FICHE MILIEU DE CULTURE MILIEU KLIGLER HAJNA I- BUT C’est un milieu combiné pour l’identification rapide des bacilles Gram –. Il permet la lecture directe de différents caractères :  utilisation du glucose  utilisation du lactose (et recherche de la -galactosidase voire aussi de la LDC)  production de gaz  production d’H2S II- COMPOSITION ET ROLE DES CONSTITUANTS Constituants Rôle Peptones (15g) Source d’azote Extraits de levure et de viande (6g) Source de facteurs de croissance Chlorure de sodium (5g) Source de minéraux – maintien de la pression osmotique Glucose (1g) Source de carbone et d’énergie (faible concentration) Lactose (10g) Source de carbone et d’énergie (forte concentration) Rouge de phénol (25mg) Indicateur pH Thiosulfate de sodium (0,3g) Précurseur de la production d’H2S Citrate de fer III (0,2g) Révélateur de la production d’H2S Agar (11g) Agent gélifiant Eau Solvant pH= 7,4 III- MODE OPERATOIRE Le milieu est habituellement présenté en culot devant avoisiner 3 cm et en pente de 5 cm.  Ensemencer le culot par piqûre centrale avec une pipette Pasteur boutonnée chargée de suspension bactérienne  Puis ensemencer la pente sans recharger la pipette en faisant des stries serrées  Dévisser en partie la capsule du tube pour permettre une incubation 24h à 37°C en aérobiose (et pour éviter également la surpression du tube dans le cas des bactéries fortement gazogènes) IV- LECTURE  observation du culot : (en zone anaérobie)  Bactérie Glu + Lac + : Fermentation rapide du glucose (avec production importante d'acides) puis du lactose  le culot devient jaune  Bactérie Glu + Lac – : Fermentation rapide du glucose (avec production importante d'acides) puis faible utilisation des peptones (alcalinisation faible du milieu en anaérobie)  le culot reste jaune  Bactérie Glu – Lac – : pas d’utilisation des glucides  le culot reste rouge  observation de la pente : (en zone aérobie)  Bactérie Glu + Lac + : Fermentation rapide du glucose (avec production importante d'acides) puis du lactose  la pente devient jaune  Bactérie Glu + Lac – : Fermentation rapide du glucose (avec production importante d'acides) puis forte utilisation des peptones (alcalinisation forte du milieu en aérobie)  la pente devient rouge  Bactérie Glu – Lac – : pas d’utilisation des glucides  la pente reste rouge  observation de la jonction pente-culot pour la recherche de production d’H2S  observation d’un soulèvement éventuel du culot pour la recherche de production de gaz. Remarque : Une bactérie utilisant le lactose (lactose +) utilisera obligatoirement le glucose (glucose+) Une bactérie glucose – sera obligatoirement lactose – ZONE DU TUBE Culot (anaérobiose) Pente (aérobiose) CARACTERE RECHERCHE ASPECT INTERPRETATION CONCLUSION LECTURE Pas de virage de l’indicateur coloré  absence d’acide dans le milieu GLUCOSE – Virage de l’indicateur coloré  accumulation d’acides dans le milieu : le glucose a été fermenté GLUCOSE + Pas de virage de l’indicateur coloré  absence d’acides dans le milieu LACTOSE – Virage de l’indicateur coloré  accumulation d’acides dans le milieu : le lactose a été utilisé LACTOSE + Pas de production de gaz GAZ – glucose lactose Gaz en glucose La production de gaz lors de la fermentation du glucose provoque une fragmentation de la gélose GAZ + Culot ou jonction pente-culot Absence d'un précipité noir de sulfure de fer. La bactérie n’a pas réduit les sulfates en sulfure. H2S – Présence d'un précipité noir de sulfure de fer. La bactérie a réduit les sulfates en sulfure. H2S + H2S LAC-, GLU+, H2S+, GAZ- LAC+, GLU+, H2S-, GAZ+ LAC-, GLU+, H2S+, GAZ-