Erfaringer med diagnostikk av
kusmavirus i Trondheim
Svein Arne Nordbø
Årskonferansen FHI 3. desember 2015
Kusma (parotitt)
• Dråpesmitte/kontaktsmitte
• Inkubasjonstid 2-3 uker (18
dager)
• Smittsom 1uke før til og med 7-9
dager etter symptomdebut
• Rammer spyttkjertlene, men kan
også infisere pancreas, testikler,
ovarier og CNS
• Parotittvirus (paramyxovirus)
• 1 serotype
• 12 genotyper
Diagnostikk anbefalt av CDC
http://www.cdc.gov/mumps/lab/specimen-collect.html
• Serology (serum) samples
– The first (acute-phase) serum sample should be collected as
soon as possible upon suspicion of mumps disease.
– Convalescent-phase serum samples should be collected about
2–3 weeks after the acute-phase sample.
– Persons with a history of mumps vaccination may not have
detectable mumps IgM antibody regardless of the timing of
specimen collection.
– Paired serum samples from vaccinated persons, even if
appropriately timed, may not show a rise in IgG titer.
Hvor pålitelige er de kommersielle
parotitt-testene ?
Evaluering av 6 kommersielle EIA – tester
for påvisning av IgG- og IgM- antistoffer mot
parotittvirus (kusma)
Torunn K. Sørensen
og
Kjersti Hundvin
Bacheloroppgave 2010
Materiale og Metode
ELISA – testsystem:
Det ble utprøvd kits fra 6 forskjellige produsenter
Antistoffpåvisningen med hensyn på IgG og IgM mot
parotittvirus
Sera fra pasienter med CMV, EBV, enterovirus,
parainfluensa, influensa, mistenkt parotitt, blodgivere og
barn nylig MMR-vaksinert
Følgende produsenter var med i sammenligningen:
Virotech
NovaTec
Diagnostic Automation Inc. (DAI)
VirionSerion
LDN
Siemens Enzygnost
Parotitt IgG resultater
IgG
DAI
Virotech VirionSerion NovaLisa
LDN
Siemens
Positiv
59
37
59
36
62
49
Negativ
10
29
8
20
6
9
Gråsone
1
4
3
14
2
12
70
70
70
70
70
70
Sum
Parotitt IgM resultater
IgM
DAI
Virotech VirionSerion NovaLisa
LDN
Siemens
Positiv
19
7
17
5
40
3
Negativ
49
54
47
65
17
60
Gråsone
2
9
6
0
8
2
70
70
70
70
65
65
Sum
Svært få som blir syk etter fullvaksinering
(2 doser MMR) responderer med
påvisbart IgM, men det er betydelig
forskjell mellom ulike tester
Laboratory Confirmation by IgM Serology
http://www.cdc.gov/mumps/lab/overview-serology.html
Ikke vaksinert: 80-100% IgM positiv
1 dose MMR: 50-80% IgM positiv
2 doser MMR: 13-15% IgM positiv
Rota et al. CVI 2013
Resultater ved St. Olavs Hospital
Av 83 parotitt-PCR positive pasienter var kun 9
(11%) positive for IgM med Liaisons test!
Et ukjent antall av disse pasientene var ikke
eller var ufullstendig vaksinert.
Viruspåvisning
1. PCR (real-time)
2. Dyrkning (gullstandard)
Ved St. Olavs Hospital
benyttes flocked swab i 2 ml
UTM transportmedium med
glasskuler
Diagnostikk anbefalt av CDC
http://www.cdc.gov/mumps/lab/specimen-collect.html
• Oral or buccal swab samples
– Collect oral or buccal swab samples as soon as mumps disease
is suspected.
– The buccal or oral swab specimens are obtained by massaging
the parotid gland area for 30 seconds prior to swabbing the area
around Stensen’s duct.
– Flocked synthetic swabs are preferred over cotton swabs.
– Swabs should be placed in 2 ml of standard viral transport
medium
Diagnostikk anbefalt av CDC
http://www.cdc.gov/mumps/lab/specimen-collect.html
• Urine specimens
– Unlike buccal and oral specimens, urine samples may not be
positive for mumps virus until >4 days after symptom onset.
– A minimum volume of 50 ml of urine should be collected in a
sterile container and then processed by centrifuging at 2500 × g
for 15 minutes at 4°C.
– The sediment should be resuspended in 2 ml of VTM.
– The best method for preserving mumps virus in processed
(centrifuged) urine is to freeze the sample at −70°C and ship on
dry ice.
Dyrkning av parotittvirus i cellekultur
• Viruset kan dyrkes i flere ulike cellelinjer
• Apenyreceller er mye brukt (f.eks. Veroceller)
• Ved AMM, St. Olavs Hospital har vi hatt vekst i
både LLC-MK2 celler og TMG-1 celler
• Cytopatogen effekt (CPE) er blitt registrert 2-9
dager etter utsæd
• CPE er meget karakteristisk for parotittvirus og kan
vanskelig forveksles
• UTM-mediet fra Copan fungerer meget bra til
dyrkning av parotittvirus
LLC-MK2 celler
TMG-1 celler
Diagnostiske erfaringer ved avdeling for
medisinsk mikrobiologi, St. Olavs Hospital
• Neseprøver ga upålitelige resultater (for lav
sensitivitet)
• 2 urinprøver (RNA-ekstraksjon fra 1 ml) fra
kusmapasienter var negative
• 3 sera i akuttfasen til pasienter med diagnostisert
kusma var PCR negativ
• Virus dyrkning var viktig i startfasen for å justere
sensitiviteten til vår real-time PCR (noen prøver var
kun dyrkning positive)
• Levende virus kunne påvises i halsprøve i opptil 9
døgn etter symptomdeby (også PCR positiv)
• 1 pasient var PCR-positiv (Ct 22) 11 døgn etter
symptomdebut!
Diagnostiske erfaringer ved avdeling for
medisinsk mikrobiologi, St. Olavs Hospital
• Nesten ingen av pasientene som fikk kusma til
tross for fullvaksinering med MMR hadde påvisbart
IgM med Liaison-testen
• Pasient født i 1982 ble innlagt med serøs meningitt
og klassiske kusmasymptomer. Han hadde
muligens kun fått 1dose MMR-vaksine.
Spinalvæske tatt 7 dager etter symptomdebut (og
positiv PCR i ekspektorat) var primært negativ i
PCR, men ble reproduserbar svak positiv etter at
ekstraksjonsvolumet ble økt fra 200 µl til 1000µl.
IgM-testen var negativ.
• EBV var en hyppig differentialdiagnose.
Av 27 parotitt-DNA positive prøver ble
EBV-DNA påvist i 47,1% (13/27), men
oftest i meget lav konsentrasjon
(reaktivering?)
Situasjonen pr. 30. november 2015
• 143 personer er mistenkt å ha blitt smittet
• Av disse er 118 verifisert med positiv PCR og/eller
dyrkning i cellekultur og muligens en ved serologi (neg
PCR i ekspektorat, lavt IgM-titer)
• Totalt påvist kusma hos 12 som ikke er studenter + en
ungdomsskoleelev
• 34 av studentene er utenlandsstudenter, hovedparten
er studenter ved NTNU – kun 3 ved HIST
• 26 av disse er studenter fra vesteuropeiske og
søreuropeiske land. Noen få fra Asia og MellomAmerika. Ingen fra Afrika
Eli Sagvik
Smittevernlege Trondheim kommune
Hvordan vil parotittepidemien utvikle seg?
Epidemic of Mumps among Vaccinated Persons, the Netherlands, 2009–2012
Jussi Sane,et al. EID 2014
Konklusjon
• Direkte påvisning av parotittvirus-RNA i prøver tatt
fra munnhulen er den raskeste, mest sensitive og
beste metoden til å diagnostisere kusma-tilfeller
• Flocked swabs i virustransportmedium egner seg
spesielt godt til både PCR og virus dyrkning
• Virus dyrkning kan være et nyttig supplement til
PCR i spesielle tilfeller (kvalitetssikring)
• Serologi er best egnet til å påvise
primærinfeksjoner, men sensitivitet og spesifisitet
varier betydelig for ulike tester
• Serologi er uegnet til diagnostikk av kusmatilfeller
hos fullvaksinerte pasienter