
14,48
> 60
> 60
>1
>1
0,78
>1
Insulin
BFR (ED80-dose)
dose)
0,12
ikke
angitt
sin-
jon
BFR
(ED50-
Osteokals Osteokal
(ED50dose)
Insulin
dose)
0,87
1,28
5,89
ikke angitt
1,04
7,58
Sammenligner C
3,72
7,88
> 20
> 20
Sammenligner D
35,86
> 60
> 60
> 60
Sammenligner E
0,28
0,33
>1
>1
DISSOSIASJONSINDEKS
(ED50-
NO/EP2307375
47
En dissosiasjonsindeks (DI) ble valgt som et mål for å kvantifisere dissosiasjonen
av forbindelser i forhold til dissosiasjonen av prednisolon med hensyn til
biomarkører for anti-inflammatorisk effekt og bivirkninger. Dissociation indices
ble beregnet ved hjelp av klinisk relevante biomarkører som kunne benyttes i
5
tidlig klinisk utvikling. Serum-osteokalsin og LPS-indusert serum-TNFα er klinisk
akseptert å være prediktive for henholdsvis bendannelse og anti-inflammatorisk
effekt.
Dissosiasjonsindeksen ble basert på følgende prinsipper:
10
1) Dissociation krevde en dosemargin mellom biomarkører for inflammasjon og
bivirkninger [så som osteokalsin (OC), insulin eller bendannelseshastighet], og
ble definert ved formelsen, ved hjelp av osteokalsinsuppresjon (OC) som
eksempel på bivirkning:
15
For eksempel:
2) En forbindelses DI kan vurderes i forhold til den som observeres for
prednisolon,
som
er
dens
kliniske
sammenligner.
Den
korrigerte
eller
normaliserte DI ble definert som forbindelsens DI dividert med prednisolons DI.
20
Dissosiasjonsindeks
OC/TN OC/TN
Forbindelsen F
F
s navn
(ED50-
(ED80-
dose)
dose)
2,8
3,2
2,5
2,2
1,2
> 5,3
Eksempel 1
Sammenligne
rB
Sammenligne
rC
Sammenligne
BFR/TN BFR/TN Insulin/TN Insulin/TN
F (ED50- F (ED80- F
(ED50- F
(ED80-
dose)
dose)
dose)
dose)
4,1
7,9
44,1
5,5
ikke
ikke
angitt
angitt
12,5
16,8
>2
1,2
0,8
> 6,5
>2
> 4,1
3,1
> 4,1
> 5,3
> 4,1
NO/EP2307375
48
OC/TN OC/TN
Forbindelsen F
F
s navn
(ED50-
(ED80-
dose)
dose)
< 0,8
<1
BFR/TN BFR/TN Insulin/TN Insulin/TN
F (ED50- F (ED80- F
dose)
dose)
< 0,3
< 0,3
(ED50- F
dose)
(ED80-
dose)
rD
Sammenligne
rE
Kan
ikke Kan
beregnes
ikke
beregnes
Korrigert dissosiasjonsindeks
OC/TN OC/TN
Forbindelsen F
F
s navn
(ED50-
(ED80-
dose)
dose)
3,1
1,6
2,8
1,1
1,3
Eksempel 1
Sammenligne
rB
Sammenligne
rC
Sammenligne
rD
Sammenligne
rE
5
BFR/TN BFR/TN Insulin/TN Insulin/TN
F (ED50- F (ED80- F
(ED50- F
(ED50-
dose)
dose)
dose)
dose)
5,1
6,1
4,8
11,1
ikke
ikke
angitt
angitt
1,4
3,5
>2
1,5
0,6
> 0,7
> 0,4
> 5,9
> 2,1
3,9
> 3,2
> 0,6
> 0,9
< 0,9
< 0,5
< 0,4
< 0,2
Kan
ikke Kan
beregnes
ikke
beregnes
NO/EP2307375
49
Patentkrav
1. Forbindelse med formel I:
eller salt derav.
5
2. Forbindelsen ifølge krav 1, hvori forbindelsen er (4bR,6R,7R,8aS)-4b-benzyl6,7-dihydroksy-6-metyl-N-(2-metylpyridin-3-yl)-10-okso-7-fenyl4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2-karboksamid;
eller
et
farmasøytisk
akseptabelt salt derav.
10
3. Kalsiumsaltet av forbindelsen ifølge krav 2.
4. Natriumsaltet av forbindelsen ifølge krav 2.
15
5. Sammensetning omfattende forbindelsen ifølge krav 1 eller salt derav og en
farmasøytisk akseptabel bærer.
6. Sammensetning ifølge krav 5 omfattende en farmasøytisk effektiv mengde
(4bR,6R,7R,8aS)-4b-benzyl-6,7-dihydroksy-6-metyl-N-(2-metylpyridin-3-yl)-10-
20
okso-7-fenyl-4b,5,6,7,8,8a,9,10-oktahydrofenantren-2-karboksamid,
eller
et
farmasøytisk akseptabelt salt derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
7. Forbindelse eller farmasøytisk akseptabelt salt ifølge et hvilket som helst av
kravene 1 til 4 til anvendelse i behandling av en tilstand mediert av
25
glukokortikoidreseptoraktivitet.
8. Forbindelse eller farmasøytisk akseptabelt salt ifølge et hvilket som helst av
kravene 1 til 4 til anvendelse i behandling av en inflammasjonsrelatert tilstand.
NO/EP2307375
50
9. Forbindelse eller farmasøytisk akseptabelt salt ifølge et hvilket som helst av
kravene 1 til 4 til anvendelse i astma, dermatitt, inflammatorisk tarmsykdom,
Alzheimers
sykdom,
psykotisk
alvorlig
depresjon,
nevropati,
transplantatavstøtning, multippel sklerose, kronisk uveitt, kronisk obstruktiv
5
lungesykdom eller revmatoid artritt.
10. Forbindelse eller farmasøytisk akseptabelt salt ifølge et hvilket som helst av
kravene 1 til 4 til anvendelse i lindring av bivirkninger assosiert med
glukokortikoidreseptormodulering.
10