1. No category

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Cytokeratin 19
Klon RCK108
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Kode IS615
Tiltenkt bruk
Til in vitro-diagnostisk bruk.
FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Cytokeratin 19, klon RCK108, Ready-to-Use, (Dako Autostainer/Autostainer
Plus), er beregnet til bruk i immunhistokjemi sammen med Dako Autostainer/Autostainer Plus-instrumenter. Dette
antistoffet merker eitelceller som uttrykker cytokeratin 19-proteinet og er nyttig for påvisning av epiteltumorer. Det
kan også være nyttig for påvisning av cholangiocellulære karsinomer (1). Den kliniske tolkningen av farging eller
mangel på farging, må komplementeres av morfologiske studier med bruk av egnede kontroller og skal
i sammenheng med pasientens sykehistorie og andre diagnostiske prøver evalueres av en kvalifisert patolog.
Sammendrag
og forklaring
Cytokeratin 19 (CK19) tilhører de intermediære filamentene som danner et cytoskjelett i nesten alle celler.
I motsetning til andre intermediære filamenter kommer cytokeratiner (CK) fra en kompleks multigenfamilie av
polypeptider med molekylære masser fra 40 til 68 kDa. 20 tydelige CK-polypeptider (2, 3) er påvist i forskjellige
humane epitelceller (4). De kan deles inn i en syre (type I) og en nøytral-basisk (type II) underfamilie. CK19 tilhører
den sure typen cytokeratiner og har lav molekylær masse cytokeratin (40 kDa) som vanligvis uttrykkes i enkel epitel,
overfladiske, intermediære og basale celler fra overgangsepitel og også luminale, basale og myoepiteliale celler
i noen få komplekse epiteler. CK19 uttrykkes vanligvis ikke i stratifisert flerlagsepitel, men kan finnes i modifisert
flerlagsepitel invadert av lymfocytter og også basale celler i ikke-keratinisert stratifisert flerlagsepitel (2, 4, 5).
Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining eller deteksjonssysteminstruksjoner for
IHC-prosedyrer for: 1) Prosedyreprinsipp, 2) Materialer som er nødvendige, men som ikke følger med,
3) Oppbevaring, 4) Prøveklargjøring, 5) Fargingsprosedyre, 6) Kvalitetskontroll, 7) Feilsøking, 8) Tolkning av farging,
9) Generelle begrensninger.
Reagens som
følger med
Monoklonalt antistoff av mus klart til bruk, følger med i flytende form i buffer som inneholder stabiliserende protein
og 0,015 mol/L natriumazid.
Klon: RCK108. Isotype: IgG1, kappa.
Immunogen
Cytoskjelett-preparering fra human blærekreft cellelinje T24 (1).
Spesifisitet
I Western-blotting av cytoskjelett-prepareringer fra T24- og RT4-cellelinjer samt human flerlagskarsinom cellelinje
HaCaT, merker antistoffet en enkel binding som korresponderer med CK19 (1).
I immunhistokjemi på forskjellige humane vev merker antistoffet kun epitel, mens celler som er kjent for å ikke
inneholde CK19, f.eks. hepatocytter, ikke merkes (1).
Forholdsregler
1. For profesjonelle brukere.
2. Dette produktet inneholder natriumazid (NaN3), en svært giftig kjemikalie i ren form. Selv om det ikke klassifiseres
som farlig ved produktkonsentrasjonene, kan natriumazid reagere med bly- og kopperrør og danne metallazider
som bygger seg og som er svært eksplosive. Ved avhending, skyll med rikelig med vann for å forhindre
ansamling av metallazid i rørene.
3. Riktig håndteringsprosedyrer bør brukes i likhet med alle andre produkter derivert fra biologiske kilder.
4. Bruk egnet personlig verneutstyr for å unngå kontakt med øyne og hud.
5. Ubrukt løsning skal avhendes i henhold til lokale og statlige forskrifter.
Oppbevaring
Oppbevar ved 2–8 °C. Må ikke brukes etter utløpsdat oen som er stemplet på flasken. Hvis reagensene oppbevares
under andre forhold enn de som er spesifisert, må forholdene verifiseres av brukeren. Det er ingen tydelige tegn som
indikerer at dette produktet er ustabilt. Derfor bør positive og negative kontroller kjøres samtidig med pasientprøver.
Hvis det observeres uventet farging som ikke kan forklares med variasjoner i laboratorieprosedyrer og det er
mistanke om at det er et problem med antistoffet, ta kontakt med Dakos tekniske avdeling.
Prøveklargjøring
inkludert materialer
som er nødvendige,
men som ikke
følger med
Antistoffet kan brukes til å merke formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Vevsprøver skal skjæres i snitt på ca. 4 µm.
Forbehandling med varmeindusert epitophenting (HIER) er nødvendig med bruk av Dako PT Link (kode
PT100/PT101). For detaljer, se bruksanvisningen for PT Link. Optimale resultater oppnås ved å forbehandle vev
med EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (kode K8010/K8004).
Parafininnstøpte snitt: Forbehandling av formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt er anbefalt ved bruk av 3-i-1
prøveprepareringsprosedyre for Dako PT Link. Følg forbehandlingsprosedyren som står i pakningsvedlegget for
EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (kode K8010/K8004). Merk: Etter farging må snittene
dehydreres, klares og monteres med permanent monteringsmedium.
Avparafiniserte snitt: Forbehandling av avparafiniserte formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt er anbefalt ved
hjelp av Dako PT Link og følge samme prosedyre som beskrevet for parafininnstøpte snitt. Etter farging skal
objektglassene monteres ved hjelp av vannholdig eller permanent monteringsmedium.
(116475-003)
Dako Denmark A/S
IS615/NO/MNI/2009.12.04 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Vevssnittene bør ikke tørke ut under behandlingen eller under påfølgende immunohistokjemisk fargingsprosedyre. Det
anbefales å bruke FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020) for bedre adhesjon av vevssnittene til objektglassene.
Fargingsprosedyre
inkludert materialer
som er nødvendige,
men som ikke
følger med
Anbefalt visualiseringssystem er EnVision FLEX, High pH, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kode K8010).
Trinnene for fargeprosedyren og inkubasjonstidene er forhåndsprogrammert i Dako Autostainer/Autostainer Plus
instrumentets programvare med bruk av følgende protokoller:
Protokollmal: FLEXRTU2 (200 µL dispense volume) eller FLEXRTU3 (300 µL dispense volume).
Autoprogram: CK19 (uten kontrastfarging) eller CK19H (med kontrastfarging)
Hjelpetrinnet skal stilles til "skyll buffer" i fargekjøringer med ≤10 objektglass. For fargekjøringer med >10
objektglass, skal hjelpetrinnet stilles til "ingen". Dette fastslår sammenlignbare vasketider.
Alle inkubasjonstrinnene skal utføres ved romtemperatur. Se brukerveiledningen for det aktuelle instrumentet for
ytterligere informasjon. Hvis protokollene ikke er tilgjengelig på Dako Autostainer-instrumentet som brukes, ta
kontakt med Dakos tekniske avdeling.
Optimale forhold kan variere avhengig av prøven og klargjøringsmetoder og skal bestemmes av hvert enkelt
laboratorium. Hvis den evaluerende patologen ønsker seg en annen fargingsintensitet, kan en Dako
applikasjonsspesialist/teknisk servicespesialist kontaktes for informasjon om omprogrammering av protokollen. Sjekk
at den justerte protokollens ytelse fortsatt er gyldig ved å kontrollere at fargingsmønsteret er identisk med
fargingsmønsteret som er beskrevet under "Utførelseskarakteristika".
Kontrastfarging i hematoksylin anbefales med bruk av EnVision FLEX Hematoxylin, (Dako Autostainer/Autostainer
Plus) (kode K8018). Ikke-vandig, permanent monteringsmedium anbefales.
Positive og negative kontroller skal kjøres samtidig med samme protokoll som pasientprøvene. Det positive
kontrollvevet skal inkludere tonsill og lever, og cellene/strukturene skal vise reaksjonsmønstre som beskrevet for
dette vevet i "Utførelseskarakteristika" i alle positive prøver. Anbefalt negativ kontrollreagens er FLEX Negative
Control, Mouse, (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (kode IS750).
Tolkning av farging
Celler merket med antistoffet viser cytoplasmisk farging.
Utførelseskarakteristika
Normalt vev: Antistoffet merker basale lag med epiderm (spredt cellemerking), Merkel-celler, talgkjertler, ekstern
rotskjede fra hårfollikler, sekresjons-coil og luminale gangceller fra ekkrine-svertekjertler, ikke-keratinisert
flerlagsepitel fra strupehode, mesotel, ciliert sylinderepitel og basale celler i bronkier, alveolære cellelinjer, kubiske
og basale celler fra parotiskjertel, duktale, acinære og basale celler fra spyttkjertler, basale celler fra spiserør,
sekresjons- og neuroendokrine celler fra mage, tarmtott- og krypt-epitel fra tynntarm, kolonepitel, duktal og acinær
epitel fra pankreas, epitel fra gallegang, epitel fra galleblære, sylinderceller fra lobuli og dukt i bryst, sylinder- og
reserveceller i endocervix, basale celler fra ectocervix, endometrisk glandulær epitel, placenta-cytotrofoblast, duktalt
epitel, basalceller og sædblære fra prostata, rete testis, epitel i Bowmans kapsel, proksimal/distal tubuli og Henles
sløyfe, overgangsepitel fra blæren og follikelepitel fra skjoldbruskkjertelen (1). I lever viser epitelcellene i galleganger
en moderat til kraftig cytoplasmisk fargereaksjon, mens leverceller er negative. I tonsill viser de flerlagsepitelcellene
fokalsk en svak til moderat cytoplasmisk fargereaksjon som er kraftigere i det basale laget.
Abnormalt vev: I malignt humant vev merket antistoffet: 4/4 basale celler og 3/3 godt differensierte keratiniserte
flerlagscellekarsinomer fra epiderm, 1/1 keratoacantom, 1/3 og 1/2 godt differensierte keratiniserte
flerlagscellekarsinomer fra henholdsvis leppe og tunge, 1/5 moderate og 1/1 dårlig differensierte
flerlagscellekarsinomer fra tunge, 1/1 papillom og 3/3 invertert papillom fra nasopharynx, 1/3 godt, 3/4 moderat og
1/1 dårlig differensierte flerlagscellekarsinomer fra strupe, 7/7 flerlagscellekarsinomer, 4/4 adenokarsinomer,
1/1 adenoflerlagskarsinom og 5/5 småcellede lungekarsinomer fra åndedrettssystemet, 5/5 pleomorfiske adenomer,
3/3 mukoepidermoide karsinomer og 1/1 acinær cellekarsinom fra parotiskjertel, 6/6 flerlagscellekarsinomer fra
spiserør, 4/4 adenokarsinomer, 2/2 karsinoider og 1/1 lymfeknute metastaser i mage, 1/1 adenokarsinom fra
tynntarm, 1/1 karsinoid fra appendix, 11/11 adenokarsinomer, 2/2 lymfeknute metastaser og 1/1 karsinoid fra kolon,
7/7 adenokarsinomer fra pankreas, 6/6 cholangiocellulære karsinomer, 12/12 duktale karsinomer, 4/4 lobulære
karsinomer, 2/2 lymfeknute metastaser og 4/4 kombinert duktale/lobulære karsinomer fra brystet, 2/2 Pagets
sykdom, 11/11 cystadenokarsinomer, 2/2 klare cellekarsinomer og 7/7 endometroidkarsinomer fra eggstokk,
1/1 maligne Brenner-tumor, 4/4 flerlagscellekarsinomer, 12/12 adenokarsinomer, 8/8 adenoflerlags- og 2/2 klare
cellekarsinomer fra livmorhalsen, 13/13 endometrioid-karsinomer and 3/3 adenoflerlagskarsinomer fra endometrium,
5/5 godt og 1/4 moderat differensierte flerlagscellekarsinomer fra vulva, 8/8 adenokarsinomer fra prostata,
3/3 maligne teratomer, 2/2 choriokarsinomer, 6/6 cellekarsinomer fra nyre, 9/9 karsinomer fra urinblære,
8/8 karsinomer fra skjoldbruskkjertel, 1/1 kromofobisk og 1/1 acidofil adenom fra hypofysekjertel, 4/4 astrocytomer,
4/4 meningiomer og 5/13 leiomyosarkomer (1). I en annen studie merket antistoffet 5/8 medullær, 26/28 invasiv
duktal, 4/4 invasiv lobulær, 5/5 mucinøs og 2/2 tubulær maligne brystlesjoner, og også 12/14 fibroadenomer,
5/5 Phyllodes tumorer, 3/3 tubulære adenomer, 1/1 Hamartom, 3/4 intraduktale papillomer, 8/8 gynaecomastias og
5/5 fibrocystiske endringer i bryst (6).
Referanser
1.
Kwaspen FHL, Smedts FMM, Broos A, Bulten H, Debie WMH et al. Reproducible and highly sensitive
detection of the broad spectrum epithelial marker keratin 19 in routine cancer diagnosis. Histopathol 1997;
31:503–16.
2.
Moll R, Franke WW, Schiller DL, Geiger B, Krepler R. The catalog of human cytokeratins: patterns of
expression in normal epithelia, tumors and cultured cells. Cell 1982; 31:11–24.
3.
Moll R, Löwe A, Laufer J, Franke WW. Cytokeratin 20 in human carcinomas. A new histodiagnostic marker
detected by monoclonal antibodies. Am J Pathol 1992; 140:427–47.
4.
Moll R. Cytokeratins as markers of differentiation in the diagnosis of epithelial tumors. Subcell Biochem 1998;
31:205–62.
5.
Lane EB, Alexander CM. Use of keratin antibodies in tumor diagnosis. In: Osborn M, ed. Seminars in Cancer
Biology. Antibodies in Diagnosis and Therapy. Philadelphia: Saunders, 1990; 165–79.
6.
Dalal P, Shousha S. keratin 19 in paraffin sections of medullary carcinoma and other benign and malignant
breast lesions. Mod Pathol 1995; 8:413–6.
(116475-003)
Dako Denmark A/S
IS615/NO/MNI/2009.12.04 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Symbolforklaring
Katalognummer
Temperaturbegrensning
Brukes før
In vitro-diagnostisk medisinsk
utstyr
Inneholder nok til <N> tester
Produsent
Se bruksanvisninger
Partikode
(116475-003)
Dako Denmark A/S
IS615/NO/MNI/2009.12.04 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17