Laboratoriediagnostikk av flåttbårne infeksjoner - Lyme borreliose (Borrelia burgdorferi sensu lato) - Skogflåttencefalitt (Tick-borne encephalitis virus/TBE-virus) - Harepest (Francisella tularensis) - Anaplasmose (Anaplasma phagocytophilium) - Babesiose (Babasia sp) Skogflått Larve 0,5mm Voksen hann 2mm Voksen hunn 2-2,5mm Nymfe 1mm Laboratoriediagnostikk ved Borreliainfeksjon Bedre enn sitt rykte! Laboratoriediagnostikk • Dyrkning • PCR • Serologi (antistoffpåvisning) – ELISA – Immunoblot Dyrkning • • • • Gullstandard Minimum 5 uker Lav sensitivitet Ikke i bruk rutinemessig Nukleisyre amplifikasjon (PCR) Kan benyttes som supplerende test – På leddvæske eller synovialbiopsi ved mistanke om borreliaartritt der serologiske resultater er vanskelig å tolke – På spinalvæske ved mistanke om nevroborreliose der serologisk diagnose er usikker (tidlig i sykdomsforløpet) – På hudbiopsi ved mistanke om atypisk erythema migrans i tidlig fase eller ACA (acrodermatitis chronica atrophicans) PCR • OBS! Negativt svar har liten diagnostisk verdi ELISA-tester • Indikasjon for antistoffundersøkelse – Klinisk mistanke om disseminert Lyme borreliose • Multiple Erythema migrans • Nevroborreliose • Artritt • Karditt • ACA • Ikke indikasjon for antistoffundersøkelse – – – – Flåttbitt Erythema migrans Uspesifikke symptomer Behandlingskontroll Tilpasning til ny vert I flåttens tarm, ved flåttbitt og blodmåltid: - Endring i temperatur, pH og næringstilgang - Eksposisjon for antistoff, komplement og andre deler av immunforsvaret - Borrelia replikerer raskt (<500>105 på 72 timer - Endret genekspresjon Oppregulering av enkelte overflateproteiner, for eksempel OspC Nedregulering av ”flått-relaterte” genprodukter, for eksempel OspA og OspB Tilpasning til ny vert forts. • Fra ca 36 timer etter bitt: Migrasjon av Borrelia fra flåttens tarm til spyttkjertel • Overføring til nytt vertsdyr via spytt • OspC synes å være nødvendig for etablering i ny vert – OspC blir deretter nedregulert (immune evasion?) ELISA-tester • Antigenvariasjon – Strategi for å unngå immunapparatet • VlsE: lipoprotein på Borreliabakteriens overflate som gjennomgår antigen variasjon • C6: konservert område i VlsE som er immunogent • ELISA-tester bør inneholde VlsE/C6 – Mer korrelert til aktiv infeksjon enn andre antigener ELISA-tester • Sensitivitet – Nevroborreliose 95-100 % etter 6-8 uker – Artritt og ACA ca 100 % • Spesifisitet – Problem med falskt positiv IgM (5-6%?) – IgG god analytisk spesifisitet, men betydelig lavere diagnostisk spesifisitet, spesielt i endemisk område Tolkning av serologiske tester IgM IgG Ikke Ikke påvist påvist Påvist Ikke påvist Påvist Påvist Ikke påvist Påvist Tolkning Ikke infeksjon eller tidlig i sykdomsforløpet Uspesifikk IgM, evt tidlig infeksjon Aktuell eller tidligere gjennomgått infeksjon Tidligere eller aktuell infeksjon Supplerende tester • Annen ELISA • C6-peptid – Usikkert om dette bidrar til økt sensitivitet ettersom testen inneholder VlsE-antigen • Immunoblot – Kan øke spesifisiteten med 1-2% • Ingen konsensus om hvilken type konfirmasjonstest som er å foretrekke Immunoblot • Viser hvilke undergrupper av antigener antistoffene reagerer mot • Noen antigener høy sensitivitet, men lav spesifisitet (p41) • Noen antistoff markør for tidlig smitte (OspC), mens andre markerer smitte tilbake i tid (p18, p83, p100) Immunoblot • Viktigste indikasjoner – Mistenkt uspesifikk IgM – Konfirmasjonstest ved positiv ELISA, både IgM og IgG – Screeningtest ved negativ primærtest ved langvarig symptomatologi med stor klinisk mistanke om borreliose Diagnostikk av nevroborreliose • Passende klinikk • Mononukleær pleocytose i spinalvæske • Positiv antistoffindeks spinalvæske/serum • Testen skiller mellom intrathekal antistoffproduksjon og lekkasje pga defekt blod/hjernebarriere • Kan være negativ i tidlig fase • Negativ serologi og antistoffindeks ved symptomer >6-8 uker vil i praksis utelukke nevroborreliose Kontroversielle tester • Lymfocytt transformasjonstester • CD57/CD3 lymfocytt-telling • Begge tester utføres for norske pasienter på private klinikker i Tyskland • Foreløpig foreligger ikke dokumentasjon som tilsier at disse testene har noen plass i diagnostikken av borreliose • Bruk frarådes også i nasjonale anbefalinger fra bl.a. Tyskland, Frankrike, England, Nederland og USA • Mikroskopi – Uegnet! (Nylig studie i regi av FHI) CXCL13 • En mulig aktivitetsmarkør? – Kjemokin, tiltrekker B-celler – Økte nivåer i spinalvæske hos pasienter med akutt nevroborreliose – Nivået faller ved antibiotikabehandling – Foreløpig usikker spesifisitet Fylke 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 Østfold 18 14 13 15 17 19 9 8 14 Akershus 13 11 26 16 7 14 18 18 14 Oslo 11 7 45 34 19 11 5 10 20 Hedmark 1 2 2 1 1 - - 1 2 Oppland - 3 3 3 3 - 1 4 3 Buskerud 6 11 6 7 4 4 11 11 5 Vestfold 14 19 10 30 25 22 13 19 28 Telemark 70 28 30 21 25 16 18 24 25 Aust-Agder 17 32 27 15 12 12 25 21 21 Vest-Agder 47 62 59 24 25 22 32 52 27 Rogaland 39 44 25 24 40 33 29 38 46 Hordaland 21 11 14 24 37 32 40 54 68 Sogn og Fjordane 25 28 19 24 14 13 11 17 19 Møre og Romsdal 21 36 42 26 47 27 26 29 21 Sør-Trøndelag 7 9 12 7 5 18 13 4 3 Nord-Trøndelag 3 5 4 - 4 2 3 4 4 Nordland 1 4 7 2 3 2 1 1 1 Troms 1 2 1 - - 1 1 - - Finnmark - - 1 - - - - - - Ukjent fylke - - - - - - - - - Totalt 315 328 346 273 288 248 256 315 321 Husk • Problem: skille aktuell og tidligere gjennomgått infeksjon • Gode kliniske opplysninger essensielt for tolkning av borreliaserologi – Sykdomsvarighet, flåttbitt, symptomer, evt. tidligere infeksjon og behandling • Viktigste tiltak for å forbedre serologisk diagnostikk er innstramming av indikasjonsområde SEROPREVALENS AV ANTISTOFFER MOT TBEVIRUS BLANT BLODGIVERE I ØSTFOLD Astri Lervik Larsen I, Anita Kanestrøm I, Marthe Bjørland I, Sirkka Vene II, Susanne Dudman III I Senter for laboratoriemedisin, Sykehuset Østfold, II Smittskyddsinstitutet, Solna, Sverige, III Avdeling for virologi, Nasjonalt folkehelseinstitutt Inklusjon av blodgivere fra januar 2012 Totalt 460 blodgivere inkludert Alle 5 blodbankene i Østfold deltok Innsamling av flått på Hvaler Resultater 8 positive prøvene deretter videresendt Smittskyddsinstitutet Nøytralisasjonstest 3 negative (1 fått gulfebervaksine) 5 positive (2 av disse tidligere TBE vaksine, 1 oppholdt seg mye i annet land med høy forekomst) Prevalens i Østfold: 0,65% TBE også påvist i flått fra Spjærøy Laboratoriediagnostikk av skogflåttencefalitt (TBE) • Antistoffpåvisning (IgM og IgG) i serum og spinalvæske – OBS kryssreaksjon andre flavivirus • PCR tidlig i sykdomsforløpet • Prøvene sendes Folkehelseinstituttet Laboratoriediagnostikk av harepest (tularemi) • Antistoffpåvisning (IgM og IgG) i serum – Helst parsera • Vevsprøver til dyrkning (dårlig sensitivitet) og PCR-undersøkelse • Prøvene sendes St.Olavs Hospital i Trondheim Takk for meg
© Copyright 2024