• ÅRET SOM GÅTT • APTT-ANTITROMBIN-FIBRINOGEN Equalis 2014: APTT Aktiverad partiell tromboplastintid A. Hillarp ([email protected]) Reaktioner som påverkar APTT Intrinsic pathway HMWK PK XII Extrinsic pathway XIIa XI TF VIIa XIa IX TF VII IXa VIIIa X Xa Va Protrombin Trombin Fibrinogen Fibrin APTT: utförande  1 del plasma • Mäter summan av alla faktorer i ”intrinsic-vägen”  1 del ”aktivator”(ej Ca2+) • Normal tid ca. 30-40 s Inkubation 3-5 min, 37 ˚C • Går ej att kalibrera!  1 del kalciumklorid Bestäm tiden till koagelbildning • Påvisa faktorbrist, mäta heparin, lupus antikoagulans, inhibitorer etc. Equalis: APTT Youden plot 2015:01 APTT: uppdelat på material och metoder Material APTT-SP Actin FSL STA PTT Alla Koag 96 31,4 sek CV = 2,5 % 28,5 sek CV = 1,5 % 35,3 sek CV = 4,5 % 33,7 sek CV = 9,7 % Koag 97 48,6 sek CV = 5,6 % 63,9 sek CV = 4,7 % 61,9 sek CV = 4,0 % 60,6 sek CV = 8,2 % Koag 98 55,1 sek CV = 6,3 % 63,5 sek CV = 4,3 % 63,7 sek CV = 3,9 % 62,5 sek CV = 8,2 % CV (%) Equalis: APTT 2014 Equalis utskick 2014 Equalis 2014: Antitrombin Equalis: Två metodgrupper för antitrombin Xa och IIa (trombin) baserade reagens Indirekt substratmetod baserad på trombininhibition 1. Antitrombin + heparin 2. [AT-heparin] + trombin (överskott) 3. Substrat (peptid-pNA) [AT-heparin] [AT-heparin-trombin] + trombin (rest) peptid + pNA (färg) • Antitrombin (AT) binder heparin och inaktiverar trombin. • Rest-trombin klyver substratet. Frisättning av pNA ger upphov till färgutveckling vilket detekteras spektrofotometriskt. • Absorbansen blir omvänt proportionell mot AT-koncentrationen Indirekt substratmetod baserad på Xa-inhibition 1. Antitrombin + heparin 2. [AT-heparin] +Xa (överskott) 3. Substrat (peptid-pNA) [AT-heparin] [AT-heparin-Xa] + Xa (rest) peptid + pNA (färg) • Antitrombin (AT) binder heparin och inaktiverar faktor Xa • Rest-Xa klyver substratet. Frisättning av pNA ger upphov till färgutveckling vilket detekteras spektrofotometriskt. • Absorbansen blir omvänt proportionell mot AT-koncentrationen Equalis: Antitrombin Kommersiella reagens för antitrombin: A. Inhibition av bovint/humant faktor Xa, NPU21557 Coamatic® Antithrombin (Chromogenix) HemosIL™Antithrombin (IL) Innovin® Antithrombin (Siemens) B. Inhibition av bovint trombin, NPU21558 Berichrom® Antithrombin III (Siemens) Stachrom® AT III (Stago) m.fl. reagenstillverkare... Samtliga reagens innehåller heparin (ofta av okänd typ och konc.). Antitrombin: uppdelat på material och metoder Material Anti-Xa-metoder Anti-IIa metoder Alla Koag 96 0,83 kIE/L CV = 5,8 % 0,85 kIE/L CV = 6,7 % 0,83 kIE/L CV = 6,2 % Koag 97 0,33 kIE/L CV = 10,7 % 0,36 kIE/L CV = 10,2 % 0,33 kIE/L CV = 11,3 % Koag 98 0,39 kIE/L CV = 9,1 % 0,41 kIE/L CV = 10,8 % 0,40 kIE/L CV = 9,8 % Equalis: Antitrombin 2014 anti-FXa CV (%) anti-IIa CV (%) 20 18 16 CV (%) 14 12 10 8 6 4 2 0 Equalis utskick 2014 Equalis: Fibrinogen Equalis: Resultat för fibrinogen Mätprincip Clauss fibrinogenmetod: En standardiserad mängd trombin blandas med testplasman och tiden till ett koagel bestäms. Fibrinogen Trombin 37˚C Fibrinkoagel Koagulationstiden är omvänt proportionell mot fibrinogenkoncentrationen. Kalibreras med en referensplasma som analyseras i en spädningsserie (ställd mot IS). Samtliga deltagare med fibrinogen Metod/reagens Utskick 2014:01 Utskick 2015:01 Dako polyklonal antikropp 1 1 Dade Thrombin 37 44 Fibrinogen C 5 5 Fibri-Prest 3 2 Multifibren U 2 - QFA Fibrinogen 11 8 STA Fibrinogen 8 11 STA Liquid Fib - 2 67 73 Totalt antal lab Resultat fibrinogen 2014 CV (%) (alla med Clauss-metod i samma metodgrupp) Equalis utskick 2014 Fibrinogen, ”problem 1” Metodberoende resultat • Majoritetsreagenset får stor inverkan på totalmedelvärdet (Dade Thrombin 44/73 lab) • Mindre vanliga reagens ”avviker” >2SD (utan möjlighet att korrigera - metodberoende) • Vi borde kanske ha fler metodgrupper? – Men vilka? Fibrinogen: uppdelat på material och metod Medelvärden (g/L) och medel-CV för samtliga användare och utskick CV ej beräknat vid ≤5 lab Material Dade Thrombin QFA Fib STA Fib Fib C FibriPrest STA Liquid Dako (imm) Koag 96 2,19 2,03 2,49 CV=5,0% CV=7,0% CV=5,0% 1,98 2,27 2,61 2,67 Koag 97 1,50 1,55 1,72 CV=6,4% CV=9,0% CV=3,9% 1,56 1,63 1,70 1,80 Koag 98 1,53 1,58 1,77 CV=6,6% CV=5,8% CV=4,5% 1,56 1,63 1,78 1,89 KOAG 96 är en kommersiell normalplasma med angiven fibrinogen på 2,64 g/L (acceptansgränser på 2,38 – 2,90 g/L) Resultat fibrinogen 2014: tre största metodgrupperna (n>5) Fibrinogen, ”problem 2” Vad är korrekt referensintervall? • Intervallet 2 – 4 g/L generellt accepterat – Enkelt och bra, inte varit i fokus tidigare… – Undre gräns nu av särskilt intresse – finns riktlinjer för fibrinogensubstitution vid olika situationer… • Tillverkarna egna ref. intervall kan variera – Spänner över 1,7 – 4,2 g/L – Rekommenderar lokalt etablerade intervall • Om 2-4 g/L är allmänt accepterat i vårdprogram etc. så stämmer det inte med verkligheten… Summering: APTT, Antitrombin och Fibrinogen • Tre material har använts 2014 (KOAG96, KOAG97 och KOAG98) • APTT – Tre metod/reagensgrupper – CV mellan 2 – 6 % uppdelat på metod och material • Antitrombin – Sju olika reagens fördelat på två metodgrupper (IIa och Xa) – Ingen skillnad på metodgrupper, CV 6 – 11 % • Fibrinogen – – – – En metodgrupp (”trombininducerad”), CV 8 – 11 % CV mellan 4 – 9 % uppdelat på metod och material Nya metodgrupper? (metodberoende resultat) Referensintervallen?