Alpha-1-Antitrypsin Ready-to-Use General Application Note Tillämpningsnotering Allmän riktlinje för bestämning av Alpha-1-Antitrypsin i serum/plasma (bruksfärdig) Allmän information Avsedd användning Tillämpningsnoteringen är avsedd för kvantitativ bestämning av alfa-1-antitrypsin i humant provmaterial med instrument som inte har särskilda riktlinjer (1). Resultat på instrument som valts av kunden bör kontrolleras. Mätområde Ca 0,2-5,0 g/L beroende på specifik kalibratorsats. I fall av postkoncentration eller –spädning kan området utökas. Referensintervall 0,9-2,0 g/L (2). Det rekommenderas att referensintervallet för den lokala populationen bestäms. Instrumentinställning Riktlinjer för instrumentprogrammering finns i ”Förslag på instrumentinställningar…” på sidan 3. Reagenser Antikropp Reaktionsbuffert Kalibrator Kontroller Spädning Kod nr. Namn Q 8363 DakoCytomation Polyclonal Rabbit Anti-Human Alpha-1-Antitrypsin, bruksfärdig S 2306 DakoCytomation Reaction Buffer 6 X 0908 DakoCytomation Human Serum Protein Calibrator X 0939 DakoCytomation Human Serum Protein Low Control X 0940 DakoCytomation Human Serum Protein High Control NaCl-lösning 154 mmol/L (0,9% w/v) Prov Humanserum, heparin-plasma eller EDTA-plasma. Stabil i 7 dagar vid 2-8 ºC Stabil i 3 månader vid -20 ºC ( om fryst endast en gång). Frysta prover bör tinas vid 37 ºC och blandas väl före analys. Kalibrator Spädning av standarder utförs enligt anvisningar antingen automatiskt med instrumentet eller manuellt. Reaktionsbuffert (R1) Reaktionsbufferten är bruksfärdig. Stabiliteten i instrumentet är 28 dagar vid 2-12 C. Antikropp (R3) Antikroppen är bruksfärdig. Om den förspädda antikroppen i sällsynta fall uppvisar viss grumlighet rekommenderas filtrering genom ett 0,22 µm membranfilter. Antikropps stabilitet : Se utgångsdatum på etiketten. Stabilitet i instrumentet: 28 dagar vid 2-12 °C. o Kapacitet: 1 mL förspädd antikropp motsvarar ca 10 kyvettavläsningar av standarder eller prover när 100 µL spädd antikroppslösning används per test. Reagensflaskans dödvolym bör beaktas vid beräkning av erforderlig mängd reagens. Kalibreringsstabilitet Det rekommenderas att omkalibrering utförs var 28 dag eller när reagenssatserna ändras, antikroppen filtreras eller resultaten av kvalitetskontrollerna ligger utanför det intervall som fastställts av det enskilda laboratoriet. Kalibreringsstabiliteten bör dock kontrolleras på det enskilda instrumentet. Felsökning Om resultaten är oacceptabla skall försök göras att kalibrera om. Kontrollera reagenset och proceduren. Om problemet kvarstår var god kontakta instrumentleverantören eller DakoCytomation tekniska service. (109074-001) 30 134.Q8363.01/SE/SUM/19.01.04 p. 1/3 DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 Alpha-1-Antitrypsin Ready-to-Use General Application Note Ett exempel på resultatdata på Hitachi 911 Sensitivitet Ett OD-värde på ca 0,85 på Hitachi 911 motsvarar ett alfa-1-antitrypsin koncentration på omkring 5 g/L. Detektionsgräns Detektionsgränsen uppskattas till 0,09 g/L. Precision Precisionen uppskattades genom att vid fyra olika alfa-1-antitrypsin (AAT)-nivåer testa med ANOVA-analys på sex körningar och var och en med en ny kalibrering och sex bestämningar i varje körning. AAT Sera Standardavvikelser (g/L) Medelvär de (g/L) Inom körningar Mellan körningar Totalt Total CV (%) n Humanserum 1,25 0,034 0,033 0,047 3,8 36 Humanserum 2,13 0,061 0,043 0,075 3,5 36 Human serum Protein Low Control, kod nr. X0939 0,97 0,026 0,040 0,047 4,9 36 Human serum Protein High Control, kod nr. X0940 2,39 0,071 0,054 0,090 3,8 24 Noggrannhet En återhämtning på 90-110 % av alfa-1-antitrypsin kan förväntas för DakoCytomation Human Serum Protein Low Control, kod nr. X 0939 och DakoCytomation Human Serum Protein High Control, kod nr. X 0940. Linjäritet Analysen är linjärt i intervallet 0,2-5,4 g/L Säkerhetsintervall Inget antigenöverskott påträffas för alfa-1-antitrypsinkoncentrationer upp till 13 g/L (den högsta koncentration somtestades). Interferens Ingen interferens påträffas vid koncentrationer på upp till 10 g/L hemoglobin, 600 mg/L bilirubin, 25 g/L triglycerid och 1200 IU/mL av reumatoidfaktor. All medicin som beskrivs i referens 3 undersöktes enligt rekommendationer i referens 3. Ingen interferens observerades förutom för intralipid vid 10 g/L. Metodjämförelse Bestämningar av alfa-1-antitrypsin enligt Tillämpningsnoteringen för Hitachi 911 jämfördes med andra kommersiella, turbidimetriska analyser. Data finns tillgängligt på begäran. Referenser 1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination of human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab Med 2001; 39:1098-1109. 2. Dati F, Schumann G, Thomas L, Aguzzi F, Baudner S, Bienvenu J, et al. Consensus of a group of professional societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based on the standardization against the IFCC/BCR/CAP Reference Material (CRM 470). Eur J Clin Chem Clin Biochem 1996; 34:517-20. 3. Sonntag O, Scholer A. Drug interference in clinical chemistry: recommendation of drugs and their concentrations to be used in drug interference studies. Ann Clin Biochem 2001;38:376-85. (109074-001) 30 134.Q8363.01/SE/SUM/19.01.04 p. 2/3 DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17 Alpha-1-Antitrypsin Ready-to-Use General Application Note Förslag på instrumentinställningar för Human Serum Alpha-1-Antitrypsin, bruksfärdig. * Parameter Förslag Ljusbana (mm) Inkubationstid (s) Provspädning (späd. faktor) Volym av förspätt prov (µL) Provvolym (µL) (=outspädd) Spädningsbuffert för prov+spolmedel (för prov+reag) (µL) Reaktionsbuffert volym (µL) PEG-konc. i reak. buffert (%) PEG-konc. i inkubationsvolym (%) Inkubationsvolym (µL) Antikroppsspådning (Ab späd. faktor) Volym av förspädd antikropp (µL) Antikroppsvolym (µL) (=outspädd) Spädningsbuffert för provt+spolmedel (för antikropp) (µL) Total volym (µL) Reaktionstid (s) Total analys tid (s) 10 120 19 60 3,16 190 550 5 3,44 800 1 150 150 50 1000 300 420 Proportion Sample vol.(Neat) Antibody vol.(Neat) 0,021 [0,018 - 0,022] Relation PEG - conc. inincub. vol.(%) * Sample vol.(Neat) Incub. vol. 0,0136 [0,014 - 0,016] Proportion Sample vol.(Neat) Total vol. PEG-konc. i total volym (%) 0,0032 [0,0031- 0,0034] Standarder 2,75 [2,6 - 2,9] Spädningsfaktor Std 1 (högsta konc.) Std 2 Std 3 Std 4 Std 5 Std 6 (lägsta konc.) 4,42 5,94 9,05 15,83 27,14 105,56 fi Relativ konc, faktor 4,30 3,20 2,10 1,20 0,70 0,18 * För ytterligare förklaringar på de enskilda parametrarna var god se ”Introduktion till DakoCytomation allmänna tillämpningsnoteringar”, beställningsnr. 30134.Intro, som finns att få på begäran eller på www.DakoCytomation.com. [ ] Visar en acceptabel skala som finns på olika instrument. fi Är den relativa koncentrationsfaktor som används för att beräkna den relativa koncentrationen (RC(i)) av alpha-1-antitrypsin i standarder från en specifik kalibratorsats (C(Cal)); RC(i) = fi x C(Cal) . (109074-001) 30 134.Q8363.01/SE/SUM/19.01.04 p. 3/3 DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
© Copyright 2024