C-reaktivt protein
Bruksfärdig
Allmän applikationsnot
Applikationsnot
Allmän riktlinje för bestämning av
C-reaktivt protein i serum/plasma
(Bruksfärdig)
Allmän information
Avsedd användning
Applikationsnoten är avsedd för kvantitativ turbidimetribestämning av C-reaktivt protein (CRP) i humant provmaterial
med instrument för vilka inga specifika riktlinjer finns (1). Resultatet på ett instrument valt av kunden skall kontrolleras.
Mätområde
Ungefär 5-160 mg/L beroende på kalibratorns specifika sats. I händelse av efterkoncentration eller -spädning kan
området utökas.
Referensintervall
0-5 mg/L (2). Det rekommenderas att referensintervallet för den lokala populationen fastställs.
Instrumentinställningar
Riktlinjer för instrumentprogrammering presenteras i “Förslag till instrumentinställningar...” på sidan 3.
Reagenser
Antikropp
Reaktionsbuffert
Kalibrator
Kontroller
Kod nr.
Q 8329
S 2307
X 0923
X 0925
X 0926
Utspädningsvätska
Namn
DakoCytomation Polyclonal Rabbit Anti-Human C-Reactive Protein, bruksfärdig
DakoCytomation Reaction Buffer 7
DakoCytomation Human Serum C-Reactive Protein Calibrator
DakoCytomation Human Serum C-Reactive Protein Low Control
DakoCytomation Human Serum C-Reactive Protein High Control
NaCl-lösning 154 mmol/L (0,9 % v/v)
Prover
Humant serum, heparin-plasma eller EDTA-plasma.
Stabil i 8 dagar vid 2-8 ºC (3).
Stabil i 3 månader vid –20 ºC (om den är fryst bara en gång) (3).
Frysta prover skall tinas vid 37 ºC och blandas väl före analysen.
Kalibrator
Spädning av standarder utförs antingen automatiskt av instrumentet såsom indikeras eller görs manuellt.
Reaktionsbuffert
Reaktionsbufferten är bruksfärdig Ombordstabiliteten är 28 dagar vid 2-12 °C.
Antikropp
Antikroppen är bruksfärdig.
Filtrering genom ett 0,22 µm membranfilter rekommenderas om, i sällsynta fall, den förspädda antikroppen verkar lätt
grumlig.
Antikroppens stabilitet: Se utgångsdatum på etiketten.
Ombordstabiliteten: 28 dagar vid 2-12 °C.
Kapacitet: 1 mL antikropp är ekvivalent med cirka 10 kyvettavläsningar av standarder eller prover när 100 µL
antikroppslösning används per test. Reagensflaskans dödvolym skall beaktas vid beräkning av nödvändiga mängder
reagenser.
Kalibreringsstabilitet
Det rekommenderas att omkalibrera var 28:e dag, eller vid byte av reagenssats, när antikroppen filtreras eller när
kvalitetskontrollens resultat faller utanför det område som etablerats av det enskilda laboratoriet.
Kalibreringsstabiliteten måste dock valideras på det enskilda instrumentet.
Felsökning
Försök omkalibrera om resultatet är oacceptabelt. Kontrollera reagenser och procedur. Om problemen kvarstår
kontakta instrumentleverantören eller DakoCytomation teknisk service.
(109338-001)
DakoCytomation Denmark A/S
30 134.Q8329.01/SE/AHA/07.01.04 s. 1/3
· Produktionsvej 42
· DK-2600 Glostrup
· Denmark
· Tel. +45 44 85 95 00
· Fax +45 44 85 95 95
·
CVR No. 33 21 13 17
C-reaktivt protein
Bruksfärdig
Allmän applikationsnot
Ett exempel på resultatdata på Hitachi 911
Sensitivitet
Ett OD-värde på ungefär 0,60 på Hitachi 911 motsvarar en CRP-koncentration på cirka 320 mg/L.
Detektionsgräns
Detektionsgränsen uppskattas till 2,5 mg/L.
Precision
Precisionen uppskattades genom att testa 2 olika C-reaktiva protein (CRP)-nivåer med ANOVA-analys med 6
körningar vardera med en ny kalibrering och 6 bestämningar i varje körning.
CRP
Sera
Standardavvikelse
(mg/L)
Medelvärde
(mg/L)
Inom
körning
Mellan
körning
Totalt
Total
CV (%)
n
Humant serum
låg
30,7
0,38
0,11
0,39
1,3
35
Humant serum
hög
103,7
1,29
0,57
1,42
1,4
36
Noggrannhet
En återvinning av CRP på 90-110 % kan förväntas för DakoCytomation Human Serum C-Reactive Protein Low
Control, kodnr X 0925 och DakoCytomation Human Serum C-Reactive Protein High Control, kodnr X 0926.
Linjäaritet
Analysen är linjär i intervallet 5-160 mg/L.
Säkerhetsområde
Inget antigenöverskott hittades för CRP-koncentrationer upp till 1900 mg/L.
Interferens
Ingen interferens hittas vid koncentrationer upp till 10 g/L hemoglobin, 600 mg/L bilirubin, 25 g/L triglycerid eller
50 IU/mL reumatoid faktor.
Alla medel beskrivna i referens 4 undersöktes enligt rekommendationerna i referens 4. Ingen interferens
observerades, utom för Intralipid vid 2 g/L.
Metodjämförelse
Bestämning av C-reaktivt protein enligt denna applikationsnot jämfördes med andra kommersiella turbidimetriska
analyser. Data kan fås på begäran.
Referenser
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination
human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab
2001;39:1098-1109.
2. Dati F, Schumann G, Thomas L, Aguzzi F, Baudner S, Bienvenu J, et al. Consensus of a group of professional
societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based
on the standardization against the IFCC/BCR/CAP Reference Material (CRM 470). Eur J Clin Chem Clin
Biochem 1996; 34:517-20.
3. Patient preparation and specimen handling. Fascicle VI. Chemistry/Clinical Microscopy. College of American
Pathologists. CAP.5M293.
4. Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their
concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-85.
(109338-001)
DakoCytomation Denmark A/S
30 134.Q8329.01/SE/AHA/07.01.04 s. 2/3
· Produktionsvej 42
· DK-2600 Glostrup
· Denmark
· Tel. +45 44 85 95 00
· Fax +45 44 85 95 95
·
CVR No. 33 21 13 17
C-reaktivt protein
Bruksfärdig
Allmän applikationsnot
Förslag till instrumentinställningar för humant serum C-reaktivt protein, bruksfärdig
Parameter
Förslag
Ljusväg (mm)
Inkubationstid (s)
Provspädning (Dil. faktor)
Volym förspätt prov (µL)
Provvolym (µL) (=outspädd)
Spädning+sköljning (för prov+reag) (µL)
Reaktionsbuffertvolym (µL)
PEG-konc. i reak. buffert (%)
PEG-konc. i inkubationsvolym (%)
Inkubationsvolym (µL)
Antikroppsspädning (Ab dil. faktor)
Volym spädd antikropp (µL)
Antikroppsvolym (µL) (=Outspädd)
Spädning+sköljning (för antikropp) (µL)
Total volym (µL)
Reaktionstid (s)
Total analystid (s)
Förhållande
Relation
Förhållande
10
120
1
50
50
140
670
3
2,3
860
1
100
100
40
1000
300
420
Provvol.
Antikropps
PEG - konc.
(Outspädd)
vol. (Outspädd)
i inkub. vol.(%) * Prov vol. (Outspädd)
Inkub. vol.
Prov vol. (Outspädd)
Total vol.
PEG-konc. i total volym (%)
Standarder
0,50
[0,50 - 0,52]
0,14
[0,12 - 0,13]
0,050
[0,046 - 0,049]
2,0
[2,0 – 2,0]
Spädningsfaktor
Std 1 (högsta konc.)
Std 2
Std 3
Std 4
Std 5
Std 6 (lägsta konc.)
1,00
1,33
2,00
4,00
8,00
33,33
fi relativ
konc. faktor
1,00
0,75
0,50
0,25
0,13
0,03
*
För ytterligare förklaringar av de enskilda parametrarna se, “Introduction to DakoCytomation General Application Notes”, best. nr. 30134.Intro,
som finns på begäran eller på www.DakoCytomation.com.
[ ] Indikerar ett acceptabelt intervall som mätts på olika instrument.
fi Är den relativa koncentrationsfaktorn som används för att beräkna den relativa koncentrationen (RC(i)) av C-reaktivt protein i standarderna från
en specifik kalibratorsats (C(Cal)); RC(i) = fi x C(Cal) .
(109338-001)
DakoCytomation Denmark A/S
30 134.Q8329.01/SE/AHA/07.01.04 s. 3/3
· Produktionsvej 42
· DK-2600 Glostrup
· Denmark
· Tel. +45 44 85 95 00
· Fax +45 44 85 95 95
·
CVR No. 33 21 13 17