Proyecto XI.22 Desarrollo de tecnologías para la conservación de vegetales frescos cortados Patógenos asociados a frutas frescas cortadas. Incidencia, supervivencia y crecimiento, brotes y control 1 2 2 María S. Tapia , Rosa M. Raybaudi-Massilia , Olga Martín-Belloso 1 Instituto de Ciencia y Tecnología de Alimento, Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela, Apdo. 47097, Caracas, 1041, Venezuela. 2Departamento de Tecnología de Alimentos. UTPV-CeRTA. Universidad de Lleida. Rovira Roure 191. 25198 Lleida, España La demanda de frutas frescas de alta calidad, “listas para ser consumidas” y vida útil prolongada se ha incrementado a nivel mundial. La asociación internacional de productos frescos cortados (IFPA), reportó para Estados Unidos en el año 2000 ventas hasta de 10 12 billones de dólares, donde el 60% fue para servicio a empresas de transformación y el 40% a distribuidores. Se ha estimado un aumento del 3 al 5% en el servicio a la industria transformadora, así como una subida del 10 al 15% en ventas a distribuidores para los próximos 5 años (González-Aguilar y col., 2004). En Europa, uno de los primeros países en desarrollar la industria de vegetales cortados fue Francia, donde actualmente la industria está muy bien establecida. Francia y el Reino Unido son los líderes en el mercado de venta al por menor, con grandes innovaciones de productos y de tecnologías de procesamiento. La industria de este tipo de productos en países como Alemania e Italia aun se encuentra en crecimiento, mientras que el resto de los países de Europa se están iniciando en este mercado. La industria de fruta cortada en Latinoamérica está muy poco desarrollada, comparada con algunos países de Europa y Estados Unidos. (González-Aguilar y col., 2004). Riesgos microbiológicos de frutas frescas cortadas. Los alimentos consumidos crudos son potencialmente más peligrosos que los alimentos que se cocinan previamente al consumo, ya que el tratamiento de cocción destruye muchas de las toxinas producidas por los microorganismos (incluyendo C. Botulinum) y causa la muerte de patógenos infecciosos (como E. coli O157:H7). Las frutas frescas cortadas son adquiridas con la confianza de que son seguras o inocuas, por lo que el consumidor las ingiere directamente al sacarlas del empaque. Existen diferentes motivos por los que el riesgo de contaminación con microorganismos en frutas frescas cortadas se incrementa con respecto a frutas frescas enteras (de Ancos y col., 2003): 1- El proceso al que se les somete como pelado, cortado (trozos, rodajas, tiras, cubos, etc.), destruye la barrera natural de protección del vegetal, favoreciendo la salida de nutrientes (azúcares, etc.) y la contaminación con microorganismos alterantes o patógenos. 2- El perfeccionamiento en el diseño inteligente de combinaciones de distintas tecnologías de conservación o barreras adecuadas a cada tipo de alimento, como la selección del envase (permeabilidad, películas impregnadas con antimicrobianos, etc.) temperaturas y atmósferas modificadas óptimas, ha permitido prolongar la vida útil de las frutas frescas cortadas el tiempo suficiente para que tenga lugar el crecimiento de algunos patógenos humanos que, en otras circunstancias, no hubieran podido alcanzar niveles infecciosos en tiempos de almacenamiento más cortos. Simposium “Nuevas tecnologías de conservación y envasado de frutas y hortalizas. Vegetales frescos cortados” La Habana, Cuba. Marzo 2005 111 Proyecto XI.22 Desarrollo de tecnologías para la conservación de vegetales frescos cortados Tapia M. S. y col. Incidencia de patógenos en cortadas frutas frescas Aunque las bacterias deteriorativas, levaduras y mohos dominan la microflora en frutas, se está documentando la presencia ocasional de bacterias patogénicas, parásitos y virus capaces de causar infecciones. En la tabla 1 se muestran diferentes estudios de incidencia de patógenos en frutas, donde se puede observar que el patógeno más frecuentemente encontrado ha sido Salmonella, en melón. Durante el procesamiento de las frutas, la calidad del agua de lavado, la higiene (incluyendo la higiene de operarios, equipos y áreas) y el mantenimiento del producto a temperaturas de refrigeración, juegan un papel muy importante. La contaminación de las frutas frescas cortadas puede ocurrir en diferentes puntos de la cadena de procesamiento, considerándose como operaciones muy importantes, el lavado de las frutas (que reduce la carga microbiana que acompaña a la materia prima), el pelado y el cortado, que son procesos en los que el riesgo de contaminación por operarios o por equipos sucios, es mayor que cualquier otro (Figura 1). 112 Sin embargo, también se han encontrado L. monocytogenes y Shigella en varios productos. Según Beuchat (2002) todos los tipos de frutas tienen el potencial para albergar patógenos, pero Shigella spp., Salmonella, Escherichia coli enterotoxigénica y enterohemorragica, Campylobacter spp., Listeria monocytogenes, Yersinia enterocolítica, Bacillus cereus, Clostridium botulinum, virus y parasitos tales como Giardia lamblia, Cyclospora cayetanensis, y Cryptosporidium parvum, son los de mayor importancia en salud pública. Equipos de procesamiento Agua de lavado o enjuagado Contaminación cruzada Operarios Empacado Manipulación por consumidor Temperatura de almacenamiento Figura 1. Fuentes de contaminación de las frutas frescas cortadas y condiciones que incrementan el riesgo. Simposium “Nuevas tecnologías de conservación y envasado de frutas y hortalizas. Vegetales frescos cortados” La Habana, Cuba. Marzo 2005 Proyecto XI.22 Desarrollo de tecnologías para la conservación de vegetales frescos cortados Tapia M. S. y col. Supervivencia y multiplicación de patógenos en frutas frescas cortadas. La supervivencia y/o crecimiento de patógenos en frutas frescas cortadas depende del tipo de organismo, tipo de producto y las condiciones a las que son expuestos, incluyendo el envasado y el almacenamiento. En general, los patógenos pueden sobrevivir pero no crecer en la superficie externa no dañada de frutas frescas, una excepción es el crecimiento de E. coli O157:H7 sobre la superficie de la corteza de melones y sandías (Del Rosario y Beuchat, 1995). La supervivencia de patógenos en frutas aumenta significativamente una vez que la barrera protectiva de la epidermis se ha roto por daños físicos, pinchazos o magulladuras, o por degradación debida a microorganismos patógenos de plantas (bacterias u hongos). Esas condiciones pueden también promover la multiplicación de patógenos, especialmente a temperaturas no refrigeradas. Los microorganismos sobreviven frecuentemente a temperaturas de refrigeración, sin embargo, esa condición reduce o elimina la habilidad del organismo para multiplicarse. Excepciones de esto son los patógenos psicrotroficos incluyendo no proteolíticos C. botulinum, L. monocytogenes, Y. enterocolítica, y el patógeno presuntivo Aeromonas hydrophila. Se ha demostrado que varios patógenos entéricos han sido capaces de multiplicarse en la superficie de melones cortados, lechugas cortadas y perejil picado, así como también en productos más ácidos, tales como tomates picados y tejidos de manzanas heridas (Harris y col., 2003). Durante las operaciones de transformación o procesamiento de frutas (pelado, cortado, rebanado o picado) para obtener frutas frescas cortadas, puede ocurrir el paso de microorganismos patógenos (si están presentes), desde la superficie de la fruta intacta, al tejido interno (Harris y col., 20003). Por otra parte, durante estas etapas de procesamiento se liberan sustancias hacia el exterior ricas en nutrientes, dándose así las condiciones idóneas para el crecimiento microbiano (Martín-Belloso y Rojas- Graü, 2004). La supervivencia y crecimiento de microorganismos patógenos en frutas frescas cortadas se ha demostrado en diferentes estudios. Así, Escherichia coli O157:H7, diferentes especies y serotipos de Salmonella, Shigella, L. monocytogenes y Staphylococcus aureus crecieron en distintos tipos de frutas frescas cortadas, particularmente en aquellas almacenadas a temperaturas por encima de 20ºC como se muestra en la tabla 2, mientras que Campylobacter jejuni sobrevivió pero no creció. Brotes de enfermedades asociadas con el consumo de frutas frescas cortadas. El número de brotes de enfermedades transmitidas por alimentos asociadas a frutas frescas cortadas se ha incrementado en los últimos años (Beuchat, 1998; Beuchat, 2002; Harris y col., 2003). Se han propuesto varias razones para explicar este incremento, entre las que se pueden señalar: 1- Un cambio en los hábitos alimenticios (Beuchat, 1998), habiendo un incremento en los últimos años en el consumo de frutas frescas cortadas, debido a la activa promoción de las frutas como una parte importante de una dieta sana y a las facilidades que ofrece al consumidor como producto preparado y listo para consumo. 2- El aumento ocurrido en los últimos años en el consumo de alimentos no preparados en el h o g a r, c o m o c o n s e c u e n c i a d e u n a incorporación activa de la mujer en el mercado laboral, así como la popularidad de los “salad bars” o buffets . 3- La globalización del mercado de frutas fresca cortadas (Beuchat, 1998). 4- La introducción inadvertida de patógenos en nuevas áreas geográficas (por ejemplo cyclosporiasis en Estados Unidos, asociada al consumo de frambuesas importadas de Guatemala) (Beuchat, 1998) 5- Cambios genéticos en los microorganismos (desarrollo de nuevos factores de virulencia, así como de la resistencia a factores de stress ambiental) (Beuchat, 1998) Simposium “Nuevas tecnologías de conservación y envasado de frutas y hortalizas. Vegetales frescos cortados” La Habana, Cuba. Marzo 2005 113 Proyecto XI.22 Desarrollo de tecnologías para la conservación de vegetales frescos cortados Tapia M. S. y col. 6- Cambios en la demografía social (aumento de la cantidad de personas con mayor susceptibilidad (personas con problemas en el sistema inmunológico, personas con enfermedades crónicas, etc.) Tabla 2. Supervivencia y crecimiento de bacterias patógenas en frutas frescas cortadas. Patógeno Fruta pH Una amplia variedad de bacterias, virus y parásitos se ha relacionado con brotes de enfermedades asociadas a frutas frescas cortadas. En la tabla 3 se muestran los principales brotes causados por bacterias patógenas que han ocurrido en los últimos años, donde se observa que la 114 Temperatura OC Recuento Log10 UFC Inicial/final Referencia mayoría de los brotes se han asociado a diferentes serotipos de Salmonella y E. coli O157:H7, además se puede ver la diversidad de frutas frescas cortadas capaces de servir como vehículos de enfermedades en humanos. Simposium “Nuevas tecnologías de conservación y envasado de frutas y hortalizas. Vegetales frescos cortados” La Habana, Cuba. Marzo 2005 Proyecto XI.22 Desarrollo de tecnologías para la conservación de vegetales frescos cortados Tapia M. S. y col. Cyclospora cayetanensis ha sido el parásito más implicado en brotes causados por consumo de frutas frescas cortadas, mientras que los virus principalmente involucrados han sido el virus Norwalk, el virus de la hepatitis A y Calicivirus (Harris y col., 2003). Es importante señalar que no todos los países tienen un registro disponible de los brotes que ocurren a lo largo del año o sistema de vigilancia epidemiológica. Siendo las causas principales: el hecho de que los brotes no sean informados, no se hace el seguimiento necesario para la identificación de los agentes causales o no se aplica un sistema de trazabilidad, ésta situación ocurre principalmente en los países en vías de desarrollo. Así podemos ver en la tabla 3 que la gran mayoría de los brotes han sido documentados en Estados Unidos, pero esto no indica que en otros países u otros continentes no han ocurrido brotes, sino que en Estados Unidos se ha hecho el esfuerzo Tabla 3. Brotes de enfermedades por bacterias patogénicas transmitidas por frutas frescas cortadas Patógeno Año Localización Fruta Casos (muertes) Referencia Simposium “Nuevas tecnologías de conservación y envasado de frutas y hortalizas. Vegetales frescos cortados” La Habana, Cuba. Marzo 2005 115 Proyecto XI.22 Desarrollo de tecnologías para la conservación de vegetales frescos cortados Tapia M. S. y col. El mínimo procesado requerido para obtener frutas frescas cortadas, donde se omite algún paso efectivo de eliminación microbiana, podría dar como resultado productos que naturalmente transporten microorganismos, algunos de los cuales pueden ser potencialmente peligrosos para la salud humana. Además, algunas condiciones de procesamiento como el empacado en atmósferas modificadas, ampliamente utilizado para este tipo de productos, como herramienta para restringir el crecimiento de microorganismos y lograr prolongar la vida útil del producto, tiene poco o ningún efecto sobre el crecimiento de algunos patógenos de gran importancia como E. coli O157:H7 (Harris y col., 2003), Aeromonas hydrophila (Harris y col., 2003) y Listeria monocytogenes (Beuchat, 1998) y podría favorecer el crecimiento de microorganismos anaerobios, los cuales encuentran menos competencia por una baja carga microbiana nativa presente. Por otra parte, otra de las estrategias para conservar los alimentos como es el uso de temperaturas de refrigeración no detiene el crecimiento de microorganismos psicrotroficos como Aeromonas hydrophila y Listeria monocytogenes (Harris y col., 2003). Medidas de control para reducir riesgos por patógenos en frutas frescas. Se han desarrollado diferentes estrategias efectivas de intervención para garantizar productos inocuos al consumidor. En esta se ha considerado que la prevención en la contaminación de frutas frescas y hortalizas con patógenos microbianos, niveles dañinos de residuos químicos o contaminantes físicos, es la estrategia más efectiva para garantizar que esos alimentos sean saludables e inocuos para el consumo humano (Garrett y col., 2003) Entre las estrategias desarrolladas para garantizar productos inocuos al consumidor podemos señalar: las buenas prácticas de agricultura, manufactura y la implementación de Análisis de Peligros y Puntos de Control Críticos. 116 Estas estrategias han sido recomendadas por diferentes organismos, así en 1998, la Administración de Alimentos y Drogas (FDA) emitió una guía para la industria llamada “Guía para minimizar los peligros microbianos para la inocuidad de alimentos en frutas frescas y hortalizas, la cual describe las prácticas de buena agricultura y manufactura (GAPs y GMPs, respectivamente). Esa guía cubre calidad del agua, manejo de estiércol, entrenamiento de trabajadores, deinfección y transporte (Rajkowski y Baldwin, 2003). Un año más tarde en 1999, el Comité de Advertencia Nacional en Criterios Microbiológicos para Alimentos de los Estados Unidos (NACMCF, 1999), recomendó varios pasos para garantizar la inocuidad microbiológica de frutas frescas y hortalizas desarrollando 7 recomendaciones específicas. Ellas son (1) Buenas prácticas de agricultura, (2) Buenas prácticas de manufactura, (3) Programas de Análisis de Peligros y Puntos Críticos de Control, (4) Entrenamiento a operarios, (5) Evaluación de riesgos, (6) investigación y (7) mejores sistemas de trazabilidad en frutas para investigar sobre brotes relacionados con este tipo de productos (Rajkowski y Baldwin, 2003). Medidas de control para reducir riesgos por patógenos en frutas frescas cortadas. Para minimizar los riesgos de infecciones o intoxicaciones asociadas a frutas frescas cortadas, se deben identificar las fuentes potenciales de contaminación desde la materia prima hasta su consumo en la mesa y las medidas específicas para prevenir y/o minimizar los riesgos de contaminación deben ser consideradas y correctamente implementadas. En aquellos casos en que las posibilidades de contaminación no puedan ser excluidas se deben aplicar procesos de descontaminación. La materia prima de la que se parte para obtener las frutas frescas cortadas, es de suma importancia y el industrial o procesador debe contar con un proveedor que le garantice materia prima de buena calidad. Simposium “Nuevas tecnologías de conservación y envasado de frutas y hortalizas. Vegetales frescos cortados” La Habana, Cuba. Marzo 2005 Proyecto XI.22 Desarrollo de tecnologías para la conservación de vegetales frescos cortados Tapia M. S. y col. Cada uno de los pasos del procesamiento de frutas frescas cortadas afecta la microflora del producto final, así como también la manipulación post-procesamiento. En la figura 2 se presenta el diagrama de flujo del procesamiento de frutas frescas cortadas. Recepción de materia prima Selección Pre-enfriamiento Lavado y desinfección Pelado Cortado Acondicionamiento Envasado Embalaje Transporte, Distribución y Venta Consumidor Figura 2. Diagrama de flujo de preparación de frutas frescas cortadas En este esquema se consideran puntos críticos del procesamiento, el lavado, pelado, cortado y acondicionamiento (incluye, inmersión en soluciones antioxidantes, soluciones con compuestos para mantener una buena textura del producto y escurrido). Esto debido a que el producto entra en contacto con los operarios, equipos y soluciones, los cuales podrían ser fuentes de contaminación. Del mismo modo, son críticos la temperatura (que debe ser de refrigeración) y el envasado. Esto significa que la higiene y la aplicación de buenas prácticas sanitarias por parte de los operarios y el uso de equipos con superficies limpias y desinfectadas, juega un papel fundamental en la reducción de las posibilidades de contaminación por microorganismos y que el mantenimiento de una temperatura baja, es vital durante todo el procesamiento, distribución, venta y almacenamiento en casa. El lavado con soluciones de cloro es el método más ampliamente utilizado para descontaminar la superficie de las frutas y áreas de procesamiento. Sin embargo existen otros métodos como son, el uso de bromo, yodo, fosfato trisódico, compuestos de amonio cuaternario, ácidos, peróxido de hidrogeno, ozono e irradiación. Algunos desinfectantes son apropiados para usarlos en lavado por contacto directo, mientras que otros solamente se utilizan para las superficies de los equipos de procesamiento, transporte y almacenamiento de la frutas. El lavado con soluciones de cloro, es considerado un punto crítico de control en un Análisis de Peligros y Puntos Críticos de Control para evitar los patógenos humanos en productos frescos cortados terminados (Zhuang y col., 2003). Otro factor importante a considerar es la temperatura del agua de lavado, ya que puede producirse la infiltración de microorganismos al interior del fruto como consecuencia de un diferencial de temperatura. Así Zhuang y col. (1995) encontraron niveles significativamente mayores de Salmonella montevideo (incorporados en la superficie de tomates a 25ºC) cuando fueron sumergidos en una suspensión a 10º C que en una suspensión de células a 25 o 37ºC. Las condiciones de envasado, la integridad del mismo y la refrigeración desde la producción hasta la puesta en venta son también puntos de control importantes para la vida útil de frutas frescas cortadas. Generalmente una estrategia aplicada para prevenir las alteraciones de las frutas cortadas y poder alargar la vida útil del producto final, es envasar en atmósfera modificada (Soliva-Fortuny y col., 2004). Sin embargo el uso de atmósferas modificadas no es una buena defensa contra patógenos como Listeria monocytogenes y Aeromonas hydrophila que podrían estar presentes. Las empresas de alimentos están inmersas actualmente en procesos de implantación y certificación de sistemas de Simposium “Nuevas tecnologías de conservación y envasado de frutas y hortalizas. Vegetales frescos cortados” La Habana, Cuba. Marzo 2005 117 Proyecto XI.22 Desarrollo de tecnologías para la conservación de vegetales frescos cortados Tapia M. S. y col. gestión y aseguramiento de la calidad dentro de sus cadenas productivas y más recientemente de sistemas de trazabilidad. En general, las normativas referentes a sistemas de trazabilidad permiten determinar el origen de un problema de seguridad alimentaria, acatar los requisitos legales y satisfacer las expectativas de los consumidores sobre seguridad y calidad de los productos consumidos, logrando una identificación exacta y a tiempo del alimento, su origen, ubicación dentro de la cadena de abastecimiento y retiro eficiente del mismo, si fuese necesario (Martín-Belloso, 2003). Conclusión. Debido a la popularidad de las frutas frescas cortadas, el hecho de que puedan ser vehículos de transmisión de enfermedades hace indispensable que se hagan todos los esfuerzos necesarios para que lleguen con garantía de inocuidad al consumidor y que sean además, de muy buena calidad desde el punto de vista sensorial conservando al máximo las características de los productos frescos. Los estudios de las frutas frescas cortadas se concentraron inicialmente en la respuesta fisiológica a las operaciones de cortado y de mantenimiento de la calidad en el almacenamiento refirgerado. La calidad de las frutas frescas cortadas ha ido aumentado mediante el uso de diferentes estrategias como el envasado en atmósferas modificadas y diversos tratamientos post-cosecha y durante las operaciones de preparación. Sin embargo, la concienciación acerca de su papel en la transmisión de enfermedades y el conocimiento de las multiples vías de contaminación con patógenos de las frutas en el campo, las ha convertido en objeto de enorme atención debido al riego microbiológico que pueden representar para los consumidores y a la gran responsabilidad que significa garantizar su inocuidad por parte de los procesadores. Por ello, el conocimiento de los patógenos microbianos asociados a las frutas frescas cortadas, su incidencia, crecimiento y supervivencia al procesado mínimo, su control y registro de los brotes en los que estos productos han 118 estado involucrados, constiuyen áreas esenciales de estudio para la sustentabilidad del mercado de las frutas frescas cortadas. Estrategias de control como la aplicación de buenas prácticas de agricultura, manufactura, así como la implementación del sistema de Análisis de Peligros y Puntos de Control Críticos (APPCC) y de trazabilidad, están siendo de utilidad para que la industria pueda garantizar al consumidor frutas frescas cortadas inocuas y de alta calidad. Agradecimientos Los autores agradecen el apoyo de los Proyectos a CYTED XI.22 Desarrollo de Tecnologías para la Conservación de Productos Vegetales Frescos Cortados y CYTED XI.15. Desarrollo de Tecnologías Emergentes de Interés para Iberoamérica; al Proyecto FONACIT G2 0 0 0 0 0 1 5 3 8 D e s a r ro l l o d e A l i m e n t o s Funcionales a partir de Frutas, incorporando Componentes Fisiológicamente Activos: Vitaminas, Minerales y Microorganismos Benéficos, al Consejo de Desarrollo Científico y Humanístico de la Universidad Central de Venezuela, al proyecto AGL2003-09208-C01 Obtención de frutas mínimamente procesadas mediante agentes y recubrimientos de origen natural del Ministerio de Ciencia y Tecnología de España y a la Generalitat de Catalunya, España por su financiación. Bibliografía Beuchat, L., 1998. Surface decontamination of fruits and vegetables eaten raw: a review. Food Safety Issues. www.who.int/foodsafety/publications/fs_manage ment/e/surface_decon.pdf Beuchat, L. R. 2002. Ecological factors influencing survival and growth of human pathogens on raw fruits and vegetables. Microbes and infection. 4: 413 423. De Ancos, B., Muñoz, M. y Cano M P. 2003. 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