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Biologie Appliquée
Hématologie
TD6
2015
Stéphanie Sigaut
INSERM U 1141
[email protected]
Le Sang
• 
L'Hématologie étudie la physiologie et la pathologie du sang.
• 
Le sang composé de cellules qui flottent dans un liquide jaune ambré : Le
plasma
• 
- 
Rôle :
Apporte les éléments nutritifs et les messagers (immunologiques,
chimiques) comme les hormones aux cellules de l’organisme entier
Recueille et conduit aux organes éliminateurs (peau, rein, poumon) les
produits dégradés de l'activité cellulaire.
- 
- 
Le volume sanguin total est d'environ 5 litres chez l'adulte
Le Plasma (1)
= Portion du sang qui ne contient pas les cellules sanguines.
= Obtenu, après recueil du sang dans un tube contenant un anticoagulant , par
sédimentation (les cellules se déposent naturellement dans le fond du tube)
ou plus rapidement par centrifugation.
En très grande partie constitué d'eau (92%)
le plasma contient :
- des électrolytes (Na, K, Ca ...),
- des produits des métabolismes cellulaires
(urée, bilirubine, Co2 ...),
- des enzymes,
- des hormones,
- des nutriments (glucides, lipides),
- des protéines.
Le Plasma (2)
Le taux normal des protéines sanguines est de 70 g/l.
Les principales protéines plasmatiques sont :
-  Albumine
Rôle : Transporte des éléments du sang (ex : facteurs de coagulation,
hormones…).
Elle joue aussi un rôle dans le maintien de l'équilibre hydrique du sang.
- Les immunoglobulines du système immunitaire qui jouent un rôle
essentiel dans la défense de l'organisme contre les agressions.
- Protéines du complément qui ont un rôle majeur dans l’initiation de la
réponse immunitaire et de l’inflammation
- Protéines de la coagulation sanguine (les facteurs de coagulation).
Le sérum
• 
Lors de la coagulation sanguine le sang se sépare en un caillot sanguin et
le sérum (= partie du plasma qui reste liquide)
• 
Le sérum est donc le liquide sanguin débarrassé de ses cellules et des
protéines de la coagulation
• 
On peut donc obtenir du sérum en laissant coaguler du sang recueilli sans
anticoagulant
Les cellules sanguines
• 
Les cellules du sang proviennent de l'hématopoïèse qui s'effectue dans la moelle
osseuse.
• 
Pour la plupart des cellules le passage dans le sang n'est qu'une étape intermédiaire
entre le lieu de leur production (la moelle osseuse) et le lieu de leur fonction (tissus)
• 
On distingue :
- Les hématies (ou globules rouges GR) sont des cellules anucléées. Elles
donnent la couleur du sang de part l'hémoglobine qu'elles contiennent.
Rôle : transport de l'oxygène
- Les plaquettes (ou thrombocytes) sont également des cellules anucléées.
Rôle : prévention et l'arrêt des hémorragies.
- Les leucocytes (ou globules blancs GB) sont des cellules nucléées
Rôle : défense de l'organisme contre les agressions extérieures (bactéries,
virus…)
Le frottis sanguin
= Sang étalé sur une lame de microscope
But : observer ses cellules et les dénombrer. Le frottis doit subir une coloration pour
révéler certaines cellules qui sans cela seraient transparentes, donc non visibles
Principe de la coloration
Il repose sur l'action combinée de deux colorants :
- Le May-Grünwald, contenant un colorant acide, l'éosine, et un colorant basique, le bleu de
méthylène.
- Le Giemsa, contenant lui aussi de l'éosine, et un colorant basique, l'azur de méthylène
Les constituants cellulaires acides fixent les colorants basiques. Ces éléments sont qualifiés de
basophiles (ADN, cytoplasme des lymphocytes riche en ARN).
Les constituants cellulaires basiques fixent les colorants acides. Ces éléments sont qualifiés d'acidophiles
ou d'éosinophiles (cas de l'hémoglobine et des granulations des granulocytes éosinophiles).
Les constituants fixant les deux types de colorants sont dits neutrophiles .
Résultat :
Les hématies sont beige-rosé
Les noyaux sont de bleu à violet-noir
Les granulations des granulocytes basophiles sont bleu-noir
Les granulations des granulocytes éosinophiles sont orangé.
Les granulations des granulocytes neutrophiles sont violet-lilas.
Les granulations des grands lymphocytes sont pourpres.
Les leucocytes (1)
On sépare les leucocytes en fonction de leur morphologie :
1 . Polynucléaires (PN) du fait du caractère lobé de leur noyau : PN neutrophiles, PN
éosinophiles et PN basophiles
2. Mononucléaires : Lymphocytes et Monocytes
Lymphocytes : diamètre : 7 µm, Noyau sphérique, dense
Monocytes : diamètre : 17 µm, Noyau centrale en fer à cheval
Les leucocytes (2)
l’Hémogramme (1)
Hémogramme ou formule sanguine complète :
Analyse quantitative (numération) et qualitative (formule) des éléments figurés
du sang : globules rouges (GR) , globules blancs (GB) et plaquettes.
L'analyse est effectuée au microscope ou par un automate qui mesure :
-  le nombre GR
-  l'hématocrite : % relatif du volume des cellules (GR majoritairement) circulant
dans le sang par rapport au volume total du sang
-  le taux d'hémoglobine
-  le nombre de GB
Le prélèvement de sang se réalise sur tube contenant une substance anticoagulante (ex : solution d'EDTA)
l’Hémogramme (1)
Numération Globulaire = Nbre [Globules Rouges + Globules Blancs + Plaquettes]
par unité de sang (µl)
GR :
GB
Plaquettes
5 ±0,5 E+06;
4,5±0,5 E+06
7 000 ± 3 000 chez l’adulte
150 000 à 450 000
Formule Leucocytaire = Nbre des différentes populations de leucocytes
Granulocytes Neutrophiles 1 800 à 8 000 40 -70%
Eosinophiles
50 à 500 1 - 4 %
Basophiles
< 100 0 – 1 %
Lymphocytes
1 500 à 4 500 20 – 45 %
Monocytes
100 à 1 000 4 – 8 %
NB: résultats exprimées en Nbre absolu par µl (1µl=1mm3)
Exercice 1
Par quelle méthode obtient-on le plasma et sérum à partir d’un prélèvement de sang?
Exercice 2 : Hémogramme
1. Quel sont les paramètres évalués dans l’hémogramme?
2. Vous devez réaliser un hémogramme. Quel procédure devez-vous suivre
lors du prélèvement sanguin?
3. Vous réalisez un frotti sanguin, identifier les éléments suivants.
Exercice 2 : Hémogramme
1. Quel sont les paramètres évalués dans l’hémogramme?
GR , GB, taux hémoglobine et hématocrite
2. Vous devez réaliser un hémogramme. Quel procédure devez-vous suivre
lors du prélèvement sanguin?
Prélèvement fait dans un tube contenant une substance anticoagulante (EDTA ,
héparine… )
3. Vous réalisez un frotti sanguin, identifier les éléments suivants.
Myélogramme
•  Prélèvement de moelle osseuse au niveau du sternum
ou de la crête iliaque
•  Réalisation d’un frottis
•  Étude des progéniteurs des globules rouges, plaquettes,
des polynucléaires et monocytes
Myélogramme
•  Lignée érythroblastique
•  Au fur et à mesure des divisions cellulaire, la cellule se charge en
hémoglobine et le noyau se condense et son reliquat est finalement
expulsé
Myélogramme
•  Lignée myéloide
Myélogramme
•  Mégacaryocyte
•  Fragmentation de son cytoplasme donne les plaquettes
Bonus : frottis sanguins pathologiques
Présence de plasmodium falciparum dans les hématies = paludisme
Bonus : frottis sanguins pathologiques
Présence de trypanosomes = maladie du sommeil
Bonus : frottis sanguins pathologiques
Mise en évidence de leishmania dans un myélogramme = leishmaniose
Bonus : frottis sanguins pathologiques
Hématies falciformes = drépanocytose (anomalie de l’hémoglobine)
L’agglutination et les groupes sanguins ABO (1)
è Technique que repose sur l’interaction spécifique entre un anticorps et un
antigène
Un antigène est une macromolécule naturelle ou synthétique (protéine,
glucide) reconnue par des anticorps. Les antigènes peuvent être exprimés à la
surface des cellules, mais aussi être solubles.
Dans le cas d'antigènes protéiques, on nomme épitope ou déterminant
antigénique la partie de l'antigène reconnue par un anticorps. Un même
antigène peut comporter plusieurs épitopes (identiques ou différents) et
ainsi induire une réponse immunitaire variée.
Le système ABO est le premier système de groupe sanguin découvert (1900-1901)
« ABO » est une combinaison des 3 lettres utilisées pour définir les groupes sanguins.
L’agglutination et les groupes sanguins ABO (2)
La classification ABO des groupes sanguins repose sur la présence ou non
d’antigènes A ou B (= Sucres ou glucides de type A ou B) à la surface des GR.
Le système ABO révèle quatre groupes sanguins : A, B, O et AB : Les GR du
groupe sanguin A possèdent des antigènes A, ceux du groupe B des antigènes B,
ceux du groupe AB des antigènes A et B alors que ceux du groupe O ne contiennent
pas d’antigènes de type A ni de type B.
Adrien Six_Agglutination_Fête de la Science 2007
L’agglutination et les groupes sanguins ABO (3)
Il existe des anticorps (Immunoglobulines) reconnaissant les sucres de type A ou B.
In vitro, si les anticorps reconnaissent les sucres présents à la surface des GR à Agglutination
In vivo, si les anticorps reconnaissent les sucres présents à la surface des GR à Plasmolyse
Adrien Six_Agglutination_Fête de la Science 2007
L’agglutination et les groupes sanguins ABO (4)
Lecture des différentes réactions par techniques
Technique en tube
Technique en microplaque
L’agglutination et les groupes sanguins ABO (5)
Réalisation et interprétation d'un groupage ABO :
Le groupage sanguin ABO est la seule recherche des antigènes à la surface des
GR qui comporte deux épreuves :
- l'épreuve globulaire (Beth-Vincent)
- l'épreuve plasmatique (Simonin-Michon).
Chaque individu d'un groupe comporte les anticorps dirigés contre les autres
groupes ABO.
Cette immunisation se réalise au cours des 6 premiers mois de la vie, lorsque le
corps du nouveau-né est exposé aux différents germes de l'environnement. Cette
exposition conduit à la création d'anticorps notamment les anticorps des groupes
sanguins, le système ABO n'étant pas exclusivement d'origine érythrocytaire. Ces
anticorps sont dits "naturel".
Epreuve globulaire (Beth-Vincent)
• 
Cette épreuve consiste à mettre en évidence les antigènes du système
ABO de la surface des GR à l'aide d'anticorps (antisérum) spécifiques =
détermination le groupe ABO du patient.
• 
Lors de cette épreuve, il doit être utilisé un anti-A, un anti-B et un anti-AB.
- l'anti-A permettra de reconnaitre les individus possédant les
antigènes A
- l'anti-B les individus possédant l'antigène B
- l’anti-AB les individus possédant l'antigène A et/ou l'antigène B.
Epreuve plasmatique (Simonin-Michon)
• 
Cette épreuve consiste à mettre en évidence les anticorps du système
ABO contenus dans le plasma du patient à l'aide de GR de groupe ABO
connu.
Lors de cette épreuve, il est utilisé des GR de groupe A et des GR B.
- Les individus de groupe A possèdent les anti-B, le plasma agglutinera
donc avec les globules rouges de groupe B
- Les individus de groupe B possèdent les anti-A, le plasma agglutinera
donc avec les hématies de groupe A
- Les individus O possèdent les anti-A et les anti-B, le plasma agglutinera
avec les hématies A et B
- Les individus de groupe AB ne possèdent pas d'anticorps, il n'y aura donc
aucune réaction avec les différentes hématies.
Exercice 3 : L’agglutination et les groupes sanguins AB0
Exercice 3 : L’agglutination et les groupes sanguins AB0
1.  Les antigènes A et B présent à la surfaces de leurs hématies. Ce sont
des sucres (glucides de type A et B.
2.  Les résultats seront les suivants :
-  l'anti-A induira l’agglutination des GR possédant les antigènes A : Groupe A
-  l'anti-B induira l’agglutination des GR possédant les antigènes B : Groupe B
-  l’anti-AB induira l’agglutination des GR possédant les antigènes A et/ou :
Groupe A, B et AB.
- 
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- 
- 
Un individu du groupe A présentera une agglutination avec les sérums A et
AB
Un individu du groupe B présentera une agglutination avec les sérums B et
AB
Un individu AB présentera une agglutination avec l’ensemble des
antisérums : A, B et AB.
Un individu O ne présentera pas d’agglutination quelque soit l’antisérums : A,
B et AB.
Exercice 3 : L’agglutination et les groupes sanguins AB0
Exercice 3 : L’agglutination et les groupes sanguins AB0
Le test de Simonin-Michon qui consiste à mettre en évidence les anticorps du
système ABO contenus dans le plasma du patient à l'aide de GR de groupe ABO
connu.
on utilise des GR de groupe A et des GR B.
- Les individus de groupe A possèdent les anti-B, le plasma agglutinera
donc avec les globules rouges de groupe B
- Les individus de groupe B possèdent les anti-A, le plasma agglutinera
donc avec les hématies de groupe A
- Les individus O possèdent les anti-A et les anti-B, le plasma agglutinera
avec les hématies A et B
- Les individus de groupe AB ne possèdent pas d'anticorps, il n'y aura
donc aucune réaction avec les différentes hématies.
Exercice 4 : L’agglutination et les groupes sanguins AB0
Exercice 4 : L’agglutination et les groupes sanguins AB0
1. Cette épreuve consiste à mettre en évidence les antigènes du système ABO de la
surface des GR à l'aide d'anticorps spécifiques : des anti-A, des anti-B et des anti-AB, qui
permettront respectivement de reconnaître les individus possédant les antigènes A, B et
les individus possédant l'antigène A et/ou l'antigène B.
2. On observe une agglutination des GR en présence de l’anti-B et l’anti-AB. Le
groupe sanguin du patient est B.
3. Il se base sur les conséquences induites chez l'hôte par l’infection bactérienne à savoir
la production d'anticorps dirigés contre cette bactérie. Les anticorps sont recherchés, le
plus souvent, dans le sang circulant après prise de sang.
Autres systèmes de groupes sanguins
•  Le système rhésus permet de classer les groupes sanguins selon
la présence ou non de l’antigène D à la surface des globules ouges
(rhésus est le nom d’une espèce de macaque, Macaca rhesus, qui a
permis de mettre en évidence ce système de groupe sanguin)
•  Autres systèmes avec autres antigènes : Kell, Duffy, Lewis, Kidd,
MNSs
Transfusion sanguine
•  Transfusion de globules rouges :
–  concentré, contient peu de plasma
–  Donc présence d’antigène sur les globules rouges et absence
d’anticorps
Transfusion sanguine
•  Transfusion de plasma :
– 
– 
– 
– 
Contient des anticorps et pas d’antigènes
Donc règles de compatibilité différentes de la transfusion de GR
AB+ donneurs universels de plasma
O- receveurs universels de plasma
Accident transfusionnel
•  Si on ne respecte pas les règles de
compatibilité :
–  Fixation des anticorps sur les antigènes
–  Activation du complément
–  Lyse des globules rouge = hémolyse
–  Csq = inefficacité de la transfusion,
insuffisance rénale, coagulation intravasculaire disséminée