Alpha-1-Antitrypsin
Ready-to-Use
General Application Note
Tillämpningsnotering
Allmän riktlinje för bestämning av
Alpha-1-Antitrypsin i serum/plasma
(bruksfärdig)
Allmän information
Avsedd användning
Tillämpningsnoteringen är avsedd för kvantitativ bestämning av alfa-1-antitrypsin i humant provmaterial med instrument
som inte har särskilda riktlinjer (1). Resultat på instrument som valts av kunden bör kontrolleras.
Mätområde
Ca 0,2-5,0 g/L beroende på specifik kalibratorsats. I fall av postkoncentration eller –spädning kan området utökas.
Referensintervall
0,9-2,0 g/L (2). Det rekommenderas att referensintervallet för den lokala populationen bestäms.
Instrumentinställning
Riktlinjer för instrumentprogrammering finns i ”Förslag på instrumentinställningar…” på sidan 3.
Reagenser
Antikropp
Reaktionsbuffert
Kalibrator
Kontroller
Spädning
Kod nr. Namn
Q 8363
DakoCytomation Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Antitrypsin, bruksfärdig
S 2306
DakoCytomation Reaction Buffer 6
X 0908
DakoCytomation Human Serum Protein Calibrator
X 0939
DakoCytomation Human Serum Protein Low Control
X 0940
DakoCytomation Human Serum Protein High Control
NaCl-lösning 154 mmol/L (0,9% w/v)
Prov
Humanserum, heparin-plasma eller EDTA-plasma.
Stabil i 7 dagar vid 2-8 ºC
Stabil i 3 månader vid -20 ºC ( om fryst endast en gång).
Frysta prover bör tinas vid 37 ºC och blandas väl före analys.
Kalibrator
Spädning av standarder utförs enligt anvisningar antingen automatiskt med instrumentet eller manuellt.
Reaktionsbuffert (R1)
Reaktionsbufferten är bruksfärdig. Stabiliteten i instrumentet är 28 dagar vid 2-12 C.
Antikropp (R3)
Antikroppen är bruksfärdig.
Om den förspädda antikroppen i sällsynta fall uppvisar viss grumlighet rekommenderas filtrering genom ett 0,22 µm
membranfilter.
Antikropps stabilitet : Se utgångsdatum på etiketten.
Stabilitet i instrumentet: 28 dagar vid 2-12 °C.
o
Kapacitet: 1 mL förspädd antikropp motsvarar ca 10 kyvettavläsningar av standarder eller prover när 100 µL spädd
antikroppslösning används per test. Reagensflaskans dödvolym bör beaktas vid beräkning av erforderlig mängd
reagens.
Kalibreringsstabilitet
Det rekommenderas att omkalibrering utförs var 28 dag eller när reagenssatserna ändras, antikroppen filtreras eller
resultaten av kvalitetskontrollerna ligger utanför det intervall
som fastställts av det enskilda laboratoriet.
Kalibreringsstabiliteten bör dock kontrolleras på det enskilda instrumentet.
Felsökning
Om resultaten är oacceptabla skall försök göras att kalibrera om. Kontrollera reagenset och proceduren. Om
problemet kvarstår var god kontakta instrumentleverantören eller DakoCytomation tekniska service.
(109074-001)
30 134.Q8363.01/SE/SUM/19.01.04 p. 1/3
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Alpha-1-Antitrypsin
Ready-to-Use
General Application Note
Ett exempel på resultatdata på Hitachi 911
Sensitivitet
Ett OD-värde på ca 0,85 på Hitachi 911 motsvarar ett alfa-1-antitrypsin koncentration på omkring 5 g/L.
Detektionsgräns
Detektionsgränsen uppskattas till 0,09 g/L.
Precision
Precisionen uppskattades genom att vid fyra olika alfa-1-antitrypsin (AAT)-nivåer testa med ANOVA-analys på sex
körningar och var och en med en ny kalibrering och sex bestämningar i varje körning.
AAT
Sera
Standardavvikelser
(g/L)
Medelvär
de (g/L)
Inom
körningar
Mellan
körningar
Totalt
Total
CV (%)
n
Humanserum
1,25
0,034
0,033
0,047
3,8
36
Humanserum
2,13
0,061
0,043
0,075
3,5
36
Human serum Protein Low
Control, kod nr. X0939
0,97
0,026
0,040
0,047
4,9
36
Human serum Protein High
Control, kod nr. X0940
2,39
0,071
0,054
0,090
3,8
24
Noggrannhet
En återhämtning på 90-110 % av alfa-1-antitrypsin kan förväntas för DakoCytomation Human Serum Protein Low
Control, kod nr. X 0939 och DakoCytomation Human Serum Protein High Control, kod nr. X 0940.
Linjäritet
Analysen är linjärt i intervallet 0,2-5,4 g/L
Säkerhetsintervall
Inget antigenöverskott påträffas för alfa-1-antitrypsinkoncentrationer upp till 13 g/L (den högsta koncentration
somtestades).
Interferens
Ingen interferens påträffas vid koncentrationer på upp till 10 g/L hemoglobin, 600 mg/L bilirubin, 25 g/L triglycerid och
1200 IU/mL av reumatoidfaktor.
All medicin som beskrivs i referens 3 undersöktes enligt rekommendationer i referens 3. Ingen interferens
observerades förutom för intralipid vid 10 g/L.
Metodjämförelse
Bestämningar av alfa-1-antitrypsin enligt Tillämpningsnoteringen för Hitachi 911 jämfördes med andra kommersiella,
turbidimetriska analyser. Data finns tillgängligt på begäran.
Referenser
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination of
human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab Med
2001; 39:1098-1109.
2. Dati F, Schumann G, Thomas L, Aguzzi F, Baudner S, Bienvenu J, et al. Consensus of a group of professional
societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based
on the standardization against the IFCC/BCR/CAP Reference Material (CRM 470). Eur J Clin Chem Clin
Biochem 1996; 34:517-20.
3. Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their
concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-85.
(109074-001)
30 134.Q8363.01/SE/SUM/19.01.04 p. 2/3
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Alpha-1-Antitrypsin
Ready-to-Use
General Application Note
Förslag på instrumentinställningar för Human Serum Alpha-1-Antitrypsin, bruksfärdig.
* Parameter
Förslag
Ljusbana (mm)
Inkubationstid (s)
Provspädning (späd. faktor)
Volym av förspätt prov (µL)
Provvolym (µL) (=outspädd)
Spädningsbuffert för prov+spolmedel (för prov+reag) (µL)
Reaktionsbuffert volym (µL)
PEG-konc. i reak. buffert (%)
PEG-konc. i inkubationsvolym (%)
Inkubationsvolym (µL)
Antikroppsspådning (Ab späd. faktor)
Volym av förspädd antikropp (µL)
Antikroppsvolym (µL) (=outspädd)
Spädningsbuffert för provt+spolmedel (för antikropp) (µL)
Total volym (µL)
Reaktionstid (s)
Total analys tid (s)
10
120
19
60
3,16
190
550
5
3,44
800
1
150
150
50
1000
300
420
Proportion
Sample vol.(Neat)
Antibody vol.(Neat)
0,021
[0,018 - 0,022]
Relation
PEG - conc. inincub. vol.(%) * Sample vol.(Neat)
Incub. vol.
0,0136
[0,014 - 0,016]
Proportion
Sample vol.(Neat)
Total vol.
PEG-konc. i total volym (%)
0,0032
[0,0031- 0,0034]
Standarder
2,75
[2,6 - 2,9]
Spädningsfaktor
Std 1 (högsta konc.)
Std 2
Std 3
Std 4
Std 5
Std 6 (lägsta konc.)
4,42
5,94
9,05
15,83
27,14
105,56
fi Relativ
konc, faktor
4,30
3,20
2,10
1,20
0,70
0,18
*
För ytterligare förklaringar på de enskilda parametrarna var god se ”Introduktion till DakoCytomation allmänna tillämpningsnoteringar”,
beställningsnr. 30134.Intro, som finns att få på begäran eller på www.DakoCytomation.com.
[ ] Visar en acceptabel skala som finns på olika instrument.
fi Är den relativa koncentrationsfaktor som används för att beräkna den relativa koncentrationen (RC(i)) av alpha-1-antitrypsin i standarder från en
specifik kalibratorsats (C(Cal)); RC(i) = fi x C(Cal) .
(109074-001)
30 134.Q8363.01/SE/SUM/19.01.04 p. 3/3
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17