Haptoglobin
Bruksfärdig
Allmän applikationsnot
Applikationsnot
Allmän riktlinje för bestämning av
haptoglobin i serum/plasma
(bruksfärdig)
Allmän information
Avsedd användning
Applikationsnoten är avsedd för kvantitativ bestämning av haptoglobin i humant provmaterial med instrument för vilka
ingen specifik riktlinje existerar (1). Resultatet på ett instrument valt av kunden skall kontrolleras.
Mätintervall
Ungefär 0,2-4,0 g/L beroende på den specifika kalibratorsatsen. Intervallet kan utökas i händelse av efterkoncentrering
eller spädning.
Referensintervall
0,3-2,0 g/L (2). Det rekommenderas att referensintervallet för den lokala populationen bestäms.
Instrumentinställningar
Riktlinjer för instrumentprogrammering presenteras i “Förslag till instrumentinställningar...” på sidan 3.
Reagenser
Antikropp
Reaktionsbuffert
Kalibrator
Kontroller
Spädningsmedel
Kodnr
Q 8330
S 2306
X 0908
X 0939
X 0940
Namn
DakoCytomation Polyclonal Rabbit Anti-Human Haptoglobin, bruksfärdig
DakoCytomation Reaction Buffer 6
DakoCytomation Human Serum Protein Calibrator
DakoCytomation Human Serum Protein Low Control
DakoCytomation Human Serum Protein High Control
NaCl-lösning 154 mmol/L (0,9 % v/v)
Prover
Humant serum, heparin-plasma eller EDTA-plasma.
Stabil i 7 dagar vid 2-8 ºC.
Stabil i 3 månader vid –20 ºC (om fryst enbart en gång).
Frysta prov skall helst tinas vid 37 ºC och blandas väl före analys.
Kalibrator
Spädning av standarder utförs antingen automatiskt av instrumentet såsom indikeras eller görs manuellt.
Reaktionsbuffert (R1)
Reaktionsbufferten är bruksfärdig. Stabiliteten ombord är 28 dagar vid 2-12 °C.
Antikropp (R3)
Antikroppen är bruksfärdig.
Om, i sällsynta fall, antikroppen verkar en aning grumlig, rekommenderas filtrering genom ett 0,22 µm membranfilter.
Antikroppens stabilitet: Se utgångsdatum på etiketten.
Stabilitet ombord: 28 dagar vid 2-12 °C.
Kapacitet: 1 mL av antikroppen är ekvivalent till cirka 10 kyvettavläsningar av standarder eller prover när 100 µL
antikropp används per test. Reagensflaskans dödvolym skall beaktas vid beräkning av nödvändiga mängder
reagenser.
Kalibreringsstabilitet
Det rekommenderas att omkalibrera var 28:e dag, eller vid byte av reagenssats, när antikroppen filtreras eller när
kvalitetskontrollens resultat faller utanför det område som etablerats av det enskilda laboratoriet. Kalibreringsstabiliteten
måste dock valideras på det enskilda instrumentet.
Felsökning
Om prestandan är oacceptabel, försök att kalibrera om. Kontrollera reagenser och förfarande. Om problemen
kvarstår kontakta instrumentleverantören eller DakoCytomation teknisk service.
(109471-001)
30 134.Q8330.01/SE/SUM/19.01.04 s. 1/3
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Haptoglobin
Bruksfärdig
Allmän applikationsnot
Ett exempel på resultatdata på Hitachi 911
Sensitivitet
Ett OD-värde på cirka 0,70 på Hitachi 911 motsvarar en haptoglobinkoncentration på ungefär 4 g/L.
Detektionsgräns
Detektionsgränsen uppskattas till 0,04 g/L.
Precision
Precisionen uppskattades genom att testa 4 olika haptoglobin- (HPT) nivåer med ANOVA-analys av 6 körningar
vardera med en ny kalibrering och 6 bestämningar i varje körning.
HPT
Standardavvikelse
(g/L)
Medelvärde
(g/L)
Inom
körning
Mellan
körning
Totalt
Total
CV
(%)
n
Humant serum
1,56
0,061
0,043
0,075
4,8
36
Humant serum
1,69
0,081
0,014
0,082
4,9
36
Human serum Protein Low
Control, kodnr X0939
0,87
0,023
0,004
0,023
2,6
36
Human serum Protein High
Control, kodnr X0940
2,10
0,101
0,036
0,108
5,1
36
Sera
Noggrannhet
Återvinning av 90-110 % av haptoglobin kan förväntas för DakoCytomation Human Serum Protein Low Control,
kodnr X 0939 och DakoCytomation Human Serum Protein High Control, kodnr X 0940.
Linjäritet
Denna analys är linjär i intervallet 0,2 - 4,5 g/L.
Säkerhetsintervall
Inget antigenöverskott hittas för haptoglobinkoncentrationer upp till 11 g/L (den högsta koncentrationen som
testades).
Interferens
Ingen interferens hittas vid koncentrationer upp till 600 mg/L bilirubin, 25 g/L triglycerid och 600 IU/mL reumatoid faktor.
Närvaron av hemoglobin orsakar en minskning av cirka 0,2 g/L i den uppmätta haptoglobinkoncentrationen på grund av
den fysiologiska interaktionen mellan hemoglobin och haptoglobin.
Alla medel beskrivna i referens 3 undersöktes enligt rekommendationerna i referens 3. Ingen interferens observerades,
utom för Intralipid vid 10 g/L.
Metodjämförelse
Bestämning av haptoglobin enligt applikationsnot för Hitachi 911 jämfördes med andra kommersiella turbidimetriska
analyser. Data finns tillgängliga på begäran.
Referenser
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination of
human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab Med
2001;39:1098-1109.
2. Dati F, Schumann G, Thomas L, Aguzzi F, Baudner S, Bienvenu J, et al. Consensus of a group of professional
societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based
on the standardization against the IFCC/BCR/CAP Reference Material (CRM 470). Eur J Clin Chem Clin
Biochem 1996;34:517-20.
3. Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their
concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-85.
(109471-001)
30 134.Q8330.01/SE/SUM/19.01.04 s. 2/3
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Haptoglobin
Bruksfärdig
Allmän applikationsnot
Förslag till instrumentinställningar för humant serum haptoglobin, bruksfärdig
Parameter
Förslag
Ljusväg (mm)
Inkubationstid (s)
Provspädning (utsp.faktor)
Volym förspätt prov (µL)
Provvolym (µL) (=outsp.)
Spädning+sköljning (för prov+reag) (µL)
Reaktionsbuffertvolym (µL)
PEG-konc. i reakt. buffert (%)
PEG-konc. i inkubationsvolym (%)
Inkubationsvolym (µL)
Antikroppsspädning (Ak spädn.faktor)
Volym spädd antikropp (µL)
Antikroppsvolym (µL) (=outsp.)
Spädning+sköljning (för antikropp) (µL)
Total volym (µL)
Reaktionstid (s)
Total analystid (s)
Förhållande
Relation
Förhållande
Prov vol. (outsp.)
Antikroppsvol.(outsp.)
PEG - konc. i inkub.vol.(%)*Prov vol.(outsp.)
Inkub.vol.
Provvol.(outsp.)
Totalvol.
PEG-konc. i total volym (%)
Standarder
10
120
19
60
3,16
190
550
5
3,44
800
1
150
150
50
1000
300
420
0,021
[0,018 - 0,022]
0,01357
[0,0130 - 0,0160]
0,0032
[0,0031 - 0,0033]
2,75
[2,6 – 2,9]
Spädningsfaktor
Std 1 (högsta konc.)
Std 2
Std 3
Std 4
Std 5
Std 6 (lägsta konc.)
4,52
6,13
9,50
15,83
27,14
105,56
fi relativ
konc. faktor
4,20
3,10
2,00
1,20
0,70
0,18
*
För ytterligare förklaringar av de enskilda parametrarna se, “Introduction to DakoCytomation General Application Notes”, best. nr. 30134. Intro,
som finns på begäran eller på www.DakoCytomation.com.
[ ] Indikerar ett acceptabelt intervall som mätts på olika instrument.
fi Är den relativa koncentrationsfaktorn som används för att beräkna den relativa koncentrationen (RC(i)) av haptoglobin i standarderna från en
specifik kalibratorsats (C(Cal)); RC(i) = fi x C(Cal) .
(109471-001)
30 134.Q8330.01/SE/SUM/19.01.04 s. 3/3
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17