C-Reaktivt Protein (Sensitive)
Allmän applikationsnot
Applikationsnot
Allmänna riktlinjer för bestämning av
C-reaktivt protein i serum/plasma
Allmän information
Avsedd användning
Applikationsnoten är avsedd för kvantitativ bestämning av C-reaktivt protein (CRP) i humant provmaterial med
instrument för vilka inga specifika riktlinjer finns (1).
Prestanda på ett instrument som valts av kunden bör valideras.
Mätintervall
Ungefär 0,2–15 mg/L beroende på den specifika kalibratorsatsen. Intervallet kan utökas i händelse av
efterkoncentrering eller -spädning.
Referensintervall
0–0,5 mg/L (2).
Det rekommenderas att referensintervallet för den lokala populationen bestäms.
Instrumentinställningar
Riktlinjer för instrumentprogrammering anges i ”Förslag på instrumentinställningar...” på sidan 3.
Reagenser
Antikropp
Reaktionsbuffert
Kalibrator
Kontroller
Spädningsmedel
Kodnummer
LX001
S2360
X0970
X0971
X0972
S2005
Namn
DakoCytomation C-Reactive Protein Immunoparticles (Sensitive)
DakoCytomation Reaction Buffer 8
DakoCytomation C-Reactive Protein Calibrator (Sensitive)
DakoCytomation C-Reactive Protein Low Control (Sensitive)
DakoCytomation C-Reactive Protein High Control (Sensitive)
DakoCytomation Dilution Buffer 1
Prover
Humanserum, heparin-plasma eller EDTA-plasma.
Stabilt i 5 dagar vid 2–8 °C.
Användning av tidigare frysta prover rekommenderas inte.
Kalibrator
Spädning av standarder utförs antingen automatiskt av instrumentet såsom angivet eller görs manuellt.
Reaktionsbuffert
Reaktionsbufferten är bruksfärdig. Stabilitet på instrumentet är 8 veckor vid 2–12 °C.
Antikropp
Immunpartikelsuspensionen är bruksfärdig.
Stabilitet vid 2–8 °C: se specifikationsblad och utgångsdatumet på etiketten.
Stabilitet på instrumentet: 8 veckor vid 2–12 °C.
Kapacitet: 1 mL immunpartikelsuspension motsvarar ungefär 10 kyvettavläsningar av standarder eller prover när
100 µL immunpartikelsuspension används per test. Dödvolymen för reagensflaskan bör läggas till när nödvändig
reagensmängd beräknas.
Kalibreringsstabilitet
Det rekommenderas att omkalibrering utförs var 8:e vecka, när reagenssatser ändras eller när kvalitetskontrollresultat
ligger utanför det intervall som fastställts för det enskilda laboratoriet. Kalibreringsstabiliteten bör emellertid valideras på
det enskilda instrumentet.
Felsökning
Om prestandan är oacceptabel, försök att kalibrera om. Kontrollera reagenser och förfarande. Om problemet
kvarstår, kontakta instrumentleverantören eller DakoCytomations tekniska support.
(113213-001)
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00
30 134.LX001.01/SE/KGR/22.09.04 s. 1/3
·
Fax +45 44 85 95 95
· CVR No. 33 21 13 17
C-Reaktivt Protein (Sensitive)
Allmän applikationsnot
Exempel på prestandadata på Hitachi 917
Sensitivitet
Ett OD-värde på ungefär 0,35 på Hitachi 917 motsvarar en CRP-koncentration på ca 14 mg/L.
Detektionsgräns
Detektionsgränsen uppskattas till 0,09 mg/L.
Precision
Precisionen uppskattades med användning av två kontroller och tre serum CRP-nivåer enligt riktlinjerna i NCCLS
Document EP5-A (3).
Prover
C-Reactive Protein Low Control
(Sensitive), kodnummer X0971
C-Reactive Protein High Control
(Sensitive), kodnummer X0972
Humanserum pool A
Humanserum pool B
Humanserum pool C
Standardavvikelse
(mg/L)
Mellan
Mellan
körningar
dagar
CRP
medelvärde
(mg/L)
Inom
körning
3,26
0,026
0,040
11,62
0,031
0,87
7,06
13,33
0,032
0,021
0,035
Totalt
Totalt
CV
(%)
0,030
0,057
1,7
80
0,109
0,110
0,158
1,4
80
0,022
0,075
0,077
0,016
0,000
0,035
0,042
0,077
0,091
4,9
1,1
0,7
80
80
80
n
Noggrannhet
Ett CRP-utbyte på 85–115 % kan förväntas för DakoCytomation C-Reactive Protein Low Control (Sensitive),
kodnummer X0971, och DakoCytomation C-Reactive Protein High Control (Sensitive), kodnummer X0972.
Linjäritet
Analysen är linjär i intervallet 0,2–60 mg/L.
Säkerhetsintervall
Inget antigenöverskott finns för CRP-koncentrationer under 500 mg/L.
Interferens
Ingen interferens påträffas vid koncentrationer upp till 10 g/L hemoglobin, 25 g/L triglycerid, 1200 IU/mL
reumafaktor, 275 mg/L (~ 325 µmol/L) konjugerat bilirubin och 320 mg/L (~ 550 µmol/L) okonjugerat bilirubin.
Bilirubin som överstiger de nämnda koncentrationerna minskar signalen signifikant (falskt låga resultat).
Metodjämförelse
Bestämning av CRP enligt denna applikationsnot jämfördes med en kommersiellt tillgänglig nefelometrisk analys.
Data finns tillgängliga på begäran.
Referenser
1. Blirup-Jensen S. Protein Standardization III: Method optimization: Basic principles for quantitative determination
of human serum proteins on automated instruments based on turbidimetry or nephelometry. Clin Chem Lab
Med 2001;39:1098-109.
2. Dati F, Schumann G, Thomas L, Aguzzi F, Baudner S, Bienvenu J, et al. Consensus of a group of professional
societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based
on the standardization against the IFCC/BCR/CAP Reference Material (CRM 470). Eur J Clin Chem Clin
Biochem 1996;34:517-20.
3. Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices, Approved Guideline, NCCLS Document
EP5-A, 1998.
(113213-001)
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00
30 134.LX001.01/SE/KGR/22.09.04 s. 2/3
·
Fax +45 44 85 95 95
· CVR No. 33 21 13 17
C-Reaktivt Protein (Sensitive)
Allmän applikationsnot
Förslag på instrumentinställningar för humant C-reaktivt protein
Speciella
rekommendationer
En primär våglängd på ca 450 nm bör användas.
Följande reaktionsmetod rekommenderas:
1. Blandning av (spätt) prov och reaktionsbuffert.
2. Inkubation (tills stabila avläsningar erhålls).
3. Tillsats av immunpartikelreagenset.
4. Blankning (första avläsningen) omedelbart efter blandning av alla reagenser.
5. Mätning av signaler under reaktionen tills en slutpunkt erhålls.
* Parameter
Förslag
Ljusväg (mm)
Inkubationstid (s)
Provspädning (spädningsfaktor)
10
120
1
5
Volym av förspätt prov (µL)
Provvolym (µL) (=ospädd)
5
0
Spädnings-medel + spolning (för prov och reagens) (µL)
385
Reaktionsbuffertvolym (µL)
PEG-konc. i reaktionsbuffert (%)
PEG-konc. i inkubationsvolym (%)
1
0,987
390
Inkubationsvolym (µL)
Antikroppsspädning (spädningsfaktor för antikropp)
1
84
Volym av spädd antikropp (µL)
Antikroppsvolym (µL) (=ospädd)
84
26
Spädningsmedel + spolning (för antikropp) (µL)
500
Total volym (µL)
Reaktionstid (s)
Total analystid (s)
Förhållande
Relation
Förhållande
300
420
Provvolym (outspädd)
Antikroppsvolym (outspädd)
PEG-koncentration i inkubationsvolym (%) * provvolym (outspädd)
Inkubationsvolym
Provvolym (outspädd)
Total volym
PEG-konc. i total volym (%)
Standarder
0,06
[0,05 – 0,06]
0,013
[0,01 – 0,013]
0,0100
[0,0085 – 0,0102]
0,77
[0,76 – 0,78]
fi relativ
Spädningsfaktor
Standard 1 (högsta konc.)
Standard 2
Standard 3
Standard 4
Standard 5
Standard 6 (lägsta konc.)
2,13
6,29
16,61
54,95
90,91
161,29
koncentrationsfaktor
0,4704
0,1591
0,0602
0,0182
0,0110
0,0062
*
För vidare förklaringar av de enskilda parametrarna, se “Introduction to DakoCytomation General Application Notes”, beställningsnummer
30134, Intro, som är tillgänglig på begäran eller på www.dakocytomation.com.
[ ] Anger ett acceptabelt intervall som påträffas på olika instrument.
fi Är den relativa koncentrationsfaktorn som används för att beräkna den relativa koncentrationen (RC(i)) av CRP i standarder från en specifik
kalibratorsats (C(Cal)); RC(i) = fi x C(Cal).
(113213-001)
DakoCytomation Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00
30 134.LX001.01/SE/KGR/22.09.04 s. 3/3
·
Fax +45 44 85 95 95
· CVR No. 33 21 13 17