1. No category

Retinolbindande protein
IMMAGE® Immunochemistry System
Applikationsnotering
Riktlinje för bestämning av
retinolbindande protein i serum
på IMMAGE* Immunochemistry System
Allmän information
Avsedd användning
Applikationsnoteringen är avsedd för kvantitativ bestämning av retinolbindande protein (RBP) i humant serum
genom nefelometri på IMMAGE Immunochemistry System (1, 2).
Mätintervall
Ungefär 16 – 169 mg/L beroende på den specifika kalibratorsatsen.
Referensintervall
26 – 60 mg/L. Det rekommenderas att referensintervallet bestäms för den lokala populationen.
Instrumentinställningar
Instrumentprogrammering utförs enligt ”Instrumentinställningar” på sidan 3.
Reagenser
Antikropp
Reaktionsbuffert
Kalibrator
Kontroll
Spädningsmedel
Kodnr
A0040
S2007
X0908
X0940
X0939
447640
S2005
Namn
Polyclonal Rabbit Anti-Human Retinol Binding Protein
Dako Turbidimetry/Nephelometry Reaction Buffer 1
Human Serum Protein Calibrator
Human Serum Protein High Control
Dako Human Serum Protein Low Control
IMMAGE® Immunochemistry System DIL 1
Beckman Coulter Part (4x120 mL) eller
Dako Turbidimetry/Nephelometry Dilution Buffer 1
Prover
Humant serum.
Stabila i 7 dagar vid 2 – 8 C.
Stabila i 3 månader vid -20 ºC (endast vid en nedfrysning).
Frysta prover bör tinas vid 37 ºC och blandas noggrant före analys.
Kalibrator
Spädning av kalibrator utförs manuellt antingen i IMMAGE® Immunochemistry System DIL 1 eller i
Dako Turbidimetry/Nephelometry Dilution Buffer 1.
Reaktionsbuffert
Reaktionsbufferten är bruksfärdig.
Antikropp
Antikroppen är bruksfärdig. Om antikroppen i sällsynta fall verkar något grumlig rekommenderas filtrering genom
ett 0,22 µm membranfilter.
Stabilitet på outspädd antikropp: Se utgångsdatumet på etiketten.
Stabilitet på förspädd antikropp: 28 dagar vid 2 – 8 °C.
Stabilitet i instrumentet: 28 dagar.
Kapacitet: 1 mL av antikroppen motsvarar ca 47 kyvettavläsningar av standarder eller prover. Reagensflaskans
dödvolym bör läggas till när nödvändig reagensmängd beräknas.
Kalibreringsstabilitet
Det rekommenderas att omkalibrering utförs var 28:e dag eller när reagenspartier ändras, när en ny
antikroppsspädning prepareras, när antikroppsspädningen filtreras eller när kvalitetskontrollresultat ligger utanför
det intervall som fastställts för det enskilda laboratoriet.
Felsökning
Om prestandan är oacceptabel, försök att kalibrera om. Kontrollera reagenser och förfarande. Om problemet
kvarstår ska du kontakta instrumenttillverkaren eller Dakos tekniska service.
Referens
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: method optimization. Basic principles for quantitative
determination of human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin
Chem Lab Med 2001;39: 1098-109.
2. IMMAGE® Immunochemistry System Operation Manual (s). IMMAGE är ett registrerat varumärke som tillhör
Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA.
(121151-001)
30 197.A0040.01/SE/SSH/2010.10.28 p. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Danmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Retinolbindande protein
IMMAGE® Immunochemistry System
Prestandadata
Sensitivitet
Typiska värden funna vid 20,6 mg/L retinolbindande protein är ca 284 instrumentsvar på Beckman Immage.
Detektionsgräns
Detektionsgränsen uppskattas till 15 mg/L.
Precision
Precisionen uppskattades vid två kontroller och ett serumprov genom ANOVA-analys av 6 körningar vardera med
en ny kalibrering och 6 bestämningar i varje körning.
Retinolbindande
protein
medel-värde
mg/L
Human Serum Protein
Low Control (X0939)
Human Serum Protein
High Control (X0940)
Låg serumpool
Standardavvikelse
mg/L
Inom
körningar
Mellan
körningar
Totalt
Totalt CV
(%)
n
37,9
0,251
0,560
0,614
1,6
36
86,9
0,659
0,893
1,109
1,3
36
21,9
0,173
0,584
0,609
2,8
36
Linjäritet
Linjäriteten är acceptabel inom intervallet 16 – 100 mg/L, den högsta koncentration som testats.
Säkerhetsintervall
Inget antigenöverskott frinns i retinolbindande proteinkoncentrationer < 476 mg/L (högsta koncentration
som testats).
Interferens
Ingen interferens föreligger vid koncentrationer upp till 8,4 g/L hemoglobin, 380 mg/L bilirubin, 2 g/L intralipid och
100 IU/mL reumatoid faktor.
(121151-001)
30 197.A0040.01/SE/SSH/2010.10.28 p. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Danmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Retinolbindande protein
IMMAGE® Immunochemistry System
®*
Instrumentinställningar för IMMAGE Immunochemistry System
Procedur
1. Programmera ett användardefinierat reagens med parametrarna angivna nedan. Se kapitel 5 i användarhandboken
för IMMAGE Immunochemistry System för mer detaljerade instruktioner.
2. Överför Dako Antibody Reagent till ”A”-delen på en ny användardefinierad kassett.
3. Överför Dako Reaction Buffer 3 till ”B”-delen på kassetten. Se anmärkningen nedan.
4. Ge analysen namnet ”RBP”.
5. Kalibratorvärdet är satsberoende. När Dako Calibrator.
(Code X0908) används, förbereds följande spädningsserier manuellt enligt spädningsschemat nedan.
6. Använd IMMAGE DIL1 (Beckman Coulter PN 447255) som provspädningsmedel och konfigurera det på
IMMAGE som DIL1.
Spädningsschema
Standard
Std. (1)
Std. (2)
Std. (3)
Std. (4)
Std. (5)
Std. (6)
X0908
[
[
[
[
[
[
15
20
40
80
100
150
NaCL
0,9 %
]
]
]
]
]
]
[
[
[
[
[
[
150
115
95
100
50
0
]
]
]
]
]
]
f(i)
Konc.
Faktor
f(1)
f(2)
f(3)
f(4)
f(5)
f(6)
0,0909
0,1481
0,2963
0,4444
0,6667
1,000
X0908
[
[
[
[
[
[
0,0909 x (C(Cal))
0,1481 x (C(Cal))
0,2963 x (C(Cal))
0,4444 x (C(Cal))
0,6667 x (C(Cal))
1,0000 x (C(Cal))
]
]
]
]
]
]
Koncentrationen av retinolbindande protein i standarder (C(i)) (mg/L) beräknas från den retinolbindande
proteinkoncentration (C(Cal)) (mg/L) som angivits för den specifika kalibratorsatsen (X0908) och den relativa
koncentrationsfaktorn (f(i)) genom multiplicering, dvs. C(i) = f(i) x C(Cal). Se bladet med analytiskt värde för det exakta
C(Cal) värdet för aktuell sats.
Protokollinformation
Kem. namn
Retinolbindande
protein
Enheter
mg/L
Icke konkurrerande
nefelometri
XX/XX/XX
3
Partinummer
XXXXXX
Protokoll
Serienummer för reagens
Prov- eller spädningsvolym
XXXXXXX
Utgångsdatum för reagens
Förstärkning
Volym för reaktionsbuffert
0 µL
Kal. spädning
Provspädning
1:18
195 µL
6/2
Reaktionstid
Kalibrator-börvärden
2,0 minuter
Lot-specifika poster
Volym Del A
Volym Del B
Kalibratornivåer/replikat
75 µL
21 µL
1:5
XX Fastställs av användaren.
Användardefinierad modell: Fyra parameters logistik
OBS!
(121151-001)
Den maximala volymen av delarna A och B av UDR-kassetten är 8,0 mL med en dödvolym på 250 µL.
Medan systemet dispenserar 195 µL buffert från del B enligt protokollet som beskrivs ovan, aspirerar det en
total volym av 200 µL för att undvika eventuell vätskekontamination. Därför kan cirka 35 tester köras när kassetten
är helt fylld. Det rekommenderas att reagensförbrukningen kontrolleras och att delarna A och B fylls på tills
kassettens alla 300 tester har använts.
30 197.A0040.01/SE/SSH/2010.10.28 p. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Danmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17