Resistensbestemmelse av anaerobe bakterier Truls Leegaard AFA-kurs 2015 Anaerober - utfordring • • • • • • Langsomtvoksende Identifikasjon Krever spesielle vekstvilkår Opprettholdes anaerobe forhold? Hvilke funn skal resistensbestemmes? Polymikrobielt Hva skal vi resistensbestemme? • Viktig å identifisere anaerober korrekt – har tradisjonelt vært vanskelig • Dermed risikerer man å sammenligne resistensen til forskjellige grupper • Nå endelig mulig, med: – MALDITOF MS matrix-assisted laser desorption ionization timeof-flight mass spectrometry – 16S RNA • NORM 2014: Standardisering av identifikasjon og resistensbestemmelse Resistensmekanismer • Penicilliner • Karbapenemer – β-laktamase klasse A (cefalosporinaser) – Hemmes av tazobactam og klavulansyre • Bacteroides spp. • Prevotella spp. • Fusobacterium spp. – Metallo-β-laktamase – cfiA • Bacteroides fragilis gruppen Resistensmekanismer • Klindamycin – Metylaser – Høygradig, konstitutiv MLS-resistens • Bacteroides spp. • Peptostreptococcus spp. • Metronidazol – nim-gener (nitromidazol reduktase) Referansemetode: Agar-fortynning (CLSI) / Buljongfortynning (B.fragilis gruppen) Anbefalt metode: Agar gradientdiffusjon • Medium: – Brucella agar med • 5 % saueblod • 1 mg/L vitamin K1 • 5 mg/l hemin • Inokulum: – Brucella-buljong (eller tilsvarende) – 1 McFarland (3 McF for C. difficile) Agar gradientdiffusjon • Inkubering – Inkuberes innen ”1 – 2 timer” – Anaerob atmosfære (4-7 % CO2) – 20-24 timer ( - 48 timer) Supplerende tester • Nitrocefintest – Påvisning av β-laktamaser – Som regel positiv innen 30 minutter • MBL-kombinasjonsstrips Tolkning • S-I-R-kategorisering iht brytningspunkttabell Nitrocefin + R for penicilliner Nitrocefin - MIC? MIC > S ID? Repeter test Peptostreptokokker Erythromycin MIC > 8 mg/L R for Klindamycin Bacteroides Erythromycin MIC > 32 mg/L R for Klindamycin MIC > S ID? Repeter test Penicilliner Karbapenemer Klindamycin (Induserbar resistens) Metronidazol Kvalitetskontroller • Anbefales inkludert ved hvert oppsett – B. fragilis (ATCC 25285) - metronidazol – P. aeruginosa (ATCC 27853) på laktose agar Hvilke midler bør være med i et resistensoppsett? • • • • • • • Penicillin Piperacillin-tazobactam Meropenem Klindamycin Metronidazol (Kloramfenikol) Brytningspunkter fra Eucast/NordicAST/AFA: www.nordicast.org Resistensbestemmelse av anaerober i Norge • Kommedal O, Nystad TW, Bolstad B, Digranes A. Antibiotic susceptibility of blood culture isolates of anaerobic bacteria at a Norwegian university hospital. APMIS. 2007; 115: 956-61 • Hannula R, Iversen G. Resistance of Bacteroides species in Trondheim, Norway. Poster ECCMID 2008. Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=hannula+2008 • N Handal, SB Jørgensen, HS Tunsjø, BO Johnsen, TM Leegaard. Anaerobic blood culture isolates in a Norwegian university hospital: identification by MALDI-TOF MS vs 16S rRNA sequencing and antimicrobial susceptibility profiles. APMIS 2015; 123: 749-58 • NORM rapport 2014: www.antibiotikaresistens.no Kilder • NordicAST metodedokument: “Resistensbestemmelse af anaerobe bakterier”. NordicAST 2012. • Strategirapport nr. 23, 2009 – “Anaerob diagnostikk”. FHI 2010. • M11-A8 – Methods of Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria; Approved Standard – Eight edition. CLSI 2012. Identifikasjon • For å få en god oversikt over resistensforholdene er det essensielt at identifikasjonen er korrekt. • Artikkelen sammenligner MaldiTOF identifikasjon med 16S identifikasjon • Viser at MaldiTOF fungerer godt, med unntak av GPAK og non-fragilis bacteroides group pga dårlige databaser hos produsenten. • Fusobacterier må forbehandles for å få akseptabel identifikasjon • Pga utbredelsen av MaldiTOF er nå overvåkning av anaerob resistens mulig Hvilke resistens kan jeg finne i mitt eget laboratorium? • • • • • • • Resistens mot β-laktam + β-laktamase inhibitor kombinasjoner er vanlig i Bacteroides fragilis gruppen Resistens mot metronidazol på grunn av nim gener. Sjeldent, men er påvist over hele verden og det er også påvist overføring til andre arter. PCR påvisning av nim gener er ikke tilstrekkelig for å påvise resistens mot metronidazol, man må utføre en MIC bestemmelse, noe som tyder på at nim alene ikke er nok til å gi metronidazol-resistens Klindamycin resistens (20% av alle anaerobe bakterier) Beta-laktamaseproduksjon i 2/3 av Prevotella isolatene Penicillinaseproduksjon i Fusobacterium og Clostridium butyricum Bred-spektrum beta-laktamase hos Clostridium clostridioforme og Clostridium ramosum Karbapenemase produksjon hos B. fragilis (3%) Bacteroides fragilis (n=74) %R 0,064 0,125 0,25 0,5 1 2 4 8 16 32 Metronidazol 1.4 0 2 9 32 29 0 1 0 0 1 Penicillin 100 0 0 0 0 0 2 5 6 37 24 Pip-tazo 2.7 2 4 18 33 11 1 2 1 2 0 Meropenem 6.8 6 45 13 5 0 0 1 1 2 1 Klindamycin 12.2 5 6 7 14 15 10 8 0 0 9 Non-fragilis Bacteroides spp. (n=48) %R 0,064 0,125 0,25 0,5 1 2 4 8 16 32 Metronidazol 2.1 0 0 2 23 20 2 0 0 0 1 Penicillin 97.9 0 0 1 1 2 2 3 4 12 23 Pip-tazo 43.7 0 0 2 1 3 6 7 8 15 6 Meropenem 2.1 0 11 29 7 0 0 1 0 0 0 Klindamycin 29.2 6 1 4 3 4 9 7 4 1 9 Fusobacterium spp. (n=13) %R 0,064 0 11 0 2 Penicillin 15.4 10 1 Pip-tazo 0 13 Meropenem 0 Klindamycin 0 Metronidazol 0,125 0,25 0,5 1 2 4 8 16 32 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 13 0 0 0 0 0 0 0 0 0 13 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Gram-positive anaerobic cocci (n=15) %R 0,064 0,125 0,25 0,5 1 2 4 8 16 32 Metronidazol 0 2 4 3 3 0 3 0 0 0 0 Penicillin 0 12 2 1 0 0 0 0 0 0 0 Pip-tazo 0 11 1 1 1 0 1 0 0 0 0 Meropenem 0 13 1 1 0 0 0 0 0 0 0 Klindamycin 20 3 3 3 1 2 0 0 0 0 3 Prevotella spp. (n=13) %R 0,064 0,125 0,25 0,5 1 2 4 8 16 32 Metronidazol 15.4 0 3 2 0 3 3 0 1 0 1 Penicillin 69.2 3 1 0 2 1 0 1 3 2 0 Pip-tazo 0 9 3 0 1 0 0 0 0 0 0 Meropenem 0 9 4 0 0 0 0 0 0 0 0 Klindamycin 0 12 0 1 0 0 0 0 0 0 0 Clostridium spp. (n=32) %R Metronidazol 0,064 0,125 0,25 0,5 1 2 4 8 16 32 0 2 1 3 3 9 10 4 0 0 0 Penicillin 34.4 13 7 1 2 6 1 1 0 1 0 Pip-tazo 3.1 16 5 1 0 4 1 1 3 1 0 Meropenem 0 18 1 1 5 7 0 0 0 0 0 Klindamycin 31.3 6 3 1 4 2 3 3 6 1 3 B. fragilis Penicillin: R Pip-tazo: R Meropenem: R Metronidazol: R Klindamycin: R Kloramfenikol: S Pasient fra Pakistan B. thetaiotaomicron Penicillin: R Pip-tazo: R Meropenem: S Metronidazol: S Klindamycin: S Kloramfenikol: S P. bivia Penicillin: R Pip-tazo: S Meropenem: S Metronidazol: 2 (S) -> 8 (R) Klindamycin: S Kloramfenikol: S
© Copyright 2024