01.06.15
Biologiske medikamenter –
serumkonsentrasjonsmålinger
Overlege, dr. med. Knut E. A. Lundin
Endoscopy Unit, Dept of Transplantation medicine
Centre for Immune Regulation
Oslo University Hospital, Rikshospitalet
Medical Faculty, University of Oslo
Immune treatment of IBD Disclosures • 
• 
• 
• 
• 
MSD Hospira Orion pharma Abbvie TakedaNycomed • 
• 
• 
• 
Regeneron ImmusanT Alvine PharmaceuAcals GlaxoSmithKline EMA certified expert
B cell receptor (Ig) sequence • TNF-‐α
• Interleukin 2
• Interferon γ
• MAP kinase inhibitor
• Interleukin 12/23
• α4β7 integrin
• Interleukin 6, 10, 11
• Etc etc
• Both small molecules,
cytokines, antisense,
mAb,growth factors
Immunoglobulins as anAgens fonc-02-00159-g002.jpg 892 × 1 185 bildepunkter
08.01.14 21:35
•  Immunoglobulins very good anAgens •  Protein sequence foreign to the immune system •  Clinical immunogenicity against IFX –  RA approx 10% –  Psoriasis 20-‐50% –  Crohns 50-‐60% http://c431376.r76.cf2.rackcdn.com/35762/fonc-02-00159-r2/image_m/fonc-02-00159-g002.jpg
6 Side 1 av 1
1
s of
Response and loss of
Infliximab
response
Infliximab
• Intravenous
administration
• 30% of patients
are primary non1,2
• Dosage
responders
5mg/kg every 8wks
• Trough
(TL) = drug
level
in
• 50%levels
of patients
lose
clinical
serum
just before
benefit
over next
timeiv(secondary
mary non-
nical
ndary
01.06.15
• Intravenous administration
• Dosage 5mg/kg every 8wks
• Trough levels (TL) = drug level in
serum just before next iv
non-responders)1,2
FarmakokineAkk – trough / peak / • Loss
of profile
response
”mellommåling”
can be
Pharmacokinetic
of infliximab:
managed clinically by
FarmakokineAkk Pharmacokinetic profile of infliximab:
ween iv
– Increasing dose
– Decreasing intervals between iv
tients
rapy3
seen in 5-18% of IBD patients
under maintenance therapy3
loss
of response
infliximab
(ATI) are
• to
Antibodies
to infliximab (ATI) are
oss of
Adapted from Tracey D. et al., Pharm & Ther 2008
Adapted from Tracey D. et al., Pharm & Ther 2008
Infliximab
7
8
AJG 2011; 3. Cassinotti A, Travis
1. Allez
S, IBD
M2009
et al., JCC 2010; 2. Yanai H, Hanauer SB, AJG 2011; 3. Cassinotti A, Travis S, IBD 2009
clinical
condary
• Intravenous administration
• Dosage 5mg/kg every 8wks
• Trough levels (TL) = drug level in
serum just before next iv
be
Pharmacokinetic profile of infliximab:
rimary non-
FarmakokineAkk AnA-‐adalimumab 121 RA pasienter. 40 mg adalimumab q 2 uke. 21 pasienter med anA-‐
adalimumab e 28 uker. EULAR respondere hadde mindre anA-‐
ada og høyere ada nivå. between iv
ab (ATI) are
patients
herapy3
Adapted from Tracey D. et al., Pharm & Ther 2008
Bartelds et al Ann Rheum Dis 2007
9
SB, AJG 2011; 3. Cassinotti A, Travis S, IBD 2009
11 12 Maser et al Clin Gastro Hepatol 2006
2
01.06.15
• 155 patients had HACA and IFX conc measured
• 177 tests
• Indications: Loss of response 49 %, partial response 22 %, hypersensitivity 10 %
13 14 Aﬁf et al. Am J Gastro 2010 Serum konsentrasjons måling 2008-‐2014 •  ForsikAg start 2008 – Gastrolab RH •  Innsamling og analyse frem Al 2014 – ELISA basert system (mye pipedering) Gut 2014
–  Støde fra MSD •  Fra 2014 “automaAsk” analyse på OUS Radiumhospitalet -‐ stordrif ELISA for måling av serumkonsentrasjon ELISA-‐metode for måling av anA-‐TNF-‐α i serum. Ternant et al. Ther Drug Monit 2006 1.Micro(ter plate (96-‐brønner) inkuberes med humant TNF-‐α. Vask x 4 2. Gjenværende proteinbindende steder i brønnene blokkeres med PBS-‐buﬀer (lsaM bovint serum albumin. Vask x 4 3. TilseMer standarder (0.25-‐40 ng/ml), kjente kontroller og ukjente prøver (fortynnet 1/100) i duplikat. Vask x 4 4. TilseMer HRPan( human IgG, Fc-‐spesiﬁkk Vask x 4 5. TilseMer substrat TMB (tetramethylbenzidine) 6. TilseMer stopp reagens (syre) 7. Avleses på ELISA-‐leser ved 450 nm Uspesiﬁkk bakgrunns-‐binding blir testet ved hver ukjent prøve, ved å inkubere med PBS-‐buﬀer i stedet for TNF-‐α (punkt1) . Det er oppservert uspesiﬁkk binding i serum fra RA pasienter. Analysen tar 2 dager. HRP-conjugated
secondary antibody
Anti-TNF agent
(drug)
TNF-molecule
18
3
01.06.15
Known amount added to nil-‐serum DiluAon 1:2 of three sera 19 20 Knut E. A. Lundin Knut E. A. Lundin Konklusjon -‐ take home message Intra-‐assay correlaAon •  Vi Albyr gode medikamentanalyser som gir valide resultater •  Mange pasienter har for lave eller for høye medikamentkonsentrasj
oner 21 Knut E. A. Lundin 22
DELFIA assay 41%
20%
•  Gjentade målinger sammenfaller med større andel pasienter i “terapeuAsk vindu” TR-‐Fluorometry of Eu DELFIA 4
01.06.15
TIME-‐RESOLVED FLUOROMETRY OUS RADIUM HOSPITALET •  Tar i mot prøver fra alle rekvirenter •  Analysekostnad noe under HELFO takst NOK 85 (ikke medrenget arbeidskostnader) •  Kostnad hvis kit ca NOK 350 pr prøve •  Ønsker volum •  Seder opp anA-‐drug anAbody ved lave konsentrasjoner Oppsummering og konklusjoner Gastropasienter analysert på DNR siste 6.mnder •  Serumkonsentrasjonsmåling av biologiske legemidler Infliksimab mg/L
•  Inﬂiksimab (3-‐8 mg/L), ca 1400 prøver: 50
45
40
•  40 % av målingene 3-‐8 mg/L •  30 % < 3 mg/L •  30 % > 8 mg/L 35
30
25
Infliksimab mg/L
20
15
10
5
•  Adalimumab (5-‐12 mg/L), ca 830 prøver: 0
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
Adalimumab mg/L
•  50 % av målingene 5-‐12 mg/L •  30 % < 5 mg/L •  20 % > 12 mg/L 45
40
35
30
25
Adalimumab mg/L
20
15
10
5
–  Avdekker mange pasienter med uAlsiktet høye eller for lave konsentrasjoner –  AnA-‐drug anAbodies aktuelt men kons. vikAgst –  Klinisk meget nyrg verktøy –  Stort prøvevolum –  Robuste analyser –  Norge ledende land i utviklingen –  Intet negaAvt signal vedr bioAlsvarende 0
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
Takk Al •  Jorunn Bratlie •  Merete Gedde-‐Dahl •  Magne Rekvik •  Nils Bolstad •  David Worren •  Stein Bergan •  Jørgen Jahnsen •  Bjørn Moum •  Samarbeidende gastroenterologer •  Anne Gils 5